调心方对APP/PS1双转基因AD小鼠空间学习记忆能力和海马突触传递长时程增强的影响

目的观察调心方对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠空间学习记忆能力和海马突触传递长时程增强(LTP)的影响,探讨其作用机制。方法将54只3月龄APP/PS1双转基因AD小鼠随机分为模型组、调心方组和阳性药组,以同月龄同性别18只C57BL/6J野生小鼠作为正常组,各给药组给予相应药物灌胃。给药12周后,进行Morris水迷宫行为学检测和离体电生理记录。结果 Morris水迷宫测试结果显示,定位航行实验与模型组比较,调心方组逃避潜伏期时间明显缩短(P0.01);空间探索实验与模型组比较,调心方组小鼠穿越原平台所在象限次数和在原平台所在象限停留时间明显增加(P0.05,P0.01)。在离体海马电生理诱导中,与模型组比较,调心方组海马兴奋性突触后电位斜率明显增强(P0.01),海马双脉冲易化无明显差异(P0.05)。结论调心方可有效改善APP/PS1双转基因AD小鼠空间学习记忆能力和神经突触可塑性,具有认知保护作用。     

清心开窍方对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆及海马CA1区Akt、GSK3α、βAPP、Aβ表达的影响

目的:探讨清心开窍方对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力、海马CA1区神经元形态学的改变,以及对Akt、GSK3α、βAPP、Aβ蛋白表达的影响。方法:选取50只3月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠,随机分为模型组、多奈哌齐组(1.67 mg·kg~(-1))、清心开窍方高、中、低剂量组(每日给药剂量分别为19、9.5、4.75 g·kg~(-1)),另取10只同背景同性别同月龄的C57BL/6J小鼠作为对照组,对照组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,1次/d,连续灌胃12周。采用Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力,透射电镜观察小鼠海马CA1区神经元超微结构,尼氏染色法观察小鼠海马CA1区神经元损伤情况,免疫组织化学染色法检测海马CA1区Akt、GSK3α、βAPP、Aβ蛋白的表达情况。结果:与对照组比较,模型组APP/PS1双转基因小鼠逃避潜伏期延长(P0.01),穿台次数减少,其海马CA1区神经元超微结构出现严重损伤,锥体细胞数量减少,排列紊乱,尼氏体着色变浅,Akt蛋白表达减少(P0.01),GSK3α、βAPP、Aβ表达增加(P0.01);与模型组比较,清心开窍方干预组逃避潜伏期均明显缩短(P0.01),穿台次数增多,同时比较小鼠在原平台停留的时间和路程百分比均明显增加(P0.05;P0.01),其神经元结构较完整,核膜清晰,胞浆内核糖体丰富,线粒体数量增多,且嵴结构完整,锥体细胞数量增多,排列紧密,尼氏体着色较深,同时Akt蛋白表达增加(P0.01;P0.05),GSK3α、βAPP、Aβ表达减少(P0.01;P0.05)。结论:清心开窍方能够改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力,其机制可能与Akt/GSK3α介导的信号通路相关,它能够激活Akt,抑制GSK3α,降低βAPP、Aβ的生成,减少神经元损伤。     

还脑益聪方提取物对不同月龄APP转基因小鼠行为学及其海马区线粒体超微结构的影响

目的:研究还脑益聪方提取物对不同月龄APP转基因小鼠行为学及其海马CA1区线粒体超微结构的影响,从能量代谢的角度探讨中药提取物治疗AD的部分作用机制。方法:选用3月龄APP695V717I转基因小鼠120只为痴呆模型,随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方提取物高剂量组、低剂量组,每组30只,并设正常对照组。采用Morris水迷宫及跳台实验观察试验动物的行为学;应用透射电镜观察模型脑海马区线粒体超微结构。结果:7,9月龄APP转基因模型小鼠Morris水迷宫试验中穿越原平台位置次数、游泳时间和路程均较转基因模型组显著增多(P<0.05,P<0.01)、跳台实验中的潜伏期均明显缩短(P<0.01),且随着病程的进展而有加重之势。还脑益聪方提取物能明显提高不同月龄转基因小鼠穿越原平台位置次数、游泳时间和路程(P<0.05,P<0.01),且明显延长跳台实验中的潜伏期(P<0.05,P<0.01)。7,9月龄APP转基因小鼠海马CA1区神经元线粒体均表现出线粒体膜破坏、溶解,内嵴大部分排列轻度紊乱,有的嵴内腔扩张,基质疏松,线粒体肿胀,且随病程进展而损坏加重;还脑益聪方提取物能改善不同月龄APP转基因小鼠海马CA1区线粒体超微结构与数量。结论:APP转基因小鼠AD模型学习记忆能力显著下降,且该模型海马CA1区神经元线粒体数量减少、结构损伤,且随病程进展而均显加剧;还脑益聪方提取物能够改善不同病程APP转基因小鼠的学习记忆能力,其可能与改善海马区神经元线粒体结构、增加线粒体数量而保护脑功能有关。     

大补元煎通过上调BDNF/TrkB/CREB信号通路改善APP/PS1双转基因痴呆小鼠海马突触可塑性

目的:观察大补元煎对APP/PS1痴呆小鼠海马突触可塑性及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的作用,并探讨其改善突触可塑性的可能机制。方法:将APP/PS1小鼠36只分为模型组、多奈哌齐组(6.5×10~(-4)g·kg~(-1)·d~(-1))和大补元煎组(13.2 g·kg~(-1)·d~(-1)),野生鼠12只设为正常组,正常组和模型组给予等体积生理盐水,各组连续灌胃30 d。应用Morris水迷宫检测各组小鼠的学习记忆能力,应用尼氏染色和高尔基染色观察海马区神经元和突触的病理形态变化,应用免疫荧光(IF)观察海马突触后致密蛋白95(PSD95)及突触素(SYN)的蛋白表达水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马中BDNF,TrkB,CREB及磷酸化CREB(p-CREB)的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠平台潜伏期和游泳总路程增加(P0.01),穿越平台次数和目标象限停留时间减少(P0.01),小鼠海马CA3区神经元胞内尼氏体减少或消失,小鼠海马CA3区神经元及树突分支数量、树突棘密度减少(P0.01),小鼠海马SYN,PSD95,BDNF,TrkB及p-CREB的蛋白表达水平减少(P0.01)。与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠平台潜伏期和游泳总路程减少(P0.05,P0.01),穿越平台次数和目标象限停留时间增加(P0.05,P0.01),小鼠海马CA3区神经元胞内尼氏体数量增多,小鼠海马CA3区神经元及树突分支数量,树突棘密度增加(P0.05,P0.01),小鼠海马SYN,PSD95,BDNF,TrkB及p-CREB的蛋白表达水平增加(P0.05,P0.01)。结论:大补元煎改善APP/PS1双转基因小鼠突触可塑性的机制可能与其上调小鼠海马中BDNF/TrkB/CREB信号通路有关。     

异常黏液质成熟剂颗粒对APP/PS1转基因小鼠行为学和海马组织病理形态学的影响

目的观察异常黏液质成熟剂颗粒对APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆、海马CA1区组织病理形态学变化的影响,探讨其作用机制。方法选取3月龄APP/PS1转基因模型小鼠并将其随机分为模型组、阳性药组和异常黏液质成熟剂高、中、低剂量组,每组18只。另取18只3月龄C57BL/6J小鼠作为正常组。各给药组给予相应药物灌胃,连续6个月。Morris水迷宫实验观察小鼠学习和记忆能力;HE染色光镜下观察海马CA1区病理形态;透射电镜观察小鼠海马CA1区有髓神经髓鞘、微管、微丝。结果水迷宫实验结果显示,模型组小鼠逃避潜伏期时间较正常组明显延长(P0.01),空间搜索实验穿越原平台位置次数较正常组明显减少(P0.01);与模型组比较,异常黏液质成熟剂除低剂量组第1日外其余各剂量组小鼠逃避潜伏期明显缩短(P0.05,P0.01),异常黏液质成熟剂低、高剂量组小鼠经过有效区域次数明显增加(P0.05,P0.01),异常黏液质成熟剂各剂量组小鼠原平台所在象限停留时间明显增加(P0.01)。HE染色显示,异常黏液质成熟剂各组小鼠脑组织海马CA1区,锥体细胞层完整性稍好,细胞排列整齐,形态正常,均匀分布;电镜观察,与模型组比较,异常黏液质成熟剂各组小鼠海马CA1区神经元核形不规则,核膜清楚,染色质清晰,核仁明显,细胞基质均匀,细胞器丰富,分布均匀,线粒体嵴明显,粗面内质网和游离核糖体多见。结论异常黏液质成熟剂颗粒可改善APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力,减轻神经元超微结构受损。     

洗心汤对APP/PS1双转基因小鼠突触功能相关蛋白及受体表达的影响

目的观察洗心汤对APP/PS1双转基因小鼠空间学习记忆能力、海马CA1区突触超微结构和突触功能相关蛋白及受体表达的影响,初步探讨洗心汤方治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法选用8周龄雄性APP/PS1双转基因小鼠,分为模型组、盐酸多奈哌齐组、洗心汤组,另以同窝阴性小鼠设立空白对照组,每组15只。连续灌胃给药6个月后进行相关指标检测。采用Morris水迷宫实验观测APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力;透射电镜观察小鼠海马CA1区突触超微结构;分别采用免疫荧光法及免疫印迹法检测APP/PS1转基因小鼠海马CA1区突触后致密物质-95(PSD95)、N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(NMDAR2B)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、生长相关蛋白43(GAP43)表达水平。结果与空白对照组比较,模型组逃避潜伏期延长,在目的象限游泳距离与穿越平台次数的百分比降低(P0.01);与模型组比较,洗心汤组小鼠逃避潜伏期均值总体下降(P0.01,P0.05),在目的象限游泳距离及穿越平台的次数占总路程与总穿越平台次数的百分比显著增加(P0.01,P0.05)。电镜结果表明,洗心汤组较模型组神经元细胞密集,细胞核多为圆形,核内染色质轻度凝集,核仁可见;细胞质内线粒体轻度肿胀,粗面内质网轻度扩张,游离核糖体丰富,脂褐素颗粒少见,突触结构基本清晰。免疫荧光结果表明,海马CA1区PSD95、NMDAR2B、MBP、GAP43蛋白表达明显增加(P0.05,P0.01),免疫印迹实验中其含量亦呈现高表达水平(P0.05,P0.01)。结论洗心汤对APP/PS1转基因小鼠的空间学习记忆功能具有明显的改善作用,其机制可能与影响小鼠海马突触结构,提高小鼠海马突触功能蛋白及受体表达有关。     

石菖蒲活性成分对双转基因小鼠APP及神经突触超微结构的影响

目的　探讨石菖蒲活性部位β-细辛醚和丁香酚对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑内β淀粉样前体蛋白(Amyloid Precursor Protein,APP)表达及神经突触超微结构的影响。方法　3月龄SPF级雄性APPswe/PS1dE9双转基因小鼠12只,随机分为4组:模型组、安理申(以安理申为阳性对照药)组、β-细辛醚组及丁香酚组,每组3只,用同龄同背景APPswe/PS1dE9转基因阴性小鼠3只作为正常对照组。用药4个月后,免疫组织化学染色方法检测大脑内海马及皮层APP表达水平,并采用透射电子显微镜观察海马CA1区神经元及神经突触的超微结构的变化。结果　模型组在海马CA1区和皮质的APP阳性面积百分比较正常对照组显著增加(P < 0.01)。与模型组比较,安理申组和β-细辛醚组在海马CA1区和皮质的APP阳性面积百分比显著减少(P < 0.01);丁香酚组皮质的APP阳性面积百分比显著减少(P < 0.01)。透射电子显微镜观察,与正常对照组比较,模型组小鼠海马CA1区神经元神经毡内突触结构表现为大片的轴浆空泡化,突触数量减少,突触界面变短或融合消失,突触小泡数量明显减少,突触前膜、后膜及突触间隙大多模糊不清,突触后成分致密区厚度变薄,典型的突触结构已遭破坏,部分线粒体有轻微破损。安理申组、β-细辛醚组及丁香酚组小鼠海马CA1区神经突触结构与正常对照组比较无明显差异,与模型组比较在细胞器结构、轴浆空泡化、突触数量、突触界面、突触小泡数量及突触结构上均有不同程度的改善。结论　β-细辛醚及丁香酚可以抑制APP的过量表达,对与学习记忆密切相关的突触有一定的保护和修复作用。     

“益肾调督”电针法对阿尔茨海默病小鼠大脑海马老年斑形成的影响

目的:观察"益肾调督"电针法对APP/PS 1双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠海马区老年斑(SP)及其相关蛋白表达的影响,探讨电针改善AD的机制。方法:APP/PS 1双转基因AD小鼠随机分为模型组、电针两疗程组和电针三疗程组,每组6只;6只雄性野生型小鼠为对照组。给予各电针组小鼠"百会"和双侧"肾俞"电针治疗,每天1次,7d为1个疗程,分别进行2个或3个疗程。Morris水迷宫实验观察各组小鼠记忆和空间探索能力,免疫组化法检测海马区SP的表达情况,Western blot法检测海马区淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶1(BACE 1)和胰岛素降解酶(IDE)的表达水平。结果:与对照组相比,模型组小鼠的逃避潜伏期和搜索路径均明显增加(P0.01,P0.05),穿越原平台的次数明显减少(P0.01);与模型组相比,两治疗组小鼠的第5天逃避潜伏期和第4天、第5天搜索路径均明显缩短(P0.01),穿越原平台的次数明显增加(P0.01);与电针两疗程组相比,电针三疗程组的第5天逃避潜伏期和第4天、第5天搜索路径也明显缩短(P0.05,P0.01),穿越原平台的次数明显增加(P0.05)。对照组小鼠海马区无SP阳性斑块;模型组SP数目较对照组明显增加(P0.01);与模型组相比,两治疗组海马区的SP数目均明显减少(P0.01);与电针两疗程组相比,电针三疗程组SP数目明显减少(P0.01)。模型组小鼠海马区APP、BACE 1表达水平明显高于对照组(P0.01),IDE表达水平明显低于对照组(P0.01);两治疗组海马区APP、BACE 1表达水平明显低于模型组(P0.01),IDE表达水平明显高于模型组(P0.01);电针三疗程组海马区APP、BACE 1表达水平明显低于电针两疗程组(P0.01,P0.05),IDE表达水平明显高于电针两疗程组(P0.05)。结论:"益肾调督"电针法可降低AD小鼠海马区APP、BACE 1表达,提高IDE的表达,从而减少海马区SP的沉积,改善其学习记忆和空间探索能力。     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠突触 相关蛋白表达的影响

目的:观察姜黄素对AD模型APP/PS1双转基因小鼠突触相关蛋白突触后致密蛋白-95(postsynaptic densityprotein-95,PSD-95)和骨架蛋白Shank1表达的影响。方法:将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮阳性对照组(10 mg.kg-1.d-1)、姜黄素高、中、低剂量组(400,200,100 mg.kg-1.d-1),正常对照组为相同背景非转基因小鼠。灌胃3个月后,应用免疫组织化学和Western blot方法进行检测。结果:行为学检测,治疗组与模型组相比定位航行实验和空间探索实验存在不同程度的差异(P<0.01或P<0.05)。PSD-95和Shank1免疫组化,模型组小鼠大脑海马CA1区较对照组阳性细胞明显减少(P<0.01),姜黄素干预组有所恢复。Western blot检测海马PSD-95的蛋白结果显示,模型组小鼠海马PSD-95的蛋白表达条带均比对照组小鼠明显变细、颜色变浅(P<0.01);姜黄素干预组小鼠海马PSD-95的蛋白表达条带均明显增粗、颜色加深(P<0.05)。结论:姜黄素增加APP/PS1双转基因小鼠突触相关蛋白shank1和PSD-95表达,改善APP/PS1双转基因小鼠突触的结构和可塑性,提高空间学习记忆能力。     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠海马IRS-1和p-IRS-1表达的影响

目的:观察姜黄素对AD模型APP/PS1双转基因小鼠胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)和磷酸化胰岛素受体底物-1(p-IRS-1)表达的影响.方法:将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照罗格列酮组(10mg.kg-1·d-1)、姜黄素高、中、低剂量组(400,200,l00mg.kg-1·d-1),正常对照组为相同背景非转基因小鼠.灌胃3个月后,应用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR方法进行检测.结果:IRS-1和p-IRS-1免疫组化染色,模型组小鼠大脑海马CA1区IRS-1阳性细胞较对照组明显增加(P＜0.01),p-IRS-1明显减少(P＜0.01);与模型组相比,姜黄素各干预组可减少IRS-1阳性细胞数(P＜0.05或P＜0.01),并升高p-IRS-1阳性细胞数(P＜0.05或P＜0.01).Westem blot检测海马IRS-I和p-IRS-1的蛋白表达结果与免疫组织化学检测结果一致.RT-PCR检测IRS-1 mRNA表达结果与免疫组织化学和Western blot结果相反.结论:姜黄素可以使APP/PS1双转基因小鼠海马增加的IRS-1和减少的p-IRS-1得以恢复,并增加IRS-1 mR-NA表达,改善APP/PS1双转基因小鼠胰岛素信号转导,提示姜黄素可能通过调节胰岛素信号转导机制发挥抗AD作用.     

珍珠母超微粉蛋白及寡肽对小鼠镇静安眠作用比较

目的比较珍珠母超微粉蛋白、寡肽对小鼠镇静安眠作用。方法利用PCPA制造小鼠失眠模型,观察小鼠的自主活动情况,ELISA法测小鼠血中ATCH含量并计算脑及脑系数。结果阳性对照组、寡肽组小鼠的自主活动次数显著降低,小鼠血中ACTH的含量增加,但脑干系数无影响。结论超微粉寡肽类成分(MCP)镇静安眠活性最强,为镇静安眠主要活性部位,调节ACTH可能是其镇静安眠机制。     

耳鸣(肾精亏损型)临床资料研究

[目的]对2007年11月至2008年11月就诊的主观性耳鸣患者246例,排除其他中医证型,主要研究肾精亏损型耳鸣患者耳鸣的临床特征,变化规律及耳鸣产生的影响等.[方法]选择肾精亏损型耳鸣患者,记录临床症状及体征,采用电测听及耳鸣匹配、听觉脑干诱发电位(ABR)等方法检查,并将资料进行统计分析.[结果]患者年龄以51～60岁最多见,其次为61～70岁.耳鸣响度的自我评分与响度匹配值之间无关联.大多数病例的耳鸣病程在一年之内.大部分患者受耳鸣困扰的程度在中度以下.ABR测试结果听力正常者占25%,右侧和左侧听神经传导至脑干功能障碍患者分别占13%和19%,双侧听神经传导功能障碍占16%.[结论]临床耳鸣患者多数为肾精亏损型,年龄以51～60岁最多见,男女比例相当,大部分患者听神经传导障碍和脑干功能障碍,高音调耳鸣患者居多.     

《老老恒言》论老年养生

简要论述了《老老恒言》中有关老年养生的思想和方法 ,认为饮食以调理脾胃为要 ,应注意饮食有节、五味调和、清淡为补 ;起居以养静为要 ,应注意调顺四时、起居有常、静养与导引相结合 ;养性以安命为要 ,应注意清心寡欲、修心养性     

辨证与辨病相结合辨治乳腺增生病

探讨乳腺增生病中医辨证分型的客观依据,泌免疫变化与中医辨证分型的相关性进行了总结和研究,医药辨治乳腺增生病的新思路。对乳腺增生病的红外光扫描诊断、病理分类、内分以期能够使微观医学与宏观辨证相结合,以开拓中医药辨治乳腺增生病的新思路。     

往来寒热证58例辨证论治探讨

收集我院门诊自2000年10月至2003年9月接诊的往来寒热证患者58例,实验室检查排除疟疾(血涂片均未找见疟原虫),分别从少阳辨证论治33例,从膜原辨证论治25例,疗效满意。     

中药产业竞争力提升战略研究

本文运用了竞争力理论与战略理论，分析了中药产业竞争力提升的环境与条件，提出了提升中药产业竞争力的三大战略目标、三大总体战略、四条战略举措及三个实施阶段与重点任务。     

中医“治未病”理论的研究

治未病是中医学重要的防治思想,即预防疾病的发生和发展,防惠于未然的预防学思想,即未病之前,防止疾病的发生;已病之后,防止疾病的传变,强调以“预防为主”。本文从治未病的渊源;治未病思想的实质内容;“治未病”理论的应用;“治未病”临床研究进展等几方面解释治未病。     

咳嗽六经辨治初探

六经皆有咳嗽,寒热皆可致咳,治疗上不可拘于一理一方,当穷究其机,辨证施治,方能事半功倍。以六经辨证为纲,分析《伤寒杂病论》对咳嗽的有关论述,以期提高咳嗽的临床疗效。     

丁香苦苷不同给药途径的药物动力学研究

目的:研究并比较丁香苦苷单体两种给药途径在家兔体内的药物动力学过程,考察丁香苦苷单体口服后的绝对生物利用度。方法:家兔静脉注射丁香苦苷注射液和灌胃给予丁香苦苷水溶液,采集血样,固相萃取小柱活化方法处理血浆后高效液相色谱法测定丁香苦苷血浆浓度,采用药动学软件3P97进行数据处理,确定药动学参数。结果:丁香苦苷静脉给药后在体内符合二室模型分布,其主要药动学参数分别如下:T1/2α为2.41min,T1/2β为15.38min。灌胃给药后丁香苦苷的药动学行为符合一级吸收二室模型,Cmax为17.91min,T1/2(α)为9.642min,T1/2(β)31.748min。绝对生物利用度为35.9%。结论:丁香苦苷单体经口服和静脉两种给药途径给药后,吸收和消除均较快。     

老年股骨颈骨折术后的护理

股骨颈骨折是发生于老年人的常见骨科病，以女性多见。因老年人骨质疏松，有机质少，应变力差，所以只需较小扭转暴力就能引起骨折。骨折后，由于骨折部位血供差，骨折不愈合的可能性大，加之患者年老体弱、长期卧床，易发生危及生命的并发症，因此恰当的护理非常重要，现将护理体会介绍如下。