MicroRNA-29b表达改变对卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响

目的：探讨microRNA-29b (miRNA-29b)在卵巢癌细胞中的表达差异及其对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：采用real-time PCR技术检测人卵巢癌上皮细胞系SKOV-3及正常人卵巢上皮细胞系IOSE80中miRNA-29b的表达水平;采用转染技术上调SKOV-3细胞中miRNA-29b的表达水平;采用CCK-8法检测SKOV-3细胞增殖能力;采用Transwell法检测SKOV-3细胞的侵袭能力;采用Western印迹法检测SKOV-3细胞中蛋白表达水平。结果：与IOSE80细胞相比,人卵巢癌上皮细胞系SKOV-3细胞miRNA-29b的表达下降（P<0.05）。转染miRNA-29b mimic后SKOV-3细胞中miRNA-29b的表达水平增加;从第4天开始,转染miRNA-29b的SKOV3细胞增殖能力下降（P<0.05）。转染miRNA-29b减少了通过聚碳酸酯膜的SKOV3细胞数量,抑制了SKOV3细胞的侵袭能力（P<0.05）;转染miRNA-29b mimic后,卵巢癌细胞SKOV3中抑制凋亡蛋白Bcl-2和侵袭相关蛋白MMP-9的表达均降低,与阴性对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论：miRNA-29b可通过抑制凋亡相关蛋白Bcl-2和侵袭相关蛋白MMP-9的表达来抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭。     

MiR-139-5p通过靶向NFAT抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长、集落形成、侵袭和迁移

目的:探究miR-139-5p对卵巢癌SKOV3细胞的生长、集落形成、侵袭能力以及迁移能力的影响及其机制。方法:采用qRT-PCR检测卵巢癌患者癌组织和卵巢癌细胞SKOV3中miR-139-5p表达情况。MiR-139-5p mimic转染SKOV3细胞,WST比色实验、集落形成实验和Transwell实验分别检测细胞的活性、集落形成、侵袭和迁移能力。采用TargetScan在线软件筛选miR-139-5p的潜在靶基因NFAT,并进一步验证。结果:MiR-139-5p在卵巢癌组织和SKOV3细胞中表达异常降低。MiR-139-5p过表达显著抑制SKOV3细胞的生长、集落形成、迁移及侵袭能力。NFAT是miR-139-5p的靶基因。过表达NFAT能逆转miR-139-5p过表达对SKOV3细胞集落形成、侵袭能力以及迁移能力与侵袭的抑制作用。结论:MiR-139-5p通过抑制靶基因NFAT来抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长、集落形成、侵袭和迁移能力。     

敲减microRNA-205靶向PTEN抑制食管癌细胞TE1的增殖并促进细胞凋亡

目的:探讨miRNA-205对食管癌细胞株TE1增殖和凋亡能力的影响及其作用机制。方法:实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western印迹检测正常食管黏膜细胞Het-1A和不同食管癌细胞株(KYSE70,TE12,TE1)中miRNA-205的mRNA及蛋白表达水平。转染miRNA-205抑制剂下调TE1细胞中miRNA-205的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖能力、细胞周期和细胞凋亡情况;Western印迹检测细胞增殖和细胞凋亡相关CDK2,cyclin D1,P21,Bcl-2,cleavedcaspase-3,caspase-3,p-Rb,Rb,p-Akt和Akt的蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因分析法预测及验证其可能的靶基因。结果:MiRNA-205在各型食管癌细胞中高表达。沉默miRNA-205后,TE1细胞的增殖能力降低并表现为细胞周期阻滞,而细胞凋亡率显著升高(P0.05)。同时细胞中cyclinD1,CDK2,bcl-2,p-Rb及p-Akt的蛋白表达水平均显著降低,p21及cleaved-caspase-3的蛋白表达水平显著升高。双荧光素酶报告基因分析显示PTEN是miRNA-205的可能作用靶点,TE1中共转染miRNA-205抑制剂和PTENsiRNA可部分逆转miRNA-205介导细胞增殖抑制及凋亡诱导作用。结论:沉默miRNA-205可靶向PTEN抑制食管癌细胞株TE1的增殖,并促进其凋亡,提示miRNA-205可作为食管癌诊疗的一个潜在作用靶点。     

人卵巢癌细胞SKOV3中壳多糖酶3样蛋白1的表达和对细胞增殖及侵袭的影响实验研究

目的　探讨壳多糖酶3 样蛋白1（chitinase-3-like-protein-1, CHI3L1）在卵巢癌细胞SKOV3 中的表达和对SKOV3 细胞增殖和侵袭的影响。方法　构建pll3.7-CHI3L1 shRNA 重组质粒,转染卵巢癌细胞SKOV3,使得卵巢癌细胞中的CHI3L1 基因沉默;pll3.7-CHI3L1 shRNA 重组质粒转染卵巢癌细胞SKOV3,同时转染空载质粒作为阴性对照,通过Western Blot 检测SKOV3 细胞中CHI3L1 蛋白表达水平;平板细胞克隆形成试验观察对卵巢癌细胞SKOV3 增殖的影响;采用Transwell 实验检测卵巢癌细胞SKOV3 侵袭能力的变化。结果　成功构建pll3.7-CHI3L1 shRNA 重组质粒,转染卵巢癌细胞SKOV3 后,观察到大量的绿色荧光细胞,且和对照组相比,pll3.7-CHI3L1 shRNA 转染组卵巢癌细胞SKOV3 中CHI3L1 蛋白表达水平下降,卵巢癌SKOV3 细胞的克隆数目减少,侵袭能力下降。结论　卵巢癌细胞SKOV3 中CHI3L1 的表达下调,抑制了SKOV3 细胞的增殖和侵袭能力。     

生物合成的MCT4siRNA抑制卵巢癌细胞的增殖作用

目的 探索生物合成的单羧酸转运蛋白4(MCT4)siRNA对卵巢癌细胞的作用。方法 将靶向单羧酸转运蛋白4(MCT4)的siRNA在大肠杆菌里进行合成,HPLC纯化后,转染卵巢癌细胞A2780和SKOV3,Western blot检测siRNA的干涉效果。利用葡萄糖、乳酸及氧消耗检测试剂盒检测细胞糖酵解水平,MTT实验检测siRNA对卵巢癌细胞增殖的抑制作用。结果 利用大肠杆菌发酵获得mg级MCT4siRNA纯品。转染卵巢癌细胞A2780和SKOV3后Western blot显示能有效降低MCT4的表达,降低细胞的糖酵解水平,抑制卵巢癌细胞的增殖。结论 生物合成的MCT4具有良好的生物活性,能显著降低靶蛋白的表达,发挥抑癌作用,具有发展成为新的核酸药物的潜力。     

miRNA-381靶向PTEN对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制研究

目的 探讨与研究miRNA-381靶向10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失基因(PTEN)对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制。方法 将处于对数生长期的BGC-823细胞平均分为三组:对照组、实验1组与实验2组,分别转染miRNA NC 20 nmol/L与miRNA-381 mimic 20 nmol/L、40 nmol/L。采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell小室实验检测细胞迁移情况,实时定量PCR检测miRNA-381表达情况,Western blotting检测PTEN蛋白表达情况。结果 转染后24 h、48 h,实验1组与实验2组的细胞增殖指数、细胞迁移指数、miRNA-381表达量高于对照组,差异均具有统计学意义(P 0. 05);实验2组高于实验1组,两组比较差异具有统计学意义(P 0. 05)。实验2组与实验1组的细胞凋亡指数、PTEN蛋白相对表达量均显著低于对照组,实验2组也较实验1组显著降低,差异均具有统计学意义(P 0. 05)。与转染后24 h相比,转染后48 h三组细胞增殖指数、凋亡指数、迁移指数以及miRNA-381相对表达量均显著增加,而PTEN蛋白相对表达量仅对照组显著增加,两个实验组均显著降低(P 0. 05)。结论 在胃癌细胞中,miRNA-381可通过靶向抑制PTEN表达,从而促进胃癌细胞增殖与迁移,抑制胃癌细胞的凋亡。     

IL-24对卵巢癌SKOV3细胞侵袭和迁移影响的研究

[目的]探讨IL-24对人卵巢癌细胞株SKOV3侵袭和迁移的影响.[方法]将pcDNA3.1(-)-IL-24真核表达载体用脂质体转染法转染SKOV3细胞,用RT-PCR检测IL-24 mRNA表达情况,用24孔的膜滤器来测定侵袭和迁移细胞数,同时为了排除IL-24的抑制侵袭和迁移能力是由于其介导凋亡的结果,采用台盼蓝排除法测定细胞成活力.[结果]RT-PCT检测表明,IL-24于mRNA水平在SKOV3细胞中获得稳定表达,IL-24能抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移,其抑制作用并不是其介导凋亡的结果.[结论]IL-24能抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移.     

超声造影剂介导PTEN基因影响卵巢癌侵袭的实验研究

目的 研究超声介导造影剂增效PTEN基因在卵巢癌细胞中的转染，探讨该基因抑制肿瘤细胞侵袭的机制。方法分别于接种人卵巢黏液性囊腺癌细胞（SKOV3）的6孔板中每孔加入200μl造影剂和5μl脂质体，以诊断超声剂量辐照60s，细胞转化48h后，采用重组基底膜侵袭模型，观察转染前后SKOV3细胞侵袭力的变化。结果转染PTEN基因可以明显抑制肿瘤细胞的侵袭力。结论PTEN基因可以通过抑制肿瘤细胞侵袭力而抑制卵巢肿瘤的生长；超声介导造影剂增效基因转染，可望成为临床基因治疗的新手段。     

α-辅肌动蛋白4对卵巢癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响及其机制

目的:探讨体外沉默α-辅肌动蛋白4(alpha-actinin-4,ACTN4)基因的表达对卵巢癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响及其可能的机制。方法:化学合成靶向ACTN4基因的ACTN4-siRNA,体外转染至人卵巢癌细胞株SKOV3和OVCA429中,采用real-time PCR检测ACTN4 mRNA的表达,采用MTT法检测卵巢癌细胞的增殖能力及存活率,采用流式细胞术检测卵巢癌细胞的凋亡情况,采用Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。结果:ACTN4-siRNA转染SKOV3/OVCA429细胞后,ACTN4的mRNA及蛋白的表达均明显下降;细胞增殖能力明显受到抑制。在不同浓度紫杉醇作用下,与转染CtrlsiRNA的对照组相比,ACTN4-siRNA转染组SKOV3/OVCA429的细胞存活率均显著降低,即转染ACTN4-siRNA后的SKOV3/OVCA429细胞对紫杉醇的敏感性明显增加(P0.01)。SKOV3细胞瞬时转染ACTN4-siRNA48 h后,细胞凋亡率[(7.22±0.31)%]明显高于转染Ctrl-siRNA的对照组[(2.07±0.08)%];OVCA429细胞的情况与之一致,转染ACTN4-siRNA后细胞凋亡率为[(23.37±0.18)%],对照组为[(19.49±0.19)%],差异均有统计学意义(P0.05)。转染ACTN4-siRNA后,SKOV3/OVCA429中p-Akt和p-FAK蛋白表达明显减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显减少,而促凋亡蛋白Bid和Bim表达则明显增加。结论:ACTN4可以降低卵巢癌细胞的化疗敏感性,这种作用可能通过抑制细胞凋亡实现。     

PTEN-FAK信号传导通路在白血病细胞迁移、侵袭中的作用

目的 探讨肿瘤抑制基因10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)对人慢性粒细胞白血病细胞系K562增殖和凋亡的影响以及PTEN-FAK信号传导通路在白血病细胞迁移、侵袭中的作用.方法 将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染K562细胞和慢性粒细胞白血病急变期患者白血病细胞,用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN mRNA、FAK mRNA水平变化,Western blot方法 检测蛋白水平变化,Transwell小室检测K562细胞及原代白血病细胞迁移及侵袭能力.结果 Ad-PTEN-GFP以感染复数为200转染K562细胞后,与Ad-GFP组相比,最大生长抑制率为35.2%;Transwell小室结果 显示,转染Ad-GFP组漏人下室内荧光细胞数量为转染Ad-PTEN-GFP组漏入下室细胞数量的9.1倍;转染PTEN基因后原代细胞侵袭迁移能力亦减弱.转染PTEN基因后K562细胞FAK、p-FAK蛋白表达下调为Ad-GFP组的0.72与0.16倍.结论 PTEN可能通过下调FAK及p-FAK表达抑制白血病细胞增殖、迁移及侵袭能力.     

沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制

目的探讨沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法将卵巢癌细胞分为Blank组、小干扰RNA(siRNA)阴性对照(siRNA-NC)组和携带wee1基因片段(siRNA-wee1)组,利用siRNA技术在卵巢癌细胞中沉默wee1基因,采用实时荧光定量PCR、免疫印迹法(WB)检测3组卵巢癌细胞wee1 RNA及蛋白表达水平,采用细胞划痕试验、Transwell试验观察卵巢癌细胞平板集落形成数及卵巢癌细胞迁移、侵袭能力,采用WB观察卵巢癌细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)、基质金属蛋白酶7(MMP-7)的表达情况。结果siRNA-wee1组卵巢癌细胞wee1 RNA和蛋白表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05),卵巢癌细胞集落形成数少于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),卵巢癌细胞迁移、侵袭能力低于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-catenin、Cyclin-D1和MMP-7表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05)。结论沉默wee1基因可抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,进而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭的影响及与VEGF和P53蛋白表达的关系研究

目的研究上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭的影响及与血管内皮生长因子(VEGF)和P53蛋白表达的关系。方法前瞻性收集新疆维吾尔自治区人民医院的卵巢癌组织标本112例(A组)、卵巢癌旁组织标本85例(B组)及正常卵巢组织标本75例(C组)。采用实时荧光定量PCR法对三组标本中的miRNA-22表达量进行检测。将卵巢癌SKOV-3细胞株分为转染miRNA-22-mimic(转染组)、miRNA-22-NC(空白载体组)及正常对照组。采用实时荧光定量PCR法对各组细胞中的miRNA-22表达量进行测定,通过Transwell小室法对各组细胞的侵袭能力进行检测,并用Western blot法对各组细胞中的P53及VEGF蛋白表达情况进行检测。结果 A组miRNA-22表达量较B、C组均明显下降(P 0. 05),而B、C组miRNA-22表达量的比较,并无显著差异(P 0. 05)。相比正常对照组与空白载体组,转染组细胞中的miRNA-22表达量明显升高(P 0. 05),而正常对照组与空白载体组细胞中miRNA-22表达量的比较,无显著差异(P 0. 05)。Transwell小室法检测结果发现,转染组卵巢癌SKOV-3细胞株侵袭能力较正常对照组与空白载体组明显减弱(P 0. 05),而正常对照组与空白载体组侵袭细胞数的比较,无显著差异(P 0. 05)。Western blot法检测结果发现,转染组细胞中P53和VEGF蛋白表达水平较正常对照组与空白载体组明显下降(P 0. 05),而正常对照组与空白载体组细胞中P53和VEGF蛋白表达水平的比较,无显著差异(P 0. 05)。结论上调miRNA-22表达可起到阻滞卵巢癌SKOV-3细胞株侵袭的作用,其机制可能与P53和VEGF蛋白表达水平下降密切相关。     

miR-20b对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制

目的:研究miR-20b在卵巢癌细胞系中的表达及其对迁移和侵袭的影响。方法:采用qRT-PCR检测卵巢癌细胞系HO8910,A2780,SKOV3与正常卵巢细胞系Hose中miR-20b的表达水平。将A2780细胞系分成两组,miR-20b模拟物组和阴性对照组,分别转染miR-20b mimics和阴性对照质粒;细胞划痕实验和Transwel l实验分别测定两组细胞迁移和侵袭能力,qRT-PCR和Western印迹分别测定两组血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)mRNA和蛋白表达水平。结果:miR-20b在卵巢癌细胞系HO8910,A2780,SKOV3中低表达,分别为0.30±0.05,0.23±0.03及0.10±0.02,显著低于Hose细胞系的1.00±0.03(P<0.001)。miR-20b模拟物组划痕愈合率为23.20%±3.50%,阴性对照组为65.70%±8.30%,miR-20b模拟物组划痕愈合率显著低于阴性对照组(P<0.01)。miR-20b模拟物组侵袭细胞数为(21.3±4.5)个,阴性对照组为(73.5±6.7)个,miR-20b模拟物组侵袭细胞数显著少于阴性对照组(P<0.01)。miR-20b模拟物组VEGF mRNA相对表达量为0.30±0.02,而阴性对照组为1.00±0.05,miR-20b模拟物组VEGF mRNA表达量显著低于阴性对照组(P<0.001)。miR-20b模拟物组VEGF蛋白表达量为118.00±8.00,显著低于阴性对照组的180.00±5.90(P<0.05)。结论:miR-20b在卵巢癌细胞系中低表达,过表达miR-20b抑制卵巢癌细胞转移与侵袭,可能通过下调VEGF发挥抑癌作用。     

长链非编码RNA肿瘤易感候选基因11在卵巢癌组织中的表达及意义

目的 观察长链非编码RNA (lncRNA)肿瘤易感候选基因ll(CASC11)在卵巢癌组织中的表达情况,探讨抑制该基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭力的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测卵巢癌组织和癌旁组织中CASC11表达情况.将SKOV3细胞分为si-CASC11组、阴性对照组和空白组,分别转染CASC11的干扰物序列、阴性对照序列和加入转染试剂,采用实时荧光定量PCR法检测细胞中CASC11表达情况,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell小室检测细胞侵袭能力.结果 卵巢癌组织中CASC11相对表达量高于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.001).不同分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期和淋巴结转移情况下,卵巢癌组织中CASC11相对表达量差异有统计学意义(P＜0.05).与阴性对照组和空白组比较,si-CASC11组细胞中CASC11相对表达量降低,细胞增殖活力、迁移能力、侵袭能力降低,差异有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01).结论 卵巢癌组织中CASC11呈高表达,且与恶性进展临床病理指标相关,抑制CASC11表达能够显著抑制SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力.     

miRNA-195在膀胱癌细胞中功能的研究

目的研究微小RNA(miRNA)-195对人膀胱癌细胞5637增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法利用阳离子脂质体方法将miRNA-195转染至人膀胱癌细胞5637(miRNA-195组),同时以只转染病毒载体的5637细胞作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测转染细胞中miRNA-195的表达量。采用噻唑蓝(MTT)法、细胞计数法和集落形成实验测定miRNA-195对5637细胞体外增殖的影响。采用划痕试验、Transwell实验、Matrigel肿瘤细胞侵袭实验检测miRNA-195对5637细胞迁移、侵袭能力的影响。结果实时荧光定量PCR检测结果表明转染后的5637细胞高表达miRNA-195。MTT法、细胞计数法及集落形成实验证明miRNA-195可以抑制5637细胞在体外的增殖,miRNA-195组和对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。划痕实验、Transwell实验以及Matrigel肿瘤细胞侵袭实验证明miRNA-195可以抑制5637细胞的迁移和侵袭能力,miRNA-195组和对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-195能够抑制膀胱癌细胞5637在体外的增殖、迁移以及侵袭能力。     

胡椒碱对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭与凋亡的影响及其机制

目的:观察胡椒碱对卵巢癌细胞株SKOV-3的侵袭与凋亡的影响并讨论其作用机制。方法:CC K-8法检测不同浓度的胡椒碱(0,5,1 0和2 0μm o l/L)对S KOV-3细胞作用不同时间(1 2,2 4和36 h)后,SKOV-3细胞存活率的变化;Transwel l小室法与TUNEL法分别检测SKOV-3细胞侵袭能力与凋亡能力的变化;Western印迹检测p-PI3K与p-Akt蛋白表达水平的变化。结果:CCK-8法结果显示胡椒碱随浓度增加与培养时间增长,对SKOV-3细胞存活率的抑制程度增强;采用10μmol/L胡椒碱培养SKOV-3细胞36 h后,SKOV-3细胞的细胞侵袭数明显降低,细胞凋亡数明显增加,差异有统计学意义(P0.05);p-PI3K与p-Akt蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:胡椒碱能够抑制卵巢癌细胞SKOV-3的增殖与侵袭能力,其增加凋亡能力可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。     

miRNA-19a对结肠癌LoVo细胞生物学特性影响的机制研究

目的探讨微小RNA(miRNA)-19a对结肠癌LoVo细胞生物学特性影响的可能机制。方法采用脂质体介导的转染方法将miRNA-19a模拟物转染到人结肠癌细胞系LoVo细胞;检测转染后miRNA-19a基因的表达;利用CCK8试剂盒检测细胞的增殖能力,TUNEL法检测细胞凋亡影响,细胞侵袭小室法检测细胞的体外侵袭力,RT-PCR和Western blot检测Hsp90/Akt信号通路的变化。结果转染miRNA-19a的结肠癌LoVo细胞,miRNA-19a表达上调,细胞体外增殖能力增强,细胞凋亡减少,细胞的侵袭力增强;细胞Hsp90和Akt的基因和蛋白表达升高。结论 miRNA-19a可通过上调Hsp90/Akt信号通路表达,促进LoVo细胞增殖,减少细胞凋亡,增强LoVo细胞的侵袭能力。     

过表达细胞黏附分子1抑制卵巢癌细胞迁移及侵袭

目的:研究过表达细胞黏附分子1(cell adhesion molecule 1,CADM1)对卵巢癌增殖、迁移和侵袭的影响。方法:q RT-PCR测定CADM1m RNA在卵巢癌细胞系SKOV3及人正常卵巢上皮细胞hose中的表达,将SKOV3细胞分成两组,即CADM1过表达组和对照组,转染48 h后Western印迹测定两组CADM1蛋白表达量,采用lipofectamine 2000分别转染pc DNA3.1-CADM1及pc DNA3.1质粒,采用CCK-8、克隆形成、细胞划痕及Transwel l实验分别检测两组细胞增殖、克隆形成、细胞迁移及侵袭能力。结果:CADM1m RNA在SKOV3中表达水平显著低于hose细胞系(1.54±0.34 vs.5.63±0.96,P0.0 5);转染4 8 h后,C A D M 1过表达组和对照组C A D M 1蛋白表达量分别为2.5 3±0.4 2,0.37±0.09,差异具有统计学意义(P0.05)。CADM1过表达组和对照组在0,24,48,72 h 450 nm处的OD值差异无统计学意义(P0.05);CADM1过表达组与对照组克隆形成数相比(60.4±7.6 vs.58.3±8.2),差异无统计学意义(P0.05);CADM1过表达组细胞迁移率显著低于对照组(20.3%±3.5%v s.60.1%±4.2%,P0.05);C A DM1过表达组侵袭细胞数显著少于对照组(24.5±5.3 v s.65.1±6.9,P0.05)。结论:CADM1在卵巢癌细胞系中低表达,过表达CADM1对卵巢癌细胞增殖和克隆形成无影响,但可抑制迁移和侵袭,起抑癌基因的作用。     

白藜芦醇通过抑制Wnt通路对人卵巢癌细胞增殖、迁移影响的机制研究

目的探讨白藜芦醇对人上皮性卵巢癌细胞SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测对照组(二甲基亚砜)、20μg/ml、40μg/ml的白藜芦醇和阳性对照组(40μg/ml顺铂)作用于SKOV3细胞48 h后对细胞增殖的影响;细胞划痕实验检测白藜芦醇对SKOV3细胞法迁移能力的影响; Transwell实验检测白藜芦醇对SKOV3细胞侵袭能力的影响; Western blot和q-RT-PCR分别检测白藜芦醇对SKOV3细胞内Wnt3a、β-catenin蛋白质以及mRNA表达的影响。结果白藜芦醇可显著抑制SKOV3细胞的增殖抑制率,且在一定范围内呈浓度依赖性(P 0. 05);此外,白藜芦醇可显著抑制SKOV3细胞的迁移距离(P 0. 05),抑制SKOV3细胞侵袭数(P 0. 05); Western blot和q-RT-PCR实验结果显示白藜芦醇可抑制SKOV3细胞内Wnt3a、β-catenin蛋白质以及mRNA表达水平。结论白藜芦醇可抑制人上皮性卵巢癌细胞SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,这一作用可能与抑制Wnt3a/β-catenin信号转导通路有关。     

miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响

【目的】探讨miRNA-155在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达及miRNA-155对人肺癌细胞A549增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测15例非小细胞肺癌组织及其癌旁组织中miRNA-155的表达;A549细胞分别转染miR-NC和miRNA-155 mimic ,采用Real-time PCR技术检测转染后A549细胞中的miRNA-155表达水平,同时采用MTT 技术和流式细胞技术检测转染后A549细胞增殖情况,Western印迹法检测转染后A549细胞中Akt、p-Akt（Ser473）、p27、bcl-2、bax的表达。【结果】miRNA-155在非小细胞肺癌组织中的表达情况明显高于癌旁组织（ P ＜0．05）;与转染 miR-NC 组相比, A549细胞转染miRNA-155 mimic后miRNA-155表达水平明显增高（ P ＜0．001）,MTT实验和流式细胞技术显示miRNA-155促进A549细胞的增殖;Western印迹法结果显示：转染miRNA-155的A549细胞p-Akt （Ser473）,bcl-2的表达水平增高,p27、bax的表达水平降低。【结论】miRNA-155可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p-Akt（Ser473）、bcl-2表达,同时抑制p27、bax的表达来促进非小细胞肺癌的发生发展。