桂枝通过调控FXR通路改善ANIT诱导的肝内胆汁淤积大鼠模型的机制研究

研究桂枝通过调控法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)通路改善α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导大鼠肝内胆汁淤积的作用及机制。将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)组(60 mg·kg~(-1))、桂枝60 mg·kg~(-1)治疗组、桂枝20 mg·kg~(-1)治疗组5组,每组8只。除正常组和模型组外,其余各组按对应浓度连续水溶液0. 005 m L·g~(-1)体质量灌胃,每天1次,灌胃7 d;除正常对照组外,其余各组于灌胃第5天予100 mg·kg~(-1)ANIT灌胃造模,每天1次,灌胃3 d。末次给药24 h后腹主动脉取血,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBi L)、总胆汁酸(TBA)水平;取大鼠肝脏组织1. 5～2 cm,经10%甲醛固定,进行石蜡包埋切片,并行HE染色,免疫组化(IHC)分析FXR的表达;取大鼠肝脏组织提取RNA及蛋白,检测FXR mRNA表达及FXR下游分别与胆汁酸合成、解毒、转运相关的SHP,UGT2B4,BSEP蛋白的表达情况。结果表明,与正常组比较,模型组血清ALT,AST,TBi L,TBA的水平升高(P0. 01),肝脏损伤严重,FXR蛋白和mRNA表达降低,SHP,UGT2B4,BSEP蛋白表达均降低(P0. 05,P0. 01);与模型组比较,药物组能在不同程度上降低血清ALT,AST,TBi L,TBA水平(P0. 05,P0. 01),改善肝脏组织损伤,增加FXR蛋白灰度值,促进FXR mRNA和FXR,SHP,BSEP和UGT2B4蛋白的表达(P 0. 05,P 0. 01)。桂枝可以缓解ANIT诱导的肝内胆汁淤积,减轻肝细胞损伤,降低血清ALT,AST,TBi L,TBA水平。其机制可能是通过FXR-SHP,FXR-UGT2B4,FXR-BSEP信号通路来进行干预。故而,在肝内胆汁淤积的发病过程中,可以尝试在桂枝改善肝内胆汁淤积方面做更进一步的探索和尝试,为临床治疗肝内胆汁淤积提供有效药物。     

残黄片对ANIT诱导黄疸模型大鼠的退黄作用机制分析

目的:考察残黄片对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导黄疸模型大鼠肝脏法尼醇X受体(FXR),尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)mRNA和蛋白表达的影响,探讨其治疗残留黄疸的作用机制。方法:大鼠分为正常组、模型组、残黄片(CHP)组和熊去氧胆酸片(UDCA)组,ANIT灌胃复制黄疸模型,相应药物干预后进行血清总胆红素(TBIL),总胆汁酸(TBA),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的含量检测和肝组织病理学检查,以评价残黄片的治疗作用。应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测各组大鼠肝组织FXR,UGT1A1,MRP2 mRNA和蛋白的相对表达量。结果:CHP能显著降低由ANIT引起的大鼠血清TBIL,TBA,ALT,AST,ALP的升高,抑制肝脏病理学改变,退黄作用优于UDCA。与正常组比较,ANIT造模后显著抑制大鼠肝组织FXR,UGT1A1,MRP2的mRNA水平(P0.01)。与模型组比较,CHP和UDCA干预后均显著提升了各蛋白目的基因mRNA水平(P0.01),在提升胆红素代谢酶UGT1A1的mRNA水平上CHP优于UDCA(P0.01)。在影响蛋白表达方面,与正常组比较ANIT造模使大鼠FXR表达明显升高(P0.05),CHP干预有促进FXR表达的趋势,而UDCA未见有促进趋势,但二者无显著差异。在促进胆红素代谢和胆汁排泄方面,ANIT造模使得UGT1A1,MRP2的表达显著降低(P0.01),而CHP治疗后显著提高了UGT1A1和MRP2蛋白的表达(P0.01)。在提高胆红素与胆汁酸外排蛋白MRP2的表达上CHP优于UDCA(P0.01)。结论:CHP退黄作用机制与激活肝脏FXR mRNA的表达,促进胆红素代谢酶UGT1A1和胆汁酸转运体MRP2的mRNA和蛋白表达,提高肝脏对游离胆红素的代谢并促进胆汁酸排出肝脏,缓解胆汁淤积性肝损伤有关。     

大黄素对大鼠血清肝功能、肝脏转运蛋白及代谢酶UGT1A1表达的影响

目的研究长期灌胃给予大黄素对大鼠血清肝功能、肝脏转运蛋白及代谢酶UGT1A1表达的影响,探讨大黄素肝毒性作用机制。方法将大鼠随机分为空白组、大黄素低剂量组(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))、中剂量组(40 mg·kg~(-1)·d~(-1))及高剂量组(80 mg·kg~(-1)·d~(-1)),灌胃30 d后,检测大鼠血清中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)水平。采用实时荧光定量RT-PCR测定大鼠肝脏中转运蛋白P-gp、Mrp2、Mrp3、Oatp1、Oatp2、Bsep、Ntcp及代谢酶UGT1A1的mRNA表达,以Western blot方法测定大鼠肝脏中P-gp、Mrp3、Ntcp及UGT1A1的蛋白表达。结果中剂量组及高剂量组大鼠血清ALP、TBIL、DBIL、TBA明显升高(P0.05或P0.01),肝脏P-gp、Mrp3 mRNA及蛋白表达均显著上调(P0.01);而肝脏中Ntcp及UGT1A1 mRNA及蛋白表达显著下调(P0.05或P0.01)。结论长期给予较高剂量的大黄素有肝脏毒性的风险。大黄素致肝毒性可能与肝脏中P-gp、Mrp3表达的上调、Ntcp及UGT1A1表达的下调有关。     

基于Sirt1-FXR通路探究京尼平苷酸对胆汁淤积大鼠胆汁酸肝肠循环的影响

通过体内外结合的方式探究京尼平苷酸(GPA)对胆汁淤积大鼠胆汁酸肝肠循环作用影响及其基于去乙酰化酶1(Sirt1)-法尼醇X受体(FXR)通路的作用机制探究。将60只SD大鼠随机分为6组,分别为空白对照组、α-萘异硫氰酸酯(ANIT)模型组、阳性对照组(100 mg·kg~(-1)·d-1UDCA),以及100,50,25 mg·kg~(-1)·d-1GPA高、中、低剂量组,每组10只,给药10d。在第8天药后,除空白大鼠其余均一次性灌胃65 mg·kg~(-1)ANIT,末次药后,测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GGT)和碱性磷酸酶(ALP)活性以及总胆红素(TB)和总胆汁酸(TBA)的含量; RT-PCR法检测肝组织中胆汁酸肝肠循坏关键基因Sirt1,FXR,多药耐药相关蛋白2(MRP2),胆盐输出泵(BSEP),钠离子-牛磺胆酸协同转运多肽(NT-CP),回肠中顶端钠-胆汁酸转运体(ASBT),回肠胆汁酸结合蛋白(IBABP) mRNA转录水平的影响;免疫荧光三染法检测MRP2,BSEP和NTCP在肝脏中表达,ASBT,IBABP在回肠中表达; Western blot法检测肝组织中Sirt1,FXR表达;体外培养原代肝细胞观察GPA对EX 527(Sirt1抑制剂)抑制与否,RT-PCR和Western blot法检测细胞中Sirt1和FXR的mRNA和蛋白表达。在体实验表明,GPA能显著降低或改善ANIT诱导的胆汁淤积大鼠血清ALT,AST,γ-GGT,ALP活性和TB,TBA的含量(P0. 01)以及肝组织病理损伤; GPA能显著升高肝组织Sirt1,FXR,MRP2,BSEP,NTCP和回肠中ASBT,IBABP mRNA转录水平和蛋白表达(P0. 01);体外原代肝细胞实验表明,EX-527能通过抑制原代肝细胞中Sirt1基因和蛋白功能来抑制FXR基因和蛋白表达(P0. 01),GPA可显著提高改善EX-527抑制的原代肝细胞中Sirt1和FXR基因和蛋白的表达(P0. 01)。以上结果发现GPA的改善作用呈剂量正相关性。GPA可改善ANIT诱导的胆汁淤积大鼠的胆汁酸肝肠循环发挥保肝利胆作用,其可能机制是GPA通过激活改善氧化应激损伤关键调控基因Sirt1来激活核受体FXR,激活的FXR再调控胆汁酸肝肠循环的相关蛋白来实现。     

白花蛇舌草对肝内胆汁淤积模型大鼠的保护作用

目的:研究白花蛇舌草对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)诱导肝内胆汁淤积模型大鼠保护作用。方法:采用灌服ANIT法建立肝内胆汁淤积大鼠模型,大鼠随机分为正常对照组、模型组、白花蛇舌草组、熊去氧胆酸阳性对照组。连续给药5 d后,测定大鼠胆管胆汁排泄量、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)、胆红素(TB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、肝组织病理学变化及其胆盐输出泵(BSEP)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)表达等指标,研究白花蛇舌草对肝内胆汁淤积大鼠肝功能、胆汁酸排泄、炎症因子及肝组织病理学变化的影响。结果:与模型组比较,白花蛇舌草能显著促进胆汁排泄,降低大鼠血清中ALT、AST、TBA、TB、TNF-α、IL-1β水平(P0.01),诱导肝内BSEP、MRP2蛋白表达,改善大鼠肝组织病理学。结论:白花蛇舌草具有保护ANIT诱导肝内胆汁淤积模型大鼠肝损伤的作用。     

栀子苷对正常和黄疸模型大鼠的亚急性肝、肾毒性

目的:开展栀子苷对正常及黄疸模型大鼠的亚急性肝、肾毒性对比研究,为栀子临床安全用药提供科学依据。方法:SD大鼠80只,随机分为8组,空白组、栀子苷低、中、高剂量(60,180,360 mg·kg~(-1))组,黄疸模型组和α-萘异硫氰酸酯(ANIT)+栀子苷低、中、高剂量(60,180,360 mg·kg~(-1))组。黄疸模型采用ANIT造模,24 h后灌胃(ig)栀子苷。分别于给药后第7,14天,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TBIL),尿素氮(BUN),血肌酐(SCr)活性,取大鼠肝、肾组织进行病理检测。结果:与空白组比较,第7,14天栀子苷中、高剂量组TBIL,SCr明显升高(P0.05,P0.01);黄疸模型组大鼠ALT,AST,TBIL均明显升高(P0.05,P0.01)。与黄疸模型组比,第7,14天ANIT+栀子苷低、中剂量组AST显著升高(P0.01),ANIT+栀子苷中剂量组TBIL,BUN明显升高(P0.05)。ANIT+栀子苷高剂量组ig 7 d后陆续全部死亡。病理切片显示,栀子苷给药后肝肾组织出现极轻度炎细胞浸润和肾小管嗜碱性变;模型组和ANIT+栀子苷各剂量组动物均出现胆管上皮细胞增生,纤维组织增生,并且有随剂量增大病变程度加重的趋势。结论:栀子苷剂量超过180 mg·kg~(-1)(约折合栀子生药量55 g·d~(-1))连续ig给药14 d可对正常及黄疸模型大鼠造成肝、肾损伤;且剂量超过60 mg·kg~(-1)时即会加重黄疸模型大鼠已有的肝损伤,随剂量增加病变程度加重。     

京尼平苷酸对ANIT诱导胆汁淤积大鼠的酮洛芬肝代谢和胆汁排泄的影响及机制探究

目的探讨京尼平苷酸(GPA)对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导胆汁淤积模型大鼠的酮洛芬(Ketoprofen,KP)及结合型代谢产物酮洛芬葡萄糖醛酸复合物(KPG)的肝代谢和胆汁排泄的影响及其可能机制。方法将80只SD大鼠随机分为5组,依次为灌胃100、50、25 mg·kg~(-1)·d~(-1)的GPA高、中、低剂量组,ANIT模型组以及空白对照组,给药10 d;在第8天给药后,除空白对照组外,所有大鼠一次性灌胃65 mg·kg~(-1)ANIT诱导肝内胆汁淤积模型;末次给药后,各组静脉注射KP 20 mg·kg~(-1),以HPLC-UV法测定大鼠血浆、胆汁中KP及其酮洛芬葡萄糖醛酸结合物(S-KPG和R-KPG)含量。检测各组大鼠血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TB)。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠肝组织中组成型雄甾烷受体(CAR)、孕烷X受体(PXR)以及尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(Ugt1a1)mRNA的转录。蛋白质印迹法(WB)检测CAR、PXR、Ugt1a1的蛋白表达情况。结果与空白对照组比较,ANIT模型组大鼠KPG的累计胆汁排泄量显著降低(P 0.01);与ANIT模型组比较,100和50 mg·kg~(-1)·d-1GPA干预组大鼠KPG的累计胆汁排泄量显著提高(P 0.01)。与空白对照组比较,ANIT模型组大鼠血浆中KP曲线下面积AUC0-∞显著增加(P 0.01)、消除半衰期T1/2显著延长(P 0.01);与ANIT模型组比较,100,50 mg·kg~(-1)·d~(-1)GPA干预组大鼠血浆中KP的曲线下面积AUC0-∞显著降低(P 0.01)、消除半衰期T1/2显著缩短(P 0.01)。与ANIT模型组比较,100和50 mg·kg~(-1)·d~(-1)GPA干预组血清中TB、GPT、GOT和TB的含量明显下降(P 0.01),25 mg·kg~(-1)·d~(-1)GPA干预组降低不明显,无统计学意义。GPA能显著增加CAR、PXR、Ugt1a1 mRNA转录和蛋白表达量,与剂量呈正相关。结论 ANIT诱导的胆汁淤积大鼠KPG胆排泄降低,可引起KP的药动学参数的变化。GPA可改善胆汁淤积大鼠对酮洛芬肝代谢和胆汁排泄的影响,有可能是通过调节CAR和PXR对Ugt1a1基因转录和蛋白表达来实现的。     

苗药结石草总生物碱对α-异硫氰酸萘酯所致肝损伤小鼠的保护作用及机制研究

目的研究苗药结石草总提物及总生物碱部位对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)所致黄疸型肝损伤小鼠的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用灌胃ANIT(60 mg·kg-1)橄榄油溶液造成小鼠急性肝损伤模型,连续给药5 d,末次给药1 h后取血、肝脏,检测血清中谷氨酸-丙酮酸转氨酶(ALT),天门冬氨酸转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),总胆汁酸(TBA),总胆红素(TBIL)和游离胆红素(DBIL)的含量;检测肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,RT-PCR检测肝组织中FXR,CYP7A1,BSEP,MRP2 mRNA的表达量,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化。结果与模型组比较,结石草总提物及总生物碱各组均可显著降低肝损伤小鼠血清ALT,AST,ALP,TBIL,DBIL和TBA的水平和肝匀浆中MDA含量,且能显著升高小鼠肝匀浆中SOD和GSH-Px的含量,各组均能显著升高肝组织中FXR,MRP2 mRNA相对表达量,且高剂量组可显著升高BSEP mRNA相对表达量,并能显著降低CYP7A1的mRNA相对表达量。病理切片显示结石草总提物和总生物碱各组能显著改善肝组织的病理变化。结论结石草总提取物及总生物碱对ANIT所致小鼠黄疸型肝损伤有保护作用,生物碱部位为其抗肝损伤活性部位。     

法尼醇X受体在胆汁淤积幼龄大鼠模型中的表达及利胆合剂的干预作用

目的研究法尼醇X受体(FXR)在胆汁淤积幼龄大鼠模型中表达及利胆合剂干预作用。方法将30只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)组、利胆合剂高、低剂量组。正常和模型组羧甲基纤维素钠溶液灌胃,其余UDCA或利胆合剂灌胃。第5天(正常组除外)给予α-异硫氰酸奈酯(ANIT),ANIT 48h处死。检测血清TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、GGT、ALP,实时荧光定量PCR检测肝组织FXR及小异源二聚体伴侣(SHP)、UDP葡糖醛酸基转移酶家族2多肽B4(UGT2B4)、胆盐输出泵(BSEP)mRNA;Western blot检测肝组织FXR及SHP、UGT2B4、BSEP蛋白。结果模型组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平较正常组增高(P0.01);与模型组比较,UDCA组、利胆合剂高、低剂量组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平降低(P0.01);与UDCA组比较,利胆合剂高、低剂量组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平降低(P0.01);与利胆合剂低剂量组比,高剂量组AST、TBA、GGT水平降低(P0.01)。模型组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白表达量较正常组降低(P0.01);与模型组比较,UDCA组、利胆合剂高、低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及高剂量组蛋白表达量升高(P0.01),低剂量组FXR、BSEP蛋白表达量升高(P0.05);与UDCA组比较,利胆合剂高、低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白表达量升高(P0.01,P0.05);与利胆合剂低剂量组相比,高剂量组FXR、SHP、UGT2B4、 BSEP mRNA表达量升高(P0.01,P0.05), SHP、UGT2B4蛋白表达量升高(P0.01)。结论利胆合剂可缓解ANIT诱导的胆汁淤积大鼠,且在一定范围内,剂量越高,效果越明显,其疗效优于UDCA,其机制可能与促进FXR及下游的SHP、UGT2B4、BSEP分子表达有关。     

白芍总苷及其所含主要成分芍药苷和芍药内酯苷对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究白芍总苷及其所含主要成分芍药苷+芍药内酯苷对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法将ICR小鼠随机分成9组,分别为正常组,模型组,联苯双酯阳性对照组(100 mg·kg~(-1)),白芍总苷低(100 mg·kg~(-1))、中(200 mg·kg~(-1))、高(400 mg·kg~(-1))剂量组,芍药苷+芍药内酯苷(8∶3)低(66 mg·kg~(-1))、中(132 mg·kg~(-1))、高(264 mg·kg~(-1))剂量组。各组按0.01 mL·g~(-1)灌胃给药,1次/d,7 d后,除正常组外其余各组腹腔注射0.15%CCl_(4 )(0.01 mL·g~(-1))建立急性肝损伤模型。17 h后取血,取材。测定血清中ALT,AST,TBIL,ALP,γ-GT,TBA水平及肝组织中SOD,MDA,GSH-Px水平;HE染色观察肝组织病理变化。结果与模型组相比,白芍总苷给药组和芍药苷+芍药内酯苷给药组均可明显改善肝脏病理变化,可降低肝损伤小鼠血清中ALT,AST,TBIL,ALP,γ-GT,TBA水平,升高肝脏组织匀浆上清中SOD,GSH-Px水平,降低MDA水平。结论白芍总苷及其所含主要成分芍药苷+芍药内酯苷对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤有明显的保护作用。     

短穗兔耳草对α-萘异硫氰酸脂致肝损伤小鼠保护作用的研究

目的研究短穗兔耳草对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)所致肝损伤小鼠的保护作用。方法取昆明种小鼠60只,随机分为6组,每组10只,分别为正常组,模型组,联苯双酯组(0.15 g·kg~(-1)),短穗兔耳草提取物低、中、高剂量组(1.0,2.0,4.0 g·kg~(-1))。采用灌胃ANIT 100 mg·kg~(-1)花生油溶液的方法制备小鼠急性肝损伤模型,连续灌胃给药7 d,末次给药1 h后取血、取肝脏,检测血清中ALT、AST、TBA、TBIL和TNF-α的含量;检测肝组织匀浆中SOD、MDA、GSH-Px的含量,PCR检测肝组织中TNF-αm RNA的表达量,HE染色显微镜下观察肝组织病理变化。结果与模型组比较,短穗兔耳草低、中、高剂量组均能显著降低肝损伤小鼠血清ALT、AST、TBA、TBIL和TNF-α的水平和肝匀浆中MDA含量,同时显著升高小鼠肝匀浆中SOD和GSHPx的含量,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);短穗兔耳草提取物各剂量组均可显著下降肝组织中TNF-αm RNA的相对表达量(P0.05,P0.01)。病理切片显示短穗兔耳草各剂量组能显著改善肝组织的病理变化。结论短穗兔耳草对ANIT所致小鼠肝损伤有保护作用。     

茵黄合剂对雌孕激素共诱导妊娠肝内胆汁淤积症大鼠胆汁酸转运蛋白MRP2与BSEP表达的影响

目的:观察茵黄合剂对雌孕激素共诱导妊娠肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)大鼠胆汁酸转运蛋白多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)与胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)表达的影响,探讨茵黄合剂治疗妊娠肝内胆汁淤积症可能的分子机制.方法:运用雌孕激素联合的方法建立孕鼠妊娠肝内胆汁淤积症模型,随机分为正常组、模型组、茵黄合剂低剂量组(9 g·kg-1·d-1,ig)和茵黄合剂高剂量组(18 g·kg-1 ·d-1,ig),分别给予生理盐水、低剂量与高剂量的茵黄合剂5d,取血,检测血清总胆汁酸(total bile acid,TBA)、总胆红素(total bilirubin,TBil)、丙氨酸转氨酶(alanine transarninase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活性,留取肝脏组织,置于液氮中保存,分别运用实时定量PCR法及蛋白免疫印迹法检测胆汁酸转运蛋白MRP2 BSEP mRNA与蛋白表达情况.结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TBA,TBil水平增加,MRP2,BSEP mRNA与蛋白表达水平降低(P＜0.01),模型组ALT,AST含量与正常组比较虽有增加,但差异无统计学意义.与模型组比较,茵黄合剂低、高剂量均能降低妊娠肝内胆汁淤积症模型大鼠血清TBA,TBil水平(P＜0.01),并且可明显增加肝脏组织MRP2,BSEPmRNA与蛋白表达水平,P＜0.01.结论:茵黄合剂治疗妊娠肝内胆汁淤积症的分子机制可能是通过增加肝脏组织胆汁酸转运蛋白MRP2,BSEP,mRNA与蛋白表达水平实现的.     

拳卷地钱总黄酮对四氯化碳致急性肝损伤大鼠的保护作用及其作用机制

目的研究拳卷地钱总黄酮对四氯化碳(CCl_4)致急性肝损伤大鼠的保护作用,并探索作用机制。方法采用腹腔注射10%(V/V)CCl_4花生油(5ml·kg~(-1))建立急性肝损伤大鼠模型,分光光度法检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量或活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)水平,观察肝组织病理变化。结果与模型对照组比较,拳卷地钱总黄酮组(200 mg·kg~(-1)·d~(-1))能显著降低血清中ALT和AST活性,并能显著升高SOD活性,减少MDA含量,GSH-Px活性无明显变化,显著抑制肝组织中TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平,改善肝组织病理变化。结论拳卷地钱总黄酮对CCl_4致急性肝损伤大鼠具有保护作用,其作用机制可能与抑制脂质过氧化、抗炎作用有关。     

复方片仔癀肝宝对大鼠慢性酒精性肝损伤肝脏SREBP2和HMGCR表达的影响

目的观察复方片仔癀肝宝对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏SREBP2-HMGCRa表达的影响,探讨其调节肝脏胆固醇合成通路的机制。方法将60只SD雄性大鼠随机平均分为正常组、模型组、对照组、复方片仔癀肝宝低、中、高剂量组6个组,采用梯度增加酒精浓度灌胃制备大鼠慢性酒精性肝损伤模型,同时分别灌服对照药水飞蓟宾葡甲胺片(0.03 g·kg~(-1)·d~(-1))和不同剂量的复方片仔癀肝宝(0.15,0.3,0.6 g·kg~(-1)·d~(-1))进行干预。给药4周后,取血清用全自动生化分析仪检测肝功能(AST、ALT、LDH、TB)和肝组织TG、TC水平,并用Western blot检测肝组织SREBP2、HMGCRa、HMGCRb和HMGCRS1表达情况。结果与模型组大鼠相比较,复方片仔癀肝宝低、中、高剂量组能不同程度地降低AST、ALT、LDH、TB(P0.05或P0.01);能降低SREBP2和HMGCRa的蛋白表达(P0.05)。结论复方片仔癀肝宝能够一定程度上改善酒精性肝损伤的肝功能并能够通过抑制酒精引起的SREBP2和HMGCRa蛋白表达的升高,从而起到保护肝脏的作用。     

白花蛇舌草对ANIT 诱导的胆汁淤积大鼠保肝作用研究

目的研究白花蛇舌草对α-萘异硫氰酸酯（ANIT）诱导的胆汁淤积肝病大鼠的保肝作用及机制。方法 将48 只SD 大鼠随机分为正常对照组,模型组,白花蛇舌草高、中、低剂量组（1、0.5、0.25 g·kg-1）,熊去氧 胆酸组（100 mg·kg-1）,每组8 只,均连续灌胃给予相应药物5 d。其中第3 天除正常对照组外,其他各组采用 灌胃给予ANIT（65 mg·kg-1）制备ANIT 诱导胆汁淤积肝病大鼠模型。检测各组大鼠血清肝功指标谷丙转氨 酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）,血清黄疸指数总胆汁酸（TBA）、总胆红素（TBIL）及肝脏抗 氧化应激因子谷胱甘肽（GSH）和超氧化物歧化酶（SOD）水平;测定各组大鼠胆汁流量以及胆汁中TBIL 和TBA 的含量;采用HE 染色检测肝脏病理变化;Real-time PCR 法检测肝脏组织中胆汁酸合成、转运、排泄和重吸 收等相关基因的表达水平。结果与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠血清的ALT、AST、ALP、TBA、TBIL 水平显著增加,而胆汁流量和胆汁中TBA 和TBIL 的排泄则显著降低,差异均具有统计学意义（P＜0.01）;胆 汁酸合成与转运的主要核受体（FXR、SHP）、胆汁酸顶腔侧膜转运体（BSEP、MRP2、MDR2）、胆汁酸合成 酶（CYP7A1、CYP8B1、CYP27A1）和胆汁酸重吸收转运体（NTCP、OATP1A1、OATP1A2）的mRNA 表达水平显 著降低,而胆汁酸基底侧膜转运体（MRP3、MRP4、OSTα、OSTβ）的mRNA 表达水平则显著升高,差异均具有 统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。与模型组相比,白花蛇舌草组大鼠血清的ALT、AST、ALP、TBA、TBIL 水 平显著降低（P＜0.01）,而大鼠胆汁流量和胆汁中TBA 和TBIL 的排泄量则显著升高（P＜0.01）;肝脏组织病理 损伤显著改善;胆汁酸核受体（FXR、SHP）、胆汁酸顶腔侧膜转运体（BSEP、MRP2、MDR2）和胆汁酸基底侧 膜转运体（MRP3、MRP4、OSTα、OSTβ）的mRNA 表达水平显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,而胆汁酸合成 酶（CYP7A1）和胆汁酸重吸收转运体（NTCP、OATP1A1）的mRNA 表达水平显著降低（P＜0.05,P＜0.01）。 结论白花蛇舌草具有改善胆汁淤积肝损伤作用,其机制可能通过激活FXR-SHP 轴的表达,从而促进胆汁酸 外排,减少胆汁酸合成与重吸收作用有关。     

芒果苷联合葛根素对自发性高血压大鼠心脏炎性损伤的协同保护作用

目的:观察芒果苷联合葛根素对自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rats,SHR)心肌炎性损伤的协同保护作用,为高血压病心肌炎性损伤的临床防治提供实验依据。方法:以8只正常血压大鼠(normal blood pressure rat,WKY)为空白组A,72只10周龄SHR大鼠随机分为模型组B,苯那普利(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))组C,芒果苷单用(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))组D,葛根素单用组E(20 mg·kg~(-1)·d~(-1)),芒果苷(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))+葛根素片(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))组F,芒果苷(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))+葛根素片(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))组G,芒果苷(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))+葛根素片(40 mg·kg~(-1)·d~(-1))组H,芒果苷(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))+葛根素片(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))组I,芒果苷(40 mg·kg~(-1)·d~(-1))+葛根素片(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))组J。每天10 m L·kg-1连续灌胃,灌胃给药2个月后停药,取材前禁食12 h。用显微镜观察大鼠心肌组织病理形态结构,免疫组化法检测大鼠心肌组织白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达,酶联免疫法检测SHR心肌组织IL-6,IL-10,TNF-α水平。结果:各组大鼠心脏组织均未见明显病理形态学改变;免疫组化和酶联免疫结果显示,与模型组比较,各组给药大鼠心肌组织IL-6,IL-10,TNF-α含量均有不同程度下降(P0.05,P0.01)。结论:芒果苷联合葛根素对自发性高血压大鼠心脏组织病理形态学无显著影响;但可下调大鼠心脏组织异常升高的炎症因子IL-6,IL-10,TNF-α水平,具有一定的协同增效作用。     

洪连对ANIT所致肝损伤小鼠的保护作用

目的:研究洪连对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)所致黄疸型肝损伤小鼠的保护作用,并探讨其作用机制。方法:采用灌胃ANIT(100 mg·kg-1)花生油溶液造成小鼠急性肝损伤模型,连续给药7 d,末次给药1 h后取血、肝脏,检测血清中谷氨酸-丙酮酸转氨酶(ALT),天门冬氨酸转氨酶(AST),总胆汁酸(TBA),总胆红素(TBIL)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;检测肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,PCR检测肝组织中TNF-αmRNA的表达量,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化。结果:与模型组比较,洪连(1.0,2.0,4.0 g·kg-1)可显著降低肝损伤小鼠血清ALT,AST,TBIL和TNF-α的水平和肝匀浆中MDA含量,同时显著升高小鼠肝匀浆中GSH-Px的含量,洪连(2.0,4.0 g·kg-1)可显著降低肝损伤小鼠血清TBA的水平和显著升高肝匀浆中SOD含量(P0.01),洪连(1.0 g·kg-1)组TBA,SOD含量与模型组比较无统计学差异。洪连提取物各剂量组均可显著降低肝组织中TNF-αmRNA相对表达量(P0.01)。病理切片显示洪连(2.0,4.0 g·kg-1)组能显著改善肝组织的病理变化。结论:洪连对ANIT所致小鼠黄疸型肝损伤有保护作用。     

覆盆子提取物对ConA致小鼠急性肝损伤的保护作用研究

该实验研究了覆盆子提取物的抗氧化能力及其对ConA致小鼠肝损伤的保护作用。将雄性Balb/C小鼠随机分为6组:正常组,模型组,双环醇阳性对照组(200 mg·kg~(-1))及覆盆子提取物低(200 mg·kg~(-1))、中(400 mg·kg~(-1))、高(800 mg·kg~(-1))剂量组。各组按照体质量灌胃给药,1次/d,7 d后,除正常组外其余各组尾静脉注射ConA溶液(20 mg·kg~(-1))建立急性肝损伤模型,8 h后处取血、取材。计算脏器指数;检测血清中ALT,AST,LDH活性及肝组织中SOD,MDA,CAT,GSH水平; HE染色观察肝组织病理变化; Western blot法检测Bax,Bcl-2,Nrf2,Keap-1蛋白的表达; CAA法测定覆盆子提取物抗氧化活性。结果表明,与模型组相比,覆盆子提取物给药组可明显改善肝脏病理变化,可显著降低肝损伤小鼠血清中ALT,AST,LDH活性(P0. 01),高剂量组肝脏组织匀浆上清中SOD和CAT活性升高,GSH含量升高,MDA含量明显降低(P0. 01),同时可致肝组织中Bax,Keap-1蛋白水平减少和Bcl-2,Nrf2蛋白水平增加。CAA结果显示,覆盆子提取物有较强的抗氧化能力。因此,覆盆子提取物对ConA所致小鼠急性肝损伤有明显的保护作用,并与其抗氧化活性相关。     

加味四逆散对抑郁模型大鼠肝损伤的保护作用

目的:研究加味四逆散对慢性温和不可预知性应激(CUMS)结合孤养法制作抑郁模型所致肝损伤的保护作用。方法:将48只SD雄性大鼠随机分为6组,正常组,抑郁模型组,氟西汀(1.58 mg·kg~(-1)·d~(-1))组,和加味四逆散低、中、高剂量(3.67,7.34,14.68 g·kg~(-1)·d~(-1))组,每组8只。造模给药结束后,采用生化试剂盒法检测各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平和肝脏组织中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)水平。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测加味四逆散对肝细胞中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),活化型半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达的干预作用。结果:生化试剂盒检测显示,与正常组比较,模型组大鼠血清中的ALT,AST水平明显升高(P0.05),肝脏组织中炎症因子TNF-α,IL-1β和IL-6水平明显升高(P0.05);与模型组比较,加味四逆散低、中剂量组可降低血清中ALT,AST和炎症因子TNF-α,IL-1β和IL-6水平(P0.05,P0.01)。Western blot检测显示,与正常组比较,模型大鼠肝细胞中的Caspase-3蛋白表达下降,cleaved Caspase-3蛋白表达上升(P0.05);与模型组比较,加味四逆散低、中剂量组可以上调Caspase-3蛋白的表达,下调cleaved Caspase-3蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:慢性应激反应所致抑郁模型可造成肝损伤,加味四逆散能够通过调节多种生理生化和炎症因子指标的水平,抑制肝脏细胞凋亡来达到保肝作用。     

茵陈蒿汤对ANIT诱导的急性肝损伤的保护作用

目的:探讨茵陈蒿汤对ANIT急性肝损伤模型的保护作用,并初步探讨其对肝细胞摄取、转化、排泄胆红素的影响,揭示利胆退黄的作用机理,为后续实验建立中医阳黄证黄疸动物模型奠定基础。方法:采用α-异硫氰酸萘酯(ANIT)灌胃诱导大鼠急性肝损伤,观察大鼠ALP,ALT,AST,γ-GT活性及T-BIL,D-BIL,β-G和MDA含量,评价茵陈蒿汤保肝作用。结果:茵陈蒿汤低剂量组能使肝损伤生化指标明显改善,具有显著的保肝作用,而高、中剂量组保肝作用不明显。结论:茵陈蒿汤具有保肝利胆退黄的作用,其机理可能与降低肝细胞β-G、MDA含量,促进胆红素代谢,降低脂质过氧化物含量有关。