慢性HCV感染者外周血中髓样和浆样树突状细胞频数和表型研究

目的 探讨慢性HCV感染者外周血中髓样树突状细胞(mDC)和浆样树突状细胞(pDC)频数和表型的变化,并分析其与丙型肝炎临床指标间的相关性.方法 采用流式细胞术检测HCV感染者及健康对照外周血中mDC和pDC的频数及细胞表面共刺激分子HLA-DR、CD83、CD86、CD40和共抑制分子PD-L1的表达水平,并分析DC频数与HCV感染者血浆病毒载量、谷丙转氨酶(ALT)的相关性.结果 与健康对照组相比,HCV感染者外周血中mDC和pDC的频数明显降低(患者组分别为0.37±0.19和0.19±0.12,对照组为0.51±0.18和0.29±0.13,P＜0.05),且mDC频数与血浆HCV载量和血清ALT水平呈负相关(r=-0.5878,P＜0.0001;r=-0.4628,P=0.003).患者mDC和pDC表面共刺激分子HLA-DR、CD83、CD86、CD40以及共抑制分子PD-L1的表达均有不同程度升高,差别有统计学意义(共刺激分子P＜0.01,共抑制分子P＜0.05或0.01).结论 慢性HCV感染者外周血mDC和pDC频数下降,但DC表面共刺激分子和共抑制分子的表达均明显升高.该结果提示mDC数量的减少可能与HCV的慢性持续性感染有关.

Abstract：

Objective To explore the frequencies and phenotype of myeloid and plasmacytoid dendritic cells (mDC and pDC) in chronic HCV infection and to investigate the relationships between DC frequencies and HCV viral load and serum ALT level. Methods PBMC were isolated from chronic HCV infected patients and healthy control. Multi-color flow cytometry was used to analyze the frequencies and surface marker expression on mDC and pDC. The relationship between DC frequencies and viral load and ALT level was also calculated. Results In comparison with healthy control, frequencies of mDC and pDC in chronic HCV infection were significantly decreased (0. 37 ± 0. 19 and 0. 19 ± 0. 12 vs 0. 51 ± 0. 18 and 0. 29 ± 0.13, P＜0.05). The frequency of mDC was negatively correlated with HCV viral load (r= -0.5878, P ＜ 0. 0001 ) and serum ALT level ( r = - 0. 4628 , P = 0. 003 ). Both costimulatory markers ( HLA-DR, CD83, CD86, and CD40) and coinhibitory marker (PD-L1) expression on mDC and pDC in HCV infection were increased (P＜0.01 for costimulatory marker, P＜0.05 or F＜0.01 for coinhibitory marker). Conclusion The frequencies of mDC and pDC in chronic HCV infection were decreased, while the expression of costimulatory markers and coinhibitory marker were increased or not decreased in HCV infection. The decreased frequency of mDC was probably related to persistance of HCV infection.     

母亲不同HBV感染状态所生新生儿树突状细胞亚群及功能研究

目的 探讨新生儿mDC、pDC频数及表面分子表达,以及母亲不同HBV感染状态对新生儿树突状细胞生物学特性的影响.方法 采集HBsAg阳性/HBeAg阳性HBV感染母亲、HBsAg阳性/HBeAg阴性HBV感染母亲以及HBV感染标志物阴性母亲所生新生儿脐带血、健康成人外周血,采用流式细胞仪检测mDC的频数及其CD86的表达、pDC的频数及其CD80、CD83、CD86表达、并采用FlowJo软件进行分析,比较各组间上述指标的差异.结果 分别采集HBsAg阳性/HBeAg阳性、HBsAg阳性/HBeAg阴性和HBV感染标志物阴性母亲所生新生儿脐带血14、12和13例,健康成人外周血7例.新生儿mDC频数(0.29±0.16)及其CD86阳性率(10.72±10.01)显著低于成年人(分别是0.81±0.17和32.13±7.46),(t=-7.86,P=0.00和t=-5.36,P=0.00)；新生儿pDC频数(0.15±0.07)以及pDC表面CD86/CD83阳性率(31.61±12.81,42.66±20.83)显著低于成年人(0.30±0.07;74.96±9.78;82.00±6.94),(t=-5.43,P =0.00;t=-8.49,P=0.00;t=-4.90,P=0.00).结论 新生儿脐带血mDC、pDC频数以及表面功能分子表达低于成人外周血,HBeAg可能降低生新生儿mDC表面CD86的表达.     

慢性乙型肝炎干扰素治疗前后树突状细胞的变化及其与疗效相关性研究

目的 探讨慢乙肝干扰素α(IFNα)治疗前后髓样树突状细胞(mDC)和浆样树突状细胞(pDC)的变化及其与病毒学、生化学指标的关系.方法 采集30例HBeAg阳性慢乙肝患者IFNα治疗前和治疗12周时的外周血,用流式细胞仪检测mDC和pDC的频数及CD86表达水平.根据IFNα治疗后生化学指标和病毒学指标变化,把患者分为ALT复常组、ALT未复常组及病毒学应答组、病毒学无应答组,分析IFNα治疗前后不同组DC变化.结果 (1)IFNα治疗12周时ALT复常组pDC频率(0.25％±0.14％)较基线(0.18％±0.09％)升高(P =0.023),ALT未复常组mDC频率(0.58％±0.34％)及表面CD86阳性率(61.80％±22.52％)则较基线(分别为0.88％±0.51％,79.92％±25.94％)下降(P =0.025;P=0.036).(2)IFNα治疗12周时病毒学应答组pDC表面CD86阳性率(46.86±12.22％)较基线(29.42±15.16％)升高(P =0.002),病毒学无应答组的mDC频率(0.51％±0.22％)及表面CD86阳性率(59.63％±22.94％)则较基线(分别为0.94％±0.58％,80.11％±29.34％)下降(P =0.006;P =0.049).结论 慢乙肝干扰素α治疗后,生化和病毒应答与pDC频率和功能增强相关,而mDC频率及功能的降低与IFN治疗后无生化和病毒应答相关.     

子痫前期患者外周血树突状细胞与T细胞亚群的变化

目的 观察子痫前期患者外周血中的树突状细胞亚群与T细胞亚群相关细胞因子的变化.方法 实验组为子痫前期患者32例,对照组为未孕妇女20例,正常妊娠妇女20例.采集研究对象外周血细胞,流式细胞术检测全血细胞中髓系树突状细胞(mDC)和浆细胞样树突状细胞(pDC);分离外周血单个核细胞,经胞内细胞染色检测Th1、Th2、Th17细胞数量及Th1/Th2比值.结果 子痫前期组mDC百分比(0.33±0.12)％和mDC/pDC比值(2.96±1.65)均高于正常妊娠组,二组数据有明显差异(P＜0.05);pDC百分比(0.16±0.13)％较正常妊娠组(0.21 ±0.12)％有所下降,二组差异有统计学意义(P＜0.05).子痫前期组IFN-γ、IL-4和IL-17的百分比分别为(18.67 ±1.96)％、(1.88±0.51)％和(1.36±0.59)％,与正常妊娠组相比均有显著性差异(P＜0.01).子痫前期组mDC/pDC比率和Th1/Th2之间呈显著正相关(r=0.637,P＜0.01);Th17表达率与pDC表达率之间呈负相关(r=-0.670,P＜0.05),与mDC/pDC比率之间呈显著正相关(r=0.772,P＜0.01).结论 子痫前期患者外周血中树突状细胞亚群和Th1、Th2、Th17型细胞因子异常表达,可能是患者发生免疫失衡的重要原因.     

Th17/Treg细胞亚群数量变化在HBV相关ACLF临床转归中的作用

目的探讨Th17细胞和Treg细胞失衡在HBV相关慢加急性肝衰竭(ACLF)发生发展中的意义。方法 ACLF患者31例,流式细胞术检测治疗基线、7、14、21、28 d外周静脉血Th17、Treg细胞频率,并分析其与肝炎临床指标的相关性。22例慢性乙型肝炎患者(CHB)和23例健康体检者(HC)作为对照。结果 1)在治疗基线时,ACLF组和CHB组Treg细胞表达均低于健康对照组(P0.01和P0.05),ACLF组的Treg细胞表达低于CHB组(P0.05),Th17细胞在CHB组、ACLF组的表达均高于健康对照组,但差异无统计学意义(P0.05)。Th17/Treg比值在ACLF组和CHB组高于健康对照组(P0.01和P0.05),Th17/Treg比值在ACLF组高于CHB组(P0.01)。2)ACLF存活组中Th17细胞表达、Th17/Treg比值随着病程逐渐降低并维持在较低水平,Treg细胞的表达逐渐升高并维持在较高水平;ACLF死亡组中Th17细胞表达、Th17/Treg比值逐渐升高并持续处于较高水平,Treg细胞表达持续处于较低水平。3)在CHB组和ACLF组中总胆红素与Th17/Treg比值呈正相关,凝血酶原活动度与Th17/Treg比值呈负相关,乙型肝炎病毒载量与Th17/Treg比值无相关性。谷丙转氨酶与CHB组的Th17/Treg比值呈正相关。结论 Th17/Treg细胞数量严重失衡可能是ACLF发生的原因之一,Th17/Treg比值有望成为判断ACLF预后的新指标。     

脐血嗜碱粒细胞经激活后对HLA Ⅱ类分子表达的影响

采用密度梯度离心和免疫磁珠分离方法,纯化脐血嗜碱粒细胞,通过体外培养并用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、γ-干扰素(IFN-γ)、尘螨提取液和高渗甘露醇刺激后观察嗜碱粒细胞膜表面HLA Ⅱ类分子的表达情况.结果显示,嗜碱粒细胞经GM-CSF和IFN-γ刺激加h后,其膜表面HLA-DR,DP,DQ的表达的细胞百分率比对照组明显增加.当选用尘螨或1.5%甘露醇刺激20 h,嗜碱粒细胞表达HLA-DR,DP和DQ的细胞百分率分别为9.42%±8.65%和4.55%±2.79%.提示嗜碱粒细胞具有表达HLAⅡ类分子的潜能.     

ICOS/ICOSL在类风湿关节炎患者外周血淋巴细胞的表达及临床意义

目的:检测初发类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)患者外周血淋巴细胞表面共刺激分子ICOS和ICOSL的表达,并探讨其临床意义。方法:采用流式细胞术和RT-PCR的方法,检测85例初发RA患者和50例健康对照(Healthy control,HC)外周血CD4+T细胞表面ICOS及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面ICOSL的表达,比较15例初诊RA患者治疗前后ICOS和ICOSL表达水平变化,分析其临床意义。结果:RA患者外周血中ICOS/ICOSL的mRNA的表达水平显著高于HC。RA患者外周血CD4+T细胞表面ICOS表达显著增高[(7.08±4.72)%vs(3.01±1.39)%,P0.0001]。RA患者外周血中CD14+单核细胞[(5.77±3.45)%vs(3.64±1.43)%,P0.05]和CD19+B细胞[(5.78±4.52)%vs(3.97±1.63)%,P0.05]表面ICOSL的表达均高于HC。活动期的RA患者外周血单核细胞和B细胞表面的ICOSL表达高于非活动期患者[(5.45±3.50)%vs(4.04±1.55)%,P=0.036]、[(6.59±5.74)%vs(5.63±4.30)%,P=0.016],治疗后CD4+T细胞表面ICOS的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面ICOSL的表达均显著下降[(3.33±0.31)%vs(5.56±1.11)%,P=0.076]、[(5.12±1.23)%vs(9.99±2.02)%,P=0.045]、[(3.74±0.57)%vs(8.62±1.77)%,P=0.011]。结论:RA患者外周血单个核细胞表面ICOS和ICOSL异常高表达,且与疾病活动度和临床疗效密切相关。提示ICOS/ICOSL信号通路可能参与RA免疫病理进程。     

胰岛素依赖型糖尿病患者外周血单核细胞膜表面HLA-Ⅱ类抗原、白细胞介素2受体和铁传递蛋白受体的表达

本文作者用间接免疫荧光法检测了10例胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)患者外周血单核细胞膜表面HLA-DR、DQ、DP抗原、白细胞介素2受体(IL-2R)、铁传递蛋白受体(TfR)的表达。术中应用了相应的单克隆抗体和FITC标记的第二抗体。结果表明,IDDM患者单核细胞膜表面HLADQ抗原、IL-2R和TfR的表达明显高于正常对照组,而HLA-DR、DP抗原的表达在IDDM组与正常对照组之间差异无显著性。推测HLA-DQ、IL-2R和TfR的异常表达在IDDM的发病机制中可能起一定作用。     

NKG2D配体的表达直接影响NK细胞对不同发育阶段DC的杀伤

目的:探讨NKG2D配体在不同发育阶段树突状细胞(DC)表面的表达及其对自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响.方法:用细胞因子(rh IL-4、rhGM-CSF、TNF-α)体外诱导培养单核细胞来源的未成熟树突状细胞(iDC)和成熟树突状细胞(mDC)并鉴定形态和表型,免疫磁珠法分离纯化NK细胞.流式细胞术(FCM)检测iDC和mDC表面NKG2D配体MICA/B、ULBP1-3的表达.用LDH释放法检测NK细胞对iDC和mDC的杀伤活性以及抗NKG2D单克隆抗体(mAb)阻断NK细胞后的杀伤活性.结果:培养的iDC和mDC具有典型的细胞形态和免疫表型特征.iDC表面表达MICA、MICB、ULBP1、ULBP3,表达率分别为(32.39±8.30)%、(17.75±3.40)%、(26.71±6.48)%、(38.37±6.89)%;mDC表面表达MICA 、ULBP3,表达率分别为(7.82±2.67)%、(8.36±2.42)%,比iDC表面相应配体表达率低(P<0.01).各效靶比NK细胞对iDC的杀伤活性均比对mDC的杀伤活性高,差异有统计学意义(P<0.01).抗NKG2D mAb阻断NK细胞后对iDC杀伤活性比阻断前减弱(P<0.05);对mDC的杀伤活性与阻断前相比无统计学意义(P>0.05).结论:NKG2D配体在iDC表面表达高,介导了NK细胞对iDC的杀伤,而对mDC的杀伤无影响,是NK细胞对iDC选择性高杀伤的分子机制之一.     

乙型肝炎肝硬化患者外周血Toll样受体2和4及CD4+CD25+调节性T细胞的变化

目的 检测乙型肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuelear cells,PBMCs)表面Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2和TLR4以及CD4+CD25+调节性T细胞(regulato-ry T cells,Treg)的表达,并探讨TLR2、TLR4与Treg的相关性.方法 分别应用抗-TLR2-PE、抗-TLR4-APC、抗-CD14-FITC及抗-CD4-PerCP、抗-CD25-FITC、扰-CD127-PE对67例研究对象[乙型肝炎肝硬化患者(HBV related liver cirrhosis,LC)30例、慢性乙型肝炎患者(chronic hepatitis B,CHB)21例、健康对照(normal control,Nc)16例]PBMCs表面分子进行免疫荧光染色,应用流式细胞仪分别对TLR2、TLR4及Treg进行检测.组间比较采用Kruskal-wallis秩和检验,相关性分析采用Spearman秩相关.结果 LC组、CHB组、NC组单核细胞表面TLR2、TLR4的平均荧光强度(MFI)分别为200.3±96.8和32.1±7.2、214.0±72.6和25.2 ±8.3、94.1 ±17.6和17.8 ±3.9.LC组与NC组、CHB组与NC组TLR2 MFI比较差异均有统计学意义(P<0.05),LC组与CHB组TLR2 MFI差异无统计学意义(P>0.05).LC组与NC组、CHB组与NC、LC与NC组TLR4 MFI比较差异均有统计学意义(P<0.05).LC组、CHB组、Nc组Treg占CD4+T淋巴细胞的比例分别为(5.07%±1.43%、5.88%±1.66%、4.21%±1.24%),CHB组与NC组、CHB组与LC组比较差异有统计学意义(P<0.05),而LC组与NC组比较差异无统计学意义(P>0.05).在LC组,TLR4的表达与Treg呈正相关(r=0.469,P=0.032),TLR2与血清病毒载量呈负相关(r=-0.428,P=0.021).结论 LC患者,TLR2、TLR4的表达显著上调,TLR2、TLR4可能与乙型肝炎肝硬化的发生有关.     

肺结核患者外周血Th17/Treg的表达及其病理意义

为探讨肺结核患者外周血Th17与Treg的表达及其病理意义,收集2017年1月至2018年6月青海省第四人民医院收治的80例肺结核患者作为结核组,同期收集80例健康成人作为对照组。观察两组外周血Th17与Treg及其细胞因子的表达情况,同时分析Th17与Treg及其细胞因子与肺结核患者病情严重程度的相关性。结果显示,与对照组比较,结核组Th17降低[(2.69±0.93)%vs(1.94±0.91)%,P=0.000],Treg升高[(7.88±2.65)%vs(9.60±2.59)%,P=0.000],IL-17降低[(32.89±8.92) pg/mL vs(25.72±9.62) pg/mL,P=0.000],IL-10升高[(22.80±6.81) pg/mL vs(26.61±7.62) pg/mL,P=0.001]。肺结核患者病灶数目、直径总和与Th17、IL-17呈显著负相关(P0.05),与Treg、IL-10呈显著正相关(P0.05)。与无空洞形成的患者比较,空洞形成的患者Th17降低[(2.06±0.62)%vs(1.76±0.68)%,P=0.045],Treg升高[(8.79±2.12)%vs(10.81±2.41)%,P=0.000],IL-17和IL-10差异无统计学意义(P0.05)。提示外周血中Th17与Treg在肺结核患者中表达异常,与结核病情严重度相关。     

HIV/AIDS患者B7-H1的表达与合并机会性感染关系的研究

目的:探讨HIV/AIDS患者外周血髓样树突细胞(mDC)上B7-H1表达水平与合并机会性感染的关系。方法:采集2009年1月至2012年5月住院的42例未经抗逆转录病毒治疗(ART)的HIV/AIDS患者及42名健康对照组抗凝全血,用流式细胞仪检测外周血mDC上B7-H1表达水平,并分析其与疾病进展的相关性。结果:HIV/AIDS患者合并机会性感染B7-H1表达水平显著高于未合并机会性感染组(P<0.05),未合并机会性感染组显著高于健康对照组(P<0.05);B7-H1表达水平>30%合并机会性感染率显著高于B7-H1表达水平<10%的HIV/AIDS患者(P<0.05);HIV/AIDS患者mDC上B7-H1表达水平与CD4+T细胞数量显著负相关(r=-0.665,P<0.05),而与病毒载量显著正相关(r=0.604,P<0.05)。结论:HIV/AIDS患者mDC上B7-H1表达水平与合并机会性感染密切相关,是疾病进展的指标。     

类风湿关节炎患者外周血单核细胞亚群的变化及其意义

目的:本次研究通过检测类风湿关节炎(RA)患者外周血单核细胞亚群比例及其分泌促炎细胞因子的功能,探讨单核细胞亚群在RA 发病过程中的作用。方法:22 例RA 患者(RA 组)和22 例健康对照者(HC 组),经知情同意后抽取3ml 静脉血,肝素钠抗凝。流式细胞术(FCM)检测单核细胞亚群比例、中间型单核细胞表面HLA-DR、Toll 样受体2(TLR2)和髓系细胞触发受体-1(TREM-1)表达,及其细胞内肿瘤坏死因子(TNF)鄄琢平均荧光强度(MFI),并分析RA 患者单核细胞亚群比例与血清细胞因子的相关性。正态数据分析采用Students’t-test 检验。结果:与HC 组相比,RA 组中间型单核细胞比例升高[(4.6±1.2)% vs (11.7±1.6)%],差异有统计学意义(P<0.05);HLA-DR 表达(MFI)与HC 组比较差异无统计学意义(26.8±8.6 vs 30.2±6.1,P>0.05)。RA 组TLR2(750.2±110.3 vs 526.8±98.6)、TREM-1(58.4±12.1 vs 40.3依10.2)表达(MFI)高于HC 组,差异均有统计学意义(P<0.05);RA 组中间型单核细胞胞内TNF鄄琢(46.3±6.4 vs 36.7±8.3)MFI 高于HC 组,差异有统计学意义(P<0.05)。RA 患者中间型单核细胞比例与DAS28 评分和血清TNF 、白细胞介素(IL)-17 呈正相关,相关系数分别为0.593(P =0.003)、0.471(P =0.027) 和0.538(P =0.009)。结论:RA 患者外周血单核细胞向中间型极化,并处于活化状态,高表达TLR2 和TREM-1,分泌较多的促炎细胞因子TNF ,参与RA 的疾病过程。因此,抑制单核细胞向中间型极化或阻断表面受体表达可能是治疗RA 的新途径。     

高血压病患者外周血树突状细胞亚群的变化

目的研究高血压病患者外周血树突状细胞（DCs）的表达情况及其在高血压病发生发展过程中的作用。方法用流式细胞仪四色荧光标记技术检测29例高血压病（HT）患者（实验组）及31例非高血压患者（对照组）外周血树突状细胞亚群的比例及数量,评价组间差异,并分析高血压病患者外周血浆细胞样树突状细胞（pDC）与血压（blood pressure,BP）的关系。结果高血压病（HT）患者与血压正常患者相比,外周血中髓样树突状细胞（mDC）比例[（7.917±4.296）‰比（8.18±5.669）‰]及绝对数[（6.971±2.115）×107/L比（7.123±5.387）×107/L]均降低,但差异无统计学意义（P〉0.05）。而浆细胞样树突状细胞（pDC）比例[（1.239±0.669）‰比（1.897±0.859）‰]及绝对数[（1.794±2.244）×107/L比（2.819±4.997）×107/L]明显升高,且差异有统计学意义（P〈0.05）,高血压病患者的外周pDC数量与收缩压（SBP）、舒张压（DBP）均成呈正相关关系（r=0.424及0.487,P〈0.05）,pDC比例与SBP、DBP无明显相关（P〉0.05）。结论高血压病的发生发展中存在着炎症反应和免疫活化,树突状细胞可能在该过程中发挥一定的作用。     

CIITA锤头状核酶的克隆及其体外活性

通过CIITA核酶抑制HeLa细胞表面MHCⅡ类分子的表达。设计并合成针对人类CIITA的核酶Rz464,通过体外转录和切割实验鉴定其活性。将Rz464亚克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP(pRz464),并稳定转染HeLa细胞株,流式细胞术检测MHCⅡ类抗原表达,RT-PCR检测CIITA mRNA水平。结果表明,Rz464与CIITA靶序列体外切割产物电泳见预期切割条带。pRz464~+HeLa细胞与对照组比较,HLA-DR、DP、DQ抗原诱导型表达分别降低了79.21%、90.31%及48.30%;同时CIITA的诱导型mRNA含量明显减少。Rz464通过切割CIITA mRNA,进而阻止了后者调控的MHCⅡ类分子的表达。     

碘普罗胺对大鼠肾小球脏层上皮细胞的影响

目的探讨碘普罗胺诱导的大鼠对比剂肾病(CIN)发生的机制。方法 24只雌性SD大鼠随机分为正常对照组和对比剂肾病组(CIN组),各12只。CIN组采用尾静脉注射碘普罗胺的方法建立大鼠CIN模型;对照组尾静脉注射等量溶剂。所有大鼠均在注射后24 h处死。采用全自动生化分析仪测定24 h尿蛋白排泄量,免疫组化法测定肾小球上皮细胞细胞周期调控蛋白P21、P27、TGF-β1的阳性表达率,并用半定量评分法对各组大鼠的肾小球与肾小管间质的病理改变进行计量分析。应用TUNEL检测肾小球上皮细胞凋亡情况。结果与对照组相比,CIN组大鼠肾小球上皮细胞P21、P27、TGF-β1的阳性表达率显著增高,P21[(12.86±0.98)%vs(0.46±0.21)%,P=0.004 5],P27[(21.76±2.75)%vs(9.57±1.86)%,P=0.007 1]和TGF-β1[(12.85±5.54)%vs(7.63±0.84)%,P=0.003 7)];CIN组24 h尿蛋白显著性增加[(23.44±5.22)mg/d vs(2.13±0.52)mg/d,P=0.007 0];CIN组大鼠肾小球上皮细胞的病理损害更加严重和凋亡率明显增高[(52.5±6.4)%vs(4.2±0.3)%,P=0.007 5)],差异均有统计学意义。病理积分与24 h尿蛋白排泄量及P21,P27和TGF-β1的表达量呈正相关(r=0.765、0.701、0.842、0.651,P0.01)。结论碘普罗胺可通过上调肾小球上皮细胞的P27、TGF-β1的表达及尿蛋白的排泄量,加重肾小球上皮细胞的病理损害及凋亡。     

MYC蛋白高表达弥漫大B细胞淋巴瘤45例分子特征分析

目的 探讨MYC蛋白高表达弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL)的分子特征。方法 收集45例DLBCL临床资料。采用免疫组化EnVision法将患者分为MYC蛋白高表达/低表达组。所有样本均行DNA靶向测序,并使用LymphGen在线工具进行分子分型。运用Lymph2Cx法对细胞起源进行测定。采用χ²检验和Fisher精确检验分析MYC蛋白高表达与临床病理参数的相关性。绘制生存曲线并使用Cox单因素、多因素回归分析生存相关因素。结果 DLBCL病例分为MYC蛋白高表达组(n=17)和低表达组(n=28),与MYC蛋白低表达组相比,MYC蛋白高表达组PIM1、MYD88、CD79B、CD58和PRDM1的突变率较高(76.5%vs 28.6%,70.6%vs 32.1%,58.8%vs 28.6%,29.4%vs 3.6%,29.4%vs 3.6%,P均<0.05);分子亚型以MCD亚型多见(58.8%vs 10.7%,P=0.001);COO亚型GCB少见(17.6%vs 50.0%,P=0.030)。...     

CⅡTA锤头状核酶的克隆及其体外活性

通过CⅡTA核酶抑制HeLa细胞表面MHC Ⅱ类分子的表达.设计并合成针对人类CⅡTA的核酶Rz464,通过体外转录和切割实验鉴定其活性.将Rz464亚克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP(pRz464),并稳定转染HeLa细胞株,流式细胞术检测MHC Ⅱ类抗原表达,RT-PCR检测CⅡTA mRNA水平.结果表明,Rz464与CⅡTA靶序列体外切割产物电泳见预期切割条带.pRz464+HeLa细胞与对照组比较,HLA-DR、DP、DQ抗原诱导型表达分别降低了79.21%、90.31%及48.30%;同时CⅡTA的诱导型mRNA含量明显减少.Rz464通过切割CⅡTA mRNA,进而阻止了后者调控的MHC Ⅱ类分子的表达.     

慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞Tim-3表达的检测及意义

目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单核细胞中T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)的表达及对其炎症因子生成的影响.方法 利用多色流式技术和荧光实时定量PCR(qRT-PCR),分别检测不同状态的CHB患者外周血单核细胞亚群表面Tim-3分子和Tim-3 mRNA表达水平.给予重组人galectin-9和脂多糖(LPS)共刺激CHB活动期患者外周血单核细胞,用ELISA检测培养上清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平.结果 慢乙肝免疫耐受期患者(IT)外周血单核细胞表面Tim-3表达水平显著高于健康对照组(HC)和免疫活动期患者(IA)(P＜0.01),其中IT患者CD14+ CD16-和CD14+ CD16+单核细胞亚群中Tim-3的表达均高于IA患者,差异均有统计学意义.qRT-PCR结果进一步证实IA患者外周血单核细胞中Tim-3 mRNA的表达高于HC (P =0.040).IA患者CD14+单核细胞上Tim-3的表达与血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平呈正相关(r=0.362,P=0.028).重组人galectin-9和LPS共刺激IA患者外周血单核细胞比单独使用LPS刺激分泌更高水平的TNF-α,IL-1,IL-6.结论 CHB患者外周血单核细胞Tim-3表达上调,与血清ALT水平呈正相关,Tim-3/galeetin-9通路能够促进LPS诱导的单核细胞的炎症因子的分泌.     

miR-185在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞黏附介导耐药中的作用

目的 探讨miR-185在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)细胞黏附介导耐药(cell adhesion mediated-drug resistance,CAM-DR)中的作用。方法 采用qPCR法分析人DLBCL细胞株OCI-Ly8、OCI-Ly10中miR-185的表达。应用Western blot法检测人DLBCL细胞株OCI-Ly8、OCI-Ly10中PYK2和pPYK2(Tyr402)的表达状态。在人胚肾HEK-293T细胞中利用荧光素酶报告基因实验分析miR-185是否可靶向抑制PYK2。台盼蓝拒染实验分析miR-185和PYK2对CAM-DR的影响。结果 qPCR检测发现,OCI-Ly8与纤连蛋白(fibronectin,FN)黏附培养组与悬浮培养组中miR-185的表达:(0.17±0.07) vs (1.01±0.11)(t=9.05,P 0.001);OCI-Ly10细胞与FN黏附培养组与悬浮培养组中miR-185的表达:(0.35±0.15)vs(1.01±0.15)(t=4.50,P=0.011);提示OCI-Ly8及OCI-Ly10细胞与FN黏附培养可下调miR-185的表达。Western blot法检测发现,OCI-Ly8及OCI-Ly10细胞与FN黏附培养可上调PYK2总蛋白及pPYK2(Tyr402)表达水平。在悬浮及FN黏附培养状态下,敲低miR-185可上调PYK2总蛋白及pPYK2(Tyr402)表达水平。在HEK-293T细胞中过表达miR-185后,3'非翻译区(untranslated region,UTR)空载体组与野生型PTK2B 3'UTR组的相对荧光素酶报告基因活性:(1.00±0.06) vs(0.49±0.04)(t=9.54,P 0.001);3'UTR空载体组与突变型PTK2B 3'UTR组的相对荧光素酶报告基因活性:(1.00±0.06)vs(0.94±0.06)(t=1.01,P=0.371);提示miR-185可靶向抑制PYK2。台盼蓝拒染实验显示,OCI-Ly8细胞黏附培养状态下shCtrl(对照慢病毒)+Doxo(多柔比星)组与sh-miR-185(miR-185下调慢病毒)+Doxo组细胞死亡比例:(39.43±3.94)%vs(26.93±6.25)%(t=2.93,P=0.043);OCI-Ly10细胞黏附培养状态下shCtrl+Doxo组与sh-miR-185+Doxo组细胞死亡比例:(43.67±9.66)%vs(16.10±3.42)%(t=4.66,P=0.009)。OCI-Ly8细胞黏附培养状态下Ctrl(对照慢病毒)+Doxo组与PYK2(PYK2过表达慢病毒)+Doxo组细胞死亡比例:(37.70±7.64)%vs(20.07±7.59)%(t=2.84,P=0.047);OCI-Ly10细胞黏附培养状态下Ctrl+Doxo组与PYK2+Doxo组细胞死亡比例:(34.00±5.46)%vs (14.37±3.46)%(t=5.26,P=0.006)。细胞黏附介导的miR-185下调和PYK2表达增加,可促进CAM-DR。OCI-Ly8细胞黏附培养状态下sh-miR-185+Doxo组与sh-miR-185+Doxo+PF-562271组细胞死亡比例:(25.03±3.30)%vs(39.37±5.06)%(t=4.11,P=0.015);OCI-Ly10细胞黏附培养状态下sh-miR-185+Doxo组与sh-miR-185+Doxo+PF-562271组细胞死亡比例:(27.50±6.52)%vs(47.53±9.43)%(t=3.03,P=0.039);PF-562271可抑制miR-185下调介导的CAM-DR表型。结论 DLBCL细胞与FN黏附培养可下调miR-185表达,并上调PYK2总蛋白及pPYK2(Tyr402)表达水平;在DLBCL中miR-185可靶向抑制PYK2,细胞黏附介导的miR-185下调可能通过诱导PYK2表达增加促进CAM-DR;PF-562271可抑制miR-185下调介导的CAM-DR。