miR-186介导YAP1调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-186介导的YAP1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot法检测miR-186、YAP1蛋白在正常乳腺细胞MDA-kb2及人乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达；利用Lipofectamine 2000试剂将miR-186 mimic转染至乳腺癌细胞，荧光显微镜下观察转染效率；采用CCK-8法检测乳腺癌细胞的增殖能力；细胞划痕实验检测细胞的迁移能力；Transwell细胞侵袭实验检测细胞的侵袭能力；Western blot法检测YAP1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-186与YAP1的靶向关系。结果 与正常乳腺细胞相比，乳腺癌细胞中miR-186表达量显著减少(P<0.01),YAP1蛋白表达量显著增加(P<0.01)。与对照组相比，miR-186过表达可明显降低乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),同时降低了YAP1蛋白表达(P<0.01)。miR-186和野生型YAP1载体共转染细胞的荧光素酶活性显著降低(P<0.01)。结论 miR-186在乳腺癌细胞中表达下...     

miR-425-5p靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用研究

目的 探讨微小RNA-425-5p(miR-425-5p)靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用.方法 用Lipofiectamine2000分别将miR-425-5p inhibitor及NC转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞作为miR-425-5p inhibitor组和NC组,不做任何处理的为对照组.通过RT-qPCR测乳腺上皮细胞MCF10A及miR-425-5p inhibitor组、NC组、对照组中miR-425-5p及FOXJ3mRNA表达水平.通过MTT法测miR-425-5p inhibitor组、NC组、对照组细胞增殖情况;通过流式细胞仪测3组细胞凋亡情况;Transwell小室实验测细胞侵袭情况;Western-blot测细胞中FOXJ3、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达情况;双荧光素酶实验验证miR-425-5p与FOXJ3的靶向关系.结果 与乳腺上皮细胞MCF10A比,乳腺癌细胞MDA-MB-231中miR-425-5p表达水平显著升高(P<0.05),FOXJ3mRNA表达水平显著下降(P<0.05);与对照组和NC组比,miR-425-5p inhibitor组细胞增殖、迁移、侵袭能力受到抑制,细胞凋亡率升高(P<0.05);双荧光素酶实验结果显示抑制miR-425-5p表达显著增加野生型FOXJ33'UTR萤光素酶活性,对突变型FOXJ33'UTR的萤光素酶活性无影响.结论 下调miR-425-5p可能通过靶向FOXJ3抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭,并促进细胞凋亡.     

LINC01106靶向miR-744-5p影响乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭

目的 探讨LINC01106对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 收集39例乳腺癌组织及癌旁组织,RT-qPCR法检测组织中LINC01106和miR-744-5p表达水平.体外培养乳腺癌细胞MDA-MB-231,分别转染si-LINC01106、miR-744-5p模拟物、或共转染si-LINC01106与anti-miR-744-5p,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验和Transwell分别检测细胞迁移和侵袭,免疫印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证LINC01106和miR-744-5p调控关系.结果 乳腺癌组织中LINC01106的表达高于癌旁组织(P＜0.05),miR-744-5p的表达低于癌旁组织(P＜0.05).干扰LINC01106或过表达miR-744-5p可降低MDA-MB-231细胞OD值、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数及细胞中N-cadherin蛋白表达(P＜0.05),而促进了 E-cadherin蛋白表达(P＜0.05).LINC01106靶向负调控miR-744-5p,干扰miR-744-5p可逆转干扰LINC01106对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用.结论 LINC01106在乳腺癌组织中表达升高,其可能通过靶向负调控miR-744-5p促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,有可能成为乳腺癌治疗的新分子靶点.     

长链非编码RNA NCK1-AS1作为海绵体与TCF4竞争结合miR-153-5p调节乳腺癌细胞侵袭、炎症和凋亡

目的：研究LncRNA NCK1-AS1与miR-153-5p调节转录因子4(TCF4)对乳腺癌细胞生长、运动和炎症因子的影响。方法：以乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7作为体外研究对象，将裸鼠作为体内研究对象。RT-qPCR检测组织和细胞中LncRNA NCK1-AS1、miR-153-5p和TCF4表达；TargetScan预测与双荧光素酶报告实验验证LncRNA NCK1-AS1与miR-153-5p的靶向关系；Transwell检测细胞侵袭；ELISA检测炎症因子水平；流式细胞术检测凋亡；Western blot检测TCF4、c-myc、c-jun蛋白水平；裸鼠皮下注射MDA-MB-231细胞建立移植瘤模型；免疫组化检测Caspase-3、VEGF阳性细胞百分比。结果：LncRNA NCK1及TCF4在癌组织和细胞中高表达，而miR-153-5p则低表达。与对照组比较，LncRNA NCK1-AS1干扰抑制乳腺癌细胞侵袭和炎症反应，并促进其凋亡。LncRNA NCK1-AS1与miR-153-5p存在靶向关系。与对照组相比，LncRNA NCK1-AS1干扰和miR-1...     

miR-129-5p靶向HMGB1对卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制

为探讨miR-129-5p对卵巢癌(ovarian cancer,OC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响及分子机制,qRT-PCR检测不同OC细胞株和正常人卵巢上皮细胞株中miR-129-5p的表达水平;在SKOV3细胞中分别转染miR-129-5p模拟物或无关序列,qRT-PCR检测转染后细胞中miR-129-5p的表达情况。生物信息学软件TargetScan预测miR-129-5p与高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein, HMGB1)基因靶向结合位点,qRT-PCR、Western blotting和双荧光素酶报告基因实验分析miR-129-5p对HMGB1的靶向调控作用。分别采用MTT和Transwell实验检测SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移能力。将miR-129-5p模拟物和HMGB1 siRNA或siRNA Control共转染至SKOV3细胞,MTT和Transwell实验检测其对细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果显示,SKOV3细胞中miR-129-5p的表达量显著低于正常人卵巢上皮细胞(P0.05)。在SKOV3细胞中转染miR-129-5p模拟物可显著提高miR-129-5p的表达量(P0.05)。miR-129-5p与HMGB1 3’非翻译区存在靶向结合位点,且过表达miR-129-5p可抑制HMGB1的表达,miR-129-5p模拟物转染后相对荧光素酶活性显著下降(P0.05)。过表达miR-129-5p后,SKOV3细胞增殖能力明显减弱,侵袭和迁移能力明显受到抑制(P0.05)。而转染HMGB1 siRNA后,miR-129-5p模拟物对SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用明显减弱(P0.05)。以上结果表明miR-129-5p通过靶向调控HMGB1的表达抑制SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移。     

microRNA-31通过靶向调控Dock1抑制乳腺癌的上皮-间质转化

目的:探讨microRNA-31(miR-31)靶向调控Dock1对乳腺癌上皮-间质转化的影响。方法:通过qRT-PCR、Western blot检测人正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞中miR-31、Dock1的表达情况;将含有miR-31的过表达质粒或Dock1的敲除质粒转入乳腺癌细胞MDA-MB-231中并检测转染效率;用Western blot检测转染后各组细胞中Dock1的表达变化; Transwell侵袭实验检测转染及共转染后各组细胞的侵袭能力的变化; Western blot检测转染及共转染后各组细胞中EMT标志物的表达情况。结果:MCF-7细胞中miR-31的表达明显高于MDA-MB-231细胞,但两组都低于其在MCF-10A中的表达。转染对照及过表达质粒后,MDA-MB-231细胞中miR-31的表达较正常组与对照组明显上调,Dock1表达明显下调。Transwell侵袭实验结果显示,MDA-MB-231/miR-31组相比于MDA-MB-231/NC组穿过基底膜的细胞数明显减少,而与MDA-MB-231/miR-31+con组相比无明显差距; MDA-MB-231/miR-31+Dock1组与MDA-MB-231/miR-31+con组相比穿过基底膜的细胞数明显增多。Western blot结果显示,MDA-MB-231/miR-31和MDA-MB-231/miR-31+con细胞相比于MDA-MB-231/NC细胞中E-cadherin表达水平显著上调,在MDA-MB-231/miR-31+Dock1细胞中E-cadherin的表达水平与对照组相比无统计学意义;与MDA-MB-231/NC细胞相比,MDA-MB-231/miR-31和MDA-MB-231/miR-31+con细胞中Vimentin表达水平明显下调,MDA-MB-231/miR-31+Dock1细胞中Vimentin的表达水平几乎无变化。结论:miR-31可以靶向调控Dock1来抑制乳腺癌的上皮-间质转化,进而抑制乳腺癌的侵袭与转移。     

MicroRNA-940在乳腺癌中的表达变化及作用机制

目的 探讨microRNA-940(miR-940)在乳腺癌组织和细胞中的表达以及对乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及其相关分子机制。 方法 实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测2016年1月~2017年1月我院手术切除的78例患者的乳腺癌组织、癌旁组织和人乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231、BT-549及人正常乳腺细胞系MCF-10 A中miR-940的表达情况。在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中利用脂质体LipofectaminsTM 2000转染miR-940模拟物上调miR-940的表达,CCK-8实验检测细胞增殖活性的改变,小室侵袭及迁移实验（transwell）检测细胞侵袭、迁移能力的改变。生物学信息法预测miR-940的可能作用靶基因,双荧光素酶报告实验检测miR-940与CXC趋化因子受体2 (CXCR2)的3’UTR区结合情况,Western blotting检测miR-940对CXCR2 蛋白表达的影响。 结果 miR-940在乳腺癌组织和细胞中表达明显降低（P<0.01）,并且miR-940的表达与TNM分期和淋巴结转移密切相关（P<0.01）。上调MDA-MB-231细胞miR-940表达后,细胞的增殖活性明显下降（P<0.01）,侵袭及迁移能力明显下降（P<0.01）。双荧光素酶报告显示,miR-940可与CXCR2 的3’UTR区特定序列结合显著抑制荧光素酶活性(P<0.01),上调miR-940后细胞中CXCR2 蛋白的表达均明显下降(P<0.01)。 结论 miR-940在乳腺癌中的表达降低,miR-940可以通过靶向CXCR2抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。     

miR-504靶向CHD1L抑制乳腺癌细胞侵袭的分子机制

目的探讨miR-504靶向染色质解旋酶DNA结合蛋白(chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like gene,CHD1L)抑制乳腺癌细胞侵袭的分子机制。方法 qRT-PCR检测人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)与乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)中miR-504的表达量,同时检测miR-504在MDA-MB-231细胞中的转染效率;双荧光素酶实验检测miR-504与CHD1L是否存在结合靶点;qRT-PCR及Western blot法检测CHD1L mRNA和蛋白的表达水平;Transwell侵袭实验检测MDAMB-231细胞的侵袭能力;Western blot法检测p-Akt、MMP-2和MMP-9的表达情况。结果乳腺癌细胞中miR-504的表达量明显低于人正常乳腺上皮细胞(P 0. 05);miR-504在MDA-MB-231/miR-504组中的表达水平明显增高(P 0. 05);双荧光素酶实验检测显示miR-504能与CHD1L mRNA的3'-UTR结合;此外,过表达miR-504后CHD1L mRNA的表达水平无显著变化,但CHD1L蛋白表达水平显著降低(P 0. 05);与MDA-MB-231/NC组相比,MDA-MB-231/miR-504组侵袭能力明显降低,而MDA-MB-231/miR-504+CHD1L组侵袭能力比MDA-MB-231/miR-504+Con组明显增加;用表皮生长因子分别刺激转染不同质粒的MDA-MB-231细胞,与MDA-MB-231/NC组相比,MDA-MB-231/miR-504组中p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P 0. 05),而MDA-MB-231/miR-504+CHD1L组中p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平与MDA-MB-231/miR-504+Con组相比明显增加(P 0. 05)。结论 miR-504靶向CHD1L通过PI3K/Akt/MMP信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭。     

miR-125a-5p通过GSK-3β/Snail信号通路抑制乳腺癌细胞的上皮-间充质转化

目的:探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)通过GSK-3β/Snail信号通路对乳腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:RT-qPCR检测人正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量,同时检测miR-125a-5p质粒在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中的转染效率;趋化运动实验与Transwell侵袭实验检测趋化运动能力和侵袭能力;Western blot检测EMT相关标志物的变化,同时检测磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)的蛋白水平及Snail的转核情况。结果:乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量明显低于人正常乳腺上皮细胞(P0.05);miR-125a-5p在转染miR-125a-5p质粒的MDA-MB-231细胞中表达水平明显增高;MDA-MB-231细胞的趋化运动能力在表皮生长因子(EGF)浓度为10μg/L时最强;在EGF刺激下,与MDA-MB-231/NC细胞组相比,MDAMB-231/miR-125a-5p细胞组的侵袭能力明显降低,上皮钙黏着蛋白(E-cadherin)表达量升高,波形蛋白(vimentin)和p-GSK-3β的蛋白水平明显降低,同时Snail转核受到明显抑制;与MDA-MB-231/miR-125a-5p+Con细胞组相比,MDA-MB-231/miR-125a-5p+GAB2细胞组的侵袭能力明显增强,E-cadherin表达量降低,vimentin和p-GSK-3β的蛋白水平明显升高,同时促进Snail转核。结论:miR-125a-5p可通过GSK-3β/Snail信号通路抑制乳腺癌细胞的EMT,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭能力。     

miR-138靶向调控FAK抑制三阴型乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移的机制

目的 探讨miR-138对三阴型乳腺癌(triple-negative breast cancer, TNBC)MDA-MB-231细胞侵袭、转移的影响及分子机制。方法 将MDA-MB-231细胞转染miR-138 mimics及其阴性对照,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力改变。生物信息学预测miR-138的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告实验和Western blot法分析miR-138与FAK的靶向调控关系。回复实验使用Transwell及Western blot实验验证miR-138通过FAK抑制MDA-MB-231细胞侵袭、转移。结果 Transwell实验结果表明：过表达miR-138后,MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力均显著降低(P<0.05)。生物信息学预测FAK为miR-138的潜在靶基因,双荧光素酶报告实验结果表明：FAK 3′UTR区域存在miR-138的互补结合位点。Western blot结果发现过表达miR-138后FAK蛋白表达降低。回复实验Transwell及Western blot结果表明：上调FAK可以部分恢复miR-138过表...     

长链非编码RNA UCA1 靶向miR-582-5p 对膀胱癌UM-UC-3细胞生存和运动能力的调节作用及机制研究

目的：探究长链非编码RNA-UCA1通过靶向miR-582-5p对膀胱癌细胞生存和运动能力的作用及作用机制。方法：用UCA1-shRNA(sh-UCA1)和(或)miR-582-5p inhibitor转染细胞,荧光定量检测转染效率及miR-582-5p的表达水平;荧光素酶报告实验确定UCA1和miR-582-5p的靶向关系;CCK8检测细胞活性,流式检测细胞凋亡情况,侵袭及划痕实验检测细胞侵袭迁移能力,免疫印迹检测细胞增殖、凋亡及迁移相关蛋白的表达。结果：sh-UCA1能显著降低膀胱癌细胞UCA1表达水平(P<0.05),促进miR-582-5p表达(P<0.05);miR-582-5p-inhibitor能明显减弱sh-UCA1对miR-582-5p表达的促进作用(P<0.05);荧光素酶报告实验表明UCA1上有miR-582-5p的结合位点;沉默UCA1可显著抑制膀胱癌细胞增殖及Ki67的表达,促进细胞凋亡及cleaved caspase-3的表达(P<0.05);同时,sh-UCA1还能显著抑制膀胱癌细胞侵袭、迁移及VEGF的表达(P<0.05);此外,miR-582-5p inhibitor可显著减弱sh-UCA1对细胞增殖、凋亡及侵袭迁移能力的作用(P<0.05)。结论：UCA1可通过靶向miR-582-5p增强膀胱癌UM-UC-3细胞的生存及运动能力。     

miR-194-3p调节TGF-β诱导的上皮-间充质转化抑制乳腺癌细胞侵袭

目的研究miRNA-194-3p在TGF-β1诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化(EMT)发生中的作用,探讨miR-194-3p抑制乳腺癌侵袭的机制。方法体外培养人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,采用TGF-β1加入人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞培养液中制备细胞模型,RT-PCR检测miR-194-3p在TGF-β1诱导前后的表达变化。采用miRNA拟似物和无关序列分别转染MDA-MB231的方法获得细胞模型。Western blot检测EMT标记分子(E-cadherin、Vimentin)的表达。Trasnwell实验检测miRNA-194-3p拟似物、TGFβ1和共同作用对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。结果 TGF-β1诱导乳腺癌细胞发生EMT,TGF-β组中E-cadherin表达下调,Vimentin表达上调;过表达miRNA-194-3p抑制了TGF-β对E-cadherin、Vimentin的作用。在侵袭迁移实验中,TGF-β促进细胞的侵袭,过表达miRNA-194-3p可抑制TGF-β的促进作用。结论 MiR-194-3p调节TGF-β诱导的上皮-间充质转化抑制乳腺癌侵袭。     

miR-454-3p靶向TCF-4对人肾癌细胞GRC-1增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨miR-454-3p与TCF-4的靶向关系,以及对人肾癌细胞GRC-1增殖、凋亡和迁移的影响。方法 miR-454-3p mimic和(或)pLV-TCF-4转染GRC-1细胞后,采用qRT-PCR法检测miR-454-3p和TCF-4 mRNA水平;Western blot法检测TCF-4蛋白的表达;双荧光素酶报告实验验证miR-454-3p与TCF-4的靶向关系;MTT法检测细胞增殖情况;Hoechst染色检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移能力;体外侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果 miR-454-3p mimic抑制TCF-4 mRNA和蛋白的表达;pLV-TCF-4缓解miR-454-3p对TCF-4蛋白表达的抑制作用。miR-454-3p mimic与TCF-4野生型报告载体共转,荧光素酶活性降低;与TCF-4突变型报告载体共转后,荧光素酶活性无明显变化。与GRC-1组相比,miR-454-3p mimic转染到GRC-1细胞后,细胞增殖倍数明显降低(P0.01),细胞凋亡率由(5.08±1.21)%增加到(23.12±1.82)%,伤口愈合率由(58.43±6.32)%降低到(32.15±5.16)%,侵袭细胞数目由113.54±9.27减少至51.21±6.03;共转染miR-454-3p mimic和pLV-TCF-4后,能够逆转上述改变。结论 miR-454-3p可通过靶向TCF-4抑制人肾癌细胞GRC-1的增殖和迁移,诱导细胞凋亡。     

miR-197-3p调控DMBT1抑制甲状腺癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-197-3p是否通过靶向调控恶性脑瘤缺失1基因(DMBT1)影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法RT-qPCR检测健康人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1和甲状腺癌细胞SW579、CGTHW-1中miR-197-3p表达;MTT法检测SW579细胞增殖;Transwell小室法检测SW579细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验验证miR-197-3p是否靶向DMBT1;Western blot检测细胞DMBT1、cyclinD1、p21、MMP-2和E-cadherin蛋白表达。结果与Nthy-ori 3-1细胞比较,SW579和CGTHW-1细胞中miR-197-3p相对表达量升高(P<0.05);抑制miR-197-3p表达后,SW579细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显受到抑制,细胞中cyclinD1蛋白和MMP-2蛋白表达降低而p21蛋白和E-cadherin蛋白表达升高;SW579细胞中miR-197-3p靶向负调控DMBT1的表达;过表达DMBT1明显抑制SW579细胞增殖、迁移和侵袭,而抑制DMBT1则能逆转miR-197-3p对SW579细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论miR-197-3p通过靶向调控DMBT1的表达,抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

Circ-DDX5靶向miR-3940抑制人乳腺癌细胞系的增殖和侵袭

目的 探讨环状RNA-DDX5(circ-DDX5)在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌患者临床分期的关系,分析circ-DDX5对人乳腺癌细胞系增殖和侵袭能力的调控机制。方法 通过TCGA数据库分析circ-DDX5在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌患者临床分期的相关性。生物信息学分析和双荧光素酶报告实验验证circ-DDX5和miR-3940的靶向关系。通过TCGA数据库分析乳腺癌组织中circ-DDX5与miR-3940表达的相关性。RT-qPCR检测circ-DDX5在乳腺癌细胞系SK-BR-3、MDA-MB-231、BT-549、MCF-7、HCC-1937中表达。将circ-DDX5过表达质粒和阴性对照质粒转染至MDA-MB-231细胞,分别命名为circ-DDX5组和NC组。集落形成实验和Transwell小室法检测circ-DDX5组和NC组MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭。Western blot检测MDA-MB-231细胞增殖表型蛋白和侵袭表型蛋白表达。RT-qPCR检测circ-DDX5组和NC组MDA-MB-231细胞中miR-3940表达水平。结果 乳腺癌组织中...     

miR-149-5p/PANX1轴对垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探究miR-149-5p对垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用及可能机制。方法 qRT-PCR检测垂体瘤组织及正常垂体组织中miR-149-5p表达;将miR-149-5p模拟物转染垂体瘤细胞,Edu实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;生物信息学分析PANX1 mRNA 3′UTR上miR-149-5p的潜在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证;qRT-PCR和Western blot检测转染miR-149-5p模拟物后垂体瘤细胞PANX1表达;转染miR-149-5p模拟物后,Edu实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果 miR-149-5p在垂体瘤组织中下调;过表达miR-149-5p抑制垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭;miR-149-5p靶向结合PANX1并抑制其表达;过表达PANX1逆转了过表达miR-149-5p对垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-149-5p抑制PA细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向抑制PANX1表达有关。     

缺氧条件下沉默DEC1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞活力、侵袭及迁移的影响

目的:探讨在缺氧条件下沉默人胚胎软骨发育基因1 (differentiated embryonic chondrocyte gene 1,DEC1)的表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及作用机制。方法:分别检测不同培养条件(常氧和缺氧)下MDA-MB-231细胞中DEC1基因的表达情况;设计、合成靶向抑制DEC1基因的小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA),通过脂质体转染入缺氧条件下的MDA-MB-231细胞中,采用RT-qPCR和Western blot法验证细胞转染效率,CCK-8法、Transwell和划痕实验分别检测沉默DEC1基因表达对MDA-MB-231细胞活力、侵袭及迁移能力的影响;此外,采用Western blot法分析转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad3信号通路关键分子的表达。结果:在缺氧条件下人乳腺癌MDA-MB-231细胞中DEC1表达显著增高(P0.05),沉默DEC1表达后,MDA-MB-231细胞的活力、侵袭和迁移能力显著下降(P0.01);Western blot结果显示,缺氧条件下,沉默DEC1后磷酸化Smad3 (phosphorylated Smad3, p-Smad3)蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:在缺氧条件下,沉默DEC1基因表达可能通过阻断TGF-β/Smad3信号通路进而抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的活力、侵袭及迁移能力。     

miR-874-3p靶向结合SDC1抑制胶质瘤血管生成拟态

目的本研究旨在探讨miR-874-3p调控胶质瘤血管生成拟态的潜在分子机制。方法应用实时定量PCR检测miR-874-3p在胶质瘤细胞系U87细胞中的表达水平;应用双荧光素酶报告基因分析系统检测miR-874-3p和SDC1的结合作用;应用CCK-8法、transwell法、体外管形成实验检测miR-874-3p或SDC1表达变化对U87细胞增殖、迁移、侵袭和管形成能力的影响。结果 miR-874-3p在U87细胞中低表达,过表达miR-874-3p显著抑制U87细胞的增殖、迁移、侵袭和管形成能力。SDC1在U87细胞中的表达上调,沉默SDC1显著抑制U87细胞增殖、迁移、侵袭和管形成能力。miR-874-3p靶向SDC1 3'UTR。结论 miR-874-3p通过靶向结合SDC1抑制胶质瘤血管生成拟态。     

NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响

目的探讨NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响。方法免疫组织化学SP法、即时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测10例新鲜乳腺浸润性导管癌和27例石蜡包埋乳腺癌组织中NDRG1蛋白和mRNA的表达。脂质体介导NDRG1基因瞬时转染高侵袭高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231;用5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)掺入法、流式细胞术观察NDRG1基因转染后对细胞增殖和细胞周期的影响;细胞体外侵袭实验和迁移实验观察转染后细胞侵袭和迁移能力的变化。结果NDRG1蛋白和mRNA表达分别为:无转移的乳腺癌组织阳性率为100%(14/14)和0·82±0·14,而有转移的乳腺癌组织中为69·2%(9/13)和0·17±0·11,均明显降低;对两株细胞的检测中,高侵袭高转移的MDA-MB-231细胞株中NDRG1mRNA的表达水平(0·14±0·02)明显低于低侵袭低转移的MCF7细胞株(1·51±0·11)。NDRG1基因瞬时转染MDA-MB-231细胞后,与未转染组和pEGFP-N3组相比,pEGFP-NDRG1-N3转染组中,细胞BrdU掺入率降低,细胞周期G0/G1期比例增高,S期比例明显减低;同时细胞体外侵袭能力下降,而体外迁移能力则差异无统计学意义。结论NDRG1基因的表达与乳腺癌的转移呈负相关关系,提示该基因可望成为早期预测乳腺癌转移的分子生物学标记物之一;NDRG1基因通过脂质体转染高侵袭高转移性人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,可抑制肿瘤细胞增殖、降低其侵袭能力,提示其可作为一个候选的肿瘤转移抑制基因,并有望成为乳腺癌基因治疗的新的候选基因。     

miR-32-5p靶向ZEB1、ZEB2基因调控乳腺癌增殖和侵袭能力的机制

目的探讨ZEB1和ZEB2在乳腺癌中的作用及miR-32-5p对乳腺癌调控的分子机制。方法通过Western blot和qRT-PCR检测乳腺癌和癌旁组织中ZEB1、ZEB2和miR-32-5p的表达,筛选出ZEB1和ZEB2高表达的乳腺癌细胞系,采用Western blot和qRT-PCR检测敲减效率。应用克隆形成、迁移和侵袭实验检测敲减ZEB1或ZEB2后对乳腺癌细胞生物学行为的影响,Western blot检测上皮-间质转化相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达。双荧光素酶报告系统检测miR-32-5p与ZEB1或ZEB23′UTR区域的结合。Western blot、迁移和侵袭实验检测抑制miR-32-5p后对上皮-间质转化相关蛋白、迁移和侵袭的影响。结果乳腺癌组织中ZEB1、ZEB2和miR-32-5p mRNA表达高于癌旁组织。乳腺癌组织中miR-32-5p表达和ZEB1、ZEB2表达呈正相关。MCF-10A、MDA-MB-231和MCF-7三种细胞中,MCF-7细胞ZEB1和ZEB2表达水平较高。敲减ZEB1或ZEB2后,形成的克隆数目减少,迁移和侵袭能力减弱,E-cadherin蛋白表达增加,vimentin蛋白表达降低。ZEB1或ZEB23′UTR区域存在miR-32-5p的结合位点,抑制miR-32-5p会增加迁移和侵袭能力,E-cadherin蛋白表达增加,vimentin蛋白表达降低。增加ZEB1或ZEB2表达会使抑制作用减弱。结论miR-32-5p通过靶向ZEB1和ZEB2调控E-cadherin和vimentin蛋白表达,抑制乳腺癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭。