经支气管镜确诊肺癌患者病理类型与其基本临床特征的关系

目的探讨经支气管镜确诊肺癌患者组织学类型与性别、年龄、吸烟的关系.了解支气管镜诊断肺癌现状,为拓展运用支气管镜技术诊断呼吸系统恶性肿瘤奠定基础.方法选取225例经支气管镜检查且病理学明确诊断为肺癌患者的数据,进行统计学分析.结果经支气管镜确诊患者225例中,男性161例（71.6%）,女性64例（28.5%）;经支气管镜确诊病理类型包括鳞癌102例（45.3%）、腺癌58例（25.8%）、小细胞癌39例（17.3%）、其他类型肺癌26例（11.6%）;男性鳞癌最高占52.2%（P〈0.05）,男性鳞癌高于女性（P〈0.05）.50～69岁患者鳞癌比例最高,为57.8%（P〈0.01）;不吸烟患者腺癌比例最高占40.7%（P〈0.05）,吸烟者鳞癌比例最高达59.0%（P〈0.01）,特别是吸烟指数大于400的患者更高为60.2%（P〈0.01）.结论鳞癌是支气管镜诊断率最高的病理类型;其次为腺癌.男性以鳞癌为主,高于女性;50～69岁鳞癌多见;不吸烟患者腺癌多见,吸烟患者鳞癌多见.     

2001-2008年1657例肺癌住院病例分析

目的 了解近年来肺癌住院病例的临床特征.方法 收集宁夏医科大学附属医院2001-2008年1657例新发肺癌住院患者的临床资料,分析性别、年龄、吸烟、病理类型等方面的特征及其动态变化.结果 女性肺癌的比例有所增加,所有病例男女性别比为2.67:1.00,其中前4年为3.10:1.00,后4年则下降为2.41:1.00;鳞癌、腺癌、小细胞癌男性均明显多于女性,鳞癌最为明显,小细胞癌次之,而腺癌男女比率差异不大,为1.16:1.00;40岁以上肺癌患者占绝大多数;8年来鳞癌病例数有所下降,而腺癌病例数明显增加.男性不同病理类型肺癌吸烟者比例有所不同.结论 近年来肺癌患者占总住院患者的比例无明显变化;鳞癌住院病例数仍居首位,但有所下降,腺癌住院病例明显上升;女性肺癌患者明显上升.肺癌的早期诊断仍存在很大困难,控制吸烟仍是今后肺癌防治的重点     

经纤维支气管镜确诊的不同病理类型肺癌的临床研究

目的 评价不同病理类型的支气管肺癌的临床特点和纤维支气管镜下不同的表现以及纤维支气管镜下所见与病理类型的关系.方法 回顾性分析苏州大学附属第四人民医院呼吸内科支气管镜室2000～2006年1658例经纤维支气管镜确诊的支气管肺癌患者的镜下所见以及不同病理类型的性别、年龄、吸烟指数、临床表现及镜下表现等分布特点.结果 经纤维支气管镜确诊的鳞癌、小细胞癌、大细胞癌男性均明显多于女性,而腺癌男女性别比例差异不大;鳞癌、小细胞癌好发于上叶,而腺癌好发于下叶;病理以鳞癌所占比例最高(53.2%),腺癌次之(26.4%),小细胞癌较少(8.4%).鳞癌、小细胞癌均以增殖型为主,腺癌以浸润型为多.结论 :不同病理类型的支气管肺癌的临床特点、镜下所见均有所不同.     

2005-2014年中日友好医院肺癌发病情况研究

目的 对比分析2005-2014年中日友好医院住院患者中原发性肺癌患者的病理类型、年龄、性别的差异,以初步了解近10年本院住院肺癌患者的流行病学特征。方法 调查2005-2014年在中日友好医院初次住院的原发性肺癌患者的临床资料,对肺癌病理类型构成、发病年龄、性别分布进行统计分析。结果 本研究纳入2005-2014年初次住院的原发性肺癌患者共4 114例,明确病理诊断3 183例,临床诊断931例。肺腺癌患者构成比最高,占52.25%（1 663/3 183）,男性患者例数是女性的1.98倍（2 734/1 380）。高发年龄为56~75岁,占60.73%（2 499/4 114）。2005-2014年各年病理类型构成比（χ2= 27.277,P＝0.449）、各年龄段构成比（Z=0.573,P＝0.999）比较,差异均无统计学意义。男女患者年龄段构成比比较,差异无统计学意义（χ2=0.152,P＝0.879）;2005-2014年各年份男女患者构成比比较,差异无统计学意义（χ2=6.446,P＝0.695）。Spearman相关分析显示,56~65岁患者构成比与年份呈正相关（rs=0.806,P＝0.005）。结论 中日友好医院近10年收治住院原发性肺癌患者例数呈逐年增长趋势,腺癌构成比最高,其次是鳞癌、小细胞肺癌。高发年龄段为56~75岁;男性鳞癌比例高于女性。     

肺癌1521例临床病例分析

目的:了解近3年来到川北医学院附属医院就诊的住院肺癌患者的发病特点及规律。方法:对该院2010年-2012年期间1521例肺癌住院患者的病历进行回顾性调查,分析性别,年龄,发病部位,易感因素,病理类型等方面的特征。结果:1 521例肺癌中男性1 124例,女性397例,发病年龄17⁹1岁,平均年龄60岁,左侧553例,右侧870例,未注明部位100例。有明确病理类型中,鳞癌397例,腺癌266例,小细胞癌89例,大细胞癌3例,其它49例。有吸烟史427例,慢性肺部疾病史487例等。结论:近三年来肺癌的发病趋势平稳,男性患病比例明显高于女性,女性发病有上升趋势。肺癌发病右侧多于左侧。有明确病理类型中,以鳞癌为主;不同性别患肺癌的病理类型有所不同,男性以鳞癌为主,女性以腺癌为主。高发年龄段均为5091岁,平均年龄60岁,左侧553例,右侧870例,未注明部位100例。有明确病理类型中,鳞癌397例,腺癌266例,小细胞癌89例,大细胞癌3例,其它49例。有吸烟史427例,慢性肺部疾病史487例等。结论:近三年来肺癌的发病趋势平稳,男性患病比例明显高于女性,女性发病有上升趋势。肺癌发病右侧多于左侧。有明确病理类型中,以鳞癌为主;不同性别患肺癌的病理类型有所不同,男性以鳞癌为主,女性以腺癌为主。高发年龄段均为50⁷9岁。本组调查数据中,肺癌相关危险因素(吸烟,嗜酒,慢性肺部疾病史等)在肺癌中所占比例有差异;除顺庆区外,不同地区的肺癌就诊人数相差不大。     

河南省肺癌病理类型变化趋势分析

目的:了解近年来河南省肺癌的发病特征和变化趋势。方法:收集2012至2018年河南省8家综合/肿瘤专科医院原发性肺癌病例资料,对不同特征患者的病理类型构成进行比较,采用Joinpoint回归计算各病理类型构成比的年度变化百分比(APC)。结果:共收集11 207例,其中男7 673例,女3 534例。发病年龄以60～69岁为主,病例占38.77%。腺癌、鳞状细胞癌(鳞癌)、小细胞肺癌和其他类型占比分别为52.34%、22.99%、19.51%和5.16%。2012至2018年肺腺癌占比明显上升(APC=3.11%,年龄调整APC=3.47%,P均<0.05),鳞癌占比呈下降趋势(APC=-6.60%,年龄调整APC=-7.57%,P均<0.05),小细胞肺癌(APC=-2.90%,年龄调整APC=-2.48%,P均>0.05)和其他类型肺癌(APC=9.27%,年龄调整APC=9.99%,P均>0.05)占比平稳波动。结论:近年来河南省肺腺癌占比呈上升趋势,鳞癌呈下降趋势;目前腺癌是肺癌最主要的病理类型。     

The analysis of clinical characteristics of 1,485 patients with primary bronchogenic carcinoma of lung

目的:探讨近10年原发性肺癌病例的临床病理特征变化及意义.方法:对2001年1月至2010年12月1 485例原发性肺癌病例的临床及病理资料进行收集,分析性别、年龄、发病部位、病理类型等方面的特征及其动态变化.结果:1 485例肺癌中男性1 119例,女性366例.发病年龄为24～90岁,平均年龄59岁.左肺664例,右肺821例.鳞癌705例,腺癌511例,小细胞癌83例,低分化癌116例,腺鳞癌13例,肉瘤样癌13例,其它类型44例.结论:男性患肺癌比例明显高于女性,10年来患肺癌中女性发病比例明显升高(P＜0.05).肺癌发病右侧多于左侧(P＜0,05).病变类型以鳞癌为主.不同性别患肺癌的病理类型有所不同,男性以鳞癌为主,女性以腺癌为主(P＜0.05).     

无吸烟史肺癌临床特点分析

目的探讨有无吸烟史肺癌患者的临床特点与近期疗效的差异。方法比较非吸烟肺癌(137例)及吸烟肺癌(321例)患者年龄、性别、病理类型、分期、治疗情况和近期疗效等方面的差异。结果无吸烟史肺癌患者女性占57.7%,≤45岁患者占19.7%,进展期肺癌占78.0%,病理类型以腺癌为主(60.6%)。吸烟肺癌患者女性占3.7%,≤45岁患者占10.6%,进展期肺癌占73.2%,病理类型以鳞癌为主(53.6%),既往有慢性支气管炎、肺结核比例高,两组比较有统计学差异。但两组患者近期疗效相似。结论吸烟和非吸烟者肺癌的临床特点存在差异,近期疗效相似。     

793例云南籍肺癌患者特征分析

目的了解云南籍肺癌患者的流行病学特征,为云南省肺癌的防治提供参考.方法回顾性分析2009年12月至2011年12月云南省肿瘤医院收治的793例云南籍肺癌患者的病理类型、性别、发病年龄等流行病学特征.结果肺腺癌353例(44.5%)、肺鳞癌241例(30.4%)、小细胞肺癌88例(11.1%)、其他类型111例(14.0%);肺癌患者男女比例为2.7:1,腺癌男女之比为1.45:1,鳞癌高达12.39:1,小细胞肺癌为3.89:1,其他病理类型为2.36:1;肺癌的平均发病年龄为(57.56±0.417)岁,发病高峰集中在41～60岁(50.94%).结论(1)肺腺癌的发病率高,超过了鳞癌;(2)肺癌患者男性居多,男性患者以肺鳞癌为常见病理类型,女性肺癌患者以腺癌多见;(3)肺癌患者发病年轻化,女性患者更加明显.     

肺癌124例临床和病理特征分析*

目的：探讨肺癌患者病理类型及分级与年龄、性别、淋巴结转移及肿瘤性坏死等因素的关系。方法：回顾性统计分析124例肺癌患者的临床和病理资料。结果：男性以鳞状细胞癌为主，在各病理类型中占52.50%，差异具有统计学意义（χ2=15.902，P＜0.001）；女性则以腺癌为主，在各病理类型中占77.27%，差异具有统计学意义（χ2=15.841，P＜0.001）。106例患者中周围型和中央型肿块分别占61.32%、38.68%，周围型和中央型中腺癌分别占72.31%、19.51%，差异具有统计学意义（χ2=28.071，P＜0.001），提示腺癌以周围型肿块多见；周围型和中央型中鳞癌分别占24.62%、65.85%，差异具有统计学意义（χ2=17.734，P＜0.001），提示鳞癌以中央型肿块多见。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级腺癌淋巴结转移率分别为20.00%、21.74%、53.85%，差异有统计学意义（χ2=4.691，P＜0.05），提示腺癌Ⅲ级较Ⅰ级、Ⅱ级更容易发生淋巴结转移。106例患者中57例（53.77%）发生肿瘤性坏死，其中鳞癌和腺癌肿瘤性坏死发生率分别为67.44%、36.36%，差异有统计学意义（P＜0.05）。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级鳞癌肿瘤性坏死发生率分别为33.33%、86.67%、68.42%，鳞癌Ⅰ级与鳞癌Ⅱ、Ⅲ级相比，差异具有统计学意义（P＜0.05），提示鳞癌Ⅰ级较鳞癌Ⅱ级、Ⅲ级不易发生肿瘤性坏死。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级腺癌肿瘤性坏死率分别为0.00%、27.59%、80.00%，腺癌Ⅰ级与腺癌Ⅱ、Ⅲ级相比，差异有统计学意义（P＜0.05），提示腺癌Ⅰ级很少发生肿瘤性坏死，而腺癌Ⅲ级较易发生肿瘤性坏死。结论：分析肺癌患者的临床和病理特征对肺癌的早发现、早诊断、早治疗及判断预后有重要意义。     

BAD慢病毒载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

目的探讨促凋亡基因BAD(Bcl-2-associated death protein)重组慢病毒表达载体构建及其对肺癌A549细胞株增殖的影响。方法应用PCR法从含有目的基因的质粒pAV-MCMV-BAD-GFP中扩增BAD基因片段,克隆至慢病毒载体(pLVX-IRES-ZsGreen 1),应用PCR、酶切和测序鉴定正确后,经病毒包装,感染A549细胞,经流式细胞仪筛选稳定表达细胞株,Western blot鉴定重组慢病毒感染的A549细胞BAD的表达。采用CCK-8试剂盒定点检测细胞的光密度(OD)值,分析BAD蛋白过表达对A549细胞增殖能力的影响。结果酶切鉴定和基因测序证实长度为507bp的BAD基因成功克隆至慢病毒表达载体pLVX-IRES-ZsGreen1;重组慢病毒通过感染A549细胞株和流式细胞仪筛选出单克隆细胞株BAD-A549,Western blot检测结果显示,细胞培养BADA549细胞可稳定过表达BAD蛋白。体外增殖结果显示,细胞培养120~144h,BAD组的OD值均较对照组低(P<0.05)。结论成功构建了BAD重组慢病毒载体,获得稳定表达BAD的A549细胞株。BAD过表达能有效抑制A549细胞的增殖速度。     

人AURKA基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

目的:针对AURKA基因构建RNA干扰重组慢病毒质粒并进行慢病毒包装,初步探讨AURKA基因的功能。方法:应用pGCLV-GFP慢病毒载体构建针对AURKA的shRNA载体,转染包装293T细胞,收集病毒上清液,转染肺腺癌细胞株A549。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况确定转染效率,应用Western blot技术检测AURKA基因在蛋白水平表达的变化,以明确RNAi的抑制率。应用BrdU法分析干扰AURKA前后A549细胞增殖情况的变化,运用克隆形成实验检测干扰AURKA后A549细胞株对长春新碱敏感性的变化。结果:针对AURKA基因的RNAi慢病毒表达载体构建成功,PCR和DNA测序鉴定实验表明插入位点与干扰片断的碱基序列完全正确。在293T细胞中进行慢病毒包装,获得高滴度病毒上清液。通过重组慢病毒载体将AURKA shRNA转导入A549细胞中,转染效率为100%。Western blot检测证实LV-AURKA慢病毒显著抑制AURKA的表达,BrdU检测显示AURKA基因表达下调抑制了A549细胞的增殖。克隆形成实验表明AURKA基因表达增强A549细胞对长春新碱的敏感性。结论:慢病毒载体介导的靶向AURKA的RNA干扰可有效抑制AURKA表达,降低肺腺癌A549细胞的增殖能力,并且增强A549细胞对长春新碱的敏感性。     

PAX2特异性siRNA在诱导HEC-1A细胞增殖及凋亡中的作用

目的研究靶向全长配对盒基因-2(PAX2)siRNA在诱导子宫内膜癌细胞增殖、凋亡中的作用。方法慢病毒载体介导针对PAX2基因的siRNA转染HEC-1A细胞,Western blot、激光共聚焦显微镜、Annexin-V/PI双标法及四甲基偶氮唑蓝(MTT)分别检测PAX2蛋白表达、细胞凋亡形态学改变、凋亡率及细胞增殖变化。结果 PAX2-siRNA转染后,HEC-1A细胞的PAX2蛋白表达明显降低(P<0.05);细胞早期凋亡率显著增加(22.07±2.17)%,与空载体转染组(1.12±0.37)%及未转染组(0.89±0.52)%比较,差异均具有统计学意义(均P<0.01);细胞生长速率显著减慢,细胞经Hoechst 33258荧光染色,见转染后细胞的胞核呈浓集固缩改变,而空载体转染组和未转染组细胞的胞核无凋亡形态学改变。结论 PAX2特异性siRNA能明显抑制PAX2蛋白在子宫内膜癌HEC-1A细胞中的表达,抑制细胞增殖并诱导HEC-1A细胞凋亡。     

稳定沉默GRP78基因的胰腺腺泡细胞株AR42J的建立

目的设计并构建编码大鼠葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的短发夹样RNA(shRNA)慢病毒载体,用以建立稳定沉默GRP78基因的大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J。方法设计并合成3条编码大鼠GRP78mRNA的shRNA质粒表达载体,用三质粒包装系统包装成慢病毒,并以相应慢病毒转导大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J。经流式细胞分选术(FCAS)筛选出绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞,采用real-time PCR及Western blot方法检测GRP78基因的mRNA和蛋白表达。结果测序证实,成功构建了编码GRP78的shRNA慢病毒载体LVshGRP78-1、LVshGRP78-2和LVshGRP78-3。慢病毒转导AR42J细胞后,经荧光显微镜和FCAS证实转导效率>85%。经real-time PCR验证,与未处理组相比,LVshGRP78-1、LVshGRP78-2和LVshGRP78-3处理组对GRP78mRNA表达的沉默效率分别为69.4%±1.42%、74.7%±1.69%和86.6%±1.73%(P<0.05),含无义序列的阴性质粒LV-Non Target对照组与未处理组相比,GRP78mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示各组GRP78蛋白表达与mRNA表达趋势一致。结论成功构建了编码GRP78的shRNA慢病毒载体,建立了稳定沉默GRP78基因的胰腺腺泡细胞株AR42J,为探讨GRP78基因在急性胰腺炎发病机制中的作用提供了新的细胞模型。     

慢病毒shRNA靶向干扰RegⅣ基因胰腺癌细胞株的构建

 目的  构建并鉴定再生基因4 (regenerating islet-derived family member 4,RegⅣ)短发夹干扰RNA (short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体,继而建立稳定干扰RegⅣ基因表达的胰腺癌细胞株PANC-1。方法  使用聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction,PCR)检测RegⅣ基因在胰腺癌细胞株中的表达情况。构建重组靶向干扰RegⅣ基因的shRNA 慢病毒表达质粒pGC-shRNA-RegⅣ,用脂质体转染的方法将载体导入胰腺癌细胞,建立稳定表达shRNA的细胞株。使用荧光定量PCR检测干扰效率。RegⅣ基因过表达载体的构建方法为:将获取的目的基因与pEGFP-RegⅣ-3FLAG过表达质粒载体分别进行双酶切,利用电泳回收双酶切产物,转化感受态细胞并进行测序验证,验证成功后,使用Western blot检测其在293T细胞中的表达强度。结果  PCR结果显示RegⅣ在PANC-1中表达最高,在BxPC-3中表达最低。测序验证pGC-shRNA-RegⅣ重组质粒构建成功。将重组质粒稳定转染入胰腺癌细胞株PANC-1后能明显抑制RegⅣ mRNA 表达水平。过表达载体pEGFP-N1-3FLAG-RegⅣ合成成功后进行Western blot鉴定,验证pEGFP-N1-3FLAG-RegⅣ过表达载体构建成功。过表达RegⅣ基因转染BxPC-3后,与空质粒组相比,RegⅣ表达量明显提高。结论  成功建立了靶向稳定干扰RegⅣ基因表达的shRNA胰腺癌细胞株PANC-1。     

慢病毒介导的调节因子XI过表达及其对胶质瘤细胞增殖的抑制作用

目的：构建调节因子X1(regulatory factor X1,RFX1)过表达慢病毒载体,并观察其对F98细胞增殖的影响。方法：运用PCR技术扩增RFX1,并将其插入慢病毒空载体质粒pITA,构建pITA-RFX1慢病毒质粒,经琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定正确。将包装慢病毒共转染293T细胞,然后感染F98细胞。利用Western印迹和激光共聚焦验证RFX1过表达情况,用流式细胞仪和CCK-8试剂盒观察转染前后细胞增殖情况。 结果：电泳和测序显示慢病毒载体pITA-RFX1构建成功,将其感染F98细胞后过表达RFX1蛋白,同时可以明显抑制细胞的增殖。结论：过表达慢病毒载体构建成功,上调RFX1可以降低恶性胶质瘤细胞的增殖。     

下调叉头转录因子M1基因表达对非小细胞肺癌细胞生长与侵袭能力的影响

目的 研究用叉头转录因子M1(FoxM1)基因小干扰RNA下调非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株FoxM1基因表达后细胞增殖与侵袭能力的改变,为开发新的NSCLC靶向治疗方法提供依据.方法 设计靶向FoxM1小干扰RNA(siFoxM1),分别以siFoxM1和无关对照siRNA转染人NSCLC细胞株SPC-A-1、A549和LTEP-a-2,采用实时逆转录PCR和蛋白质印迹法检测FoxM1 mRNA和蛋白表达,采用集落形成试验、划痕试验和细胞侵袭试验研究下调FoxM1基因表达对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.结果 转染siFoxM1可高效特异地下调SPC-A-1、A549和LTEP-a-2细胞的FoxM1mRNA表达(分别下降83.9%、83.6%、88.6%)和蛋白表达.转染siFoxM1的SPC-A-1、A549和LTEP-a-2细胞集落形成数[分别为(136.0±15.5)、(87.0±2.6)和(121.7±9.4)个]和穿膜细胞数[分别为(19.2±2.5)、(4.2±0.8)和(6.2±1.8)个]均明显低于转染无关对照siRNA细胞[集落形成数分别为(222.3±20.5)、(164.7±14.1)和(260.7±13.5)个,穿膜细胞数分别为(81.4±6.2)、(39.2±4.6)和(35.6±3.0)个,均P<0.01];转染siFoxM1的SPC-A-1细胞划痕愈合率(52.6%±7.8%)明显低于转染无关对照siRNA细胞(85.3%±18.6%,P<0.01).结论 FoxM1基因表达下调可显著降低多种NSCLC细胞的增殖与侵袭能力,提爪FoxM1是潜在的肺癌治疗靶点.     

FHL1对肺腺癌细胞株A549生物学特性的影响

 目的 研究FHL1的表达对人肺腺癌细胞株A549生物学特征的影响。方法 以FHL1 mRNA及shRNA慢病毒载体转染肺腺癌细胞株A549,并采用Western blot及RT-PCR法筛选检测稳定过表达FHL1肺腺癌细胞株模型及低表达细胞株模型;运用CCK-8实验、Transwell实验、流式细胞仪、细胞集落形成实验等方法对其增殖、侵袭、凋亡及锚定非依赖性生长生物学特性进行检测评估。结果 FHL1稳定过表达及低表达组的Western blot及RT-PCR法检测显示病毒转染效果可靠稳定;CCK-8实验提示低表达组的细胞增殖情况明显高于过表达组及空白组(P=0.002 2);流式细胞仪检测提示过表达组的细胞总体凋亡率为50.48%,明显高于两个低表达组(16.41%、20.12%)及空白对照组(25.90%),差异有统计学意义(P<0.001);Transwell实验提示过表达组细胞表现出的侵袭性明显低于低表达组及空白组差异有统计学意义(P<0.001);成集落实验显示过表达组细胞株形成的集落数为28.7±6.0,明显少于两个低表达组(157.0±6.4、150.7±9.5),差异有统计学意义(P<0.001)。结论 稳定过表达FHL1肺腺癌细胞株A549模型及低表达模型构建成功。FHL1的表达对于肺腺癌细胞株A549的增殖、侵袭及转移均有抑制作用,并能够诱导其加速凋亡。     

靶向IGF-1R的siRNA增强肺癌细胞对Trail诱导凋亡敏感性的研究

目的 研究IGF-1R特异RNA干扰后肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的改变以及其对Trail的敏感性。 方法 化学合成IGF-1R特异siRNA转录模板,与表达载体连接,转染大肠杆菌扩增后提取质粒,酶切鉴定和DNA测序分析。转染A549细胞后筛选稳定表达IGF-1R-siRNA细胞株,FQ RT-PCR、Western blot和免疫组织化学检测IGF-1R基因表达。MTT法和流式细胞仪测定Trail作用前后转染和非转染A549细胞增殖活性和凋亡率。 结果 成功构建IGF-1R-siRNA表达载体并筛选出稳定表达IGF-1R-siRNA单克隆细胞。和空白对照相比IGF-1R蛋白和IGF-1RmRNA表达分别下降79.01%(0.17±0.06 vs.0.81±0.15)(P＜0.01)和76.05%(1.36±0.26 vs.5.68±0.45)(P＜0.01)。免疫组织化学显示IGF-1R表达降低。Trail作用于IGF-1R-siRNA的A549,细胞增殖速度降低(P＜0.05);凋亡率明显增加(P＜0.01)。 结论 IGF-1R-siRNA表达载体具有RNA干扰作用。IGF-1R表达下降后A549细胞增殖速度减慢,对Trail诱导的细胞凋亡敏感性增加。      

慢病毒载体介导HIF1α稳定表达A549细胞系构建

目的 利用慢病毒载体系统构建稳定表达HIF1α的A549细胞系.方法 以NCBI人HIF1α基因编码序列为模板,设计并合成引物,PCR法扩增HIF1α.酶切回收的HIF1α片段与制备的慢病毒载体HBLV-RFP-Puro重组反应.PCR和基因测序鉴定重组质粒.重组质粒和辅助质粒共转染293T细胞.包装好的病毒经过滤、浓缩后,利用稀释计数法测定病毒滴度.制备好的慢病毒感染A549细胞,采用药物筛选稳定转染细胞系.荧光显微镜及Western blot检测观察转染及筛选效果.结果 PCR扩增HIF1α片段经鉴定成功,重组质粒经PCR、基因测序鉴定构建成功.成功包装获得高滴度LV-HIF1α.LV-HIF1α感染A549细胞后经药物筛选,荧光显微镜下细胞带有红色荧光,Western blot结果显示LV-HIF1α组HIF1α的表达水平明显高于对照组.结论 慢病毒载体介导HIF1α稳定表达的A549细胞系构建成功.