过表达Oct4B1 诱导结直肠癌SW480 细胞发生上皮间质转化

目的:探讨Oct4B1 基因过表达是否诱导人结直肠癌SW480 细胞发生上皮间质转化(EMT)及其可能的机制。方法:用带G418 抗性的Oct4B1 基因过表达质粒及阴性对照质粒转染人结直肠癌SW480 细胞株,分别称为实验组(SW480-Oct4B1)及对照组(SW480-NC),转染成功后用G418 筛选建立稳定转染的细胞株,对两种稳定转染细胞进行如下检测: RT-qPCR 检测Oct4B1 的mRNA 水平;于划痕实验和Transwell 小室实验检测迁移和侵袭能力;盂Western blot 检测EMT 相关标记物E-cadherin、N-cadherin 及Vimentin 蛋白表达; RT-qPCR 和Western blot 检测EMT 转录因子Twist 的mRNA 及蛋白表达。结果:稳定转染细胞株建立后,实验组与对照组比较:Oct4B1 基因表达水平明显升高(P<0.01);细胞迁移明显增强(P<0.01);细胞侵袭能力明显提高(P<0.01);上皮标记物E-cadherin 蛋白表达量明显下降(P<0.01);而间质标记物N-cadherin 及Vimentin蛋白表达量明显上调(P<0.01);Twist 的mRNA 及蛋白表达量均明显升高(P<0.01)。结论:过表达Oct4B1 基因可诱导人结直肠癌SW480 细胞发生EMT,增强细胞迁移及侵袭能力,其分子机制可能与提高Twist 表达有关。     

TGF-β1诱导上皮间质转化促进口腔鳞癌侵袭转移

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113上皮间质转化(EMT)发生中的作用。方法采用不用浓度的TGF-β1处理Tca8113细胞24 h,普通倒置光学显微镜下观测处理前后细胞形态学改变;分别采用Real timePCR和Western blot法检测细胞中上皮间质转化标记物E-cadherin、Vimentin mRNA和总蛋白的表达;Transwell体外细胞侵袭实验观测细胞侵袭能力变化。结果 TGF-β1可显著诱导口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞的形态从上皮样向间质样改变,并上调Vimentin mRNA和蛋白的表达和下调E-cadherin mRNA和蛋白的表达。此外,TGF-β1可明显促进Tca8113细胞的体外迁移和侵袭,而使用TGF-β1特异性抑制剂LY2109761则减弱这一效应。结论 TGF-β1通过启动上皮-间质转化(EMT)程序发生从而促进TCA8113细胞的侵袭转移。     

5-氟尿嘧啶抑制TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞间质化

目的探讨5-氟尿嘧啶对TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞间质化的抑制作用,并探讨其作用机制。方法原代培养人肝内胆管上皮细胞,角蛋白19荧光染色鉴定;细胞分为:对照(normal)组,TGF-β1(TGF-β1)组,5-氟尿嘧啶(TGF-β1+5-FU)组;免疫荧光染色观察CK-19、E-cadherin、vimentin和α-SMA标记蛋白;Western blot检测细胞标记蛋白及TGF-β1表达量;Real-time PCR检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1 mRNA含量。结果原代培养的人肝内胆管上皮细胞呈多边形或者锥形,CK-19荧光染色为胞质着色;TGF-β1诱导72 h后,胆管上皮出现间质化表现,与正常组比较,vimentin、α-SMA和TGF-β1表达明显增强(P0.05),CK-19和E-cadherin表达显著减弱(P0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1 mRNA含量显著升高(P0.05);5-FU抑制胆管上皮间质化,与TGF-β1组比较,CK-19和E-cadherin表达增强(P0.05),vimentin、α-SMA和TGF-β1表达明显减弱(P0.05),TGF-β1 mRNA和Ⅲ型胶原mRNA含量明显降低(P0.05)。结论 5-FU通过下调TGF-β1的表达抑制胆管上皮细胞间质化。     

TGF-β1诱导大鼠肝星状细胞系HSC-T6活化及上皮间质转换

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)活化及上皮间质转换(EMT)中的作用。方法体外培养HSC-T6,用MTT法筛选TGF-β1对HSC-T6作用的最佳浓度;用10μg/L TGF-β1处理HSC-T6 24 h,相差倒置显微镜下观察细胞形态改变,免疫荧光染色法检测细胞骨架结构F-actin蛋白的表达,RT-q PCR法检测肌动蛋白α-SMA及代表上皮间质转换的神经黏附素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和上皮黏附素(E-cadherin)基因表达;用不同浓度(0、5和10μg/L)的TGF-β1处理HSC-T6 24 h,Western blot检测α-SMA、N-cadherin、vimentin和E-cadherin蛋白表达。结果 10μg/L TGF-β1干预HSC-T6 24 h有最好的细胞存活率;TGF-β1刺激HSC-T6后,细胞拉伸,伪足增多呈星形,细胞间连接疏松,呈显著活化状态;F-actin聚集形成应力纤维丝,沿细胞长轴分布;实验组α-SMA mRNA及vimentin mRNA的表达量明显高于对照组(P0.05),而E-cadherin mRNA的表达量明显降低(P0.05);在不同浓度的TGF-β1呈剂量依赖性致α-SMA及N-cadherin和vimentin的蛋白表达量增多,而E-cadherin的蛋白表达量减少。结论 TGF-β1可诱导HSC-T6活化及上皮间质转换。     

Notch1在TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化中的表达和意义

目的:探讨Notch1蛋白及其mRNA在TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化(KTECT)中的动态表达及意义.方法:以体外培养的人近端肾小管上皮细胞株( HK-2)为研究对象,实验分为空白对照组及TGF-β1( 10 ng/mL)诱导组.加入TGF-β1作用后分别于12 h、24h、48 h及72 h在倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;用细胞免疫组化染色法检测α-平滑肌肌动蛋白( α-SMA)、E-钙黏连素(E-cadherin)和Notch1蛋白表达的变化;用RT-PCR法检测α-SMA mRNA、Ecadherin mRNA和Notch1 mRNA表达的变化.结果:与空白对照组相比较,在加入TGF-β1作用后12 h、24h、48 h及72h,TGF-β1诱导组α-SMA蛋白及其mRNA表达明显增加(P＜0 05);Notch1蛋白及其mRNA在TGF-β1作用后的24h、48h、72 h表达逐渐增加(P＜0.05);E-cadherin蛋白及其mRNA表达在24h、48 h、72 h明显减少(P＜0.05);Notch1蛋白及其mRNA的表达与E-cadherin蛋白及其mRNA的表达呈负相关(r蛋白=-0.937;rmRNA=-0.921;假设检验结果(P＜0.05),与α-SMA蛋白及其mRNA的表达呈正相关(r蛋白=0.958;rmRNA=0.944;假设检验结果(P＜0.05).结论:Notch1极有可能参与了TGF-β1诱导的KTECT.     

烟草烟雾通过TGF-β1/Smad2通路诱导RLE-6TN发生上皮间质转化

目的:探讨烟草烟雾提取物(Cigarette smoke extract,CSE)在诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞RLE-6TN发生上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用及机制。方法:以不同浓度(0.25%,0.5%及1%)CSE刺激RLE-6TN细胞株;TGF-β1受体抑制子(SB431542)预处理后,加入1%CSE共培养。实时定量PCR(RT-PCR)检测E-cadherin和Vimentin RNA表达;印迹法(Western blot)检测TGF-β1、Smad2、磷酸化的Smad2(p-Smad2)、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达量。结果:经不同浓度的CSE作用,E-cadherin无论是在RNA还是在蛋白水平表达均下调,而Vimentin表达均上调;同时,TGF-β1、p-Smad2和N-cadherin蛋白表达量增加;TGF-β1受体抑制子(SB431542)干预后,p-Smad2表达量明显降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达量较对照组明显增加(P0.05),N-cadherin和Vimentin蛋白表达量较对照组明显降低(P0.05)。结论:CSE可能通过激活TGF-β1/Smad2信号通路,参与调节E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达,从而诱导RLE-6TN发生EMT。     

Twist对TNF-α作用后乳腺癌细胞侵袭及上皮间质转化的影响

RNA干扰技术抑制Twist在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达,观察其沉默对TNF-α作用后乳腺癌细胞侵袭及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的影响。以乳腺癌细胞MDA-MB-231为空白对照,shRNA-NC空载体为阴性对照,构建Twist沉默表达载体,转染乳腺癌细胞MDA-MB-231,qRT-PCR和Western blotting检测转染细胞中Twist mRNA及蛋白质表达水平。建立Twist沉默表达的乳腺癌细胞模型后,用TNF-α分别处理对照组及转染后的乳腺癌细胞,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western blotting检测细胞EMT相关蛋白波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)和转移相关蛋白基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2, MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达。结果显示,下调Twist的乳腺癌细胞经TNF-α处理后,细胞侵袭和迁移能力降低,Vimentin表达减少,E-cadherin表达增加,细胞中MMP-2、MMP-9表达减少,与空白对照及TNF-α作用后的阴性对照相比,差异有统计学意义(P0.05)。因此,下调Twist可降低TNF-α诱导的乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力,抑制其EMT。     

缺氧微环境调控Twist促进人肝癌细胞株SMMC-7721的上皮间质转化

目的探讨缺氧条件下,Twist基因的表达及其在人肝癌SMMC-7721细胞株上皮间质转化中的作用机制。方法模拟缺氧微环境,分别在常氧(21%O_2)和缺氧(1%O_2)条件下培养SMMC-7721细胞24 h。在倒置光学显微镜下检测SMMC-7721细胞形态学的改变;RT-PCR和Western blot法检测细胞中HIF-1α、Twist、上皮表型标记蛋白E-cadherin及间质表型标记蛋白Vimentin的表达;Transwell小室侵袭实验检测缺氧条件和常氧条件下细胞侵袭能力的变化。使用Twist1靶向siRNA抑制其表达后,进一步采用RT-PCR和Western blot检测HIF-1α、Twist、E-cadherin和Vimentin的表达水平,Transwell法检测细胞侵袭能力变化。结果在缺氧模拟条件下,人肝癌SMMC-7721细胞中Twist基因表达水平显著升高,同时细胞发生上皮-间质转化和侵袭能力增强。靶向沉默Twist基因后,低氧诱导的上皮间质转化过程被逆转,同时细胞侵袭能力显著减弱。结论低氧条件下Twist基因异常激活,进而促进SMMC-7721细胞上皮-间质转化的发生和侵袭能力的增强。     

miR-194-3p调节TGF-β诱导的上皮-间充质转化抑制乳腺癌细胞侵袭

目的研究miRNA-194-3p在TGF-β1诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化(EMT)发生中的作用,探讨miR-194-3p抑制乳腺癌侵袭的机制。方法体外培养人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,采用TGF-β1加入人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞培养液中制备细胞模型,RT-PCR检测miR-194-3p在TGF-β1诱导前后的表达变化。采用miRNA拟似物和无关序列分别转染MDA-MB231的方法获得细胞模型。Western blot检测EMT标记分子(E-cadherin、Vimentin)的表达。Trasnwell实验检测miRNA-194-3p拟似物、TGFβ1和共同作用对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。结果 TGF-β1诱导乳腺癌细胞发生EMT,TGF-β组中E-cadherin表达下调,Vimentin表达上调;过表达miRNA-194-3p抑制了TGF-β对E-cadherin、Vimentin的作用。在侵袭迁移实验中,TGF-β促进细胞的侵袭,过表达miRNA-194-3p可抑制TGF-β的促进作用。结论 MiR-194-3p调节TGF-β诱导的上皮-间充质转化抑制乳腺癌侵袭。     

积雪草苷对TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞增殖和Vimentin蛋白表达影响

目的:研究积雪草苷对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肺泡上皮细胞增殖和波形蛋白(Vimentin)表达的影响。方法:用5 ng/ml的TGF-β1处理A549细胞,同时分别给予40、80、160μg/ml浓度的积雪草苷处理,以正常培养的细胞作为对照,MTT测定各组细胞增殖情况,Western blot检测细胞中上皮间质转化(EMT)标志蛋白Vimentin、钙黏蛋白E(E-cadherin)的表达水平,同时检测诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)蛋白水平。收集各组培养液上清,用ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)、血管内皮生长因子(VEGF)含量。结果:TGF-β1培养后的A549细胞增殖活性升高,细胞间质标志物Vimentin蛋白水平升高,上皮标志物E-cadherin蛋白水平降低,同时细胞中i NOS蛋白水平也升高,细胞分泌的IL-6、TNF-α、IL-4、VEGF水平升高,IFN-γ水平降低,与正常培养的对照细胞比较,差异有统计学意义(P0. 05)。40、80、160μg/ml的积雪草苷处理以后的细胞增殖活性降低,细胞中间质标志物Vimentin表达减少,上皮标志物E-cadherin表达增多,i NOS蛋白表达减少,细胞分泌的IL-6、TNF-α、IL-4、VEGF减少,IFN-γ增多,与未用积雪草苷处理的细胞比较,差异有统计学意义(P0. 05)。结论:积雪草苷抑制TGF-β1诱导肺泡上皮细胞增殖活性和EMT,减少细胞分泌炎症因子,调控细胞因子的表达,具有一定的抗肺纤维化作用。     

肿瘤相关巨噬细胞对宫颈癌SiHa 细胞迁移和侵袭的影响

目的:探究THP-1来源的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭的影响及其相关分子机制。方法:佛波脂(PMA)和IL-4将THP-1细胞诱导为TAMs,流式细胞仪检测其表面CD204和CD206分子的表达;将TAMs与SiHa细胞共培养,采用划痕实验、Transwell实验检测TAMs对SiHa细胞迁移和侵袭能力的影响;免疫印迹法检测共培养后SiHa细胞上皮间质转化相关蛋白的变化,RT-PCR检测转录因子Snail/Slug mRNA表达水平。结果:PMA作用于THP-1细胞24 h,IL-4继续作用72 h后,细胞表面CD204和CD206分子表达明显增加,TAMs诱导成功;与未共培养组相比,共培养组SiHa细胞迁移和侵袭能力显著增强(P0.001);共培养组SiHa细胞E-cadherin蛋白表达水平显著降低,N-cadherin、Vimentin蛋白、Snail/Slug mRNA表达水平显著升高(P0.05)。结论:TAMs可能通过上调转录因子Snail的表达促进SiHa细胞上皮间质转化进程,从而促进其侵袭和转移。     

转化生长因子β1与食管鳞状细胞癌上皮间质转化的关系

目的 探讨食管鳞状细胞癌中转化生长因子β1(TGFβ1)与上皮间质转化的关系以及阻断TGFβ1通路对食管鳞状细胞癌上皮间质转化的影响.方法 将化学合成的TGFβ1反义寡核苷酸(TGFβ1-ASODN)转染食管鳞状细胞癌细胞株EC9706,采用RT-PCR、免疫细胞化学及流式细胞术检测阻断前后对TGFβ1活性的影响以及对上皮性标志物E-cadherin及间质性标志物波形蛋白表达的影响;观察TGFβ1-ASODN转染前后细胞形态学的变化;采用细胞划痕试验检测TGFβ1-ASODN转染前后细胞迁移能力的变化.结果 转染TGFβ1-ASODN可有效的抑制EC9706细胞中TGFβ1的活性,其mRNA(0.25±0.07)及蛋白(35.07%±1.42%)的表达均明显低于转染前mRNA(0.43±0.09)及蛋白(43.57%±1.77%)的水平(χ2=13.847及χ2=84.120,均P<0.05);并提高E-cadherin的表达,抑制波形蛋白的表达.转染后E-cadherin mRNA(0.38±0.09)及蛋白(17.13%±1.45%)的表达明显高于转染前mRNA(0.22±0.06)及蛋白(12.53%±1.31%)的水平(χ2=0.160及χ2=40.008,均P<0.05);波形蛋白mRNA(0.73±0.07)及蛋白(14.15%±1.46%)的表达低于转染前mRNA(0.89±0.09)及蛋白(17.97%±1.42%)水平(χ2=0.160及χ2=21.103,均P<0.05).TGFβ1-ASODN转染可明显抑制细胞的运动能力,转染后细胞迁移距离(0.45±0.05)比转染前(0.81±0.11)明显缩小(χ2=16.854,P<0.05).结论 TGFβ1可能参与了食管鳞状细胞癌的上皮间质转化,TGFβ1-ASODN可导致食管鳞状细胞癌细胞上皮性标志物E-cadherin表达上调、间质性标志物波形蛋白表达下调、形态发生改变以及细胞移动能力降低,阻断TGFβ1信号可抑制食管鳞状细胞癌细胞的上皮间质转化.     

敲减NOB1基因表达对人结肠癌SW480细胞药物敏感性及侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨通过小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)技术敲减NOB1基因表达对人结肠癌SW480细胞活力、药物敏感性、凋亡、细胞周期及侵袭和迁移能力的影响。方法:利用脂质体Lipofectamine 3000将NOB1 siRNA转染至SW480细胞,采用real-time PCR和Western blot检测转染后SW480细胞中NOB1 mRNA和蛋白表达的变化;采用MTT法检测敲减NOB1基因表达后SW480细胞活力及其对不同化疗药物(顺铂、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂和卡培他滨)敏感性的变化;流式细胞术检测敲减NOB1基因表达对SW480细胞凋亡和周期的影响;Transwell方法检测敲减NOB1基因表达对结肠癌SW480细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:转染NOB1 siRNA后,SW480细胞中NOB1的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05);与对照组和阴性对照siRNA组相比,NOB1 siRNA转染组的SW480细胞在24～72 h的细胞活力显著降低,顺铂、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂和卡培他滨对该细胞的半数抑制浓度均显著降低,细胞凋亡率显著增加,细胞周期受到阻滞,细胞侵袭和迁移能力显著降低(P0.05)。结论:NOB1 siRNA转染能够抑制结肠癌SW480细胞活力及侵袭和转移能力,并增强细胞对药物的敏感性,促进细胞凋亡。NOB1能够成为结肠癌诊断和治疗的新靶点。     

高迁移率族蛋白1 在钬激光致输尿管狭窄患者中的作用及甘草酸苷的 体外抑制研究

目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)在钬激光致输尿管狭窄患者中的作用及甘草酸苷的体外抑制效应。方法:选取28例钬激光致输尿管狭窄患者作为研究对象,均行输尿管狭窄段切除术,荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测输尿管狭窄段组织中HMGB1、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA水平,Pearson法分析HMGB1与各因子的相关性。将人输尿管上皮SV-HUC-1细胞随机分为3组,即对照组、钬激光组、钬激光+甘草酸苷组。照射48 h后,Western blot检测HMGB1及下游TLR4/NFκB信号通路的表达;ELISA检测上清中IL-1β、TNF-α、TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白、纤维连接蛋白的含量;免疫荧光染色检测E-cadherin和Vimentin表达情况。结果:HMGB1 mRNA表达与IL-1β、TNF-α、TGF-β1 mRNA水平呈正相关(P0.05)。对照组、钬激光+甘草酸苷组细胞中HMGB1、TLR4、p-NFκB蛋白表达量均低于钬激光组(P0.05)。对照组、钬激光+甘草酸苷组细胞上清液中IL-1β、TNF-α、TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白、纤维连接蛋白含量均低于钬激光组(P0.05)。与钬激光组相比较,对照组、钬激光+甘草酸苷组细胞E-cadherin荧光强度明显增强,Vimentin荧光强度明显减弱。结论:在钬激光致输尿管狭窄患者的输尿管组织中,HMGB1表达与促炎及促纤维化因子水平呈正相关。在钬激光照射输尿管上皮细胞的体外模型中,甘草酸苷可抑制HMGB1及其下游TLR4/NFκB信号通路的激活,下调炎症及纤维化因子的表达,抑制细胞发生上皮间质转化。     

miR-377靶向ZEB2调节结肠癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化北大核心CSCD

目的:探讨miR-377对结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及潜在作用机制。方法:RT-qPCR检测结肠癌细胞系HT29、SW480、SW620和HCT116和人小肠上皮细胞HIEC miR-377表达。将miR-377 mimic、阴性对照物、pmirGLO-wt-ZEB2、pmirGLO-mut-ZEB2转染至HCT116细胞,双荧光素酶报告实验检测miR-377与ZEB2的靶向作用,伤口愈合实验、Transwell、Western blot检测miR-377和ZEB2对细胞迁移、侵袭、上皮-间质转化相关蛋白表达的影响。结果:与HIEC细胞相比,结肠癌细胞系miR-377表达降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-377 mimic和pmirGLO-WT-ZEB2共转染的HCT116细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05),但ZEB2结合位点突变逆转了miR-377 mimic对荧光素酶活性的抑制作用(P>0.05);miR-377 mimic显著降低了HCT116细胞ZEB2蛋白表达(P<0.05)。与NC+Vector组相比,miR-377+Vector组细胞划痕愈合率、侵袭细胞数显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P>0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低(P<0.05)。与miR-377+Vector组相比,miR-377+ZEB2组细胞划痕愈合率、侵袭细胞数显著高于miR-377+Vector组(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05),miR-377+ZEB2组与NC+Vector组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-377通过靶向作用于ZEB2调节结肠癌细胞上皮-间质转化相关蛋白表达,进而影响结肠癌细胞迁移、侵袭,为结肠癌临床治疗提供了新的策略。     

转化生长因子-β1诱导大鼠毛乳头细胞转分化为成纤维细胞的研究

目的 研究大鼠触须毛乳头细胞在转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导作用下转分化为成纤维细胞的可能性,从新的角度探讨增生性瘢痕的形成机制.方法 消化收集第4代毛乳头细胞,处理组以 TGF-β1（10 ng/mL）处理细胞4 d;对照组加入正常培养基（不含胎牛血清的DMEM/F12培养液）,每隔24 h观察两组细胞生长形态及生长方式;分别用实时一步法RT-PCR和流式细胞仪检测细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）的mRNA表达和蛋白表达,Western blotting检测成纤维细胞特异蛋白（FSP1）的表达.结果流式细胞仪检测TGF-β1诱导48 h、72 h后α-SMA表达明显低于对照组（P〈0.01）;TGF-β1诱导48 h、72 h、96 h后Vimentin表达明显高于对照组（P〈0.01）.实时一步法RT-PCR检测Vimentin的mRNA表达逐渐增强,α-SMA的mRNA表达在48 h后明显下降（P〈0.01）,但96 h后表达又有所增加;Western blotting法检测FSP1表达在诱导48 h后逐渐增加（P〈0.01）.结论 毛乳头细胞经TGF-β1诱导后,失去其典型的细胞形态及生长方式,而表现出成纤维细胞的细胞形态及生长方式;其相对特异性标记物α-SMA的表达下降,而成纤维细胞的相对特异性标记物Vimentin和FSP1表达增加.故TGF-β1可诱导大鼠毛乳头细胞转分化为成纤维细胞.     

miR-126 对结肠癌细胞生物学行为的影响及其在调控结肠癌EMT 转化中的作用

目的:观察miR-126 在不同转移潜能的人结肠癌细胞系中的表达情况及其对结肠癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响并探讨可能的作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR 检测结肠癌细胞系(SW480、SW620 及HCT116)中miR-126 的表达量。通过脂质体瞬时转染法将miR-126 过表达(miR-126 mimics),并设置阴性对照组,然后采用CCK8 法检测细胞的增殖能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell 侵袭小室实验检测细胞的侵袭能力,Western blot 实验检测E-cadherin 和Vimentin 蛋白表达量的变化。结果:相对于低转移潜能的结肠癌细胞株SW480,miR-126 在高转移潜能的SW620 和HCT116细胞中的表达降低。过表达miR-126 可使SW620 细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,E-cadherin 蛋白表达增加,Vimentin 蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:低表达的miR-126 与结肠癌的转移密切相关,miR-126 影响结肠癌细胞生物学行为的作用可能是通过调控EMT 进程实现的。     

模拟低氧微环境中基质硬度对结肠癌细胞上皮-间质转化的影响

目的 通过模拟人结肠癌组织微环境,研究基质硬度和低氧协同对结肠癌细胞SW480上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 制备硬度分别为4.5、20、40 kPa聚乙烯醇(polyvinyl alcohol, PVA)凝胶模拟结肠癌组织各部位的刚度范围。以氯化钴(CoCl₂)模拟低氧微环境,在不同硬度基底上检测细胞形态变化;利用Western blot检测低氧诱导因子(hypoxia inducible factor, HIF-1α)以及EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、转录因子Snail 1表达;通过实时荧光定量PCR检测HIF-1α、E-cadherin、Vimentin、Snail 1、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)和MMP-9基因表达。结果 模拟低氧微环境中,随基质硬度增加,细胞铺展面积增大,由圆形逐渐变为纺锤形;通过上调Vimentin、Snail-1、MMP-2、MMP-9表达以及下调E...     

黄精皂苷对TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT、补体系统和PI3K/AKT/NF-κB信号通路的影响

目的分析黄精皂苷通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路调控补体系统对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的HK-2细胞上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的影响及机制。方法 HK-2细胞分为4组:对照组、黄精皂苷组、TGF-β1组、TGF-β1+黄精皂苷组。在培养基中加入终质量浓度为10 ng/ml的TGF-β1处理48 h诱导。黄精皂苷终质量浓度为20 ng/ml,培养48 h。检测各组细胞迁移和侵袭的能力,并检测E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)、波形蛋白(Vimentin,Vim)mRNA和蛋白水平评估EMT。通过RT-qPCR和Western blot检测C3aR、C5aR、PI3K、AKT、NF-κB m RNA和蛋白表达量。结果 4组细胞的上述指标比较差异显著(P<0.05)。黄精皂苷组细胞的迁移能力(22.75%±1.98%)、C3aR、C5aR、PI3K、AKT、NF-κB、N-cad、Vim的mRNA和蛋白表达量显著低...     

光动力疗法抑制黑色素瘤的迁移、侵袭和上皮间质转化

目的研究以5-氨基乙酰丙酸为光敏剂的光动力疗法(AlA-PDT)对黑色素瘤细胞A375迁移、侵袭和上皮间质转化的影响。方法体外培养人黑色素瘤A375细胞,采用不同光照强度的ALA-PDT处理,采用CCK8检测不同光照强度对A375细胞增殖能力的影响,采用划痕实验、Transwell法实验检测A375细胞迁移和侵袭能力,采用免疫印迹法(Western blot)检测上皮间质转化相关分子,如上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、Snail、TGF-β、Smad2和Smad3蛋白表达情况。结果与对照组相比,ALA-PDT处理组A375细胞迁移和侵袭能力有不同程度的降低(P0.05),上皮间质转化相关分子E-cadherin表达量显著增加(P0.01),而Snail、Smad2、Smad3和TGF-β的表达量则显著降低(P0.05)。结论 ALA-PDT不但可以抑制黑色素瘤的迁移和侵袭能力,而且还可以抑制黑色素瘤的上皮间充质转化。