Th17/Treg及其相关细胞因子在结肠癌中的表达并与肿瘤分期的相关性

研究结肠癌患者肿瘤组织中Th17细胞、Treg细胞及患者外周血中相关细胞因子的表达水平,探讨其表达与肿瘤分期的相关性及可能机制。运用流式细胞分析(FACS)技术检测30例结肠癌肿瘤组织及癌旁正常组织中Th17细胞及Treg细胞的比例;采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测20例结肠癌患者外周血中Th17、Treg相关细胞因子IL-23和IL-10的表达水平。结果显示结肠癌肿瘤组织中Th17细胞和Treg细胞的比例明显高于癌旁正常组织(P<0.05),进展期肿瘤组织中Treg细胞的比例高于早期(P<0.05),而Th17细胞的比例较早期无明显差异(P>0.05),进展期肿瘤组织中Th17/Treg细胞的比例比早期偏低(P<0.05)。结肠癌患者外周血中IL-23、IL-10的mRNA水平升高,与健康对照组差异明显(P<0.05),且进展期与早期结肠癌IL-10mRNA的表达水平差异显著(P<0.05),而IL-23mRNA在两组间无明显差异(P>0.05)。随着结肠癌病程的进展,肿瘤组织内Th17细胞及Treg细胞的比例逐渐升高,且Treg细胞比Th17细胞升高更加明显。相关细胞因子IL-23和IL-10在患者外周血中的变化趋势和Th17、Treg细胞在肿瘤组织中的变化趋势相一致,提示Th17、Treg细胞在结肠癌的表达可能与肿瘤免疫微环境中相关的细胞因子调节有关。     

趋化因子SDF-1调控结直肠癌细胞上皮-间质转化

目的通过检测Twist、SDF-1、E-cadherin在结直肠癌及癌旁组织中的表达,探讨三者与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的相关性,为肿瘤的分子靶向治疗提供可能的靶标。方法收集结直肠癌和对应癌旁正常新鲜标本组织40例和结直肠癌组织及对应癌旁组织蜡块90例,利用免疫组化SP法和qRT-PCR法检测结直肠癌组织中SDF-1及EMT相关因子E-cadherin、Twist的表达,统计学分析SDF-1表达与E-cadherin、Twist表达之间的相关性。结果 qRT-PCR结果显示,与对应癌旁组织相比,结直肠癌组织中SDF-1、Twist mRNA的表达水平明显升高,而Ecadherin mRNA表达水平显著下降,差异有统计学意义(P0.05);结直肠癌组织中SDF-1、Twist的阳性率分别为75.56%、62.22%,明显高于对应癌旁组织,而E-cadherin在肿瘤中的阳性率为28.89%,显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(P0.05)。SDF-1表达与E-cadherin表达呈负相关,而与Twist表达呈正相关。结论趋化因子SDF-1高表达可能参与结直肠癌细胞的EMT过程,Twist高表达和Ecadherin低表达提示EMT现象参与结直肠癌的形成及转移过程,并促进肿瘤的生成和转移。     

食管鳞癌患者肿瘤微环境中Th17细胞的表达及临床意义

目的:了解Th17细胞在食管鳞癌患者肿瘤微环境中表达水平,探讨其在食管鳞癌进展中的作用。方法:收集健康人外周血、食管鳞癌患者外周血、癌旁组织、癌组织标本,流式细胞术检测Th17细胞水平;实时荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR)检测RORγt、IL-17a mRNA表达水平。结果:食管鳞癌患者外周血、癌旁组织、癌组织中Th17细胞水平和RORγt、IL-17a mRNA表达水平较健康人外周血均升高,且癌组织>癌旁组织>患者外周血>健康人外周血,差异有统计学意义(均P<0.05)。食管鳞癌患者外周血中Th17细胞水平升高与患者性别、年龄、肿瘤大小无明显关系,但与有无淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.01)。结论:食管鳞癌患者肿瘤微环境中Th17细胞水平和RORγt、IL-17a mRNA表达水平均升高,Th17细胞可能通过RORγt和IL-17a参与食管鳞癌进展过程。     

结直肠癌中Survivin、Caspase 9和Ki-67表达的相关性及临床意义

目的探讨Survivin、Caspase 9和Ki-67三种肿瘤相关因子在结直肠癌中表达的相关性。方法采用免疫组化Eli Vision法检测50例结直肠癌、30例结直肠腺瘤和30例癌旁正常组织中Survivin、Caspase 9和Ki-67的表达,并分析三者与结直肠癌临床病理特征的关系。结果 Survivin和Ki-67在结直肠癌组织中的阳性率高于结直肠腺瘤和癌旁正常组织;而Caspase 9阳性率低于结直肠腺瘤和癌旁正常组织。Survivin与Caspase 9的表达呈负相关,与Ki-67表达呈正相关;Caspase 9与Ki-67的表达呈负相关。Survivin、Ki-67、Caspase 9的表达与结直肠癌分化程度、淋巴结转移及Dukes分期相关(P0.05)。结论Survivin可能通过抑制Caspase 9的激活,使细胞不能进行有效凋亡并异常增殖,从而促进结直肠癌的发生、发展。联合检测有助于了解结直肠肿瘤的生物学行为并对患者早期诊断、预后判断及干预治疗提供分子生物学支持。     

STING及相关免疫抑制因子在宫颈癌中的表达及相关性分析

目的观察干扰素刺激因子(STING)及其相关免疫抑制因子CCL22、IDO、IL-10在高危型人类乳头瘤病毒(HRHPV)阳性宫颈鳞状细胞癌(CSCC)及癌前病变组织中的表达情况,探讨STING对CSCC肿瘤微环境的调节作用及对肿瘤进展的影响。方法收集58例宫颈组织标本,其中正常宫颈组织20例作为对照组,HR-HPV阳性的CIN Ⅱ9例及CIN Ⅲ9例作为癌前病变组,HR-HPV阳性的CSCC 20例作为CSCC组。用Western blot检测在各宫颈组织中STING蛋白水平的表达;荧光定量PCR检测STING、CCL22、IDO、IL-10 mRNA在各宫颈组织中的表达。结果宫颈病变组织中STING蛋白的表达量较正常宫颈组织明显增加(P0.05),且其在正常宫颈、CIN Ⅱ~Ⅲ、CSCC中的表达呈现逐渐上升趋势。STING、CCL22、IDO、IL-10 mRNA在宫颈病变组织中的表达较正常宫颈均明显上调(P0.05),且其表达量随病变进展而增加。在宫颈病变组织中,STING mRNA的表达与CCL22 mRNA、IDO mRNA分别呈正相关,与IL-10 mRNA无明显相关性。结论在宫颈癌中,STING表达的上调,可能通过促进CCL22、IDO的释放,加剧肿瘤微环境中局部免疫的失衡,从而参与HR-HPV致癌的进程。     

结直肠癌中S100A4的表达及意义

目的探讨S100A4在结直肠癌组织及细胞系中的表达,并分析其与结直肠癌临床病理特征的相关性。方法采用免疫组化法检测65例结直肠癌及对应癌旁正常结直肠组织中S100A4蛋白的表达;分别采用RT-PCR法和Western blot法检测S100A4 mRNA和蛋白在7个人类结直肠癌细胞系中的表达。结果 RT-PCR及Western blot检测结果显示S100A4在多数结直肠癌细胞中均有表达。免疫组化检测结果显示S100A4阳性表达主要定位于结直肠癌细胞质内,结直肠癌组织中S100A4蛋白阳性率高于癌旁正常结直肠组织(P0.000 1)。S100A4蛋白表达与结直肠癌患者年龄、性别有关,高龄组阳性率高于低龄组(P=0.026),男性组S100A4蛋白阳性率高于女性组(P=0.038),其表达与肿瘤部位、分化程度、淋巴结转移均无相关性(P0.05)。结论 S100A4在多数结直肠癌细胞中均有表达,在癌组织中的表达高于癌旁组织,S100A4蛋白表达与结直肠癌患者年龄、性别有关,可能为结直肠癌患者的个性化诊断及治疗提供指导。     

结直肠癌中NKD1和β-catenin的表达及意义

目的观察NKD1和β-连环素(β-catenin)在结直肠正常黏膜组织、结直肠腺瘤及结直肠癌中的表达,探讨两者在结直肠肿瘤发生、发展中的作用。方法应用免疫组化SP法检测NKD1和β-catenin在正常黏膜组织、结直肠腺瘤、结直肠癌组织中的表达。结果 NKD1在正常组织中的阳性率明显高于结直肠腺瘤、结直肠癌,其表达与肿瘤的分化程度、Dukes分期及淋巴结转移相关,差异有统计学意义(P<0.05)。β-catenin在癌组织中的表达异常率明显高于癌旁正常组织,其异位表达率与肿瘤的分化程度、Dukes分期、淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P<0.05)。NKD1的表达和β-catenin异位表达呈负相关(rs=-0.691,P<0.01)。结论 NKD1的表达下调与β-catenin的异位表达,可能与结直肠肿瘤的发生、发展有关。     

BS69 在结直肠癌组织中的表达以及病理相关性研究

目的:探讨BS69在结直肠癌组织及细胞系中蛋白和mRNA的表达水平,分析BS69与患者病理特征的相关性。方法:选择2016年8月至2017年10月间手术切除的60例结直肠癌组织和25例癌旁正常组织,采用免疫组化和RTq PCR法检测组织中BS69蛋白和mRNA的表达情况。采用蛋白印迹(Western blot)法检测BS69在三种结直肠癌细胞系和正常结直肠上皮细胞中的蛋白表达。结果:BS69免疫组化染色主要定位于细胞核,少量位于细胞浆。其在结直肠癌和正常结直肠组织中的阳性率分别为65%和87%,差异具有统计学意义(P0. 05); BS69在结直肠癌组织中的表达水平与Dukes分期、肿瘤组织分级、淋巴结转移及远处转移有相关性(P0. 05); Western blot检测BS69在3种结直肠癌细胞系与正常结直肠上皮细胞中蛋白表达,各细胞系中结果有明显差异;结直肠癌组织中BS69 mRNA的表达明显低于正常组织,差异有统计学意义(P0. 05)。结论:BS69是重要的转录抑制因子,可能参与了结直肠癌的发生、发展过程,有望成为特异性较高的肿瘤标志物。     

结直肠癌患者肿瘤浸润Th17细胞与临床病理特征相关性分析

目的探讨结直肠癌患者肿瘤浸润Th17细胞占淋巴细胞比例与临床病理特征相关性。方法采用流式细胞术检测28例结直肠癌患者正常黏膜组织和肿瘤组织中Th17细胞占淋巴细胞比例;用ELISA检测患者正常黏膜组织和肿瘤组织培养上清液中IL-17A水平,收集患者临床病理资料分析肿瘤组织中Th17细胞和IL-17A水平与临床病理特征的关系。结果结直肠癌患者肿瘤组织中Th17细胞占淋巴细胞比例为(2.47±0.34)%,正常黏膜组中为(2.24±0.24)%,二者之间无统计学差异(P0.05)。肿瘤组织培养上清液中IL-17A水平为(257.74±31.36)pg/mL,高于正常黏膜组(163.53±12.62)pg/mL(P0.05)。结直肠癌患者肿瘤组织中Th17细胞及IL-17A水平与患者年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤大小及肿瘤生长方式无关(P0.05),而与肿瘤分化程度、淋巴结转移情况及TNM分期相关(P0.05)。正常黏膜组织中Th17细胞及IL-17A水平与各项临床病理参数无相关性。结论 Th17细胞可能参与了结直肠癌发生发展的免疫病理过程。     

NPM1在结直肠癌的表达及临床价值

目的 观察核仁磷酸蛋白（NPM1）在结直肠中的表达及其意义.方法 用免疫组化法对50例结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中的NPM1表达进行分析.结果 NPM1在结直肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P ＜0.001）;NPM1表达上调与肿瘤直径、TNM分期、Dukes分期、淋巴结转移及远处转移显著相关,而与患者性别、年龄及结直肠癌分化水平无关（P＞0.05）.结论 NPM1的表达与结直肠癌的发生发展有关.     

结直肠癌Stat3表达与细胞增殖、凋亡及预后的关系

目的探讨结直肠癌Stat3蛋白表达与细胞增殖、凋亡、临床病理特征及预后的关系。方法应用免疫组织化学及DNA末端标记(TUNEL)技术分别检测129例结直肠癌及癌旁组织芯片中Stat3、Cyclin D1蛋白表达及凋亡指数(AI),分析Stat3表达与临床病理特征和预后的关系及其与增殖、凋亡之间的相关性。结果结直肠癌组织中Stat3、Cyclin D1阳性表达率分别为67.4%和79.8%,均高于癌旁组织的43.4%和5.4%(P0.05),结直肠癌组织AI(5.62)低于癌旁(7.86)(P0.05)。Stat3的表达与结直肠癌的Dukes分期、淋巴结转移、肿瘤发生部位明显相关(P0.05)。结直肠癌组织中Stat3和Cyclin D1的表达呈正相关(P0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示Stat3、Dukes分期、淋巴结转移及凋亡指数与生存期相关(P0.05);Cox回归分析显示Dukes分期为独立的风险预后因子。结论 Stat3可能参与了结直肠癌的发生发展,检测Stat3可作为评估结直肠癌患者预后及淋巴结转移的指标。     

干扰IGF2BP2下调MYC表达抑制结直肠癌细胞增殖、迁移并促进肿瘤免疫

目的 探究胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)对结直肠癌细胞增殖、迁移能力和肿瘤免疫微环境的影响及其可能的分子机制。方法 使用癌症基因图谱(TCGA)数据库分析结直肠癌及癌旁组织的IGF2BP2和MYC表达水平。采用RNA干扰技术(RNAi)沉默HCT-116和SW480人结直肠癌细胞的IGF2BP2表达，实时定量PCR检测沉默效果。敲低IGF2BP2后，集落形成实验、 CCK-8实验、 5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验检测细胞集落形成和增殖能力，Transwell^TM实验检测细胞迁移能力，实时定量PCR检测IGF2BP2、 MYC、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素10(IL-10)的mRNA表达。Western blot法测定IGF2BP2、 MYC的蛋白表达，RNA免疫共沉淀后实时定量PCR(RIP-qPCR)检测HCT-116细胞中IGF2BP2与MYC mRNA结合能力。结果 TCGA数据库结果表明，IGF2BP2和MYC在结直肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织，且IGF2BP2高表达的结直肠...     

结直肠癌中lipocalin 2的表达及临床病理特征分析

目的探讨脂质运载蛋白2(lipocalin 2, Lcn2)在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法收集40例配对结直肠癌及癌旁组织样本,分别采用qRT-PCR法、Western blot法检测Lcn2的mRNA和蛋白水平,运用免疫组化检测Lcn2蛋白并分析其与临床病理特征的关系。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织中:qRT-PCR结果显示Lcn2的mRNA水平升高(P=0.006 5);Western blot结果显示Lcn2的蛋白水平升高(P0.05);免疫组化结果显示,癌细胞胞质和胞膜中Lcn2呈强阳性,癌旁组织Lcn2呈阴性,且Lcn2强阳性与肿瘤直径(P=0.014)、分化程度(P=0.017)、T分期(P=0.042)及淋巴结转移(P=0.025)密切相关。结论 Lcn2在结直肠癌中呈强阳性,且与肿瘤直径、分化程度、T分期及淋巴结转移密切相关,提示其可能参与结直肠癌的进展和转移。     

TIMP-3基因甲基化与结直肠癌临床病理的关系

目的：探讨TIMP-3基因甲基化与结直肠癌临床病理指标和转移复发的关系。 方法： 采用巢式甲基化特异性PCR技术（nMSP法）检测100例结直肠癌组织和100例癌旁非癌组织TIMP-3基因甲基化；采用RT-PCR检测100例结直肠癌组织和100例癌旁非癌组织TIMP-3 mRNA的表达。 结果： 肿瘤组织TIMP-3 mRNA的表达阳性率为64%，肿瘤组织TIMP-3 mRNA的表达率明显低于癌旁非癌组织（P＜0.01）；TIMP-3 mRNA的表达率无淋巴结转移组（34/42）高于淋巴结转移组（30/58）（P＜0.01），甲基化阳性率Duke’s C+D期伴淋巴结转移组明显高于Duke’s A+B期不伴淋巴结转移组（P＜0.05）。结肠近端、分化程度差的结直肠癌组织甲基化阳性率明显高于远端直肠和分化程度高者（P＜0.05）。 结论： TIMP-3基因甲基化容易发生在结肠近端、Duke’s C、D期、伴淋巴结转移、细胞分化差和浸润型结直肠癌患者。     

Trop-2在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的 探讨人滋养层细胞表面抗原-2(Trop-2)在结直肠癌中的表达及其意义.方法 用免疫组化法检测84例结直肠癌组织标本及其相对应的癌旁正常组织中的Trop-2表达情况,分析其表达与临床病理特点的关系,进一步采用Westem blot检测34例手术标本的Trop-2表达情况.结果 Trop-2在结直肠癌组织中的表达高于癌旁正常组织(P ＜0.05);Trop-2表达量:直肠癌(RC)组＞左半结肠癌(LSCC)组＞右半结肠癌(RSCC)组(P＜0.05),Dukes'C+D组＞A+B组(P＜0.05),淋巴结转移组＞无淋巴结转移组(P＜0.05),远处转移组＞无远处转移组(P＜0.05);与性别、年龄、分化程度无关.结论 Trop-2在结直肠癌组织中高表达,与Dukes分期、淋巴结转移、远处转移和肿瘤所在部位有关.     

上调miR-433表达抑制结直肠癌细胞系增殖

目的研究miR-433在结直肠癌中的表达,并初步探讨其功能。方法选择不同分期结直肠癌癌组织(CRC)、癌旁组织与正常结直肠组织,用实时定量PCR检测miR-433表达并比较;体外培养结直肠癌细胞系HT-29、HCT-116和SW480以及正常结直肠细胞系NCM460,用实时定量PCR检测miR-433表达。随后将miR-433模拟物转染SW480细胞,CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞侵袭;流式细胞测量术检测细胞周期。结果与癌旁组织相比,miR-433在结直肠癌组织中表达显著降低(P0.05)。在结肠癌患者血清中miR-433水平也显著低于健康人群(P0.05)。此外,从TNM分期Ⅰ期～Ⅳ期,结直肠癌组织内miR-433表达逐渐降低(P0.05)。与NCM460相比,HT-29、HCT-116和SW480中,miR-433表达下调(P0.05)。SW480转染miR-433模拟物后,与对照miRNA组相比,在SW480细胞增殖水平明显降低(P0.05),G_2和M期细胞比例增多。上调miR-433后,细胞侵袭和迁移明显减弱(P0.05)。结论 miR-433在结直肠癌中表达降低。在SW480细胞中上调其表达后,可抑制细胞系增殖、侵袭与迁移。     

Lumican基因在结直肠癌中表达的相关研究

目的探讨Lumican基因的表达与结直肠癌发生、发展之间的关系。方法应用RT- PCR方法检测49例结直肠癌组织及其癌旁正常黏膜上皮组织内Lumican mRNA的表达水平,并进行统计学分析。结果RT-PCR结果表明结直肠癌组织中Lumican mRNA均呈阳性表达,癌旁正常黏膜上皮组织内Lumican mRNA的表达显著低于癌组织(P<0.01)。Lumican mRNA的表达水平与患者的性别、年龄、组织病理分型、淋巴结转移及Dukes分期无关。结论结直肠癌组织中Lumican mRNA的表达增强提示Lumican mRNA在结直肠癌组织中的高表达对结直肠癌的发生发展可能起重要作用。     

环氧合酶-2在预测结直肠癌肝转移中的价值

目的研究环氧合酶-2（COX-2）在结直肠组织中的表达，探讨其与结直肠癌肝转移的关系。方法免疫组化学检测无肝转移、术时合并肝转移和术后发生肝转移的各30例结直肠组织以及30例癌旁正常粘膜组织（对照组）中的COX-2表达水平，分析其与性别年龄、Dukes分期等临床特征之间的联系，比较无肝转移、术时肝转移、术后肝转移的结直肠癌组织和癌旁正常粘膜组织中的COX-2表达水平。结果COX-2表达情况：在结直肠组织中的表达显著高于癌旁正常粘膜组织（P〈0.05）；在术时肝转移和术后肝转移组中的表达均显著高于无肝转移组（P〈0.05）；在结直肠癌组织中的表达与性别、年龄、分化登记、病理类型、术前癌胚抗原（CEA）和糖链抗原19-9（CA19-9）无关，与Dukes分期、淋巴结转移有关。结论COX-2过度表达与结直肠癌发生、发展、肝转移相关，对结直肠肝转移早期诊断有一定的确应用价值。图4表2参8。     

SDF-1/CXCR4及VEGF在结直肠腺癌中的表达及其意义

目的:研究VEGF、SDF-1及CXCR4在结直肠腺癌中的表达及其与临床病理学参数之间的相关性;探讨SDF-1/CXCR4轴与VEGF在结直肠腺癌发生发展浸润转移中的作用。方法:利用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法及免疫组织化学SP法检测80例结直肠腺癌及其对应癌旁组织中SDF-1、CXCR4和VEGF mRNA及蛋白的表达。结果:在mRNA水平上,结直肠癌组中SDF-1、CXCR4、VEGF的表达显著高于对应的癌旁组织。免疫组化结果显示,肿瘤中c蛋白表达阳性率分别为78.7%、60%和66.3%高于对应癌旁组织的37.5%、42.5%和28.8%,差异显著(P0.05);结直肠癌中SDF-1表达水平与肿瘤细胞淋巴结转移、远处转移及TNM分期密切相关(P0.05),与患者的年龄、性别、肿瘤的大小、浸润深度等无关;CXCR4的表达与患者的淋巴结转移及TNM分期密切相关;SDF-1的表达与CXCR4及VEGF的表达成显著正相关。结论:SDF-1/CXCR4及VEGF在结直肠癌组织中高表达,并且与肿瘤生物学行为密切相关,提示其在肿瘤的发生发展浸润转移过程中发挥重要作用。     

干细胞转录因子OCT4在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的探讨干细胞转录因子OCT4在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化EnVision两步法及Western blot法检测60例结直肠癌手术切除组织及癌旁正常组织中OCT4的表达,分析其与结直肠癌临床病理特征的关系,运用Kaplan-Meier法分析OCT4表达与结直肠癌患者总生存率的关系。结果结直肠癌组织中OCT4的阳性率为80.00%,高于癌旁正常组织(16.67%),差异有统计学意义(P0.05),OCT4阳性与结直肠癌的淋巴结转移及Dukes分期有关(P0.05),与其他临床病理特征尚无相关性(P0.05)。Western blot实验显示:结直肠癌组织中OCT4蛋白的相对表达量为7.70±0.07,高于癌旁正常组织(0.70±0.07),差异有统计学意义(P0.05);OCT4阳性与结直肠癌的淋巴结转移及Dukes分期有关(P0.05),与其他临床病理特征无相关性(P0.05)。生存分析显示:OCT4阳性患者的总生存期低于阴性患者。结论 OCT4在结直肠癌中过表达,可作为预测结直肠癌患者预后的潜在分子标志物。