miR-193a-3p在胃癌中调节细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨微小RNA 193-a-3p(miR-193a-3p)在胃癌中调节细胞凋亡的分子机制。方法运用实时荧光定量PCR在健康人胃黏膜细胞系GES-1、人胃癌细胞系MKN-45、SGC-7901、MGC-803、SNU16检测miR-193a-3p的相对表达水平;通过TargetScan在线分析和荧光素酶报告系统检测miR-193a-3p的靶基因;过表达或敲低miR-193a-3p后,免疫印迹试验检测靶基因和细胞凋亡标志蛋白的表达量以及细胞凋亡检测试验(Annexin V双染色法)检测细胞的凋亡水平。结果相比于健康人胃黏膜细胞系GES-1,miR-193a-3p在人胃癌细胞系MKN-45、SGC-7901、MGC-803、SNU16中低表达(P0.05),并且MGC-803的表达量最低。miR-193a-3p靶向P21活化激酶4(PAK4)的3端非编码区。过表达miR-193a-3p后,PAK4的表达量降低,而凋亡标志蛋白cleaved-caspase3表达量升高,胃癌细胞MGC-803的凋亡水平上升(P0.05)。敲低miR-193a-3p后,PAK4的表达量升高,而凋亡标志蛋白cleaved-caspase3表达量降低,胃癌细胞MGC-803的凋亡水平下降(P0.05)。结论 miR-193a-3p通过靶向调节PAK4促进胃癌细胞发生细胞凋亡。     

转录因子7类似物2在胃癌中的表达及其与铂类药物耐药性的关系

目的研究转录因子7类似物2(TCF7L2)基因在胃癌中的表达情况及其与胃癌化疗耐药的关系。方法采用qRT-PCR方法检测15例胃癌及其癌旁组织中TCF7L2的mRNA量,western blot实验检测胃癌细胞株SGC-7901、HSC44、44AS3、N87、MKN45、MGC803与永生化正常胃黏膜上皮细胞GES-1中TCF7L2蛋白表达量。通过基因稳定转染技术构建高表达TCF7L2的SGC-7901/TCF7L2细胞株和SGC-7901/CON(对照组)细胞株,用细胞计数法分别检测两者对顺铂和卡铂的耐药情况。结果 TCF7L2在胃癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织,在胃癌细胞株中的表达水平也明显高于对照细胞GES-1。高表达TCF7L2的SGC-7901/TCF7L2细胞株对顺铂与卡铂的耐受性明显强于对照细胞株。结论 TCF7L2基因表达与胃癌的发生发展有正相关关系;TCF7L2高表达可能是胃癌对铂类药物化疗耐受的原因之一。     

CD44在胃癌患者及胃癌细胞系中的表达及意义

目的探讨CD44在胃癌患者组织及其胃癌细胞系中的表达水平,并分析其与临床病理参数的关系。方法收集60例胃癌患者手术切除的癌组织及癌旁组织,常规培养胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901,用免疫组织化学染色及免疫荧光染色检测其CD44的表达水平,并分析其与临床病理参数的关系,体外划痕实验检测不同CD44表达水平的胃癌细胞系的迁移能力。结果 60例胃癌患者癌组织中CD44阳性表达率为81.6%(49/60),与癌旁组织26.7%(16/60)比较,差异有统计学意义(χ2=36.55,P0.05),且CD44表达水平与患者的临床分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关(P均0.05);荧光免疫染色结果表明,CD44蛋白在BGC-823细胞中的荧光强度高于SGC-7901细胞;体外划痕实验结果证实,CD44表达水平较高的BGC-823细胞的迁移能力明显高于SGC-7901细胞。结论 CD44在胃癌患者癌组织及胃癌细胞系中的表达水平较高,可作为胃癌迁移能力判断及临床预后分析指标。     

微小RNA-1291对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制研究

目的 探讨微小RNA-1291(miR-1291)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制。方法 通过公共数据库分析miR-1291在胃癌组织、正常胃组织中的表达。培养人胃癌细胞SGC-7901、人胃黏膜上皮细胞GES-1,比较miR-1291表达水平。将miR-1291 mimic、miR-NC、miR-1291 inhibitor、miR inhibitor质粒分别转染至SGC-7901细胞,设为miR-1291组、miR-NC组、miR-1291 inhibitor组、miR inhibitor组。将BMP激活素膜结合抑制因子(BAMBI) mimic质粒、Vector质粒、sh-BAMBI质粒、sh-NC质粒分别转染至SGC-7901细胞中,设为BAMBI组、Vector组、sh-BAMBI组、sh-NC组。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-1291和BAMBI mRNA表达水平,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测BAMBI、转化生长因子-β(TGF-β)...     

胃癌外体（exosome）内miRNA-1的检测分析

目的检测胃癌细胞系来源外体(exosome)及其胃癌组织和血清中exosome内miRNA-1的表达水平并分析其临床意义。方法采用实时荧光定量RT-PCR分别检测胃癌细胞系来源exosome、胃癌患者组织及血清exosome内miRNA-1的表达水平,分析其与临床资料相关性,并绘制ROC曲线进行效能分析。结果 miRNA-1在人胃癌细胞系MGC-803(6.51±0.41)和SGC-7901(14.81±1.30)中的含量明显高于胃上皮细胞系GES-1(1.05±0.25),差异有统计学意义(t分别为11.26、10.38,P均0.01);而MGC-803、SGC-7901细胞培养上清exosome内miRNA-1的表达水平(49.98±11.77和28.68±4.66)显著高于GES-1来源exosome(1.00±0.02)差异有统计学意义(t分别为4.162、5.942,P均0.01);25对胃癌组织标本中有18例癌组织miRNA-1表达上调,7例表达下调,胃癌组织[1.110(0.070,4.307)]平均表达水平高于癌旁组织[1.149(1.110,2.075)],差异有统计学意义(Z=-1.897,P0.05)。miRNA-1在胃癌患者血清exosome内的表达水平[4.130(0.151,12.720)]较体检健康者血清exosome内表达水平[0.704(0.077,7.243)]明显增高(Z=-2.407,P0.05),且与胃癌的淋巴结转移相关;胃癌患者血清exosome内miRNA-1的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.723 0,95%可信区间(CI)为0.627 0~0.818 7,cut off值为2.39,敏感性为66%,特异性为68%。结论胃癌组织及其胃癌患者血清来源exosome内富含miRNA-1,有望成为新的胃癌诊断标志物。     

SLC7A5对胃癌细胞增殖的影响及其病理学意义

目的:研究胃癌中SLC7A5转录和表达的特点,探讨SLC7A5对胃癌细胞增殖的影响及其在胃癌发生、发展中的临床意义。方法:应用免疫组化法检测52对临床采集的胃癌组织及相应的癌旁组织中SLC7A5的表达情况;分析4株胃癌细胞(SGC-7901、MKN-45、MGC-803和CRL-5974)中SLC7A5转录及表达水平与永生化胃黏膜细胞GES-1间的差异;结合临床病理指标,分析SLC7A5在胃癌组织中的表达水平与各项临床病理特征间的相关性;并应用pGU6/GFP/Neo/shRNA-SLC7A5质粒载体转染胃癌SGC-7901细胞,下调SLC7A5表达,通过CCK8检测及流式细胞术检测分析SLC7A5对胃癌细胞增殖和细胞周期的影响。结果:SLC7A5在胃癌组织和细胞中的表达上调,且其表达水平与胃癌肿瘤的直径、局部浸润深度、淋巴结转移及TNM分期进展显著相关;而下调胃癌SGC-7901细胞SLC7A5表达,可显著减弱胃癌细胞增殖能力,并将细胞周期阻滞于G0/G1期。结论:SLC7A5可促进胃癌细胞增殖,与其肿瘤直径、局部浸润深度、淋巴结转移及TNM分期等临床病理特征相关,可作为分子标志物评价胃癌的生物学行为,并可能成为胃癌诊断和防治中的新靶点。     

miR-3648对胃癌细胞增殖和转移的影响及其临床意义

目的探讨miR-3648在胃癌诊断中的临床意义以及其对胃癌细胞增殖和转移的影响。方法采用OncomiR在线工具分析miR-3648在胃癌中的表达情况。收集2018年6月至2020年3月经手术切除的100例胃癌患者的胃癌组织和相应的癌旁正常组织标本。采用实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)检测胃癌组织和癌旁正常组织以及胃癌细胞中miR-3648的相对表达水平,分析其相对表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-3648的相对表达水平在胃癌诊断中的作用。将miR-3648抑制物(inhibitor)瞬时转染MGC-803和BGC-823细胞。CCK-8法和Transwell实验分别检测转染后细胞增殖和迁移、侵袭情况。结果 OncomiR在线工具分析显示,胃癌患者miR-3648表达水平高于健康人群(P0.05)。qRT-PCR对临床标本的检测显示,胃癌组织miR-3648相对表达水平较癌旁正常组织高(P0.05)。miR-3648表达水平与胃癌患者年龄、性别以及分化程度无关(P0.05),但和肿瘤最大径、淋巴结转移、TNM分期、癌胚抗原(CEA)水平、糖类抗原(CA)19-9水平以及CA724水平有关(P0.05)。胃组织miR-3648相对表达水平用于诊断胃癌的ROC曲线下面积为0.897,最佳截断值为3.02。转染miR-3648 inhibitor能有效干扰MGC-803和BGC-823细胞中内源miR-3648的表达(P0.05)。转染miR-3648 inhibitor能显著抑制MGC-803和BGC-823细胞增殖和迁移、侵袭(P0.05)。结论 miR-3648表达水平检测在胃癌诊断中有一定的价值,干扰miR-3648表达能抑制胃癌细胞增殖和转移。     

胃癌中细胞间黏附分子1的表达及其临床意义

目的：研究细胞间黏附分子1(ICAM-1)在胃癌组织、癌旁胃组织及胃癌细胞系中的表达及对临床实践的价值。方法从90例胃癌组织、40例癌旁胃组织及2种胃癌细胞系(MKN45、SGC-7901)中提取蛋白质,以蛋白质印迹法检测 ICAM-1的表达水平;对90例胃癌组织以 ICAM-1为一抗进行免疫组织化学(IHC)检测,并根据 IHC 结果把患者分为 ICAM-1阳性组(68例)和 ICAM-1阴性组(22例)。结果胃癌组织及胃癌细胞系中 ICAM-1的表达水平(4.5±0.3)、(5.6±0.2)高于癌旁胃组织(1.0±0.1),差异具有统计学意义(P <0.01)。胃癌组织及癌旁胃组织中 ICAM-1阳性率分别为75.6%(68/90)、32.5%(13/40),差异具有统计学意义(P <0.01);与 ICAM-1阴性组比较, ICAM-1阳性组肿瘤大小、肿瘤浸润深度、神经周围浸润率均增高,差异均具有统计学意义(P <0.01);ICAM-1阳性组复发率高于 ICAM 阴性组(67.6% vs 22.7%),5年存活率则低于 ICAM-1阴性组(61.1% vs 80.0%),差异均具有统计学意义(P <0.05)。结论 ICAM-1在胃癌中的过表达提示癌肿侵袭性增强,预后差。     

SNRPA对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及Snail1信号通路的影响

摘要：目的?检测小核核糖核蛋白多肽A(SNRPA)在胃癌组织和胃癌细胞系中的表达，分析SNRPA调控锌指转录因子1(Snail1)对人胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭的影响。方法?通过对GAPIA数据库进行检索以及western blot验证，以确定SNRPA在胃癌组织中的表达情况，并对患者临床病理参数进行统计学分析。进一步检测胃癌细胞系AGS、HGC27、SGC7901、BGC823和MGC803中SNRPA蛋白及mRNA的表达水平。在胃癌细胞系AGS和SGC7901中分别转染SNRPA siRNA和SNRPA过表达质粒，采用CCK8及EdU细胞增殖试验检测转染后细胞的增殖活性；Transwell细胞迁移和侵袭试验检测细胞迁移能力；western blot检测相应蛋白质的表达；敲减Snail1后进一步验证SNRPA调控Snail1介导胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。结果?SNRPA在胃癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。此外，在AGS细胞系中SNRPA的表达水平最高，而在SGC7901细胞系中SNRPA的表达水平最低。在AGS细胞系中，敲减SNRPA后，其细胞增殖活性显著低于阴性对照组(P<0.05)，且细胞迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)，Snail1蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。在SGC7901细胞系中，转染SNRPA过表达质粒后，其增殖活性明显高于阴性对照组(P<0.05)，细胞迁移和侵袭能力明显增高(P<0.05)，Snail1蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。在AGS细胞系中，转染Snail1 siRNA后，其细胞增殖活性明显低于阴性对照组(P<0.05)，细胞迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。而在SGC7901细胞系中，SNRPA过表达质粒和Snail1 siRNA共转染后，与对照组相比，其细胞增殖活性、细胞迁移和侵袭能力差异均无统计学意义(P>0.05)。结论?SNRPA在胃癌组织中高表达；SNRPA通过上调Snail1表达促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

cir-ITCH在胃癌患者肿瘤组织中的表达及临床应用

目的检测胃癌患者组织中circ RNA ITCH(cir-ITCH)表达情况并评估其在胃癌诊断中的应用价值。方法采用实时荧光定量RT-PCR检测cir-ITCH在胃癌患者癌组织以及胃癌细胞系中的表达水平,分析cir-ITCH表达水平与胃癌患者临床病理参数的相关性。结果 cir-ITCH在胃癌细胞系SGC-7901(0.621±0.036)和MGC-803(0.118±0.003)中的表达水平明显低于胃黏膜上皮细胞GES-1(0.999±0.037),差异具有统计学意义(t分别为7.294和23.58,P均0.01)。88例胃癌患者癌组织中cir-ITCH的表达水平[0.635(0.137,1.506)]较癌旁组织[3.042(0.808,7.972)]明显下调(Z=-5.976,P0.01),且与TNM分期密切相关(r为0.137,P0.05)。结论 cir-ITCH在胃癌组织中表达下调,并与TNM分期密切相关,有望成为潜在的胃癌诊断新分子标志物。     

SH2B1沉默对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的研究沉默SH2B1基因表达对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及3-磷酸肌醇激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路的影响。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,采用SH2B1 siRNA转染SGC-7901细胞作为研究组,采用国际通用的与所有基因均无同源序列的non-target siRNA转染作为阴性对照组(NC组),以未经处理的胃癌SGC-7901细胞作为空白对照组(BC组),48h后收集各组转染成功细胞,采用荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SH2B1 mRNA表达情况,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测SH2B1蛋白表达情况;采用细胞计数试剂盒(CKK-8)检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,同时检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Caspase-9、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达情况。结果研究组SGC-7901细胞SH2B1蛋白及mRNA表达量较BC组和NC组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染后,siRNA组SGC-7901细胞增殖明显受到抑制、平板克隆形成率较BC组和NC组明显降低,凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与BC和NC组比较,研究组SGC-7901细胞PI3K、p-AKT蛋白、Ki67及PCNA蛋白呈低表达,差异有统计学意义(P<0.05),Caspase-9蛋白呈高表达,AKT蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默SH2B1基因表达可能通过抑制PI3K/ATK信号通路激活,抑制SGC-7901细胞增殖,促进凋亡。     

Foxp3在胃癌细胞中的表达

目的:观察胃癌细胞株及人胃癌组织中Foxp3基因和蛋白的表达水平和分布特点,探讨胃癌细胞通过表达Foxp3直接参与免疫逃逸的机制。方法:应用实时荧光定量PCR技术,分别检测3株胃癌细胞株(MGC-803、BGC-823、SGC-7901)中的Foxp3mRNA表达水平,并采用流式细胞术破膜染色检测其Foxp3蛋白表达水平。对30例胃癌病理切片进行免疫组织化学染色,观察Foxp3在胃癌组织中的分布特点。结果:3株胃癌细胞株中均检测到有Foxp3基因表达,Foxp3的相对表达强度依次为BGC-823>SGC-7901>MGC-803,Foxp3蛋白表达水平与mRNA表达水平一致。30例胃癌病理切片中27例胃癌细胞表达Foxp3,且细胞质和细胞核都有表达。结论:Foxp3作为调节性T细胞发挥特异性免疫抑制功能的关键基因,在胃癌细胞中也有表达,这可能是其直接参与胃癌细胞免疫逃逸的重要机制之一。     

养胃抗瘤冲剂及其拆方对人胃癌细胞系MGC-803及BGC-823侵袭重组基底膜的作用及作用途径

目的:观察人胃癌细胞系MGC-803,BGC-823对重组基底膜的侵袭作用,分析养胃抗瘤冲剂对其侵袭作用的影响及可能作用途径。方法:实验于2001-05/2001-10在中国中医研究院广安门医院肿瘤细胞生物学实验室完成。选取日本健康雌性大耳白兔21只,按随机数字表法分为7组,即养胃抗瘤冲剂组及拆方(益气方、活血方、解毒方、益气活血方、益气解毒方)组、空白血清组,制备含药血清。采用Transwell细胞培养小室建立人肿瘤细胞系体外侵袭模型,动态观察人胃癌细胞系MGC-803,BGC-823对重组基底膜的侵袭作用以及中药复方养胃抗瘤冲剂(由生黄芪、人参、白花蛇舌草、草河车、三七、苏木等组成,每克含生药3.22g,由中国中医研究院广安门医院制剂室提供)及拆方的含药血清、化疗药顺氯氨铂对胃癌细胞系侵袭作用的影响,侵袭抑制率(%)=(对照组侵袭细胞数-给药组侵袭细胞数)/对照组侵袭细胞数×100%,凡抑制率达30%以上,认为有抗侵袭作用。同时采用流式细胞仪通过单克隆抗体标记的方法检测侵袭转移相关黏附蛋白CD9,CD31,CD36,CD42a,CD44,CD49d,CD62p,CD41、凝血酶敏感蛋白及CD63的表达。结果:①各组人胃癌细胞系MGC-803,BGC-823对重组基底膜侵袭作用的抑制率比较:养胃抗瘤冲剂组、益气组、解毒组对人胃癌细胞MGC-803的抑制率均显著高于空白血清组(55.14%,32.43%,36.59%,0,P<0.05)。益气解毒、益气活血组作用优于单纯解毒、益气、活血组,但两组比较差异无显著性意义(44.86%,41.23%,P>0.05)。人胃癌细胞MGC-803与BGC-823比较,侵袭作用MGC-803强于BGC-823(空白血清组侵袭细胞数分别为60.75±4.57,56.35±3.25),养胃抗瘤冲剂及拆方对MGC-803的抑制作用强于BGC-823,但比较差异无显著性意义(P>0.05)。②各组人胃癌细胞系MGC-803,BGC-823侵袭转移相关黏附蛋白的表达水平比较:养胃抗瘤冲剂组肿瘤转移黏附蛋白CD63、凝血酶敏感蛋白的表达水平低于空白血清组(药物作用24h:3.30%,3.10%;24.97%,11.50%;48h:0.93%,3.56%;5.78%,10.41%),抑制肿瘤转移的黏附蛋白如CD9的表达水平高于空白血清组(药物作用24h:90.49%,86.23%;48h:94.81%,77.69%)。单纯的活血药在给药早期(24h)则可以促进CD63的表达(33.12%),随着给药时间的延长(48h)则降低CD9表达(30.22%);益气活血组则可纠正活血药的这种作用(24hCD63:3.55%;48hCD9:82.92%)。结论:人胃癌细胞系MGC-803,BGC-823对重组基底膜均具有侵袭作用,MGC-803的侵袭作用强于BGC-823。养胃抗瘤冲剂及拆方对MGC-803的抗侵袭作用优于BGC-823。养胃抗瘤冲剂抗人胃癌细胞侵袭作用的可能作用途径在于可降低部分促进肿瘤转移的黏附蛋白如CD63、凝血酶敏感蛋白的表达,对抑制肿瘤转移的黏附蛋白如CD9表达有促进作用。     

京尼平苷调控Wnt/β-cantenin信号通路抑制胃癌转移的机制研究

目的 探讨京尼平苷（GEN）抑制人胃癌SGC-7901细胞转移的作用及其可能机制。方法 培养人胃癌SGC-7901细胞,使用GEN处理细胞,通过CCK8法检测GEN对SGC-7901细胞增殖的影响,运用Transwell实验检测GEN对SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的作用,运用Westernblot和q-PCR检测GEN对SGC-7901细胞β-catenin、E-cadherin、Vimentin和Snail蛋白及mRNA表达的作用;运用Wnt通路激活剂（LiCl）和GEN联合处理SGC-7901细胞后,观察对SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响,对β-catenin、E-cadherin、Vimentin和Snail蛋白及mRNA表达的影响。结果 Transwell实验结果显示,GEN能够抑制SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力下降,差异有统计学意义（P<0.05）。Westernblot和q-PCR结果表明,GEN能够促进E-cadherin的表达,抑制β-catenin、Vimentin和Snail的表达,差异有统计学意义（P<0.05）。与GEN组比较,W...     

miR-100-5p对胃癌细胞增殖、转移和化疗耐药的作用及机制研究

目的探讨miR-100-5p对胃癌细胞增殖、转移和化疗耐药的作用及机制。方法收集2017年1月—2019年6月证实的胃癌组织和癌旁组织各70例,采用qRT-PCR检测miR-100-5p在胃癌组织、癌旁组织及胃癌细胞系GES-1、MKN1、MKN45和人正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1中的表达,分析miR-100-5p表达与胃癌患者临床病理参数关系。选择miR-100-5p低表达的胃癌细胞系MKN45,转染miR-100-5p mimic,分为NC组和miR-100-5p mimic组,采用MTS实验检测两组细胞增殖能力,Transwell实验检测两组细胞转移能力;采用不同浓度奥沙利铂处理两组细胞48 h, MTS实验和流式细胞凋亡实验检测两组细胞对奥沙利铂化疗敏感性;采用Western blotting检测两组细胞中ERK1/2和pERK1/2蛋白表达。结果 miR-100-5p相对表达量胃癌组织低于癌旁组织,胃癌细胞系GES-1、MKN1、MKN45均低于人正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1,差异有统计学意义(P0.01)。miR-100-5p表达与胃癌患者淋巴结转移、TNM分期和化疗效果相关(P0.05或P0.01)。细胞中miR-100-5p相对表达量miR-100-5p mimic组高于NC组,MKN45细胞增殖能力及MKN45细胞穿膜细胞数miR-100-5p mimic组低于或少于NC组,MKN45细胞对奥沙利铂化疗敏感性miR-100-5p mimic组较NC组增加,细胞中pERK1/2蛋白表达miR-100-5p mimic组低于NC组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 miR-100-5p可能通过调控ERK1/2信号通路抑制胃癌细胞增殖、转移和对奥沙利铂化疗耐药,是治疗胃癌的潜在靶标。     

咪达唑仑通过下调circASXL1抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨咪达唑仑对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的可能机制。方法 体外培养胃癌HGC-27细胞，用不同剂量(10、20、40μmol/L)咪达唑仑干预24 h后，CCK-8法、克隆形成实验、Transwell分别检测细胞增殖抑制率、克隆数、迁移及侵袭，蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达，qRT-PCR法检测细胞中circASXL1表达。分别以53例癌旁组织、胃黏膜上皮细胞GES-1为对照，qRT-PCR法检测53例胃癌组织和HGC-27细胞中circASXL1表达。同时，咪达唑仑干预HGC-27细胞24 h后，qRT-PCR法检测细胞中circASXL1表达。转染circASXL1小干扰RNA或过表达载体至HGC-27细胞，上述相同方法观察circASXL1对HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 与对照组比较，HGC-27细胞经不同剂量咪达唑仑干预后，细胞增殖抑制率、E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05),细胞克隆数、迁移数、侵袭数及N-cadherin蛋白表达均降低(P<0.05)。胃癌组织中circASXL1的表达明...     

抑癌基因LKB1及其产物在胃癌中的表达

目的:研究LKB1、AMPK在人胃癌组织中的表达情况及其在胃癌发生中的作用机制。方法:收集胃癌组织、癌旁组织和癌旁正常组织各30例,采用实时荧光定量PCR法检测胃癌组织中LKB1 mRNA含量;用蛋白印迹法和免疫组化法检测胃癌组织中LKB1及其下游信号AMPK的表达状态。结果:胃癌组织中的LKB1 mRNA水平显著高于癌旁正常组织,而LKB1蛋白表达量和AMPK的172位苏氨酸(Thr)的磷酸化水平显著低于癌旁正常组织。结论:在胃癌组织中,肿瘤抑制因子LKB1的表达可能存在转录和(或)翻译后的调节,而LKB1蛋白激酶活性显著降低,提示存在LKB1/AMPK信号通路下调。     

胃癌组织中miR-1258的表达水平及其对胃癌细胞侵袭转移能力的调节机制研究

目的研究胃癌组织中微小RNA-1258(miR-1258)的表达水平及其对胃癌细胞侵袭转移能力的调节机制。方法采用回顾性研究,收集108例胃癌组织标本及其对应的癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR对miR-1258在两组中的表达水平进行检测。采集胃癌细胞,将其分为空白对照组(未转染的SGC-7901细胞)、阴性对照组(转移阴性miRNA模拟物)及实验组(转染miR-1258模拟物)。采用MTT实验检测miR-1258对三组细胞增殖能力的影响,并通过Transwell小室实验检测miR-1258对三组细胞侵袭能力的影响;建立裸鼠胃癌肺转移的动物模型,分析miR-1258对三组细胞转移能力的调节机制。结果相比癌旁正常组织,miR-1258低表达于胃癌组织(P 0. 01)。空白对照组细胞增殖能力明显升高,其次为阴性对照组,而实验组细胞增殖能力明显减缓(P 0. 05)。相比空白对照组和阴性对照组,实验组SGC-7901细胞侵袭能力明显下降(P 0. 01)。相比空白对照组和阴性对照组,实验组小鼠肺部转移癌灶数量明显减少(P 0. 01)。结论 miR-1258低表达于胃癌组织,促使miR-1258高表达具有阻滞胃癌细胞侵袭和转移的作用,提示其可能具有肿瘤抑制剂的作用,有望成为胃癌的新型肿瘤标志物,在临床治疗中可作为潜在靶点,具有重要的临床意义。     

低浓度5-氟尿嘧啶对胃癌细胞生物学特性的影响

目的探讨低浓度5-氟尿嘧啶(5-FU)对胃癌细胞转录因子OCT4、SOX2及细胞增殖能力的影响。方法用MTT法检测并确定5-FU对胃癌细胞系MGC803、SGC-7901的半数抑制浓度(IC50),实时荧光定量PCR及western blot检测经不同浓度的5-FU处理后胃癌细胞转录因子OCT4、SOX2表达水平,平板克隆形成实验分析胃癌细胞增殖能力的改变情况。结果5-FU对MGC803、SGC-7901细胞的IC50分别为(28.82±1.25)和(23.95±1.34);低浓度5-FU(0.5、1μmol/L)处理后,胃癌细胞MGC803、SGC-7901中转录因子OCT4、SOX2在mRNA及蛋白质水平中的表达均增强,差异具有统计学意义(P0.05);平板克隆形成实验结果表明,经低浓度5-FU(0.5、1μmol/L)作用后胃癌细胞的增殖能力变强,形成的克隆数增多,差异有统计学意义(P0.05);但5-FU浓度为2μmol/L时OCT4和SOX4的表达有不同程度的减弱,且克隆形成能力也有下降。结论低浓度5-FU能增强胃癌细胞转录因子表达、促进胃癌细胞增殖。     

养胃抗瘤冲剂及其拆方对人胃癌细胞系MGC-803及BGC-823侵袭重组基底膜的作用及作用途径

目的：观察人胃癌细胞系MGC-803，BGC-823对重组基底膜的侵袭作用，分析养胃抗瘤冲剂对其侵袭作用的影响及可能作用途径。方法：实验于2001-05／2001-10在中国中医研究院广安门医院肿瘤细胞生物学实验室完成。选取日本健康雌性大耳白兔21只，按随机数字表法分为7组，即养胃抗瘤冲剂组及拆方（益气方、活血方、解毒方、益气活血方、益气解毒方）组、空白血清组，制备含药血清。采用Transwell细胞培养小室建立人肿瘤细胞系体外侵袭模型，动态观察人胃癌细胞系MGC-803，BGC-823对重组基底膜的侵袭作用以及中药复方养胃抗瘤冲剂（由生黄芪、人参、白花蛇舌草、草河车、三七、苏木等组成，每克含生药3．22g，由中国中医研究院广安门医院制剂室提供）及拆方的含药血清、化疗药顺氯氨铂对胃癌细胞系侵袭作用的影响，侵袭抑制率（％）：（对照组侵袭细胞数-给药组侵袭细胞数）／对照组侵袭细胞数&;#215;100％，凡抑制率达30％以上，认为有抗侵袭作用。同时采用流式细胞仪通过单克隆抗体标记的方法检测侵袭转移相关黏附蛋白CD9，CD31，CD36，CD42a，CD44，CD49d，CD62p，CD41，凝血酶敏感蛋白及CD63的表达。结果：④各组人胃癌细胞系MGC-803，BGC-823对重组基底膜侵袭作用的抑制率比较：养胃抗瘤冲剂组、益气组、解毒组对人胃癌细胞MGC-803的抑制率均显著高于空白血清组（55．14％．32．43％，36．59％，0，P〈0．05）。益气解毒、益气活血组作用优于单纯解毒、益气、活血组，但两组比较差异无显著性意义（44．86％，41．23％，P〉0．05）。人胃癌细胞MGC-803与BGC-823比较，侵袭作用MGC-803强于BGC-823（空白血清组侵袭细胞数分别为60．75&;#177;4．57，56．35&;#177;3．25），养胃抗瘤冲剂及拆方对MGC-803的抑制作用强于BGC-823，但比较差异无显著性意义（P〉0．05）。（2）各组人胃癌细胞系MGC-803，BGC-823侵袭转移相关黏附蛋白的表达水平比较：养胃抗瘤冲剂组肿瘤转移黏附蛋白CD63、凝血酶敏感蛋白的表达水平低于空白血清组（药物作用24h：3．30％，3．10％；24．97％，11．50％；48h：0．93％，3．56％；5．78％，10．41％），抑制肿瘤转移的黏附蛋白如CD9的表达水平高于空白血清组（药物作用24h：90．49％，86．23％；48h：94．81％，77．69％）。单纯的活血药在给药早期（24h）则可以促进CD63的表达（33．12％），随着给药时间的延长（48h）则降低CD9表达（30．22％）；益气活血组则可纠正活血药的这种作用（24hCD63：3．55％；48hCD9：82．92％）。结论：人胃癌细胞系MGC-803，BGC-823对重组基底膜均具有侵袭作用，MGC-803的侵袭作用强于BGC-823。养胃抗瘤冲剂及拆方对MGC-803的抗侵袭作用优于BGC-823。养胃抗瘤冲剂抗人胃癌细胞侵袭作用的可能作用途径在于可降低部分促进肿瘤转移的黏附蛋白如CD63、凝血酶敏感蛋白的表达，对抑制肿瘤转移的黏附蛋白如CD9表达有促进作用。