糖皮质激素对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞周期的影响

目的:观察糖皮质激素对人卵巢癌细胞HO-8910细胞周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法:将1×10-7mol/L地塞米松(dexamethasone,Dex)和1×10-6mol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486分别单用或合用处理HO-8910细胞,采用流式细胞术测定细胞周期,核素掺入半定量RT-PCR检测细胞周期蛋白激酶抑制剂p21/WAF1的表达水平。结果:Dex诱导HO-8910细胞发生G0/G1期停滞,并使p21/WAF1 mRNA表达上调;RU486可逆转Dex引起的p21/WAF1表达的变化。结论:p21/WAF1的表达上调可能参与糖皮质激素引起的HO-8910细胞G0/G1期停滞作用。     

地塞米松抑制卵巢癌HO-8910细胞增殖机制的研究

目的 探讨地塞米松（dexamethasone,Dex)抑制人卵巢癌HO－8910细胞增殖的可能机制。方法 采用细胞计数法检测细胞增殖、流式细胞术测定细胞周期，同位素掺入半定量RT－PCR检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21/WAF1的表达水平。结果 Dex诱导HO－8910细胞发生G0／G1期停滞，使p21/WAF1 mRNA表达上调；糖皮质激素受体拮抗剂RU486可逆转细胞增殖和p21/WAF1表达的变化。结论 Dex对HO－8910细胞增殖的抑制可能与诱导p21/WAF1表达有关。     

地塞米松和TGFβ1对人卵巢癌HO-8910细胞中PAI-1表达的影响

目的观察地塞米松(Dex)和转化生长因子β1(TGFβ1)对人卵巢癌HO-8910细胞中Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达的影响,探讨其在卵巢癌的发生发展中可能发挥的作用。方法将HO-8910细胞分别用TGFβ1(0.01～10ng/ml)和Dex(100nmol/L)单独或联合处理不同时间后,用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测PAI-1mRNA和蛋白表达的变化;用放线菌素D阻断新的mRNA合成,检测PAI-1mRNA的稳定性。结果HO-8910细胞中,TGFβ1能以时间和浓度依赖性的方式上调PAI-1mRNA的表达,最高可上调3.75倍(P<0.01);Dex也能上调PAI-1mRNA的表达,最高为1.65倍(P<0.01);Dex和TGFβ1两者联合作用4h,可上调PAI-1mRNA12.7倍(P<0.01),远大于两者单独作用之和,两者联合处理对PAI-1蛋白的上调作用也大于两者单独作用;Dex和TGFβ1单独及联合作用均不影响PAI-1mRNA的稳定性。结论Dex和TGFβ1单独均能上调HO-8910细胞中PAI-1的表达,联用对PAI-1上调有协同作用,该协同作用不是通过增强PAI-1mRN...     

ghrelin对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响

目的探讨ghrelin对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖及凋亡作用的影响。方法将不同质量浓度的ghrelin(400、500、600、700、800ng·mL-1)与人卵巢癌细胞株HO-8910共同培养,采用MTT法检测细胞增殖的抑制率,Tunel法检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)的表达。结果ghrelin≥600ng·mL-1时对HO-8910细胞增殖的抑制率具有显著作用(P<0.05)。600ng·mL-1质量浓度的ghrelin作用于HO-8910细胞20min后,细胞凋亡、p-ERK1/2的灰度值均显著减少(均P<0.05)。结论 ghrelin能抑制人卵巢癌细胞株HO-8910增殖、促进其凋亡;ERK1/2可能参与了ghrelin对人卵巢癌细胞株HO-8910作用的过程。 更多还原     

CXCL12/CXCR-4对卵巢癌高低转移细胞的作用机制探讨

目的探讨趋化因子CXCL12及其受体CXCR-4对人卵巢浆液性囊腺癌高低转移细胞株HO-8910PM及HO-8910增殖、迁移作用的差异。方法采用流式细胞术分析HO-8910PM及HO-8910细胞中CD44、CD49e、E-cad-herin的表达差异;RT-PCR检测CXCR-4在HO-8910PM及HO-8910细胞中的转录水平差异;比较不同浓度CXCL12对HO-8910PM及HO-8910细胞增殖、迁移能力及对其表面相关黏附分子表达水平的影响。结果流式细胞术检测显示HO-8910PM及HO-8910细胞均表达CD44（97.6%vs 96.2%）,E-cadherin在前者不表达（6.5%）,后者高表达（92.5%）;CXCR-4在HO-8910PM中高表达（93.3%）,在HO-8910中不表达（5.7%）;CXCL12上调HO-8910PM中CD49e的表达（27.6%vs 83.2%,P〈0.05）,并且可促进细胞的增殖和移行。结论趋化因子CXCL12及其受体CX-CR-4在卵巢癌的增殖及侵袭转移中具有重要作用。     

槲皮素对人卵巢癌HO-8910细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨槲皮素对人卵巢癌HO-8910细胞增殖与凋亡的作用.方法 MTT法测定细胞增殖情况;流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡;流式细胞仪检测槲皮素对凋亡相关蛋白Bcl-2、p53表达的影响.结果 槲皮素对HO-8910细胞有增殖抑制作用,呈时间、剂量依赖性;流式细胞术检测结果分析,实验组G1/G0期上升,S期和G2/M期下降,细胞凋亡率上升;流式细胞术结果显示,槲皮素使Bel-2表达下调,而上调p53蛋白的表达.结论 槲皮素在体外能抑制卵巢癌HO-8910细胞的生长,阻止细胞由G1/G0期向S期和G2/M期移行并诱导细胞凋亡,其诱导HO-8910细胞凋亡的机制可能与上调促调亡蛋白p53表达和下调凋亡抑制蛋白Bel-2表达有关.     

苦参碱对人卵巢癌细胞株HO-8910PM增殖及侵袭运动能力的影响

目的 研究苦参碱对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM增殖及转移相关能力的影响及其作用机制.方法 以MTT法和台盼蓝拒染法检测苦参碱对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞增殖的影响;Transwell小室法检测其对HO-8910PM细胞侵袭运动能力的影响;考马斯亮蓝染色法检测不同质量浓度苦参碱对H0-8910PM细胞细胞骨架的改变及免疫细胞化学方法检测药物作用前后HO-8910PM细胞Ezrin蛋白的表达.结果 苦参碱对HO-8910PM细胞增殖抑制呈明显剂量和时间效应;1.5 g/L苦参碱能明显抑制细胞的增殖,作用6 h后能抑制HO-8910PM细胞体外侵袭人工基底膜和运动能力,抑制率分别为(41.52±10.76)%和(39.73±10.67)%;1.0、1.5g/L苦参碱作用HO-8910PM细胞24 h后使细胞骨架明显改变,并上调Ezrin蛋白的表达.结论 苦参碱能抑制高转移性人卵巢癌细胞HO-8910PM的增殖能力和侵袭运动能力,其抗肿瘤侵袭运动的机制与细胞骨架和Ezrin蛋白表达的改变有关.     

SGI-1776 钝化Pim-1 对卵巢癌细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制

目的：检测SGI-1776 对卵巢癌HO-8910 细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及其可能机制。方法：体外培 养卵巢癌HO-8910 细胞;M法和克隆形成法检测SGI-1776 对HO-8910 细胞的增殖抑制作用;PI 染色流式细胞术(ow cytometry,FCM) 检测SGI-1776 对HO-8910 细胞周期分布的影响;Transwell 法检测SGI-1776 对HO-8910 细胞迁移 及侵袭的抑制作用;ELISA,Western 印迹,siRNA/cDNA 转染检测SGI-1776 对HO-8910 细胞增殖、迁移、侵袭抑制 作用的可能分子机制。结果：SGI-1776 在体外对HO-8910 细胞增殖、迁移、侵袭呈现出浓度依赖性的抑制作用,阻 滞细胞周期于G1 期。随Pim-1 激酶活性降低,Pim-1 蛋白表达下调,同时Pim-1 下游蛋白CDK6,pCDK6,CDK4, pCDK4,CDK2 和pCDK2 表达下调,而P21 和P27 蛋白表达上调。用siRNA 干扰沉默Pim-1 基因,则SGI-1776 对 HO-8910 细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用明显加强;用Pim-1-cDNA 转染HO-8910 细胞,则能部分抵消SGI-1776 对细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论：SGI-1776 通过钝化Pim-1 而发挥其抑制卵巢癌HO-8910 细胞增殖、迁 移和侵袭的作用,提示Pim-1 是卵巢癌治疗的新的分子靶。     

雌激素对HO-8910细胞增殖与分泌CA-125量的影响

目的观察雌激素体外作用对卵巢癌细胞株HO-8910细胞增殖与分泌CA-125量的影响。方法采用MTT比色法检测不同浓度的雌激素体外作用48 h对人皮肤成纤维细胞（正常对照）和HO-8910细胞增殖的影响;放射免疫法检测不同浓度雌激素体外作用后细胞上清液中CA-125的变化。结果①雌激素对成纤维细胞增殖和分泌CA-125无影响;②10-5、10-13mol/L雌二醇对HO-8910细胞增殖有抑制作用,10-9、10-10mol/L雌二醇对其增殖则有促进作用;③CA-125水平与HO-8910细胞增殖或抑制状况无关。结论雌激素对HO-8910细胞增殖有影响,但CA-125水平与HO-8910细胞的增殖抑制状态无关。     

黄芪多糖对基底细胞样乳腺癌细胞增殖和Akt磷酸化的影响

目的：观察黄芪多糖对基底细胞样乳腺癌细胞株MDA-MB-468细胞增殖和Akt蛋白磷酸化的影响。方法：用不同浓度的黄芪多糖（Astragalus polysaccharide,APS）干预MDA-MB-468细胞,用甲基噻唑基四唑法检测不同浓度APS干预对MDA-MB-468细胞增殖的量效和时效关系。用细胞内蛋白质印迹法检测APS干预MDA-MB-468细胞株1、2、4和7d后对磷酸化Akt（phospho-Akt,p-Akt）（Thr308）和p-Akt（Ser473）蛋白表达水平的影响,以及p53/鼠双微体2（murine double minute 2,MDM2）信号转导通路中的关键靶点p53、MDM2和人第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN）蛋白表达水平的影响。用小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）技术沉默PTEN的表达,用细胞内蛋白质印迹法检测APS干预MDA-MB-468细胞2d对p-Akt（Thr308）和p-Akt（Ser473）蛋白表达水平的影响。结果：1和0.5mg/mL的APS对MDA-MB-468细胞的增殖有明显的抑制作用。1和0.5mg/mL的APS干预1、2、4和7d后能下调p-Akt（Thr308）的表达;干预1和2d后下调p-Akt（Ser473）的表达,上调MDM2蛋白的表达;干预7d后上调p53和PTEN蛋白的表达。PTEN沉默后,APS在干预2d后对p-Akt（Thr308）和p-Akt（Ser473）的表达没有影响,细胞增殖的抑制率低于PTEN未沉默时。结论：APS能抑制MDA-MB-468细胞的增殖,下调MDA-MB-468细胞Akt磷酸化的水平,其抑制MDA-MB-468细胞增殖的机制可能与通过对p53/MDM2正负反馈环的调节从而上调p53和PTEN蛋白的表达有关。     

RhoB对胰腺癌细胞SW1990中NF-κB转录活性调控研究

目的观察RhoB对人胰腺癌SWl990细胞中NF—κB转录活性的影响。方法将空载体质粒（pcDNA3）、野生型RhoB过表达质粒（RhoB—wt）、RNA干扰对照质粒fRNAi—control）、RhoBRNA干扰质粒（RhoB—RNAi）、RhoB激活质粒（RhoB—V14）或RhoB失活质粒（RhoB—N19）和NF—κB报告基因质粒（NF—κB—luc）以及内参照质粒（pRLSV40-luc）共转染人SW1990细胞中,24h后用双萤光素酶检测基因的转录活性,Western Blot检测RhoB蛋白。结果SW1990细胞中,转染0．8μg的RhoB过表达和激活均能抑制NF—κB报告基因的活性,分别是对照的54％和21％;RhoBIRNA干扰后NF—κB的转录活性上调为对照的1．5倍。结论在胰腺癌SW1990细胞中RhoB能抑制NF—κB的转录活性。     

Effect of Exogenous bFGF on the Proliferation of Human Adenoid Cystic Carcinoma ACC-2 Cells

To observe the effects of basic fibroblast growth factor （bFGF） on human adenoid cystic carcinoma ACC-2 cell line proliferation and ERK, cyclin D1/p21^waf/cip1 signaling pathways, human adenoid cystic carcinoma cells （ACC-2） were cultured and the influence of bFGF of different concentrations on cell proliferation was determined by MTT. Protein was detected by immuno-precipitation and ERK activity by using ERK agent kit. p-ERK1/2 and down-stream cyclin D1, p21^waf/cip1 expression were detected by Western blotting and the interfering role of mitogen protein-activated kinase （MEK） suppressor U0126 in the afore-mentioned indicators was examined. MTT demonstrated ACC-2 cell proliferation was substantially enhanced by bFGF, immuo-precipitation displayed ERK activity was up-regulated by bFGF, and immuno-imprinting also showed p-ERK1/2, cyclin D1 expression was greatly enhanced and p21^waf/cip1 expression was inhibited by bFGE U0126 suppressed the effect of bFGF. It is concluded that bFGF can promote the proliferation of human adenoid cystic carcinoma ACC-2 cells, and its pathways are associated with the up-regulated activity and expression of p-ERK1/2, inhibited p21waf/cip1 expression and enhanced cyclin D1 expression.     

Effects of Oxymatrine on the Apoptosis of Human Esophageal Carcinoma Eca109 Cell Line and Its Mechanism

The effects of Oxymatrine （Oxy） on the proliferation and apoptosis of human esophageal carcinoma Ecal09 cell line and the mechanism were investigated. The human esophageal carcinoma Eca 109 celis were cultured in vitro. The Oxy-induced apoptosis of Eca 109 cells was assayed by using flow cytometry. The expressions of p-ERKII2, Cyclin D1, p21^waf/cipl, Bax and Bcl-2 were detected by Western blot. Flow cytometry revealed that Oxy could induce the apoptosis of Eca l09 cells. Western blot showed that Oxy of different concentrations suppressed the expressions of p-ERK1/2, Cyclin D1 and Bcl-2, but up-regulated the expression of p21waf/cip1 and Bax, and the ratio of Bax/Bcl-2 was increased. It was suggested the Oxy could induce the apoptosis of Eca l09 cells, which might be related to the upregulation of p21waf/cip1 and the downregulation of p-ERK1/2, Cyclin D1 and p21^waf/cip1. The possible pathway may be related to Bcl-2/Bax.     

RNA干扰survivin对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响

目的 探讨RNA干扰survivin基因对卵巢癌HO-8910PM细胞周期的影响.方法 实验分3个组：siR-NA组,采用脂质体法将靶向survivin siRNA荧光真核表达质粒载体pGPU6-GFP-survivin-shRNA转染卵巢癌HO-8910PM细胞;空白对照组,单纯细胞培养;阴性对照组,用表达与survivin序列无同源性的siRNA片段质粒pGPU6-GFP-NC转染细胞.于转染后48 h和72 h,用PI单染法流式细胞术检测各组HO-8910PM细胞周期的变化以及Western blot检测survivin蛋白的表达情况.结果 PI单染流式细胞仪检测细胞周期结果表明,与空白对照组和阴性对照组相比较,2个时间点siRNA组转染后的G0/G1期细胞比例明显增加,而G2/M期细胞比例均下降（P＜ 0.05）;Western blot结果证实,siRNA组的HO-8910PM细胞survivin蛋白的表达量明显下调.结论 导入survivin基因特异性的siRNA可导致卵巢癌HO-8910PM细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞增殖受阻,且细胞sur-vivin蛋白表达量下降.     

p21~(waf1)-p27~(kip1)基因联合转染对乳腺癌细胞增殖和中心体复制的影响

目的 探讨外源性 p21~(waf1)-p27~(kip1)基因联合转染对人乳腺癌细胞细胞增殖及中心体复制的影响和意义.方法 应用脂质体介导法分别将构建的plRES-p27~(waf1)、p27~(kip1)、pIRES-p21~(waf1)-p27~(kip1)真核表达载体,转染入常规培养的人乳腺癌细胞系MCF-7,未转染组、转染空质粒组细胞做对照,Western免疫印迹法验证转染前后p21~(waf1)、p27~(kip1)基因蛋白表达情况;噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期DNA分布变化;免疫荧光技术检测转染前后中心体复制的变化情况.结果 Western免疫印迹法证实p27~(waf1)、p27~(kip1)、p27~(waf1)基因转染24 h后,其蛋白表达量明显增多(P<0.01),与对照组比较,各转染实验组细胞生长明显受抑制(P<0.01),细胞周期大部分停滞于G1期,各实验组G.期和S期细胞比例依次为:(69.52±3.21)%、(18.38±2.51)%,(60.83±3.02)%、(24.52±1.89)%,(78.37±2.83)%、(15.27±1.74)%,对照组则为(47.28±2.25)%、(33.52±1.97)%,中心体复制异常的乳腺癌细胞数较转染前(13.47±0.33)%明显减少:(5.07±0.38)%,(6.28±0.35)%,(3.47±23)%,两两比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 外源性p21~(waf1)和p27~(kip1)基因转染可抑制人乳腺癌细胞的增殖及中心体的异常复制,二者联合转染时效果显著.提示,乳腺癌的发生、发展是多基因、多因素共同参与的过程,p21~(waf1)和p27~(kip1)在调控细胞增殖及中心体复制方面具有协同作用,对于p21~(waf1)、p27~(kip1)基因失活、低表达或不表达的乳腺癌,联合转染外源性p21~(waf1)、p27~(kip1)基因不失为一种有效的治疗手段.     

RNA干扰OPN对人卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖的影响

目的观察骨桥蛋白(OPN)基因沉默对卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞的影响,为探索卵巢癌基因治疗提供理论依据。方法以脂质体法将已构建的骨桥蛋白特异性小干扰RNA真核表达载体(pSilencer3.1/OPN-shRNA)转染卵巢癌细胞HO-8910PM,48h后用Western blotting技术检测重组质粒组、空质粒组和空白对照组中卵巢癌细胞内骨桥蛋白的表达情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法连续5天测定转染后细胞的增殖情况并绘制曲线图。结果 pSilencer3.1/OPN-shRNA转染卵巢癌细胞株HO-8910PM后48h骨桥蛋白表达下降,差异有统计学意义(同空质粒组、空白对照组相比P<0.05);空质粒组与空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。重组质粒组同空质粒组、空白对照组比较其增殖于第1天差异无统计学意义(P>0.05),第2～5天差异有统计学意义(P<0.05);空质粒组与空白对照组比较,第1～5天其增殖差异均无统计学意义(P>0.05)。结论构建的骨桥蛋白特异性小干扰RNA真核表达载体可以抑制卵巢癌细胞HO-8910PM中骨桥蛋白的表达。骨桥蛋白可能与卵巢癌细胞HO-8910P...     

p21waf1基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

目的:构建人p21^waf1基因的原核表达载体并在大肠杆菌JM109中高效表达。方法:从人肝细胞中分离总RNA,经逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）得到p21^waf1全基因。用原核细胞表达载体构建了pBV220/p21^waf1重组质粒,经DNA测序确认后,将其转化到大肠杆菌JM109进行表达、初步纯化。 结果:SDS-PAGE凝胶电泳分离显示在分子量21 000处有一诱导蛋白带,薄层扫描显示表达产物在诱导5 h时可达细菌总蛋白的38%,Western blotting证明表达产物与抗人P21^waf1单克隆抗体有特异性免疫反应。 结论:成功构建出p21^waf1表达载体,诱导产生蛋白经检测证实为P21^waf1蛋白。     

Glucocorticoid modulation of extracellular signal-regulated protein kinase1/2 and p38 in human ovarian cancer HO-8910 cells

Objective To investigate the signaling pathway through testing the effects of dexamethasone (Dex)on the activation of the extracellular signal-regulated protein kinase 1/2 (ERK1/2 and p38 kinase(p38) in HO-8910 cells.Methods Activation of the ERK1/2against the total ERK1/2 and p38 mitogen-activated protein kinases (MAPKs) protein and the phosphorylated forms of them.Results Dex could suppress the activation of ERK1/2, while enhance the activation of p38 rapidly and strongly in a dose- and time- dependent manner. Neither effect could be blocked by RU486, the antagonist of glucocorticoid receptor (GR).Conclusion Dex has rapid effects on the activation of ERK1/2 and p38, and these effects are not mediated by GR.