T-G型CPM及速缓冻贮法对人精子的影响

Ｔ Ｇ型冷冻保护剂 (ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｍｅｄｉｕｍ ,ＣＰＭ )是一种新型无卵黄复合型ＣＰＭ ,我们采用Ｔ Ｇ型ＣＰＭ ,以速缓冻法冻贮 45份人精液近 1年 ,探讨Ｔ Ｇ型ＣＰＭ及其保护下速缓冻法对人精子结构和功能的影响。材料与方法　已育健康男子精液45份。 10份精液不加ＣＰＭ ,35份加Ｔ Ｇ型ＣＰＭ ,均以速缓冻法分别进行冻贮。每份精液冷冻前后行精液常规对比分析、精尾低渗肿胀试验、精子穿卵试验、精子染色体分析及精子超微结构观察。缓冻法ＣＰＭ 4℃预冷 ,与精液 1∶1混匀 ,4℃ 2 0ｍｉｎ后 ,置液氮蒸气距液面2ｃ…     

玻璃化冷冻技术在人类辅助生殖中的应用

玻璃化冷冻技术是一种快速冷冻细胞或组织的方法,可避免冻融过程中细胞内冰晶的形成,最大限度的降低细胞损伤,在人类配子、胚胎的冷冻保存中取得了不少进展。近十几年来,玻璃化冷冻技术已成功应用于成熟卵母细胞、未成熟卵母细胞、精子及胚胎的各个发育时期的冷冻保存并陆续有健康婴儿出生的报道。该技术操作简单、迅速快捷,正逐渐成为人类辅助生殖技术中重要的应用技术之一。本文综述了玻璃化冷冻技术在人类辅助生殖中应用于配子、胚胎冻存的研究进展。     

人类胚胎冷冻:真的到了由慢速向玻璃化方法过渡的时代?

自第一例冻融人类胚胎获得妊娠以来,胚胎冷冻已经成为辅助生殖技术中的一项常规操作.近年来,玻璃化冷冻技术成功用于冻存人类卵母细胞及胚胎.那么,玻璃化冷冻方法已经安全到可以广泛应用,甚至可以取代慢速冷冻方法了吗？实际上仍有许多问题有待解决,包括冷冻保护剂毒性、开放式载体的交叉污染、复苏胚胎发育潜能及损伤鉴定等.     

培养处理与冷冻保存同种异体肌腱的临床研究

目的建立经培养处理与冷冻保存的同种异体肌腱库,该腱临床应用已获得初步成功。方法将新鲜人体肌腱在含脱氧鸟苷的培养液中培养后,置入冷冻保护剂中,经超深低温无创冻存。１９９６年８月至１９９８年１２月,临床对１２例患者应用３０根同种异体肌腱。术前经快速复温及洗涤后将复苏肌腱作腱细胞活力测定、组织学检测。结果经培养处理与冻存的异体肌腱细胞活力为（７０．５±４．５）％（ｘ±ｓｘ,下同）。复苏后冷冻处理肌腱的组织学结果,与新鲜异体肌腱无显著性差异。１２例患者术后屈指功能良好,初步观察不必作粘连松解术。结论（１）脱氧鸟苷培养及无创冻存处理的人体肌腱,复苏后仍保存７０．５％的活力,是“活体”肌腱。（２）临床应用获得初步成功,粘连发生较少     

人精子超低温冻贮技术的研究(一)——不同的冻贮方法、冷平衡时间对精子存活率的影响

关于精液冻贮技术虽国外已做了大量的研究,但一些研究结果不无矛盾。为了寻找适合我国使用的简便、有效的精液冻贮方法,我库从1984年12月开始,以液氮为致冷源,用自行研制的精液冷冻设备,对人精子超低温冻贮技术进行了一系列比较性研究。从1985年2月至1986年2月,共做冻精人工授精118例,181周期。确知怀孕和已生育者33例,周期成功率为18.23%(另文报道)。现将精子冻贮技术的实验研究结果报道如下。     

剩余冷冻复苏胚胎行囊胚培养后再次冷冻并复苏移植后获双胎妊娠1例报告

在体外受精一胚胎移植(IVF-ET)周期中,冷冻复苏胚胎移植后,剩余复苏胚胎往往丢弃.本中心自2009年起对这些剩余复苏胚胎行囊胚培养及囊胚冷冻,于2010年解冻并移植前次保存的囊胚成功获得临床双胎妊娠1例,报告如下.     

人类冻精人工授精的临床应用

人类精子的冷冻贮存及人工授精,不仅对某些男性不育症的治疗有一定价值在人类优生及计划生育方面也有重要意义。我院采用简易而有效的深低温冻贮志愿供者精液,从1986年11月底至1988年5月进行人工授精共82例110周期,报告如下: 一、精液冻贮方法: 采用液氮作储存介质进行深低温冻贮     

低温冻存对胚胎大鼠神经干细胞生物学特性的影响

目的 研究不同冻存液对胚胎大鼠神经干细胞的保护作用及低温冻存对神经干细胞增殖及分化潜能的影响。方法 分别应用冻存液Ⅰ和冻存液Ⅱ对源于胚胎大鼠的神经干细胞球进行冷冻,于复苏后进行传代培养,并鉴定其增殖和分化能力。结果 复苏后的神经干细胞可以多次传代,冻存神经干细胞的克隆增殖率为(36.80±3.81)％,未冻存者为(38.15±4.80)％,两者相比差异无显著性(P>0.05)。冻存液Ⅰ和冻存液Ⅱ保存的神经干细胞分化为神经元的比例分别为(7.61±0.74)％和(12.76±2.53)％(P>0.05);分化为少突胶质细胞的比例分别为(0.90±0.50)％和(2.18±0.33)％(P>0.05);分化为星形细胞的比例为(47.67±2.10)％和(35.38±3.14)％(P<0.05)。结论 冻存的胚胎大鼠神经干细胞复苏后仍具有活跃的增殖和分化潜能,含10％血清的冻存液可以促使神经干细胞向星形细胞方向转化。     

反复冻融及超深低温处理的异体肌腱移植实验研究

为比较有创与无创冷冻方法处理的肌腱异体移植的效果，探索不同冷冻处理技术对肌腱免疫源性的影响及获得成功的异体移植的条件，采用有创反复冻融及无创超深低温（－１９６℃）冻存技术分别处理肌腱，液氮下保存３个月后异体移植，以自体肌腱移植作对照。腱细胞活力测定显示，反复冻融处理的肌腱细胞全部失活，而超深低温处理的肌腱细胞活力为（９２．５±３．４）％。组织学观察显示，反复冻融及超深低温处理的异体移植肌腱均产生了不同程度炎性细胞浸润，且腱周粘连均较自体移植肌腱重。主动屈曲功能测定、羟脯氨酸含量测定及生物力学性能测定显示，反复冻融与超深低温组无显著性差异（Ｐ＞０．０５），且后两项指标显著较自体移植肌腱差。认为：①反复冻融及超深低温处理的肌腱异体移植获得一定成功，两者无显著性意义。②既要保留肌腱细胞的活性，又要去除肌腱中的抗原呈递细胞，可能是冷冻处理的肌腱异体移植获得成功的关键。③损伤了肌腱细胞成分，降低了肌腱抗原性，不等于能获得成功的异体移植     

骨冷冻病损的实验研究:骨控制冷冻技术的测定

近年来冷冻生物学的发展大大增加了低温对主要成分为水的活组织的影响的了解。冷冻至低于冰点时,冰首先在组织间隙中形成,同时细胞也丢失水。在骤冻中,细胞内外同时有结晶冰形成。以上现象已在单个细胞中和组织培养中观察到。它证明,①冷冻后复温可杀伤大量细胞。②骤冻加渐温可产生高度的细胞死亡率。作者进行了动物实验,其目的为:(1)     

自体卵巢组织冷冻在女性肿瘤患者生育力保存中的应用

目的探讨适合育龄期女性肿瘤患者的生育力保存方案。方法回顾性分析2017年12月至2019年9月在安徽医科大学第一附属医院生殖中心生育力保存库进行生育力保存的14例肿瘤患者的临床治疗资料,并结合相关文献,探讨合适的生育力保存方案。结果 14例女性肿瘤患者中,已婚和未婚女性各7例,平均年龄(27.35±1.52)岁,包括8例乳腺癌患者、4例卵巢交界性肿瘤患者,以及结肠癌、子宫内膜癌患者各1例。14例患者均未进行促排卵治疗,仅经腹腔镜手术取部分卵巢皮质组织进行冷冻保存。7例患者体外获取的未成熟卵母细胞经体外成熟(IVM)技术于体外培养得到成熟卵母细胞,平均成熟率为54.05%(40/74);其中2例患者(未婚)进行了卵母细胞冻存,5例患者(已婚)进行了胚胎冻存,平均冻胚(3.2±1.92)枚。结论卵巢组织、卵母细胞及胚胎冷冻技术均可用于育龄期女性肿瘤患者的生育力保存。     

利用冷冻胚胎建立人胚胎干细胞系

目的利用辅助生殖技术中废弃的冷冻胚胎建立人胚胎干细胞系。方法将体外受精一胚胎移植周期中废弃的冷冻胚胎解冻,序贯培养至囊胚,分离出内细胞团,接种至混合饲养层,进行传代培养,对可连续传代的细胞系进行鉴定。结果共收集废弃冷冻胚胎44枚,形成囊胚15枚,原代接种内细胞团10枚,其中一枚已稳定传至25代,目前生长状态良好,经鉴定证实为胚胎干细胞。结论利用辅助生殖技术中废弃的冷冻胚胎,可成功建立人胚胎干细胞系。     

人类精子库及冻精人工授精的初步经验

本文对我院人类精子库的建立及应用做了初步报道。较详细地介绍了自制的、简便的精液冷贮用设备,精液保护剂的配制,降温冻贮过程及其复温使用方法。从1985年1月至1986年2月我库用冷冻精液实施人工授精118例,确知怀孕及生育者33例。文章结合我国国情,对精子库的建立、管理、应用以及供精人工授精涉及的问题进行了讨论。     

实验性大鼠胚胎脊髓移植对损伤脊髓影响的观察

目的 建立了一个胚胎脊髓（ｆｅｔａｌ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ）组织的低温保存方法笔一个损伤移植模式。方法 通过病理学、组织化学和免疫组织化学的研究,选用胎龄１４天的Ｗｉｓｔａｒ大鼠,分离胚胎脊髓,逐步降温,最后置于液氮中保存。１５天后取出,快速复温,并植入损伤大鼠脊椎内。全部动物于伤后８周处死。结果 经过低温保存的移植物能够在异体脊髓内存活并与宿主组织融合,其在损伤移植区的胶质细胞增生少于对照组。     

睾丸精子冷冻复苏对ICSI助孕结局的影响

目的探讨睾丸精子冷冻复苏对ICSI助孕结局的影响。方法回顾性分析2010年1月至2014年9月因梗阻性无精子症在本院采用睾丸精子行ICSI助孕的214个周期的临床资料,其中107个周期采用冷冻复苏的睾丸精子(冻精复苏组),另外107个周期采用新鲜睾丸精子(新鲜精子组)。比较两组中女方的一般资料、受精率、卵裂率、可利用胚胎数、优质胚胎率,以及临床妊娠率。结果本研究中,107个周期冻存睾丸精子复苏均获成功;冻精复苏组与新鲜精子组行ICSI助孕后的受精率[(76.91±18.24)%vs.(75.35±20.62)%]、卵裂率[(94.69±5.29)%vs.(95.37±4.48)%]、可利用胚胎数[(4.67±2.52)vs.(4.20±2.75)个]、优质胚胎率[(64.47±26.08)%vs.(60.34±27.39)%]及临床妊娠率(52.24%vs.50.63%)比较均无显著性差异(P0.05)。结论睾丸精子冷冻复苏对ICSI助孕结局并无显著影响。     

人类精子冷冻保存中交叉污染的风险及防范

精子的冷冻已在世界范围内得到广泛应用,但是对于保存的精子是否会受到液氮中病原体的污染报道较少。尽管在精子和胚胎的冷冻保存过程中,发生交叉污染的机会很小,但仍是一个实际存在的风险。对于人类精子库来说,应在工作的所有环节,包括精液的收集、冷冻、储存、运输、解冻以及对冻精的临床使用过程都应采取相应的措施来减少污染。     

体内、外成熟卵母细胞的胚胎冷冻-复苏后发育能力的比较

目的比较体外与体内成熟卵母细胞受精后第3天胚胎冷冻-解冻后的发育能力。方法体外成熟组的胚胎来源于在本生殖中心行未成熟卵体外成熟(IVM)治疗的患者(6例)。体内成熟组为同期行常规卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗的患者(22例)。两组患者胚胎移植后多余的胚胎按慢冻法进行冷冻保存。冻胚移植周期时冷冻胚胎按快融法解冻,体外培养约24 h后行胚胎移植。结果体外与体内成熟卵母细胞的胚胎冷冻-解冻后的复苏率、解冻培养后的可移植胚胎率以及临床妊娠率均无显著差异。结论人未成熟卵母细胞在体外培养系统中完成细胞核和细胞质成熟的同时,细胞膜的成熟可能也较充分,受精后的胚胎能够一定程度地耐受冷冻-解冻过程中面临的各种损伤,复苏后,仍能继续发育和着床并获得妊娠。     

两种方法冷冻保存异体髌腱重建膝关节交叉韧带比较

目的 观察程序冷冻液氮保存和-80℃深低温保存方法处理同种异体髌腱后重建膝关节交叉韧带的愈合过程并比较其差异.方法 将兔的1/2骨-髌腱-骨复合体经程序冷冻液氮保存和-80℃深低温保存2周后,观察冻存变化差异并行同种异体移植重建前交叉韧带,分别于术后3周和8周观察细胞毒反应、细胞活性、最大载荷和形态学变化等指标进行比较并与自体移植组对照. 结果 ①经程序冷冻液氮保存方法处理后,髌腱的最大载荷无明显下降,细胞活性得到了较好的保存,组织学观察冷冻损伤较-80℃深低温保存方法轻微.②程序冷冻液氮保存处理的移植物在术后未表现明显的排斥反应,且免疫反应随时间的推移而下降.③移植后3周,各组移植物的最大载荷差异无显著性,移植后8周,程序冷冻液氮保存组移植物的最大载荷优于-80℃深低温保存组,但和自体移植组相近.④和-80℃深低温保存组相比,程序冷冻液氮保存组的移植物在术后的愈合过程和组织学行为更接近于自体移植组.结论 ①经程序冷冻液氮保存和-80℃深低温保存方法冻存的兔异体髌腱重建膝关节交叉韧带后愈合过程和自体韧带移植重建过程相似.②程序冷冻液氮保存法优于传统的-80℃深低温保存法.     

Caspase抑制剂对冻存脐血造血干/祖细胞的保护效应

脐血因其独特的生物学特性、资源优势及临床移植适应证广泛，已成为造血干细胞移植（HSCT）的细胞来源之一。如何将脐血造血干／祖细胞进行有效的保存和复苏，降低其冻存损伤，是HSCT治疗的关键环节之一。随着对低温冻存理论的深入认识，人们发现细胞凋亡参与了细胞冷冻损伤的分子机制，造血干细胞凋亡严重损害其克隆形成能力和移植后的造血重建功能。     

玻璃化技术冻贮小鼠桑椹胚的研究

胚胎冷冻保存(embryo cryopreservation)在体外受精一胚胎移植(IVF-ET)中显得日益重要，克服冷冻损伤，提高复温后胚胎的存活率，是胚胎冻存面临的最主要问题。玻璃化技术(vitrification)是近10多年来发展起来的一项胚胎冻存新技术。本实验采用玻璃化技术，以NIH小鼠的优质桑椹胚进行冻存，与常