灵猫方及其单味药醇提物对HepG2.2.15细胞乙型肝炎表面抗原和乙型肝炎e抗原表达的影响

目的研究灵猫方及其单味药(牡丹皮、青皮、胡黄连、猫人参、淫羊藿、猫爪草、生黄芪)醇提物对HepG2.2.15细胞乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)表达的影响。方法制备灵猫方及其7种单味药的醇提物,分别配制成50、100、200、400μg/mL4个浓度,作用于HepG2.2.15细胞72h,四甲基噻唑蓝(MTT)法检测药物的细胞毒性;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg和HBeAg水平。结果灵猫方醇提物对HepG2.2.15细胞HBsAg的分泌有抑制作用,且抑制率随药物浓度的递增而增加(P0.05)。牡丹皮醇提物、青皮醇提物、胡黄连醇提物对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的分泌有抑制作用,且抑制率随药物浓度的递增而增加(P0.05)。猫人参醇提物、淫羊藿醇提物对HepG2.2.15细胞HBsAg的分泌有抑制作用,且抑制率随药物浓度的递增而增加(P0.05)。结论灵猫方醇提取物及组分的牡丹皮、青皮、胡黄连、猫人参、淫羊藿醇提取物能抑制HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的表达。     

滨蒿提取物抗乙肝病毒作用和急性毒性研究

目的:通过考察滨蒿提取物(BH)在载体细胞中对人乙肝病毒(HBV)DNA复制的干预作用,并观察其在小鼠口服给药的急性毒性反应,为滨蒿作为传统中药材治疗乙型肝炎的临床应用提供实验依据。方法:采用HBV转染人肝癌细胞的HepG2.2.15细胞模型,荧光定量PCR检测BH对细胞培养上清中HBV DNA表达的影响;酶联免疫法(ELISA)检测BH对细胞培养上清中乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)分泌的影响。以荧光定量PCR法检测乙肝病毒载体细胞HepG2.2.15细胞和HepAD38细胞内HBV DNA的表达量,观察BH对两种载体细胞中HBV复制的抑制作用。测定BH在小鼠灌胃给药的一日内最大给药量(MTD),观察给药后14d内出现的急性毒性反应。结果:BH对2.2.15细胞培养上清中HBV DNA表达有明显的抑制作用,IC₅₀平均为142.5μg/mL;其对2.2.15细胞上清中HBsAg和HBeAg的分泌也有明显的的抑制作用,IC₅₀平均为205.8μg/mL和105.3μg/mL; BH可明显抑制HepG2.2.15细胞内HBV...     

氧化苦参碱体外抗乙型肝炎病毒作用

目的:体外观察氧化苦参碱(OM)抗乙型肝炎病毒(HBV)作用,并初步探讨其作用机制.方法:用125,250,500,1000,2000 mg·L-1OM连续作用于90％汇合度的HepG2.2.15细胞9d,以MTT比色法观察药物细胞毒性;用酶联免疫法测定细胞上清液中乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg),乙型肝炎病毒s抗原(HBsAg);采用荧光定量PCR法(FQ-PCR)测定细胞上清液中HBV DNA,细胞中HBV DNA和共价闭合环状DNA(cccDNA).结果:OM对细胞内HBV DNA和cccDNA,以及细胞外HBV DNA均有抑制作用,随着浓度升高抑制作用加强,2000 mg·L-1OM对细胞内HBV DNA,cccDNA和细胞外HBV DNA的抑制率分别为64.56％,52.12％,54.25％;对HBsAg和HBeAg的分泌也有抑制作用,且浓度越高、处理时间越长,抑制作用越明显;在相同条件下对HBsAg的抑制作用强于HBeAg,OM浓度为2000 mg·L-1时对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为51.59％,17.88％.结论:OM能有效抑制HepG2.2.15细胞中HBV复制,该作用是抑制病毒核酸复制和基因表达的结果.     

辣蓼醇提液对ＨｅｐＧ２２１５细胞分泌ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的影响

目的：研究辣蓼醇提液对 HepG2.2.15细胞分泌乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎 e 抗原（HBeAg）的影响。方法：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测辣蓼醇提液对 HepG2.2.15细胞的细胞毒作用;采用药物不同浓度处理 HepG2.2.15细胞72h 后,以酶联免疫吸附实验法（ELISA 法）测定细胞上清液中 HBsAg 和 HBeAg 的分泌水平。结果：辣蓼醇提液浓度为1.8、0.9mg／ml 时,对细胞有明显毒性;浓度为0.6、0.3、0.1 mg／ml 的辣蓼醇提液处理 HepG2.2.15细胞株72h 后,对 HBsAg、HBeAg 的分泌有抑制作用（P ＜0.05）,并呈量效关系。结论：辣蓼醇提液具有体外抗 HBV 的作用,同时有一定毒性。     

辣蓼醇提液对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响

目的:研究辣蓼醇提液对HepG2.2.15细胞分泌乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测辣蓼醇提液对HepG2.2.15细胞的细胞毒作用;采用药物不同浓度处理HepG2.2.15细胞72h后,以酶联免疫吸附实验法(ELISA法)测定细胞上清液中HBsAg和HBeAg的分泌水平。结果:辣蓼醇提液浓度为1.8、0.9mg/ml时,对细胞有明显毒性;浓度为0.6、0.3、0.1 mg/ml的辣蓼醇提液处理HepG2.2.15细胞株72h后,对HBsAg、HBeAg的分泌有抑制作用(P0.05),并呈量效关系。结论:辣蓼醇提液具有体外抗HBV的作用,同时有一定毒性。     

细脚拟青霉多糖抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的:探讨细脚拟青霉多糖(PtPs)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法:通过CCK-8试剂盒检测PtPs对HepG2.2.15的细胞毒性。以无或低毒浓度的PtPs作用于HepG2.2.15细胞,采用ELISA法检测细胞内和培养上清的HBsAg,HBeAg水平;采用荧光定量PCR法检测细胞内和培养上清中HBV DNA的水平。结果:随着PtPs浓度的增加细胞内的HBeAg和上清中的HBeAg、HBV DNA的水平显著下降。PtPs对细胞内和上清中HBeAg的抑制率高度相关,r=0.994,P<0.01。PtPs作用24 h后细胞内和上清中的HBeAg的治疗指数分别为5.63和3.30。结论:PtPs在体外对HBeAg和HBV DNA的合成与分泌有抑制作用。     

乙肝健及其含药血清对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用研究

目的探讨乙肝健药液及其含药血清对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用。方法培养HepG2.2.15细胞,24 h后加入6组不同浓度乙肝健药液和其含药血清,并与空白对照组、空白血清组对照,继续培养48 h,MTT检测各组细胞存活力;根据MTT结果选取3组浓度乙肝健药物,ELISA法检测各组48 h和96 h后上清液中HBsAg和HBeAg的含量;流式细胞术测定3组不同浓度乙肝健药液48 h后对HepG2.2.15细胞周期的影响。结果乙肝健各药液组和含药血清组细胞OD值均低于空白对照组及空白血清组(P<0.01);乙肝健不同药液组及其含药血清组作用HepG2.2.15细胞48h及96 h后,除乙肝健1组96 h的HBsAg的OD值高于空白对照组和空白血清组外,其余各组OD值均低于空白对照组及空白血清组(P<0.01)。结论乙肝健具有一定抑制HBV体内复制的作用。     

HH胶囊抗乙肝病毒的体外(2.2.15细胞)实验研究

目的 研究HH胶囊体外抗2.2.15细胞乙肝病毒作用.方法 HepG2.2.15是最常用的乙肝病毒感染的体外实验模型,用不同浓度的HH胶囊干预2.2.15细胞,用CCK-8检测药物细胞毒性,酶联免疫法检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HBeAg),荧光定量聚合酶链反应法检测乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA).结果 HH胶囊可以不同程度降低细胞外HBsAg、HBeAg、HBV DNA及细胞内HBV DNA,此作用具有时间和药物浓度依赖性.结论 HH胶囊具有良好的抗HBV作用.     

葫芦茶苷调控JAK/STAT信号通路抗乙肝病毒作用及其机制研究

目的:探讨葫芦茶苷体外抗乙型肝炎病毒的作用以及对JAK/STAT信号通路的调控作用机制。方法:以HBV基因转染的HepG2.2.15体外细胞模型,采用MTT法检测葫芦茶苷对HBV基因转染的HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0),在最大无毒浓度(TC0)情况下观察不同浓度药物作用于HepG2.2.15细胞后,分别在第4 d和8 d收集细胞培养上清液,采用ELISA法测定上清液HBsAg,HBe Ag的滴度。FQ-PCR法检测上清液HBV DNA的含量;采用FQ-PCR法检测葫芦茶苷10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml剂量组对HepG2.2.15细胞内信号转导和转录活化因子STAT1mRNA、STAT2mRNA表达的影响;RTPCR法检测JAK2、STAT3mRNA表达水平。结果:葫芦茶苷对HepG2.2.15细胞毒性较低,TC50为109.56μg/ml,TC0为41.54μg/ml。与空白对照组比较,10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml剂量的葫芦茶苷能有效抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBe Ag,明显降低HBV DNA的含量。10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml剂量的葫芦茶苷能明显升高细胞内信号转导和转录活化因子STAT1、STAT2、STAT3、JAK2 mRNA的水平。结论:葫芦茶苷体外具有显著的抗乙型肝炎病毒作用,其机制可能是通过激活JAK/STAT信号转导通路而发挥抗病毒作用。     

复方六月雪含药血清对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用

目的:观察复方六月雪(六月雪、白花蛇舌草、栀子根等)体外抗HBV的作用。方法:采用血清药理学法进行实验,复方六月雪含药血清作用于HepG2.2.15细胞,分别在第72h和144h收集细胞培养上清液,采用ELISA法测定上清液HBsAg和HBeAg的滴度。结果:复方六月雪含药血清在HepG2.2.15细胞培养中可有效地抑制细胞HBsAg和HBeAg的表达(P<0.05、P<0.01),抑制作用有明显的量效反应关系。结论:复方六月雪含药血清在体外具有显著的抗HBV作用。     

甘草甜素对HepG2．2．15细胞株HBV感染的影响

目的探讨甘草甜素（GL）对HepG2．2．15细胞上清液中HBsAg、HBeAg、HBVDNA的作用,及对细胞存活率的影响。方法实时荧光定量PCR检测HBVDNA的表达,ELASA检测HBV所分泌抗原,MTT检测细胞的增殖活性,计算细胞存活率。结果给药后各组HBsAg分泌结果显示总体均数间差异显著（P=0．000）,GL各组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）,抑制作用存在剂量依赖关系;而对HBeAg水平的影响因剂量不同而表现为升高和降低两种趋势,除50pg／mL组外,其余各组与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）,但800μg／mL组HBeAg分泌增加,400μg／mL以下组为HBeAg降低;HBVDNA的表达显示GL各组与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）,但400pg／mL以下组为HBVDNA降低,800μg／mL组出现HBVDNA复制增强;MTT实验显示,200μg／mL以下3个剂量组均可促进细胞增殖（P〈0．01）,400、800μg／mL2组均显著抑制细胞增殖（P〈0．01）;MTT分别与HBeAg和HBVDNA水平呈显著负相关（P〈0．01）,但与HBsAg呈显著正相关（r=0．869,P=0．000）。结论GL对HepG2．2．15细胞株上清中的HBeAg和HBVDNA水平可能具有双向作用,而对HBsAg具有剂量依赖的抑制作用,提示GL的使用应注意选择适应证及合适的剂量。     

Hepatoprotective and antiviral properties of isochlorogenic acid A from Laggera alata against hepatitis B virus infection

Ethnopharmacological relevance

The aim of this study was to determine the anti-hepatitis B effect of isochlorogenic acid A isolated from Laggera alata (Asteraceae), a traditional Chinese herbal medicine.

Materials and methods

The anti-hepatitis B activity of isochlorogenic acid A was evaluated by the d-galactosamine (D-GalN)-induced HL-7702 hepatocyte damage model and the HBV-transfected HepG2.2.15 cells.

Results

Isochlorogenic acid A significantly improved HL-7702 hepatocyte viability and markedly inhibited the productions of HBsAg and HBeAg. The inhibitory rates of isochlorogenic acid A on the HBsAg and HBeAg expressions were 86.9% and 72.9%, respectively. In addition, isochlorogenic acid A declined markedly the content of hepatitis B virus covalently closed circular DNA (HBV cccDNA) and induced significantly the heme oxygenase-1 (HO-1) expression in HepG2.2.15 cells.

Conclusions

Isochlorogenic acid A was verified to possess the potent anti-hepatitis B activity. The anti-HBV target of isochlorogenic acid A is probably associated with blocking the translation step of the HBV replication. Overexpression of HO-1 may contribute to the anti-HBV activity of isochlorogenic acid A by reducing the stability of the HBV core protein and thus blocking the refill of nuclear HBV cccDNA. Additionally, the hepatoprotective effect of isochlorogenic acid A could be achieved by its antioxidative property and induction of HO-1.     

白藜芦醇及其衍生物抗乙型肝炎病毒体外实验研究

 目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,反式3,4′,5-三羟基-二苯乙烯)及其衍生物体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用,及相关 的量效关系与构效关系。方法 将白藜芦醇及其衍生物作用于HepG2.2.15细胞系,MTT法检测样品对HepG2.2.15细胞的毒 性,ELISA法检测细胞上清中HBsAg,HBeAg的变化,实时荧光定量PCR法检测细胞与其上清中总HBV DNA含量,流式细胞仪 检测白藜芦醇时HepG2.2.15的凋亡作用,进行综合评价。结果 白藜芦醇对抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg,HBeAg治疗指 数(TI)分别为(3.26±0.39),(2.91±0.12);在低毒或无毒浓度(0.11 mol·L^-1)下降低DNA拷贝数;呈浓度依赖性诱导 HepG2.2.15细胞凋亡。结论 白藜芦醇及其衍生物在体外有一定的抗乙型肝炎病毒作用,可能是通过抑制HBV DNA复制, 诱导感染HBV的HepG2.2.15细胞凋亡而发挥抗病毒活性。综合评价白藜芦醇及其衍生物的活性,即白藜芦醇苷(Rn1)、甲氧 基取代羟基的苷[4′-甲氧基-3,3′,5-二苯乙烯-3-葡萄糖苷(Rn3)]效果较好。     

甘草甜素对HBsAg低表达HepG2.2.15细胞株HBV感染及TLR2、4的影响

目的探讨甘草甜素(GL)对HepG2.2.15细胞上清HBV DNA、e抗原分泌,Toll样受体2、4(TLR2、4)信号分子的表达及对细胞增殖的影响.方法实时荧光定量PCR检测HBV DNA表达,ELISA检测HBV所分泌抗原,MTT检测细胞增殖活性,直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测TLR2、4在细胞株上表达的阳性细胞率,并与空白对照组对比.结果HBsAg在该细胞株低表达,但HBeAg则明显阳性,因此研究了GL对e抗原的影响,给药后第3 d e抗原总体均数间差异显著(P＜0.01),但只有400 μg/ml组与对照组间比较显著降低(P＜0.05),800 μg/ml组则较其余GL组明显升高(P＜0.01).HBV DNA给药后第3 d总体均数间比较差异有显著性,只有50 μg/ml组较对照组降低,但无统计学意义(P＞0.05),其余各组均较对照组升高;各组TLR2、4数值总体均数间有显著差异(P＜0.01).除200 μg/ml组外,各剂量组与对照组比较显示两者均显著上调(P＜0.05),但均无剂量依赖关系;MTT实验显示200 μg/ml以下三个剂量组均可促进细胞增殖,但只有200 μg/ml组与对照组间差异显著(P＜0.05);400、800 μg/ml两组均显著抑制细胞增殖(P＜0.01);而MTT分别与HBeAg、HBV DNA呈显著负相关(P＜0.05).结论研究表明,GL对HepG2.2.15变异株的病毒复制及e抗原分泌可能具有双向作用;细胞的存活数与病毒复制及e抗原呈负相关;TLR2在变异株低表达,GL呈非剂量依赖关系上调TLR2、4表达,至少在该细胞株GL影响HBV的机理与TLR2、4信号的改变无关,但有可能在体内通过免疫途径影响HBV.     

中国圆田螺多糖体外抗乙肝病毒的实验研究

目的:探讨中国圆田螺多糖(PCC)体外抗乙肝病毒的生物学活性.方法:以HepG2 2.2.15细胞系为体外实验模型.MTT法检测细胞毒性,将不同安全浓度的PCC及阳性对照药物3TC作用于此细胞系,实验同时设不加药物的细胞对照,第9天收集细胞培养上清液.采用ELISA法测定各组细胞培养上清液中HBsAg,HBeAg水平,荧光探针定量PCR检测HBV-DNA含量.结果:PCC在HepG2 2.2.15细胞培养中的TCo为1g·L-1,TC50 ＞10 g·L-1,对细胞毒性较小.PCC对HepG2 2.2.15细胞HBsAg,HBeAg分泌的IC50分别为0.501,0.401 g·L-1,SI分别为＞19.96和＞24.94.PCC可以有效抑制HBsAg,HBeAg的分泌,且PCC对HBeAg的抑制效果优于HBsAg.PCC在0.1,1g·L-1(P＜0.05)对HepG2 2.2.15细胞中的HBV-DNA有明显的抑制作用.结论:中国圆田螺多糖具有一定的体外抗HBV活性,且毒性较小,具有良好的应用前景.     

青钱柳提取物对HepG2 2.2.15细胞HBsAg和HBeAg表达的影响

目的研究青钱柳提取物体外抗乙肝病毒作用。方法青钱柳用75%乙醇提取后按溶剂极性萃取,获得的三氯甲烷部位经柱层析得到Fr.2组分。体外培养HepG2 2.2.15细胞,MTT法检测青钱柳提取物Fr.2组分对HepG22.2.15细胞的细胞毒作用,用ELISA法检测HepG2 2.2.15细胞培养液中HBsAg和HBeAg的表达。结果青钱柳提取物Fr.2组分对HepG2 2.2.15细胞无明显的细胞毒作用。与对照组比较,Fr.2组分对HBsAg和HBeAg的表达均有显著性抑制作用(P<0.01或0.05)。结论青钱柳提取物体外具有较强的抗乙肝病毒作用。     

乙肝转阴散对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用

目的 :研究乙肝转阴散(YGZYS)对HepG2.2.15细胞乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎E抗原(HBeAg)分泌的影响。 方法 :采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测YGZYS对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC₅₀)和最大无毒浓度(TC₀);在TC₀基础上观察药物5个不同浓度作用于HepG2.2.15细胞,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养4 d和8 d的细胞上清液HBsAg和HBeAg的滴度。 结果 :TC₅₀ 5.386 g ·L^-1,TC₀ 0.736 g ·L^-1。提示YGZYS对HepG2.2.15细胞毒性作用较低。在无毒浓度下,YGZYS能有效地抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg;且治疗指数(TI)均大于2,说明YGZYS为高效低毒的抗HBV药物。 结论 :YGZYS可有效地抑制HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的分泌,且毒性较低。     

Effects of Rubiadin isolated from Prismatomeris connata on anti‐hepatitis B virus activity in vitro

Prismatomeris connata was a kind of Rubiaceae plant for treatment of hepatitis, hepatic fibrosis and silicosis. Whereas, the effective components of Prismatomeris connata remains unexplored. The aim of this study was to investigate the inhibitory effects and mechanisms of Rubiadin isolated from Prismatomeris connata against HBV using HepG2.2.15 cells. The levels of hepatitis B surface antigen (HBsAg), hepatitis B e antigen (HBeAg), and hepatitis B core antigen (HBcAg) in the supernatants or cytoplasm were examined using by enzyme‐linked immunosorbent assay. HBV DNA was qualified q‐PCR. Rubiadin was isolated by silica gel column. The structure of the compound was elucidated by HPLC, FT‐IR, ¹H‐NMR, ¹³C‐NMR and identified as 1,3‐Dihydroxy‐2‐methyl‐9, 10‐anthraquinone. Rubiadin significantly decreased HBeAg,HBcAg secretion level and inhibit HBV DNA replication. Rubiadin inhibits the proliferation of the cells and HBx protein expression in a dose‐dependent manner. The intracellular calcium concentration was significantly reduced. These results demonstrated that Rubiadin could inhibit HepG2.2.15 cells proliferation, reduce the level of HBx expression, and intracellular free calcium, which might become a novel anti‐HBV drug candidate.