叉头蛋白、p66shc与长寿

p66shc是原癌基因shc编码的蛋白，敲除p66shc增加由H202和紫外线诱发的细胞凋亡的抵抗。P66shc^-／-小鼠可增加对百草枯的抵抗和寿命延长。FKHRL1和DAF16是叉头蛋白转录因子家族成员，适当增加叉头蛋白的转录活性可延长寿命，而它的磷酸化可抑制其转录活性。氧化应激可导致浓度依赖的FKHRL1的磷酸化。p66shc^-／-细胞在H202处理后FKHRL1的磷酸化无明显改变，表明氧化应激修饰的叉头蛋白的磷酸化的调节需要p66shc的参与。     

血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡及牛磺酸的作用

目的 观察外源性血管紧张家Ⅱ(AngⅡ)对心肌细胞凋亡的诱导作用，并探讨牛磺酸对其可能的作用和影响。方法 利用培养的乳鼠心肌细胞，随机分成不同AngⅡ浓度(10^—9—10^—5M)诱导的细胞凋亡组和不同浓度牛磺酸(10、20、40mmol/L)作用组，观察培养24h后的各组心肌细胞存活率，光镜和电镜观察凋亡细胞形态结构变化．TUNEL法检测凋亡，流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果 10^—9M的AngⅡ可诱导心肌细胞发生凋亡，心肌细胞呈现特征性的凋亡形态结构变化；TUNEL检测观察到凋亡细胞核呈黄褐色改变；流式细胞仪PI染色呈现典型的亚二倍体峰。牛磺酸可以明显的降低血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡率(P＜0．05)。结论 一定浓度的AngⅡ可以引起体外培养的乳鼠心肌细胞发生调亡，且牛磺酸可对这种凋亡产生保护作用。     

HO-1对AngⅡ诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的作用

目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的作用.方法 原代培养1～2 d Wistar乳鼠心肌细胞,随机分为对照组、AngⅡ组(加入AngⅡ)、HO-1诱导组(加入AngⅡ和HO-1 诱导剂氯化血红素hemin)和HO-1抑制组(加入AngⅡ和HO-1抑制剂锌原卟啉-9 ZnppIX).采用Western blotting检测心肌细胞HO-1蛋白的表达,Hoechst及流式细胞仪Annexin-V/PI检测细胞凋亡.结果 AngⅡ组较对照组心肌细胞凋亡率明显升高(P ＜0.05);HO-1诱导组较AngⅡ组细胞凋亡率明显下降(P＜0.05),HO-1蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);而HO-1抑制组较AngⅡ组心肌细胞凋亡率及HO-1蛋白表达水平均无明显变化(P＞0.05).结论 HO-1对AngⅡ诱导的乳鼠心肌细胞凋亡具有抑制作用.     

人参皂苷Rb1抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大

目的观察人参皂苷Rb1(ginsenoside Rb1,Rb1)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)所致心肌细胞肥大的影响。方法利用培养的新生大鼠心肌细胞,以细胞直径、蛋白含量为心肌肥大标志,观察药物的抗心肌肥大效应。ANFmRNA的表达用Real-timePCR检测;用Fura-2/AM负载的培养心肌细胞检测细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)以探讨Rb1可能的作用机制。结果AngⅡ1×10-7mol.L-1使心肌细胞细胞直径明显增大,蛋白含量明显增加,心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)mRNA表达明显上调,并使细胞[Ca2+]i明显升高。Rb150、100和200μg/ml使经AngⅡ处理的心肌细胞直径分别缩短18.4%,32.7%和43.8%;心肌细胞蛋白含量分别减少8.4%、13.6%和17.2%;降低ANFmRNA的表达;Rb150、100和200μg/ml呈剂量依赖地抑制AngⅡ所致的[Ca2+]i升高,NO前体L-精氨酸L-arg10-3molμL-1具有相似的作用,NO合酶抑制剂L-NAME对Rb1的效应无明显影响。结论Rb1可抑制Ang...     

蜈蚣酸性蛋白对AngⅡ诱导心肌细胞凋亡的影响

目的 研究蜈蚣酸性蛋白(CAP)对血管紧张素-Ⅱ(AngⅡ)诱导培养心肌细胞凋亡的影响及机制.方法 在培养原代乳鼠心肌细胞的基础上,通过MTT法观察CAP对培养心肌细胞活力的影响;采用激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况;使用半胱胺酸-天门冬胺酸酶(caspase-3)活性检测试剂盒,分光光度法检测心肌细胞凋亡过程中caspase-3活性的变化;并采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定相关基因c-fos mRNA表达.结果 AngⅡ模型组与空白对照组比较,心肌细胞活力明显降低,凋亡明显增加;Caspase-3活性显著增加;c-fos mRNA的表达显著增加.CAP高、低剂量组与AngⅡ模型组比较,心肌细胞活力明显增加,凋亡明显降低;Caspase-3活性显著降低,c-fos mRNA的表达显著降低.结论 CAP对AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡具有明显的抑制作用,其机制与降低Caspase-3活性以及下调c-fos mRNA表达有关.     

不同水平干预对AngⅡ作用心肌细胞活力的影响

目的：通过使用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)两种亚型受体AT1-R、AT2-R拮抗剂(Valsartan和CGP42112A)及丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)特异阻断剂，观察对心肌细胞活力的影响，探讨从受体和MAPK信号不同水平的阻断是否能有效干预心肌细胞能量代谢，为寻找新的心衰预防与治疗药物提供实验依据。方法：应用MTT比色法测定AngⅡ对培养心肌细胞活力的影响和AngII受体拮抗剂及MAPK抑制剂的干预作用。结果：AngⅡ刺激心肌细胞在10^-8～10^-5mol／L浓度范围，一定时间内呈浓度依赖性增加心肌细胞活力变化；使用Valsartan、PD98059可有效抑制AngII引起的心肌细胞活力改变；CGP42112A干预后对AngⅡ作用无明显影响。结论：AngⅡ的作用主要通过AT1-R介导；与细胞增殖、分化密切相关的ERK信号介入了心肌细胞能量代谢的过程，这对了解AngⅡ在心功能不全代偿和心力衰竭发生中的作用及临床上探讨细胞信号系统不同层面对心衰进行干预具有重要参考价值。     

异丙酚抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖的机制研究

目的 探讨异丙酚抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞增殖的机制.方法 使用4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)中含有1％(w/v)胰蛋白酶、0.5 mol/L乙二胺四乙酸(EDTA)和0.1％胶原酶的酶混合物,将切碎的心室心肌连续消化,将分离的细胞混合物在培养箱中预铺板1 h,以分离成纤维细胞.将培养细胞分为对照组、诱导组、异丙酚处理组和抑制剂组.通过5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)掺入测定法检测细胞增殖;通过使用WST-1测定法测量细胞活力;通过发光素增强化学发光法测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶和活性氧(ROS)活性;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化和激活蛋白-1(AP-1)、内皮素-1(ET-1)mRNA相对表达水平;Western blot分析蛋白激酶B(Akt)、一氧化氮合酶(eNOS)的表达.结果 第24、72小时,诱导组较对照组细胞增殖能力增强,异丙酚处理组较诱导组减弱(P<0.05).与对照组比较,诱导组细胞凋亡率降低,细胞活力升高;与诱导组比较,异丙酚处理组细胞凋亡率升高,细胞活力降低(P<0.05).诱导组NADPH、ROS活性较对照组升高,异丙酚处理组较诱导组降低(P<0.05).诱导组ERK、AP-1和ET-1 mRNA相对表达水平较对照组升高,异丙酚处理组较诱导组降低(P<0.05).异丙酚处理组Akt、eNOS表达水平较诱导组降低,抑制剂组较异丙酚处理组升高(P<0.05).结论 异丙酚可通过干扰ROS的生成来抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖.     

血管紧张素Ⅱ对心肌细胞c-myc蛋白表达的作用

目的 探讨钙内流及钙释放对心肌细胞c-myc蛋白定位及半定量表达有何影响。方法 应用血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ,10^7mol/L)刺激原代培养的大鼠心肌细胞钙内流、雷尼丁（RY,10^7mol/L)刺激胞内钙释放;免疫组织化学方法检测心肌细胞。myc蛋白定位表达,免疫印迹（Western blot)检测心肌细胞c-myc蛋白半定量表达。结果 免疫组织化学方法显示,RY诱导的心肌细胞c-myc蛋白表达及核转位表达早于Ang Ⅱ。Western bolt显示,Ang Ⅱ及RY刺激2h时,c-myc蛋白明显表达,24h下降,2、3、5d呈逐渐增加趋势,各时相点与24h比较差异显著（P＜0．05或0．01）。结论 c-myc蛋白表达与细胞内钙浓度变化有关,与钙的来源无关。     

内源性一氧化碳对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响

目的 探讨内源性一氧化碳（CO）对血管紧张素Ⅱ（AT－Ⅱ）诱导心肌细胞肥大的影响。方法 体外培养新生SD大鼠的心肌细胞，用^3H-亮氨酸（^3H-Leu)掺入法观察AT－Ⅱ对其蛋白质合成的影响，用CO合成的关键酶即血红素氧合酶（HO）的诱导剂－氯化血红素诱导心肌细胞生成CO，观察它对AT－Ⅱ作用的影响。结果 与对照组相比，AT－Ⅱ可使培养的新生SD大鼠心肌细胞对^3H-Leu的摄取明显增多（P＜0．05），用氯化血红素干预后，AT－Ⅱ上述作用被明显抑制（P＜0．05）。结论 内源性CO对AT－Ⅱ诱导的SD大鼠心肌细胞肥大有抑制作用。     

肥大心肌细胞对AngⅡ诱发凋亡的易感性增加

目的 :建立心肌细胞肥大模型 ,观测正常与肥大心肌细胞对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )促凋亡刺激的易感性 .方法 :采用新生大鼠原代培养心肌细胞 ,观测内皮素 (ET 1)或AngⅡ单独作用 2 4h后 ,心肌细胞面积与凋亡率的变化 .进一步观测ET 1作用 2 4h后 ,再用AngⅡ刺激 2 4h ,心肌细胞凋亡率的变化 .结果 :① 10或 10 0nmol·L-1ET 1作用 2 4h ,心肌细胞轮廓面积较对照组分别增加 16 8%或 184 %.而凋亡率分别为 10 .9%或 11.7%,与对照组 (10 .7%)相比均无显著性差异 .② 0 .1,1.0或 10 .0nmol·L-1AngⅡ单独作用2 4h ,心肌细胞的面积较对照组分别增大了 14 6 %,16 2 %或2 2 4 %.其凋亡率则分别为 12 .6 %,17.2 %或 16 .2 %,均与对照组有显著性差异 .③经 10nmol·L-1ET 1处理 2 4h后 ,再用 1nmol·L-1AngⅡ作用 2 4h ,心肌细胞的凋亡率进一步增加为 2 1.6 %,与对照组或 1.0nmol·L-1AngⅡ刺激组相比 ,均具有显著性差异 .④AngⅡ的AT1受体阻滞剂Losartan既可抑制AngⅡ诱导的正常心肌细胞凋亡 ,亦可抑制肥大心肌细胞的凋亡 .而AT2 受体阻滞剂PD12 3319则无明显作用 .结论 :ET 1具有剂量依赖性促心肌细胞肥大作用 ,而对心肌细胞凋亡率无明显影响 .AngⅡ有剂量依赖性促心肌细胞肥大作用和非剂量依赖性促心肌细胞凋亡     

血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后缝隙连接蛋白Cx43表达的变化

[目的]研究血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后连接蛋白43（Cx43）表达的变化及与细胞周期分布的关系。[方法]分离培养大鼠心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大,72h后用RT-PCR和免疫荧光方法观察心肌细胞Cx43基因和蛋白表达,用流式细胞仪测定法观察心肌细胞周期分布变化以及Cx43表达量的关系。[结果]血管紧张素Ⅱ处理后的心肌细胞表现细胞肥大且细胞活力增强,S期、G2-M期细胞百分比增加,细胞内G2-M（二倍体）DNA含量降低,Cx43蛋白表达低于对照组,Cx43mRNA表达水平也较对照组明显下调,Cx43蛋白表达下调与细胞周期分布的改变相关。[结论]血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后Cx43基因表达明显下调,导致Cx43蛋白表达亦出现下调,这一改变可能与心肌肥大过程中的细胞周期变化有关,提示血管紧张素Ⅱ可能通过调控Cx43基因的表达而参与缝隙连接重构过程,而Cx43表达的变化可能与心肌肥大的机制有关。     

TRPM7参与AngⅡ对心肌细胞镁离子平衡的调节

目的：探讨TRPM7在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对心肌细胞镁离子平衡调节中的作用。方法：采用原代培养的小鼠心肌细胞作为研究对象,实验分对照、AngⅡ、AngⅡ＋氯沙坦（Losartan,AngⅡ的I型受体阻断剂）及AngⅡ＋2-APB（TRPM7通道阻断剂）组。实验试剂直接加入培养液中与细胞共孵育,应用mag-fura-2镁离子荧光探针动态检测心肌细胞内镁离子水平的变化,实时定量PCR（qPCR）和WesternBlotting检测TRPM7在原代培养心肌细胞中的表达水平。结果：与对照组相比,AngⅡ组心肌细胞胞内游离镁离子水平在细胞外生理镁离子浓度及高镁离子浓度环境下均有显著下降;应用Losartan或2-APB均可显著降低AngⅡ所致的游离镁离子下降的作用。qPCR和Western Blotting检测结果提示,AngⅡ对原代培养心肌细胞中TRPM7的表达水平无影响。结论：AngⅡ可通过I型受体对原代培养心肌细胞的镁离子代谢产生显著影响,其机制可能是AngⅡ增强了心肌细胞TRPM7的功能而不影响其表达水平。     

血管紧张素Ⅱ致心肌细胞肥大作用研究进展

血管紧张素（Ang）Ⅱ是肾索-Ang系统（RASS）中的一种主要的多功能活性肽，同时也是一种重要的心肌肥大刺激因子，具有生长因子样作用，通过与特异的AngⅡ受体结合，可直接导致心肌肥厚，对心肌的结构、功能产生重大的影响。本文就AngⅡ致心肌细胞肥大作用的最新研究进展作一综述。     

基于报告基因能筛选下调p66shc基因转录的药物普筛系统的建立

将p66shc基因的启动子序列克隆到含有荧光素酶报告基因和新霉素抗性基因的pGL3B-neo载体中,然后将重组质粒pGL3B-neo-p66shc转染入人的肺癌细胞A549中,通过单集落分离法得到含有重组质粒的稳定细胞系A549/p66shc。利用这个以报告基因为基础的药物普筛系统,筛选了数百种中药提取物及单体化合物,发现抑制率达到50%以上的2种中药提取物和8种单体化合物。     

miRNA-204靶向LC3B在Ang Ⅱ诱导的心肌肥厚中的作用

目的 探讨体外血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导原代大鼠心肌细胞肥大中miRNA-204靶向自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3 B)表达的作用.方法 以原代大鼠心肌细胞为研究对象,根据不同的处理分为对照组、Ang Ⅱ组、联合1组(心肌细胞给予人AngⅡ刺激同时感染阴性对照慢病毒载体)和联合2组(心肌细胞给予人AngⅡ刺激同时感染miRNA-204慢病毒过表达载体).各组在干预治疗后48～72 h,行激光共聚焦检测心肌细胞肥大变化,荧光定量PCR探测miRNA-204的表达,蛋白印迹测定LC3B的表达;同时,双荧光素酶活性基因报告验证miRNA-204的靶基因.结果 与对照组比较,AngⅡ组心肌细胞相对表面积明显增大,同时LC3B蛋白表达明显升高、miRNA-204表达上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).与联合1组比较,联合2组能明显减少LC3B蛋白表达,同时使心肌细胞相对表面积缩小(P＜0.05).进一步的荧光素酶活性报告基因实验结果提示,miR-NA-204能结合LC3B的非翻译区的野生型片段减少荧光素霉活性(P＜0.05);但不能结合其突变型片段灭活荧光素酶活性(P＞0.05).结论 miRNA-204能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其作用是通过靶向LC3B的表达实现的.     

血管紧张素Ⅱ对心肌细胞活力的影响

目的：旨在观察血管紧张素Ⅱ（ＡＮＧⅡ）对心肌细胞活力的影响。方法：本研究利用培养的乳鼠心肌细胞，根据活细胞线粒体在能量代谢过程中可作用于ＭＴＴ产生蓝紫色结晶产物ｆｏｒｍａｚａｎ这一原理，应用ＭＴＴ法测定ＡＮＧⅡ对培养心肌细活力的影响。结果：发现ＡＮＧⅡ在１２ｈ之内使ｆｏｒｍａｚａｎ产物的ＯＤ值逐渐上升，１２ｈ达到高峰，此后开始下降，至２４ｈ已低于正常水平，它们的ＯＤ值之间均有显著的统计学差异（Ｐ〈０．０５或０．０１）。结论：该结果提示ＡＮＧⅡ在早期具有提高心肌细胞活力的效应。这一发现对了解ＡＮＧⅡ在心功能不全代偿和心衰发生中的作用地位具有重要意义。     

丝裂素活化蛋白激酶参与AngⅡ诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体的表达

目的探讨丝裂素活化蛋白激酶在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞血小板衍生生长因子受体-β(PDGF-β)表达中的作用.方法分离纯化培养的乳鼠心肌细胞,以10-7mol@L-1AngII刺激为AngII组;以10-5 mol@L-1 PD98059(一种丝裂素活化蛋白激酶抑制剂)预孵育30min10-7后再用AngII刺激为PD98059组,以正常的乳鼠心肌细胞为对照组;免疫印迹法测定培养24 h时心肌细胞PDGF-β受体的含量.结果AngII刺激培养24 h的乳鼠心肌细胞PDGF-β受体表达增强(P＜0.05),PD98059可部分抑制AngⅡ对PDGF-β受体表达的诱导作用.结论丝裂素活化蛋白激酶参与AngⅡ上调心肌细胞PDGF-β受体表达的信号转导途径.