重组人白细胞介素-24及其联合顺铂对卵巢癌细胞体外生长的影响

目的探讨重组人白细胞介素24(rhIL-24)对SKOV3卵巢癌细胞株、卵巢癌顺铂(DDP)耐药SKOV3/DDP细胞株的抑制效应,并观察rhIL-24对卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞凋亡和细胞周期的影响。方法用rhIL-24、DDP及rhIL-24联合DDP作用于SKOV3、SKOV3/DDP细胞,以CCK-8法检测细胞增殖、用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化。结果 rhIL-24对体外培养的卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞的生长有明显抑制作用,rhIL-24联合DDP对SKOV3/DDP细胞株抑制率为30.7%,与单用DDP组抑制率6.5%相比有显著性差异,流式细胞仪检测rhIL-24、DDP和rhIL-24联合DDP各组凋亡率分别为14.95%、12.99%和16.32%,与阴性对照组凋亡率1.32%比较具有显著性差异;细胞周期检测中,SKOV3细胞周期变化显示rhIL-24组G2、S期增多,联合用药组出现S期增多;SKOV3/DDP细胞中,rhIL-24组处理出现G2期增多,联合用药组出现G1期增多。结论 rhIL-24对卵巢癌细胞DDP敏感和耐药株都具有抑制作用,联合用药可增强DDP的效应;rhIL-24对卵巢癌细胞的抑制作用通过诱导细胞凋亡实现,rhIL-24处理细胞后周期变化出现G2期阻滞,联合用药组出现G1期阻滞。     

雷帕霉素对顺铂作用下人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞增殖、侵袭、黏附及自噬凋亡的影响

 目的:研究雷帕霉素（Rap）对顺铂（DDP）作用下人肺腺癌A549及耐药A549/DDP 细胞增殖、迁移、黏附及其自噬凋亡的影响。方法: 培养人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞株,利用MTT方法分别检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞增殖抑制率的影响;Transwell方法检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞体外侵袭能力的影响;黏附实验检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞体外侵袭能力的影响;流式细胞术检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞凋亡的影响;Western blotting检测Rap和DDP单独与联合作用对A549及耐药A549/DDP细胞自噬标志蛋白beclin-1和LC3表达的影响。 结果: 与Rap或DDP单独作用组相比,Rap和DDP联合作用能够同时显著抑制人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞增殖、体外侵袭能力及细胞黏附能力,并能够促进细胞凋亡和自噬标志蛋白beclin-1和LC3的表达（均P＜0.05）。结论: Rap能够通过促进细胞自噬而增强DDP的作用,进而抑制人肺腺癌A549及耐药A549/DDP细胞的增殖、侵袭、黏附并促进细胞凋亡作用,具有协同作用。     

GeXP 检测rhIL-24 联合DDP 对人肺腺癌A549 / DDP 细胞凋亡相关基因的实验研究

目的:利用多基因遗传表达分析系统(GeXP)探讨重组人白细胞介素-24(rhIL-24)联合顺铂(DDP)诱导人肺腺癌顺铂耐药株A549/ DDP 细胞6 个凋亡相关基因的变化。方法:用rhIL-24、DDP 及rhIL-24+DDP 干预A549/ DDP 细胞,应用多基因遗传表达分析系统(GeXP)同时检测Bax、Bcl-2、Survivin、Caspase3、Rb 与P53 等6 个凋亡相关基因。结果:rhIL-24 蛋白可引起A549/ DDP 细胞Bax 基因、Caspase3 基因、Rb 基因转录上调;Bcl-2 基因、Survivin 基因转录下调,但抑癌基因P53 变化无规律,rhIL-24 联合DDP 后Bax、Survivin、Rb 表达较单独rhIL-24 组变化更加显著。结论:rhIL-24 蛋白可通过上调Bax,下调Bcl-2、Survivin,激活Caspase3,上调抑癌基因Rb 诱导人肺腺癌A549/ DDP 细胞凋亡。     

靶向沉默Ku80增强顺铂诱导的人肺腺癌细胞凋亡

目的:观察沉默Ku80能否增强顺铂诱导的人肺腺癌耐药细胞的细胞凋亡。方法:首先采用RT-PCR、Westernblot方法比较Ku80在人肺腺癌亲代(A549)与耐药细胞系(A549/DDP)的表达水平;将Ku80siRNA及si-Scramble转染至A549/DDP细胞后,加药组转染后48小时加顺铂作用24小时;应用MTT法检测顺铂对各组细胞的抑制率,采用流式细胞仪检测凋亡率,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活化程度。结果:Ku80 mRNA、蛋白在A549/DDP表达水平显著高于其亲代A549;si-Ku80组A549/DDP细胞的Ku80的mRNA、蛋白表达水平下调;顺铂对si-Ku80组细胞的抑制率明显高于si-Scram-ble组与Control组;在6μg/ml顺铂作用24小时后,si-Ku80组细胞凋亡率及Caspase-3活化程度高于si-Scramble组和Control组(P<0.05)。结论:靶向Ku80siRNA导入人肺腺癌耐药细胞特异性下调Ku80的表达,增强顺铂诱导的人肺腺癌耐药细胞凋亡作用。     

GANT61 阻断Hedgehog 信号通道调控肺腺癌A549 / DDP 细胞耐药的机制研究

目的:探讨GANT61阻断Hedgehog信号通道调控肺腺癌A549/DDP细胞增殖、细胞周期及耐药的机制研究。方法:应用CCK8法检测顺铂(DDP)对肺腺癌细胞株A549和A549/DDP的半数抑制浓度(IC50),从而计算A549/DDP细胞的耐药指数;同时采用Western blot检测A549、A549/DDP细胞中Gli1、Ptch1、Shh、XRCC1蛋白的表达水平。用不同浓度的GANT61干预A549/DDP细胞后,CCK8法检测增殖活力。流式细胞术检测GANT61对A549/DDP细胞凋亡率和细胞周期的影响。Western blot检测GANT61对A549/DDP细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响。采用20μmol/L GANT61联合不同浓度的顺铂干预A549/DDP细胞,CCK8法检测各组细胞增殖抑制率变化及Western blot检测各组细胞中XRCC1蛋白的表达水平。结果:A549/DDP细胞的耐药指数为5. 34。A549/DDP细胞与A549细胞相比,Gli1、Ptch1、Shh、XRCC1在蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P 0. 01或P 0. 05)。使用GANT61处理A549/DDP细胞,当其浓度分别≥20μmol/L、≥10μmol/L时,分别培养24 h和72 h,与对照组相比肿瘤细胞增殖活性下降(P0. 01),且呈现剂量依赖性。GANT61可通过下调c-myc、cyclin D1表达(P0. 01),阻滞细胞周期于G1期(P0. 01)。GANT61能够明显诱导A549/DDP细胞发生凋亡(P0. 05),其分子机制可能与促进caspase-3的剪切活化相关(P0. 05)。GANT61联合顺铂用药后使A549/DDP细胞抑制率显著增加,呈协同效应,且伴随XRCC1蛋白表达下降(P0. 01)。结论:Gli1在人肺腺癌耐药细胞A549/DDP中的表达明显高于顺铂敏感株A549,提示Gli1可能与肺腺癌顺铂耐药相关,且XRCC1蛋白在A549/DDP细胞高表达。故采用Gli1抑制剂GANT61能够明显抑制A549/DDP细胞增殖,阻滞细胞周期,并诱导细胞凋亡。体外试验中,GANT61与顺铂联合用药可以协同抑制增殖作用,其机制可能与下调XRCC1蛋白表达有关。     

miRNA-181a在人肺腺癌细胞中的表达及对细胞功能的影响

目的:研究微小RNA-181a(mi RNA-181a)在不同人肺腺癌细胞中的表达及其转染人肺腺癌耐药细胞A549/DDP后对其细胞功能的影响及机制。方法:利用实时荧光定量PCR方法检测mi RNA-181a在人正常肺上皮细胞系BEAS-2B、人肺腺癌细胞系A549、人肺腺癌耐药细胞系A549/DDP中的表达;利用p Genesil-mi RNA-181a真核表达质粒转染A549/DDP细胞,同时设置未转染组和空载组;分别采用实时荧光定量PCR、MTT法、流式细胞术、Transwell实验以及Western blot法检测mi RNA-181a转染前后的表达情况、对A549/DDP细胞活力、细胞周期、细胞侵袭能力和顺铂(DDP)作用下的细胞生长抑制率、细胞凋亡率的影响以及对A549/DDP细胞中mi RNA-181a的靶基因bcl-2和p53蛋白表达的影响。结果:mi RNA-181a在A549和A549/DDP中的表达量显著低于BEAS-2B(P0.05),且在A549/DDP中表达量最低;mi RNA-181a转染A549/DDP细胞后其表达显著升高(P0.05)且能够抑制A549/DDP细胞活力、细胞周期和细胞侵袭能力(P0.05),同时升高DDP作用下A549/DDP细胞的生长抑制率和细胞凋亡率(P0.05);mi RNA-181a转染A549/DDP细胞后抑制Bcl-2蛋白的表达而促进P53蛋白的表达(P0.05)。结论:mi RNA-181a可能参与了肺腺癌的发生发展,mi RNA-181a可作为人肺腺癌治疗的新靶点。     

赫赛汀对吉非替尼诱导肺癌A549细胞凋亡的影响

目的： 研究吉非替尼与赫赛汀联合应用对人肺腺癌A549 细胞凋亡的影响。方法: 应用MTT法,流式细胞仪Annexin V－PI 双标法、DAPI荧光染色等多项方法,体外研究吉非替尼与赫赛汀联合对A549 细胞的促凋亡作用。结果: 吉非替尼与赫赛汀单独应用及联合应用均可以明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长，促进细胞凋亡,并呈浓度及时间依赖性,2者联合作用人肺腺癌A549 细胞24 h、48 h、72 h 的凋亡率显著高于单用吉非替尼或赫赛汀组(P<0.05),2者呈现出相加的抗瘤效果。结论: 吉非替尼与赫赛汀联合应用在体外对人肺腺癌A549 细胞有明显的促凋亡作用。     

腺病毒介导的IL-24增强紫杉醇对A549肺腺癌细胞生长的抑制作用

目的探讨腺病毒介导的白细胞介素24(Ad-IL-24)联合紫杉醇对体外培养的人肺腺癌A549细胞生长的影响。方法用Ad-IL-24、紫杉醇、Ad-IL-24联合紫杉醇处理A549细胞,以CCK-8法测定细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化。结果 Ad-IL-24可明显抑制人肺腺癌A549细胞生长并诱导细胞凋亡,与紫杉醇联合处理后,其抑制肺癌细胞生长及诱导细胞凋亡作用明显优于单用紫杉醇组及Ad-IL-24组,并引起G2/M期阻滞。结论 Ad-IL-24感染肺癌A549细胞可增强紫杉醇对肿瘤细胞生长的抑制作用。     

ATRA联合Genistein对肺癌细胞凋亡及ICAM-1表达的影响

目的 探讨ATRA联合Genistein对A549细胞凋亡及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法采用ATRA、Genistein单药及两者联合处理人肺腺癌细胞株A549,观察A549细胞生长情况并采用MTT法检测A549细胞的增殖抑制率,运用TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞表面ICAM-1的表达。结果A549肺癌细胞经ATRA、Genistein及两者联合处理后,细胞增殖明显受抑制,凋亡指数明显提高,ICAM-1表达明显下调;其中以两者联合用药最为显著。结论ATRA联合Genistein能协同抑制A549细胞的增殖、促进细胞的凋亡,并可能下调ICAM-1的表达,进而降低肺癌细胞转移的潜能。     

Polo-like激酶1反义RNA对肺癌细胞A549生长的实验研究

目的:探讨Polo-like激酶1(Plk1)基因表达下调对肺癌细胞周期分布及其生长的影响。方法:培养肺腺癌细胞株A549,构建表达Plk1反义RNA的质粒pcDNA3-Plk1,通过脂质体介导转染A549细胞,采用RT-PCR和Western blotting的方法检测Plk1基因的表达,细胞计数、BrdU脉冲标记检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期变化和凋亡,MTT法检测长春瑞宾(NVB)对各组细胞的生长抑制率。结果:A549细胞转染pcDNA3-Plk1后24h,Plk1mRNA及蛋白表达均下降;细胞变圆、漂浮、增殖减慢;S期细胞百分数(BrdU标记指数)显著低于对照组(P<0.05);转染后48hA549细胞出现G2/M期阻滞(P<0.05)并发生凋亡;等浓度化疗药物诺维本对转染pcDNA3-Plk1细胞的抑制率明显高于各对照组(P<0.05),转染pcDNA3与未转染的对照细胞差异无显著(P>0.05)。结论:pcDNA3-Plk1的转染能下调Plk1基因的表达,抑制A549细胞增殖,诱导凋亡,并能增加A549细胞对化疗药物的敏感性。     

参慈胶囊联合顺铂通过PI3K/AKT/mTOR信号通路逆转人肺腺癌顺铂耐药的机制研究

目的:探讨参慈胶囊联合顺铂是否通过PI3K/AKT/mTOR信号通路逆转接种人肺腺癌A549/DDP细胞的裸鼠体内的顺铂耐药。方法:建立裸鼠人肺腺癌移植瘤模型,随机分为对照组、参慈胶囊组、顺铂组和参慈胶囊+顺铂组。对照组予生理盐水,其余各组荷瘤裸鼠均用药21 d,断颈处死,取肿瘤组织,采用流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡;采用FQ-PCR技术检测A549/DDP肺癌组织PTEN、P-糖蛋白、PI3K、AKT和mTOR的mRNA表达情况。结果:参慈胶囊组、顺铂组和参慈胶囊+顺铂组与对照组比较,对人肺腺癌A549/DDP细胞的增殖均有抑制作用,其中参慈胶囊+顺铂组较其它治疗组能够进一步将人肺腺癌A549/DDP细胞阻滞于G_2/M期,促进细胞凋亡,增加PTEN的表达,抑制P-糖蛋白、PI3K、AKT和mTOR的表达。结论:参慈胶囊可能通过阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进PTEN的表达,或者抑制P-糖蛋白介导的耐药途径,增强裸鼠体内人肺腺癌A549/DDP耐药细胞对顺铂的敏感性。     

Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖影响实验研究

目的：探讨慢病毒载体介导survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及其作用机制，为肺癌基因治疗新策略提供帮助。方法:构建表达survivin-siRNA的慢病毒载体感染A549细胞株，测定病毒滴度。采用RT-PCR、免疫组化及Western blotting等检测感染后不同分组A549细胞survivin-mRNA和蛋白的变化及caspase-3蛋白的变化，通过流式细胞仪及MTT法检测感染后A549细胞周期及生长曲线。结果: RT-PCR及Western blotting检测显示，转染细胞(MOI=150)中survivin基因mRNA和蛋白的表达明显降低，抑制率分别为97%、88%；细胞生长曲线和周期结果显示转染组细胞增殖明显减慢，G1期细胞比例明显增加，S期细胞比例则明显减少；转染细胞中caspase-3被激活。结论: 慢病毒载体介导的siRNA能有效抑制人肺腺癌A549细胞survivin基因的表达和细胞增殖，有效激发细胞凋亡，有望成为肺腺癌基因治疗的新策略之一。     

盐霉素抑制人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP增殖及诱导凋亡的机制

目的: 探讨盐霉素对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP增殖的抑制作用及其可能机制。方法: 采用MTT法检测盐霉素对A549/DDP细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测盐霉素对A549/DDP细胞凋亡及线粒体膜电位(ΔΨ_m)的影响;比色法检测caspase-3、8和9活性;Western blotting分析细胞色素C、Bcl-2、Bax、β-catenin和磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白6(p-LRP6)蛋白水平。结果: 盐霉素对A549/DDP细胞生长具有剂量依赖性抑制作用。0.2 μmol/L盐霉素作用于A549/DDP细胞,ΔΨ_m显著下降,而细胞内活性氧和Ca²⁺浓度在短期显著升高,胞浆细胞色素C蛋白水平、caspase-3、8和9酶活性均显著增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);Bcl- 2 的表达下调,Bax 的表达明显增加,Bcl-2/Bax 比值显著降低。48 h时增殖抑制率为(34.61±1.97)%,细胞凋亡率为(18.74±2.08)%。盐霉素也减少A549/DDP细胞内β-catenin和p-LRP6蛋白水平。结论: 盐霉素通过抑制Wnt信号通路抑制A549/DDP细胞增殖,通过Bcl-2/Bax途径和线粒体凋亡途径诱导人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡。     

肝再生磷酸酶-3抗体联合培美曲塞促进人肺腺癌细胞系A549的凋亡

目的探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)抗体和培美曲塞(Pem)单用及联用对人肺腺癌细胞系A549增殖、迁移和凋亡的影响。方法不同浓度PRL-3抗体处理A549细胞;CCK-8法测细胞增殖抑制率;Transwell小室法检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western bolt检测PRL-3、磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果1)与对照组相比,PRL-3抗体随浓度增加,对A549细胞增殖的抑制作用增加(P<0.05);2)联合用药组对A549细胞增殖和迁移能力的抑制作用优于单药组(P<0.05);3)联合用药组A549细胞凋亡率34.63%±1.65%高于PRL-3抗体组17.24%±1.15%和培美曲塞组15.32%±1.82%(P<0.05);4)与单药组相比,联合用药组PRL-3、P-ERK及VEGF蛋白表达下降更显著(P<0.05)。结论PRL-3抗体联合培美曲塞可抑制A549细胞增殖、迁移并诱导凋亡,效果优于单药。其作用机制可能与抑制PRL-3、P-ERK和VEGF蛋白表达相关。     

蛋氨酸脑啡肽联合紫杉醇对肺癌细胞A549 增殖和凋亡的影响

目的:探讨蛋氨酸脑啡肽(MENK)联合紫杉醇(PTX)对肺癌细胞A549的增殖和凋亡影响。方法:CCK-8法检测各实验组对细胞增殖的抑制作用;利用中效原理对药物联合应用的效应进行评价;Hoechst33258荧光染色实验观察细胞凋亡形态;流式细胞术检测各实验组的细胞凋亡率。结果:MENK和PTX均能抑制A549细胞的增殖,并且MENK联合PTX组抑制率高于单独用药组;在整个效应范围中,MENK与PTX的药物合用指数(CI)1,两药联合应用效应为协同作用;Hoechst33258荧光实验发现,MENK与PTX组均出现凋亡形态学变化,MENK联合PTX组细胞凋亡数量最多;流式细胞术检测空白对照组、MENK组、PTX组、MENK联合PTX组的细胞凋亡率分别是1.53%、6.23%、6.04%、13.22%,联合用药组的细胞凋亡率明显高于单独用药组。结论:MENK与PTX均能抑制肺癌细胞A549的增殖,并诱导其凋亡,两药联合应用具有协同作用,显著增强抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的能力。     

WWOX基因在肺腺癌中表达及对A549细胞增殖和凋亡的影响

目的研究WWOX基因在肺腺癌组织的表达及在肺腺癌细胞系A549细胞增殖和凋亡的作用,探讨肺腺癌与临床病理特征之间的关系。方法应用免疫组化技术检测62例肺腺癌组织WWOX蛋白的表达;将携有WWOX基因的表达载体转染肺腺癌细胞系A549细胞,用Western blot法检测A549细胞WWOX蛋白的表达情况;运用细胞计数法检测细胞的增殖情况;流式细胞仪观察其对A549细胞凋亡的影响。结果肺腺癌组中WWOX的阳性表达率为45.2%,明显低于癌旁正常组织(82.9%,=0.000)。WWOX在肺腺癌的表达与分化程度(=0.023)、TNM分期(=0.007)、远处转移有关(=0.009),与患者的性别、年龄以及肿瘤的大小无关(0.05)。A549细胞转染WWOX基因后,WWOX蛋白表达明显高于空载质粒组及未转染组(未检测到WWOX蛋白的表达);生长曲线可见pcDNA3.0-WWOX转染组的A549细胞的增殖速度比pcDNA3.0组和未转染组明显下降;流式细胞仪分析表明pcDNA3.0-WWOX转染组的凋亡率明显高于pcDNA3.0空载体组。结论 WWOX的表达能够抑制肿瘤细胞的增殖,促进其凋亡。     

反义Bmi-1 RNA转染对人肺癌细胞株A549体外增殖的影响

目的 研究转染反义Bmi-1 RNA对人肺腺癌细胞A549的体外增殖及细胞周期和凋亡的影响.方法 将表达反义Bmi-1 RNA的真核表达载体稳定转染A549细胞株,GA18筛选挑取阳性克隆.应用即时荧光定量RT-PCR及Western blot检测转染后Bmi-1基因在mRNA水平及蛋白水平的表达;应用MTT比色法及平板克隆形成实验检测A549细胞体外生长能力;用PI单染及Annexin-V-PI双染技术在流式细胞仪上检测细胞周期及凋亡情况.结果 Western blot结果显示转染反义Bmi-1RNA使A549细胞中Bmi-1蛋白表达量减少了95%;MTT检测细胞生长曲线表明反义Bmi-1 RNA使A549细胞生长速度明显减慢;平板克隆形成实验结果显示转染反义Bmi-1 RNA的A549细胞在平板中形成集落的数目(0.67±0.50)明显低于未转染组(73.0±4.1)及转染空质粒组(67.0±4.0,P<0.01);流式细胞仪结果显示反义Bmi-1使A549细胞阻滞在G_0/G_1期,但对细胞凋亡没有影响.结论 反义Bmi-1 RNA在体外对A549细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制作用是通过使A549细胞阻滞在G0/G1期实现的.     

miR-24对肺癌A549细胞化疗敏感性的影响

目的:探究微小RNA(miR)-24对肺癌细胞A549化疗敏感性的影响及可能的作用机制。方法:Real-time PCR实验检测肺腺癌细胞系A549及肺腺癌耐药细胞株A549/DDP中miR-24的表达情况。转染miR-24抑制序列(miR-24 inhibitor)下调A549/DDP细胞中的miR-24后,采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、细胞色素C(Cyt C)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)和P53的蛋白水平。双荧光素酶报告基因实验预测及验证miR-24可能的靶基因。结果:耐药细胞株A549/DDP中miR-24的表达水平明显高于A549细胞(P0.05)。miR-24 inhibitor可诱导肺腺癌耐药细胞株A549/DDP的凋亡,增加细胞对顺铂的敏感性;此外还可下调Bcl-2/Bax比值,同时上调P53、p-ERK、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及Cyt C的蛋白水平。而应用ERK特异性抑制剂U0126可部分恢复miR-24 inhibitor转染的细胞活力。生物信息学分析显示p53是miR-24的可能作用靶点基因,在A549/DDP细胞中共转染miR-24 inhibitor和P53 siRNA可部分逆转miR-24 inhibitor对细胞活力的影响。结论:下调肺腺癌耐药细胞株A549/DDP中miR-24的表达可增加细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与靶向p53基因同时激活ERK/P53信号通路后促进细胞经线粒体途径的凋亡有关。     

Polo-like激酶l反义RNA对肺癌细胞A549生长的实验研究

目的： 探讨Polo-like激酶1（Plk1）基因表达下调对肺癌细胞周期分布及其生长的影响。方法： 培养肺腺癌细胞株A549，构建表达Plk1反义RNA的质粒pcDNA3-Plk1，通过脂质体介导转染A549细胞，采用RT-PCR和Western blotting的方法检测Plk1基因的表达，细胞计数、BrdU脉冲标记检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞周期变化和凋亡，MTT法检测长春瑞宾（NVB）对各组细胞的生长抑制率。结果： A549细胞转染pcDNA3-Plk1后24 h，Plk1 mRNA及蛋白表达均下降；细胞变圆、漂浮、增殖减慢；S期细胞百分数（BrdU标记指数）显著低于对照组（P<0.05）；转染后48 h A549细胞出现G₂/M期阻滞（P<0.05）并发生凋亡；等浓度化疗药物诺维本对转染pcDNA3-Plk1细胞的抑制率明显高于各对照组（P<0.05），转染pcDNA3与未转染的对照细胞差异无显著（P>0.05）。结论： pcDNA3-Plk1的转染能下调Plk1基因的表达，抑制A549细胞增殖，诱导凋亡，并能增加A549细胞对化疗药物的敏感性。     

X射线对人肺腺癌细胞及其耐药细胞株的影响

目的观察人肺腺癌细胞株A549及其耐顺铂细胞株（A549／DDP）对x射线的不同反应,不同放射剂量、照射时间对细胞周期的影响。方法用Vi—Cell细胞活力分析仪绘制A549及A549／DDP生长曲线;分别用4、8、12、16Gv6MVX射线照射A549及A549／DDP,以流式细胞仪检测细胞周期变化。结果A549与A549／DDP存活率分别为83．12％±2．23％,92．00％±2.31％（P〈0．05）。与亲本细胞株相比,A549／DDPGdG,期比例降低（P〈0．01）,GgM期比例升高（P〈0．01）。X射线照射后两种细胞出现G2／M期阻滞．照射后24h达到最大阻滞高峰．48h显示最大峰值回落。G2／M期阻滞强度在24h时与放射剂量呈正相关。在4Gy照射后,A549在6h即出现GgM期阻滞,但在照射后12h阻滞解除;而A549／DDP在24h内G2／M期阻滞呈递增趋势。在16Gy照射后,A549及A549／DDP6～12hG2/M期阻滞迅速增加,并持续至24h。结论A549／DDP较其亲本细胞株存活能力更强,对于放射线的敏感性增加。X射线可以改变A549及A549／DDP的细胞周期进程。A549经高放射剂量照射后细胞周期阻滞明显,而A549／DDP无论经过高放射剂量还是低放射剂量照射均表现出明显G2／M期阻滞．