四妙勇安汤含药血清对巨噬细胞TLR4/MyD88信号通路及其下游炎症因子的影响

目的研究四妙勇安汤含药血清对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)信号通路及TNF-α、IL-6等炎症因子表达的影响,初步探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法采用大、中、小剂量四妙勇安汤水煎剂灌胃干预清洁级SD大鼠,制备含药血清;经MTT法观察含药血清对细胞增殖的影响后,选择剂量浓度为20%的含药血清干预体外培养的经LPS活化的巨噬细胞,采用ELISA法检测细胞上清液中TNF-α及IL-6含量;荧光定量PCR及Westernblot法检测细胞TLR4、MyD88的mRNA及蛋白的表达变化。结果用LPS刺激细胞后,引起TLR4、MyD88、TNF-α及IL-6的高表达,与正常血清对照组相比,差异具有统计学意义(P0.01);而用四妙勇安汤含药血清干预后,能显著抑制各项指标的高表达,与模型组相比,差异具有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论四妙勇安汤含药血清能够有效抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,其机制可能与调控TLR4/MyD88信号转导通路有关,这可能是该方防治动脉粥样硬化及免疫炎症性疾病作用的机制之一。     

紫檀芪对棕榈酸诱导巨噬细胞炎症因子分泌的影响

目的:研究紫檀芪(pterostilbene,PTE)对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导巨噬细胞炎症因子分泌的影响及可能机制.方法:采用MTT法检测PTE对巨噬细胞RAW264.7活性的影响;先用不同浓度的PTE预处理RAW264.7,后用PA处理,ELISA法检测巨噬细胞培养上清液中炎症因子IL-18、...     

蛤蟆草对巨噬细胞炎症因子分泌的影响及免疫调节作用研究

目的研究蛤蟆草对巨噬细胞多种炎症因子的影响及免疫调节作用。方法通过小鼠血凝抗体滴度检测,考察蛤蟆草乙酸乙酯提取物对体液免疫的作用;通过小鼠迟发型超敏反应试验,考察对细胞免疫的作用;体外试验用ELISA法检测LPS诱导的小鼠巨噬细胞分泌TNF-α、IL-6和NO水平;MTT法检测脾淋巴细胞增殖;Western blot检测磷酸化NF-κB的水平。结果在体试验结果表明蛤蟆草提取物对小鼠体液血凝抗体生成和迟发型超敏反应均具有抑制作用,离体试验也显示其对T淋巴细胞和B淋巴细胞均具有抑制作用。与阴性对照组相比,蛤蟆草组LPS诱导的小鼠巨噬细胞分泌TNF-α、IL-6和NO的水平显著降低,且呈明显的剂量依赖关系。此外,蛤蟆草组磷酸化NF-κB表达水平显著降低。结论蛤蟆草乙酸乙酯提取物对小鼠体液免疫和细胞免疫均具有抑制作用,对TNF-α、IL-6和NO等促炎性细胞因子分泌水平的抑制作用可能是通过抑制NF-κB(p65)的磷酸化所致。     

巨噬细胞吞噬pRBCs后炎症因子分泌的机制研究

目的体外研究小鼠骨髓诱导巨噬细胞BMDMs吞噬pRBCs后能否形成LC3相关吞噬(LC3-associated phagocytosis,LAP)及其在调节BMDMs分泌炎症因子中的作用。方法 构建BMDMs与pRBCs体外共孵育及吞噬研究平台。体外诱导小鼠BMDMs,用CFSE标记P. y 17XNL感染的小鼠红细胞(parasitized red blood cells,pRBCs),共孵育后采用流式细胞术观察BMDMs对pRBCs的吞噬效率并选定最佳条件,用CBA法检测培养上清中炎症因子浓度。随后分离诱导巨噬细胞ATG5条件缺失小鼠(Lyz2-Cre-ATG5flox/flox)来源的BMDMs,观察其吞噬pRBCs后胞内ATG5缺失对其分泌炎症因子的影响,通过免疫荧光染色及共聚焦观察ATG5缺失对BMDMs吞噬pRBCs后,胞内LC3-Ⅱ与pRBCs共定位的影响。结果 体外成功诱导BMDMs,流式细胞术检测证实巨噬细胞纯度>95%。在BMDMs与p RBCs按照1∶20孵育下,随孵育时间延长,吞噬比例显著增加,其中孵育4 h时,吞噬比例最高(>50%)。CBA炎症因...     

小鼠ACADL对巨噬细胞表达炎症因子的影响

目的探讨长链酰基辅酶A脱氢酶(Acyl-CoA dehydrogenase,long chain,ACADL)对巨噬细胞分泌炎症因子的影响。方法在体外诱导的小鼠骨髓来源巨噬细胞中加入脂多糖(LPS)以及白细胞介素4(IL-4)分别诱导M1和M2极化,在极化0、12、24、36、48 h时用Western blot检测ACADL在M1和M2极化中的蛋白表达量。构建ACADL-pEGFP-N1质粒,使用G418筛选和鉴定过表达ACADL的RAW264.7细胞稳定株。LPS刺激过表达ACADL稳定株和对照组细胞4 h后,通过ELISA和qRTPCR检测TNF-α、IL-6、IL-10的表达情况。在RAW264.7细胞中加入beta氧化抑制因子etomoxir预处理,ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-10的表达情况。结果在巨噬细胞极化过程中ACADL蛋白量先减少再增加;过表达ACADL的细胞中,IL-6和IL-10分泌量及mRNA水平均显著高于对照组(P0.001):beta氧化抑制因子etomoxir能够减少RAW264.7细胞分泌炎症因子。结论 ACADL能增强巨噬细胞IL-6和IL-10的分泌,其作用机制可能是通过beta氧化影响炎性细胞因子的表达。     

血府逐瘀汤含药血清对Toll 样受体4 信号转导通路及下游炎症因子的影响

目的:研究血府逐瘀汤含药血清对血管内皮细胞Toll样受体4信号转导通路及下游LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1等炎症因子表达的影响,探讨血府逐瘀汤抗动脉粥样硬化的机制。方法:采用药物血清学方法制备血府逐瘀汤含药血清以备细胞实验使用。体外培养血管内皮细胞,随机分为对照组、模型组、阿托伐他汀组、血府逐瘀汤组,用LPS刺激2 h后,分别加入阿托伐他汀和血府逐瘀汤含药血清干预24 h。用荧光定量PCR方法测定TLR4、MYD88、TRAF-6、NF-κB、LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1的基因表达;用Western blot方法测定TLR4、NF-κB、LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1蛋白表达。结果:用LPS刺激血管内皮细胞后,引起TLR4、My D88、TRAF-6、NF-κB、LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1的表达升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01);用药物血清干预以后血府逐瘀汤组显著抑制各项指标的表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:血府逐瘀汤可抑制TLR4/NF-κB信号转导通路及下游LOX-1、TNF-α、VCAM-1及ICAM-1等炎症因子的表达,这可能是其防治动脉粥样硬化作用的机制之一。     

黄连解毒汤含药血清对巨噬细胞自噬相关基因表达的影响

目的:考察黄连解毒汤含药血清对RAW264郾7 巨噬细胞自噬的影响,初步探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:采用大、中、小剂量黄连解毒汤水煎剂灌胃干预SD 大鼠,制备含药血清;经MTT 法观察含药血清对细胞增殖的影响后,选择各剂量浓度为20% 的含药血清干预体外培养的巨噬细胞,采用荧光定量PCR 方法检测自噬相关基因Beclin1 和mTOR 的mRNA 表达水平;Western blot 检测Beclin1、p鄄mTOR 蛋白的表达变化。结果:与正常对照组血清相比,黄连解毒汤含药血清干预后诱导了Beclin1 mRNA 及蛋白的表达,抑制了mTOR mRNA 及p鄄mTOR 蛋白的表达。结论:黄连解毒汤含药血清可诱导RAW264郾7 巨噬细胞自噬相关基因Beclin1 的表达、抑制mTOR 的表达,这可能是该方抗动脉粥样硬化作用的重要机制之一。     

百合固金汤含药血清对巨噬细胞表面模式识别受体的影响

目的观察传统抗痨方剂百合固金汤含药血清对巨噬细胞表面模式识别受体的影响,以探讨传统医药抗结核的可能作用机制。方法按常规方法制备百合固金汤含药兔血清。以含药血清作用U937单核巨噬细胞24 h后,分别采用RT-PCR法和流式细胞仪检测巨噬细胞表面CR1、CR3、CD14、CD43、TLR2及TLR4的表达。同时设空白兔血清为对照。结果 RT-PCR和流式细胞仪结果均显示百合固金汤含药血清可使巨噬细胞表面模式识别受体CR1、CD14、TLR2、TLR4表达显著增高(P<0.05);而CR3仅在蛋白表达水平显示差异(P<0.05);CD43表达则未见显著差异(P>0.05)。结论传统抗痨方剂百合固金汤的抗结核作用可能通过对巨噬细胞表面模式识别受体的调节而发挥作用。     

Pg-LPS对兔单核/巨噬细胞炎症因子表达的影响

目的比较Pg-LPS对新西兰兔不同部位单核/巨噬细胞炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)表达的影响。方法分离新西兰兔不同部位(血液、肺、腹腔、肝脏)的单核/巨噬细胞(Mo、AM、PM、KC),将每一个部位的细胞分别用E.coli-LPS、Pg-LPS刺激。运用RT-PCR法检测各组Mo、AM、PM、KC中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达情况。结果各实验组的4个部位(Mo、AM、PM、KC)相比,IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达均存在部位差异(P﹤0.05)。E.coli-LPS组和Pg-LPS组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达较对照组总体上均明显升高(P﹤0.05),并且E.coli-LPS组的升高作用强于Pg-LPS组(P﹤0.05)。结论不同部位的单核/巨噬细胞对Pg-LPS的刺激存在敏感性差异。Pg-LPS可以增强单核/巨噬细胞炎症因子基因的表达水平。     

四妙勇安汤含药血清对 ox-LDL 诱导的泡沫化巨噬细胞活化与自噬的影响

目的:探究四妙勇安汤含药血清对ox-LDL诱导的泡沫化巨噬细胞活化与自噬的影响,并探讨其抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法:灌胃给予SD大鼠不同剂量四妙勇安水煎液制备含药血清。油红O染色观察泡沫化巨噬细胞脂滴变化;CCK-8法观察含药血清对泡沫巨噬细胞活化的影响;ELISA检测炎症性细胞因子IL-6、IL-10和IFN-γ表达;透射电镜观察细胞自噬水平;免疫荧光标记法检测LC3Ⅱ表达;RT-PCR及Western blot检测细胞AMPK/mTOR/p70S6K通路相关因子表达变化。结果:油红O染色显示,ox-LDL干预后胞质内可见大量橘红色脂滴;CCK-8显示浓度30%以下的含药血清干预泡沫化巨噬细胞OD值无明显变化(P>0.05)。与模型组相比,含药血清刺激后,IL-6、IFN-γ表达降低,IL-10表达升高(P<0.05),含药血清组及雷帕霉素组细胞自噬小体形成增加,LC3Ⅱ、AMPK表达提高,mTOR、p70S6K表达降低(P<0.05)。结论:四妙勇安汤含药血清可调节ox-LDL诱导的泡沫化巨噬细胞活化以及AMPK/mTOR/p70S6K信号通路,抑制炎...     

巨噬细胞细胞毒因子分泌调节的研究

小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)产生细胞毒因子(Mφ—CF),需激活和刺激两个信号。激活信号(A23187)单独不能诱导Mφ—CF,但能促进刺激信号(LPS)的诱导作用。活化的Mφ经LPS作用2小时内开始分泌Mφ—CF,8小时达(?),后逐降。对酵母多糖的吞噬伴有一定程度的Mφ—CF分泌,但吞噬乳胶颗粒则否。数株肿瘤细胞有明显的刺激Mφ—CF分泌的作用。PKc激活剂不能刺激Mφ—CF的产生。     

巨噬细胞炎症因子1α对人脑微血管内皮细胞通透性的影响

目的研究巨噬细胞炎症因子1α(MIP-1α)是否具有开通血脑屏障的作用。方法以重组人MIP-1α直接作用于人脑微血管内皮细胞(HBMEC),免疫荧光方法检测紧密连接蛋白ZO-1的分布变化、跨内皮细胞电阻、HRP穿过HBMEC单层的改变、HBMEC细胞CC趋化因子受体5(CCR5)的表达,以及MIP-1α中和抗体和分泌MIP-1α的模式细胞(6T-CEM)与HBMEC单层共同温育时ZO-1的分布变化。结果MIP-1α作用下,HBMEC单层紧密连接结构被破坏,通透性增加,引起HBMEC细胞CCR5受体的表达,MIP-1α中和抗体阻断6T-CEM细胞对HBMEC单层ZO-1分布的改变。结论MIP-1α可能通过CCR5改变HBMEC单层通透性促进T淋巴细胞穿过血脑屏障。     

IL-22 对骨髓来源巨噬细胞相关炎症因子表达的影响

目的:探讨IL-22对骨髓来源巨噬细胞相关炎症因子表达的影响。方法:从小鼠的股骨分离骨髓细胞,经过分化培养获得骨髓来源巨噬细胞,再用脂多糖(LPS)刺激诱导为M1型巨噬细胞。IL-22干预M1型巨噬细胞后,采用流式细胞术检测巨噬细胞标志物;用ELISA分别检测IL-1β和TNF-α的分泌水平;用RT-PCR分别检测炎症因子i NOS、IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平。结果:经过分化培养,骨髓来源巨噬细胞的纯率为(99. 3±0. 4)%,IL-22干预M1型巨噬细胞后,与LPS组相比,LPS+IL-22组的M1型巨噬细胞比例下降(P0. 05),细胞炎症因子i NOS、IL-1β和TNF-αmRNA表达下降(P0. 05),IL-1β和TNF-α分泌水平降低(P0. 05)。结论:IL-22可抑制LPS诱导的骨髓来源巨噬细胞炎症因子的表达,减轻其炎性反应。     

巨噬细胞泡沫化对炎症反应的影响

目的:观察巨噬细胞泡沫化对促炎因子水平的影响。方法:取6-8周龄C57BL/6J雄性小鼠骨髓细胞,采用L929培养分化成巨噬细胞。在巨噬细胞悬液中加入不同浓度氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL),分为空白对照组(0μg/ml)、10μg/ml组和25μg/ml组,再培养24h后观察各组细胞泡沫化程度,检测分析各组泡沫细胞中促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达水平。结果:所取骨髓细胞被成功分化为巨噬细胞。不同浓度ox-LDL均能诱导巨噬细胞的泡沫化,25μg/ml组巨噬细胞泡沫化程度高于10μg/ml组(P0.01)。与空白对照组相比,25μg/ml组的IL-1β和TNF-αmRNA表达水平均显著降低(P0.05)。结论:巨噬细胞泡沫化可以抑制炎症反应。     

炒麦芽含药血清对MMQ大鼠垂体瘤细胞NGF、PRL分泌表达的影响

神经生长因子（NGF）对垂体瘤的影响,近年来受到了医学界的关注,其治疗效应和机制也很复杂。尤其是其与PRL分泌之间的关系,虽然国内外有零星的报道,但是,研究不多,相关资料表明,NGF在PRL分泌表达的调控中,表现出了某种双相的调控作用,这种表现和炒麦芽调控乳汁分泌及其对垂体瘤细胞活力的影响具有某些类似,这就促使我们思考炒麦芽在对MMQ大鼠垂体瘤细胞产生治疗作用的过程中,有可能通过NGF而调控PRL分泌的机制参与。     

汉黄芩素对流感病毒感染肺泡巨噬细胞炎症相关因子的影响

目的: 研究汉黄芩素对甲型流感病毒鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染的大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)产生促炎症细胞因子、炎症介质及氧自由基的影响。 方法: 流感病毒感染 NR8383细胞1 h后,加入含汉黄芩素的培养基(终浓度16 mg/L),药物作用后6 h、12 h和24 h,ELISA法检测细胞上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白 1(MCP-1)的含量,放射免疫测定法检测细胞上清中前列腺素E₂(PGE₂)、磷脂酸A₂(PLA₂)和白三烯B₄(LTB₄)的含量;药物作用后8 h、24 h、36 h和48 h,生化法检测细胞内一氧化氮(NO)含量和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性,4 h、8 h、18 h和24 h,生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;药物作用后24 h,real-time PCR检测细胞内TNF-α和MCP-1的mRNA水平。 结果: 汉黄芩素抑制了流感病毒感染NR8383细胞后TNF-α、MCP-1的转录和表达(P<0.01),降低了PGE₂、PLA₂、LTB₄和MDA的含量(P<0.05);减少了NO和iNOS的产生(P<0.05),增强了SOD的活性(P<0.05)。 结论: 汉黄芩素明显抑制了流感病毒感染后肺泡巨噬细胞内各种炎症相关因子的产生,具有抗炎作用。     

雷公藤多苷对内毒素激活小鼠腹腔巨噬细胞分泌促炎症细胞因子的影响

目的：观察雷公藤多苷（TWP）对细菌内毒索（LPS）激活小鼠腹腔巨噬细胞（Mφ）分泌促炎症性细胞因子TNF-α和IL-6的影响，以探讨过度炎症反应中高细胞因子血症的调控药物和措施。方法：分离纯化小鼠腹腔Mφ，用LPS激活，与TWP共同孵育；以间接MTT法和ELISA法检测培养上清液中的TNF-α和IL-6的浓度。结果：TWP在浓度6．25～100μg/L，时间4～24小时范围内，对Mop产生TNF-α具有显著抑制作用（P〈0．01），呈剂量和时间依赖关系；TWP在浓度6．25～50μg／L范围内，时间12小时，对Mφ产生IL-6具有显著抑制作用（P〈0．01），呈剂量依赖关系。结论：TWP可以抑制LPS激活Mφ分泌促炎症性细胞因子的活性。     

重度烧伤大鼠血清对巨噬细胞Notch1的激活及分泌功能的影响

目的研究重度烧伤大鼠血清刺激后巨噬细胞Notch1蛋白表达变化,及其细胞分泌因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平变化。方法选取成年雄性SD大鼠24只,随机分为假伤组、烧伤24 h组和烧伤7 d组,每组8只。烧伤组SD大鼠造成约30%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烧伤,分别于伤后24 h、7 d收集血清;假伤组大鼠用37℃水浴,水浴后24 h取其血清作为对照。用上述各组血清制成20%培养液,刺激小鼠源巨噬细胞系RAW264.7,分别于加入血清刺激后即刻和刺激4、8、12、24、48 h后收取细胞及其上清液。另外用含20%假伤血清+脂多糖(100 ng/m L)培养液刺激巨噬细胞,于相同时间点收样。Western Blot检测各时间点巨噬细胞中Notch1蛋白表达变化,酶联免疫吸咐试验检测刺激24 h后培养上清液中IL-6及TNF-α的含量变化。结果 (1)假伤组血清刺激后即刻和刺激4、8、12、24、48 h后,Notch1蛋白表达无明显变化;(2)烧伤24 h组血清刺激后,Notch1蛋白表达明显升高,并随时间延长而达高峰;(3)烧伤7 d组血清刺激后,Notch1蛋白表达无明显变化,与假伤组血清刺激结果类似;(4)假伤组血清+脂多糖混合刺激后,Notch1蛋白表达明显增加;(5)烧伤24 h组血清及假伤组血清+脂多糖,上清液中IL-6和TNF-α含量均明显高于假伤组血清及烧伤7 d组血清。结论烧伤血清刺激下的巨噬细胞Notch1信号被激活,IL-6及TNF-α分泌能力增强,且这种激活可被脂多糖刺激所模拟。