过表达Olig2的少突胶质前体细胞在缺血缺氧脑白质损伤新生大鼠脑内的分化

目的:观察过表达特异性转录因子Olig2的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)移植在缺血缺氧(hypoxia-ischemia,HI)脑白质损伤新生大鼠脑内的分化情况。方法:用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的过表达Olig2的慢病毒感染原代分离纯化的大鼠大脑皮层OPCs,GFP阳性细胞计数测其感染率。将过表达Olig2的OPCs(Olig2组)或阴性对照病毒感染的OPCs(Vector组)脑立体定位注射到造模后7 d的HI模型大鼠胼胝体膝部,移植后2周,冰冻切片行免疫荧光染色观察OPCs的存活和分化情况。结果:Olig2-GV218病毒感染OPCs细胞48 h,荧光显微镜检测显示85%左右的OPCs细胞表达GFP;移植后2周,caspase-3荧光染色表明移植后绝大部分细胞存活,Vector组和Olig2组之间无统计学差异(P0.05);GFAP/GFP双阳性细胞在两组之间也无显著差异(P0.05);而Olig2组MBP/GFP双阳性细胞的荧光密度显著高于Vector组(P0.05)。结论:过表达Olig2可促进移植OPCs向少突胶质细胞分化。     

BMP-4在视网膜与视神经中的分布及对少突胶质前体细胞分化的影响

目的:研究骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein4,BMP-4)在视网膜与视神经上的表达情况及其对少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)分化的影响,进一步探讨视神经乳头处无髓鞘形成的原因。方法:取生后7d SD大鼠视神经,用免疫组织化学方法研究BMP-4的表达情况。采用恒温振荡法和差速贴壁法分离纯化新生SD大鼠OPCs。用BMP-4诱导OPCs分化,通过免疫细胞化学方法研究OPCs的分化方向。通过Western Blot方法研究BMP-4浓度与OPCs细胞体系内Olig2蛋白表达水平之间的相互关系。结果:(1)在发育过程中,BMP-4仅选择性表达在视神经乳头处;(2)成功纯化的OPCs在PDGF和bFGF撤除后自发分化为少突胶质细胞;(3)OPCs经BMP-4诱导后向II型星形胶质细胞分化;(4)OPCs内Olig2蛋白的表达量随着BMP-4浓度的逐渐增高而逐渐降低。结论:在视神经乳头表达的BMP-4蛋白有可能作用于迁移至此处的OPCs,通过激活相关信号途径以下调OPCs内Olig2蛋白的表达水平,抑制OPCs向少突胶质细胞方向分化,从而抑制视神经乳头髓鞘形成。     

少突胶质前体细胞分离纯化方法的比较

目的 对少突胶质前体细胞(OPCs)的分离、培养及传代方法进行改良,并建立少突胶质细胞谱系的体外分化模型,以模拟体内OPCs的生长和发育过程.方法 将12只雄性balb/c乳鼠随机分成2组,每组各6只,分别用于神经干细胞诱导分化法和传统的混合胶质细胞分离法,前者将海马及皮层中的神经干细胞分离并在条件性分化培养基中定向培养,通过差速消化法和差速贴壁法结合纯化OPCs;后者是将全脑的胶质细胞共同培养,细胞生长出现明显分层后通过差速离心法分离中间层的OPCs.不同分化阶段免疫标记物(O2、CC1和MBP)荧光染色鉴定以确定细胞分化情况,Ki-67染色用以以判断OPCs的增殖能力.结果 两种方法均可培养出具有分化能力的OPCs,但经神经干细胞诱导方法获得的OPCs具有更好的增殖能力(P<0.05),经过成熟分化培养后获得的成熟的少突胶质细胞数量也多于传统的混合胶质细胞分离法(P<0.05).该方法的整个培养周期短,获得的细胞数量多,细胞纯度高.结论 神经干细胞诱导法获得的OPCs具有更好的增殖和分化能力,可为少突胶质前体细胞研究提供稳定的细胞来源.     

大鼠Olig2基因慢病毒表达载体的构建及其转染后对少突胶质前体细胞分化的影响

目的 构建大鼠少突胶质细胞转录因子2(Olig2)的慢病毒表达载体,并转染少突胶质前体细胞(OPCs),观察Olig2过表达对OPCs向少突胶质细胞(OLs)分化的影响.方法 设计合成PCR引物,从大鼠pEGFP-N3-Olig2表达质粒中扩增并克隆大鼠Olig2-EGFP片段,将其插入到pLenti6.3慢病毒表达载体中,形成pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达载体.将其与包装质粒混合后共转染293T细胞,包装产生慢病毒后感染培养的OPCs,观察Olig2在感染细胞中的表达并鉴定其表达对OPCs向OLs分化的影响.结果 成功将大鼠Olig2-EGFP片段克隆入pLenti6.3慢病毒表达载体,构建的pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达载体能够高效表达.与空质粒转染的OPCs相比,重组质粒转染的OPCs体外诱导分化后产生更多的OLs (n =5,P＜0.01).结论 成功建立大鼠pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达系统,慢病毒介导的Olig2过表达促进大鼠OPCs向OLs分化.     

小胶质细胞在高氧暴露未成熟脑损伤中的作用

目的观察新生小鼠高氧暴露后,小胶质细胞功能变化及未成熟脑内NG2细胞的凋亡情况,以探讨小胶质细胞在高氧未成熟脑损伤中的作用。方法将新生3 d(PND3)小鼠持续90%高浓度氧暴露48 h,建立新生鼠未成熟脑高氧脑损伤模型,并腹腔注射小胶质细胞活化抑制剂米诺环素,将小鼠分为对照(A)组,空气+米诺环素(AM)组,高氧(O)组和高氧+米诺环素(OM)组,其中AM组和OM组给予45 mg/kg米诺环素。免疫组化观察小胶质细胞活化情况,real-time PCR检测TLR4(Toll样受体4,Toll-like receptor 4)、TNF-α(tumor necrosis factor-α)表达水平。免疫荧光双标检测凋亡蛋白Caspase-3表达及NG2细胞(未成熟少突胶质细胞)凋亡情况。结果与A组比较,O组激活状态的小胶质细胞明显增多,TLR4表达上调。免疫荧光结果显示O组脑组织中凋亡细胞明显增多,且免疫荧光双标可见NG2与Caspase-3共表达。而与O组相比,OM组TLR4和TNF-α的表达明显降低(P0.05),且Caspase-3表达及NG2细胞凋亡明显减少。结论围生期常压高浓度氧暴露通过激活小胶质细胞上调TLR4表达引起炎症反应致未成熟脑细胞凋亡,凋亡细胞包括少突胶质祖细胞(NG2+);抑制小胶质细胞活化可明显减轻高氧未成熟脑损伤。     

天麻素对氧糖剥夺模型中小鼠少突胶质前体细胞的保护作用

目的:探讨天麻素对氧糖剥夺(OGD)模型中小鼠少突胶质前体细胞(OPCs)的保护作用。方法:采用来自于C57BL/6小鼠的原代少突胶质前体细胞进行OGD模型实验。首先分为对照组和OGD不同时间处理模型组,用CCK-8试剂盒检测小鼠OPCs的细胞活力变化。用细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒检测各组在不同时间凋亡细胞数量的变化。最后选择细胞活性开始明显下降以及凋亡细胞开始明显增多的时间点(18 h)作为天麻素对抗OGD模型中小鼠OPCs凋亡增多的实验研究时间点,采用Western Blot和免疫荧光细胞化学染色检测18 h时cleaved-caspase 3、Bax和Bcl-2的表达变化。结果:小鼠OPCs的细胞生长曲线结果表明,OGD模型组的细胞在12 h前细胞活力应激性升高,6 h时达到最高,12 h后细胞活力逐渐下降,18 h时细胞活力明显低于对照组(P 0. 05)。此外,18 h时,OGD模型组的凋亡细胞较对照组增多,天麻素治疗组能逆转凋亡细胞数量的升高,并且能下调OGD模型组中小鼠OPCs中cleaved-caspase3和Bax蛋白的表达量(P 0. 01),上调抑制Bcl-2蛋白及Bcl-2/Bax的比值(P 0. 01)。结论:OGD处理18 h时能引起小鼠OPCs细胞活力下降以及凋亡增多,天麻素能够抑制小鼠OPCs的凋亡。     

硫酸软骨素蛋白多糖胶质细胞的研究进展

目的 简介硫酸软骨素蛋白多糖(NG2)胶质细胞的生理特性及功能.方法 归纳总结NG2胶质细胞的特性和研究现状.结果 在中枢神经系统中,有一类胶质细胞,细胞表面专一表达NG2蛋白聚糖,称之为NG2胶质细胞.近年来对NG2细胞在中枢神经系统中作用的研究越来越多.已经从先前的分化和鉴别发展到对它与神经元功能和突触可塑性之间关系的研究.结论 提示近年来有关NG2细胞的发育分化、功能特性、与神经元的相互作用及其与神经再生和疾病关系等的研究方向.     

人神经胶质祖细胞移植于小鼠脑内两侧侧脑室周区后发育成人星形胶质细胞

目的观察人神经胶质祖细胞移植于小鼠脑内两侧侧脑室周区后的形态结构发育变化。方法将人神经胶质祖细胞移植入出生1天的小鼠脑内两侧侧脑室周区,用免疫荧光组化技术和共聚焦显微镜观察移植6个月后,小鼠脑内人神经胶质祖细胞的分布、分化和形态结构的特点。结果人神经胶质祖细胞移植6个月后成功地在小鼠脑内存活并广泛分布,主要发育成人神经胶质酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein GFAP)阳性的星形胶质细胞,表现人星形胶质细胞的形态结构特点,部分神经胶质祖细胞分化成硫酸软骨素蛋白多糖(chondroitin sulphate proteoglycan,NG2)阳性的细胞。结论人神经胶质祖细胞移植小鼠脑内环境中主要分化为GFAP阳性的星形胶质细胞和部分NG2阳性细胞。     

星型胶质细胞对神经元调控的研究进展

神经系统的细胞主要由神经元和神经胶质细胞组成。人脑中神经元的总数约为1010~1012个。在脑内,神经元被神经胶质细胞紧紧包围,神经胶质细胞数量是神经元的10~50倍,约占据脑体积的一半,其中主要是星型胶质细胞(astrocytes,AS)。在视皮层,AS占整个神经胶质细胞的61·5%;在丘脑占     

低氧/复氧刺激对体外培养的胎鼠脊髓OPCs内NRG-1表达的影响

为明确脊髓少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)内neuregulin-1(NRG-1)的表达情况,并探讨脊髓缺血后OPCs中NRG-1的表达变化,本实验采用胎鼠(E11～13)脊髓神经干细胞定向诱导分化所获得的OPCs为实验材料,用免疫组织化学和Western blot方法,比较观察了正常培养和低氧/复氧培养的OPCs中NRG-1的表达。结果显示:(1)正常培养的OPCs中有基础性NRG-1的表达;(2)经低氧/复氧培养后,OPCs中NRG-1的表达2h内骤降,4h时陡升,表达量显著高于其他各时点,此后较迅速地下降,24h后趋于消失。由此推测,脊髓损伤后,OPCs能在缺血缺氧的较早期高表达NRG-1,这可能对于损伤组织的保护和修复有重要意义。     

NG2胶质细胞在中枢神经系统病变中作用的研究进展

NG2胶质细胞是中枢神经系统中除星形胶质细胞、小胶质细胞和少突胶质细胞外的第四类胶质细胞,均匀地分布在整个脑区。当中枢神经系统发生损伤时,NG2胶质细胞能通过改变其细胞形态、增殖和分化对多种损伤类型作出反应。弄清NG2胶质细胞对不同损伤的反应机制,有助于更好地发挥其在损伤修复和髓鞘再生中的作用。本文着重讨论了NG2胶质细胞在几种损伤类型中的反应。     

妊娠20～24周人脑室管膜下区神经细胞组成

目的:研究妊娠20～24周人胎脑室管膜下区(SVZ)神经细胞分化。方法:收集胎龄为20～24周的正常胚胎6例。快速解离SVZ并行即刻培养,4 h后应用特异免疫标记识别各类型神经细胞。结果:大约50%左右SVZ细胞为神经元[MAP2]细胞为(50.9±4.6)%,β-Ⅲ-tubulin细胞为(51.7±3.8)%],其中皮质神经元亚型calretinin中间神经元占(3.5±0.3)%;约1/3 SVZ细胞具有早形胶质细胞特性[vimentin]细胞为(32.7±1.5)%,GFAP细胞占(31.9 3.0)%];少突神经胶质前体细胞(PDGFR_α细胞)为(6.7±0.6)%,小胶质细胞(lectin细胞)占(1.1±0.1)%,神经干佯细胞(nestin细胞)为(14.6±0.9)%。大约有1/10 SVZ细胞正处于细胞分裂期[BrdU细胞占(11.0±0.02)%]。结论:妊娠20～24周,人类SVZ增殖活跃,包含有神经元、星形胶质细胞、少突神经胶质前体细胞、多潜能干细胞在内的各种细胞亚群。     

血清-糖皮质激素诱导激酶1基因对少突胶质细胞分化的影响

目的:探讨血清-糖皮质激素诱导激酶1(SGK1)对少突胶质细胞分化的影响。方法:利用免疫荧光染色检测糖皮质激素对体外培养少突胶质前体细胞(OPCs)分化的影响;原位杂交检测SGK1在少突胶质细胞中的表达情况;通过构建SGK1真核表达载体和鸡胚神经管电穿孔转化,研究SGK1过表达对少突胶质细胞发生发展的影响。结果:在体外,SGK1的激活物氢化可的松能促进OPCs分化;抑制物GSK650394则会阻断CPCs分化,鸡胚神经管过表达SGK1会促进少突胶质细胞转录因子2和Sox10的提前表达。结论:SGK1能促进少突胶质前体细胞的发生及分化。     

NG2细胞的研究进展

NG2细胞,是在发育和成年中枢神经系统的灰质和白质束中发现的,因表达NG2蛋白多糖而得名.NG2细胞先前被假定代表少突胶质细胞前体细胞,后来使用转基因小鼠的研究表明,NG2细胞在体内不仅能够产生少突胶质细胞,还能产生原浆性星形胶质细胞,以及某些情况下的神经元[1].NG2细胞是中枢神经系统中不同于神经元、成熟少突胶质细胞、星形胶质细胞和小胶质细胞的一类细胞亚群.此外,在发育和成年中枢神经系统的多个区域,发现NG2细胞和神经元之间存在独特的突触联系,暗示NG2细胞除了可能作为分化成多种细胞的可塑性前体细胞群,还可能会和神经元联系从而形成一个独特的神经胶质网络[2].进行综述对NG2细胞的近年研究,以及其功能特性和在神经网络中所扮演的角色.     

经典Wnt信号通路对少突胶质前体细胞生长发育的调控

少突胶质前体细胞(OPCs)经历增殖、迁移、分化为成熟少突胶质细胞(OLs),包绕轴突形成髓鞘,维持轴突正常功能及神经冲动传导。OPCs的生长发育受多种信号分子及通路的影响,其中经典Wnt信号通路与OPCs正常及病理状态下的增殖、迁移和分化过程密切相关,通路中相关分子的变化导致该通路的活化均会影响OPCs的发育,进而影响髓鞘的形成与修复再生。     

NG2~+胶质细胞在Th1-EAE和Th17-EAE中的不同作用

NG2~+胶质细胞在EAE中的作用还不清楚。课题组应用PDGFRα-CreER特异地诱导白喉毒素在NG2~+胶质细胞中表达,成功地在小鼠中枢神经系统中部分剔除NG2~+胶质细胞。研究发现部分剔除NG2~+胶质细胞的小鼠CNS中在诱导Active-EAE和Th1-EAE的发病过程中,表现为临床症状减轻、髓鞘蛋白脱落减少以及炎症细胞浸润减少,说明NG2~+胶质细胞能够增强胶质细胞的作用以加重Active-EAE和Th1-EAE的发病程度。与此相反,在Th17-EAE小鼠中,NG2~+胶质细胞能够抑制EAE的发生。这些结果提示NG2~+胶质细胞在不同诱导方式EAE发生中的作用是不同的,因此在治疗方法上也应该区别对待。这一结果将帮助多发性硬化患者的治疗提供新的靶点。     

槲皮素对大鼠缺氧损伤体外培养少突胶质前体细胞增殖的作用

目的:探讨槲皮素(Quercetin,Qu)对大鼠缺氧损伤后少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)增殖的作用。方法:取新生1～2 d Sprague-Dawley(SD)大鼠大脑皮质细胞进行原代培养,振荡分离后纯化3 d行Olig2和A2B5免疫荧光染色鉴定。纯化的细胞分为正常对照组、模型组(缺氧9 h)和Qu处理组(3,9,27,81μmol/L)。缺氧后3 d光镜下观察细胞形态学变化,CCK-8法检测细胞存活率,Olig2免疫荧光染色计数阳性细胞数。结果:纯化培养3 d的细胞胞体呈圆形,有双极或三极突起。免疫荧光染色显示,绝大部分细胞为A2B5和Olig2阳性,A2B5/DAPI阳性细胞率为98.54%。缺氧9 h后,模型组很多细胞出现突起皱缩或崩解,细胞密度较Qu处理组明显降低;培养至3 d,光镜下计数和CCK-8检测结果均表明9μmol/L和27μmol/L Qu处理组细胞数较模型组显著增加(P<0.01,P<0.05);Olig2免疫细胞化学染色结果进一步表明9μmol/L和27μmol/L Qu处理组OPCs数较模型组显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论:9μmol/L和27μmol/L Qu有促进缺氧损伤OPCs增殖的作用。     

小胶质细胞与NG2胶质细胞相互作用研究进展

小胶质细胞是大脑的固有免疫细胞,在中枢神经系统的发育和稳态中起着重要的作用。NG2胶质细胞被认为是少突胶质细胞的前体细胞。近年来的研究表明,NG2胶质细胞与其他神经胶质细胞也存在广泛的相互作用,参与大脑神经免疫反应。加强对小胶质细胞和NG2胶质细胞之间相互作用的认识将有助于发现大脑中免疫调节的新途径,有利于神经炎症和神经退行性疾病的治疗,本文将对这两种细胞之间的相互作用进行综述。     

Erk信号途径在B104 CM诱导神经干细胞向少突胶质细胞前体分化中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(Erk)信号途径及下游转录因子cf-os、cj-un等在神经母细胞瘤B104细胞系来源的条件培养基(B104 CM)诱导神经干细胞(NSCs)向少突胶质细胞前体(OPCs)分化中的作用。方法从形态学上观察Erk1/2特异性抑制剂U0126阻断对B104 CM诱导NSCs向OPCs分化的影响;分别以Western blotting和RT-PCR法检测对照组、B104 CM诱导组和U0126预孵组NSCs中Erk的磷酸化和转录因子cf-os、cj-un、c-myc的表达情况。结果U0126预孵可阻断B104 CM诱导的NSCs向OPCs分化;B104 CM可引起NSCs中Erk1/2迅速磷酸化和cf-os、cj-unmRNA表达上调,该作用可被U0126阻断。结论B104 CM通过活化Erk信号途径及其随后上调转录因子cf-os、cj-un的表达诱导NSCs向OPCs分化。     

新生大鼠少突胶质前体细胞低糖缺氧损伤模型的建立

目的:利用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)低糖缺氧损伤模型。方法:取新生1 d Sprague-Dawley(SD)大鼠大脑皮质,体外混合及纯化培养获得OPCs,O4免疫荧光染色鉴定;取纯化2 d的OPCs,分为正常组和Na2S2O4损伤组,Na2S2O4损伤组又分为0.5、1 h和1.5 h三组,倒置显微镜下观察各组细胞形态;CCK-8法检测细胞存活率;透射电镜观察细胞超微结构。结果:免疫荧光染色鉴定显示纯化的细胞绝大部分为O4阳性;形态学观察显示,缺氧0.5 h,大部分细胞突起回缩,胞体变圆,颜色变暗,随低糖缺氧损伤时间的延长OPCs逐渐脱壁,1.5 h时只有少数贴壁细胞;CCK-8法检测显示损伤0.5、1 h和1.5 h组细胞的存活率显著降低,与正常组比较均有统计学意义,损伤后1.5 h与0.5 h比较,细胞的存活率具有显著性差异;电镜观察损伤1.5 h后的细胞,线粒体肿胀,有些细胞胞核固缩成块,细胞器破碎。结论:用浓度为2mmol/L Na2S2O4的低糖培养基处理OPCs 1.5 h可以建立有效的低糖缺氧损伤模型。