乙型肝炎病毒标志物检测的临床意义

乙型肝炎病毒标志物(HBV-M)是诊断乙型肝炎(乙肝)较准确而可靠的依据,按检测途径来分,其指标大致有免疫学与分子生物学两类,兹分述如下。 1 血清免疫学标志物 1.1 表面抗原(HBsAg)和表面抗体(抗-HBs) HBsAg存在于乙肝病毒颗粒的外壳,若在受试者血清中可以检出,多表示体内存在HBV,所以是确定受试者感染HBV的标志。 HBsAg出现的早晚和它在体内被清除的早晚与感染剂量、感染方式以及病情轻重有关。如果受试者因创伤或输血而     

急慢性丙型肝炎患者进行乙型肝炎病毒标志物检测的临床意义

采用ＥＩＡ、ＰＣＲ技术对急、慢性丙肝患者血清标本进行乙型肝炎病毒标志物、丙型肝炎不同功能区抗体和ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ检测。结果：排除甲、戊型肝炎的急、慢性丙肝的乙肝感染率的７４．６７％和５９．０９％均以ＨＢｃＡｂ和ＨＢｓＡｂ为主,其他出现,有乙肝三内肝ＡＬＴ值较高。ＨＢＶＤＮＡ检出率较低,且与ＨＣＶＲＮＡ极少同时检出;急、慢性丙肝ＨＣＶＲＮＡ检出率有乙肝旮明显偏低。有乙肝感染时急性丙肝中Ｅ     

2种方法检测乙型肝炎病毒标志物的比较

我国是乙型肝炎感染的高发区。据流行病学调查,我国一般人群的乙肝表面抗原(HBsAg)阳性率为7.18%,远高于美国的乙肝表面抗原(HB-sAg)阳性率(0.3%)。ELISA法是我国目前实验室检测HBsAg的常用方法,但由于干扰因素较多,一些弱阳性标本的结果不够稳定,给结果的判定带来一定的困扰,随着生物学技术的发展,核酸检测技术受到人们的重视,该法具有灵敏度高、特异性     

时间分辨荧光免疫法定量检测HBV标志物的临床价值

乙型肝炎病毒血清标志物（HBV-M）的检测除传统的ELISA法外．近年来发展较快的一种定量的高灵敏度的时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）正被临床广泛应用。为评价TRFIA定量检测HBV-M的临床价值，我们应用TRFIA法与ELISA法对HBV-M5项指标分别进行定量和定性检测，以了解TRFIA的敏感性和特异性，同时采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测其HBV DNA，以了解HBV-M各指标动态变化的临床意义，现报告如下。     

血吸虫病时间分辨免疫荧光检测试剂盒的研制和效能评价

目的研制日本血吸虫SjP38的时间分辨免疫荧光分析(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂盒,并评价其效能。方法将抗SjP38的9G7单克隆抗体作为捕获抗体包被96孔板,Eu~(3+)标记1A6单克隆抗体作为检测抗体,研制SjP38 TRFIA试剂盒,并评价试剂盒的准确度、灵敏度、精密度、稳定性以及与病原学检测方法的符合率等指标。结果自制试剂盒准确度好,线性范围为2~1 250 ng/ml,最低检出浓度为0.14 ng/ml;精密度良好,分析内精密度为3.6%~4.6%,分析间精密度为5.1%~6.7%。定性试验表明该试剂盒可在4℃稳定半年,37℃稳定7 d。自制试剂盒与病原学检测方法的阳性符合率为95%,阴性符合率为100%。结论所研制试剂盒的各项性能及检测指标均达到临床检验的要求,但临床推广使用还有待进一步的验证。     

甲状腺素运载蛋白时间分辨免疫荧光试剂盒的制备和效能评价

目的制备甲状腺素运载蛋白(transthyretin,TTR)的时间分辨免疫荧光(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂盒并对其性能进行评价。方法将抗TTR的4H2单克隆抗体作为包被抗体包被至96孔板,用Eu^3+标记3E4单克隆抗体作为检测抗体,制备双抗体夹心TRFIA试剂盒,应用该试剂盒对42例川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿及13名健康儿童的血清进行检测,以稀释回收率、准确度、精密度、稳定性等指标对试剂盒的效能进行评价。结果该研究制备的TTR TRFIA试剂盒与Western blot法同时检测42份KD临床样本和13份健康样本,两方法的结果符合率为100%,特异性强。试剂盒的最低检出浓度为0.05μg/ml,稀释回收率为88.00%~111.00%,分析内精密度为8.01%~9.17%,分析间精密度为8.88%~11.82%。稳定性实验表明该试剂盒可在4℃稳定保存6个月,37℃稳定保存7 d。结论该研究制备的TTR TRFIA试剂盒具有准确性高、方便快捷等优点,适用于大批量临床KD血清样品的TTR检测,为快速区分丙种球蛋白敏感型和无反应型的KD患儿提供了方法。     

狂犬病毒核蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒研制

目的 研制狂犬病毒（RV）核蛋白（NP）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立RV NP TRFIA 试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果 试剂盒准确度好,线性范围为5～2 500 mEU/mL,灵敏度为1.018 mEU/mL,精密度良好,分析内精密度为2.7%～9.3%,分析间精密度为3.5%～12.2%。将15份疫苗样品用本法与国内常用ELISA检测试剂盒同时检测,其相关系数r为 0.85,稳定性试验表明试剂可以在4 ℃稳定半年,37 ℃稳定7d。结论 试剂盒各项已检测指标达到临床检验要求,有望替代同类产品进一步作临床检测试验。     

Detection of anticardiolipin antibody IgG by time-resolved fluoroimmunoassay

In an effort to improve the quantitative detection of anticardiolipin antibodies (aCL) IgG so as to classify patients correctly as antiphospholipid syndrome (APS) positive, we developed a new immunoassay based on a sandwich time-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA) using the complex of cardiolipin plus bovine β₂GPI as antigen and Eu³⁺-labeled rabbit antihuman IgG as conjugate. The precision, sensitivity, specificity, and stability of the assay were evaluated, and comparison with the classical ELISA was also made. The aCL IgG TRFIA kit we established had a wider detectable range than three commercial ELISA ones from different manufacturers when a specimen was diluted, with strong positive result from 1:12.5 to 1:204,800. The average intra-assay and inter-assay CVs detected by the aCL IgG TRFIA was 3.14 and 3.70?%, respectively. The sensitivity was 0.1?GPL?U/ml, and the clinical diagnostic specificity was 98?%. The established assay kit also behaved better in stability than the commercial ELISA ones. Additionally, the immunoassay we established correlated well with the ELISA, and the correlation coefficient was 0.975. We thus conclude that the TRFIA we developed for aCL IgG detection gives promise to a more sensitive and reliable diagnosis of APS and has potential value for large-scale screening programs.     

时间分辨荧光免疫分析法测定抗环瓜氨酸肽抗体方法学的建立

目的 建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体的时间分辨荧光免疫分析方法.方法 以CCP重组抗原和鼠抗人IgG抗体分别作为固相抗原和Eu3+记抗体,如果样本中存在抗CCP抗体,则形成CCP重组抗原-抗CCP抗体-Eu3+标记鼠抗人IgG抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中抗CCP抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(TRFIA)法检测抗CCP抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对32例阳性血清标本分别利用TRFIA及酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测抗CCP抗体,分析其相关性;收集50名健康献血者,32例系统性红斑狼疮,26例干燥综合征,10例硬皮病,20例混合性结缔组织病,18例多发性硬化症,利用TRFIA检测其血清中的抗CCP抗体,计算临床特异度.TRFIA与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用Mc Nemar检验.结果 TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(20份)精密度分别为2%、3%和4%,批间(8份)精密度分别为3%、4%和7%;平均回收率为101%;方法的灵敏度为1.0 U/ml;TRFIA法检测健康献血者、系统性红斑狼疮、干燥综合征、硬皮病、混合性结缔组织病及多发性硬化症患者血清中抗CCP抗体,临床特异度分别为98%、97%、96%、100%、95%、100%;2种方法检测的相关系数为0.989;TRFIA比ELISA的检测范围更宽,稳定性能好.结论 首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的抗CCP抗体,对早期诊断RA及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用.     

AFP/CEA双标记时间分辨荧光免疫分析试剂的研制及性能鉴定

目的研制甲胎蛋白（AFP）及癌胚抗原（CEA）的双标记时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）试剂,并鉴定其性能。方法将抗AFP单克隆抗体（E014）与抗CEA单克隆抗体（3E6）混合包被96孔板,用钐标记抗AFP单克隆抗体（E010）,铕标记抗CEA单克隆抗体（S001）,用双抗体夹心一步法建立AFP/CEA TRFIA试剂,测定其线性相关性、灵敏度、精密度、回收率、特异性,并与对应的单标记进口试剂进行比较。结果 AFP分析灵敏度为0.3 U/ml,线性范围为0.3~800 U/ml,平均回收率为99.8%,分析内和分析间变异系数分别为2.1%~5.8%、4.1%~8.7%;CEA分别为0.2 ng/ml、0.2~400 ng/ml、100.3%、2.4%~5.6%、4.8%~9.8%。该试剂与对应的单标记进口试剂的相关系数分别为0.99、0.98。结论成功研制了AFP/CEA双标记TRFIA试剂,其性能均达到临床检测要求,可替代国内外的单标记试剂。     

时间分辨荧光免疫分析法检测C反应蛋白方法的建立及应用

目的 制备4,7-（氯磺酸基苯基）-1,10-菲啰啉-2,9-二羧酸（BCPDA）鳌合剂,并以其建立时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术检测C反应蛋白（CRP）的方法.方法 用二甲基甲酰胺（DMF）溶解自制BCPDA后测定其吸光度;以BCPDA分别标记铕（Eu3＋）、CRP多克隆抗体制备CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3＋荧光标记物;以纳米磁珠为固相载体包被CRP单克隆抗体,分别加入CRP抗原及CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3＋,应用六合一板式检测仪检测CRP荧光强度.结果 自制BCPDA吸收光谱为220～360 nm, 用337 nm 的紫外光激发得到CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3＋的荧光发射光谱, 利用TRFIA可检测到0.1 mg/L 的CRP抗原.结论 本研究成功制备CRP多克隆抗体-BCPDA-Eu3＋荧光标记物并建立了TRFIA检测CRP的方法,此为临床检测CRP提供了新的思路,亦为TRFIA的推广应用提供了理论依据.     

The serological diagnosis of human hydatid disease by time-resolved fluoroimmunoassay

The use of a new immunoassay, time-resolved fluoroimmunoassay (TR-FIA), in the diagnosis of human hydatid disease has been evaluated. This technique, which is based on the labelling of antibodies with europium (Eu), was compared with a well-established method, the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Of 102 patients with hydatid disease, 97 (95.1%) were positive according to TR-FIA and 83 (81.4%) according to ELISA. The rate of non-specificity for other parasitic infections (n = 206) was 8.7% for TR-FIA and 17.5% for ELISA. It is concluded that TR-FIA is more sensitive and more specific than ELISA in the diagnosis of human hydatid disease.     

乙型肝炎血清标志物定量检测在临床应用中的新角色

确定HBV感染状态,评估预后及监测抗病毒疗效是乙型肝炎（乙肝）防治的核心内容,经典的乙肝五项定性检测已不能对上述临床实践提供有效支持;HBV DNA定量检测使乙肝实验诊断水平显著提高,但存在一定的局限。乙肝五项定量检测有可能弥补现有技术的不足,使HBV实验室检测更为全面和高效。临床研究表明,乙肝五项的定量指标与HBV感染自然史及肝纤维化进程存在相关性,在干扰素和核苷（酸）类似物的治疗中,其水平的变化不仅能反映治疗效果,还能较好地预测治疗终点,与HBV DNA定量联合使用有望形成完善的HBV感染临床管理体系。本文通过对相关内容进行综述,了解该领域的发展现状,以探讨其潜在的临床价值。     

时间分辨荧光免疫分析法和酶联免疫吸附实验法测定乙型肝炎病毒大蛋白的方法学比较

目的对时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测乙型肝炎患者血清中病毒大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,HBV-LP)进行方法学比较。方法收集30例正常体检血清标本作为阴性对照和150例慢性乙型肝炎患者血清标本,利用ELISA法检测HBV-LP,将其中70例阳性标本作为阳性样本,70例阴性标本作为阴性样本,再分别采用TRFIA法检测HBV-LP,对二者的灵敏度、特异度、一致性、检测线性范围、精密度、相关性及两种试剂盒的稳定性进行比较。其中TRFIA与ELISA结果不一致的12例标本采用PCR法进行验证。结果TRFIA检测HBV-LP的最小测定值为0.1 ng/ml,ELISA检测HBV-LP的最小测定值为2.5 ng/ml,二者的特异度均为100%。TRFIA和ELISA检测HBV-LP的Kappa值为0.83。12例ELISA和TRFIA检测不一致的标本,经PCR验证后有10例HBV DNA103拷贝数。TRFIA试剂检测的线性范围在0.625~10 252 ng/ml之间,ELISA试剂盒检测的线性范围在5~1 281.6 ng/ml。TRFIA法检测高、中、低3个浓度水平的批内CV平均为6.10%,ELISA法的批内CV平均为8.98%。TRFIA批间CV平均为6.91%,ELISA的批间CV平均为10.45%。TRFIA试剂盒的结合下降率为6.61%,ELISA试剂盒的结合下降率为23.59%。结论 TRFIA与ELISA具有高度的一致性,但是两者相比,前者有更高的灵敏度和精密度,且TRFIA试剂盒的稳定性更好。     

乙型肝炎病毒血清学标志物定量检测方法比较及其应用

随着免疫学和分子生物技术的迅速发展,检测HBV血清学标志物(HBV-M)的方法不断更新[1].目前常用的免疫学方法主要有酶联免疫吸附法(ELISA),固相放射免疫法及免疫荧光法[2].放射免疫分析虽然具有高灵敏度的优点,但其不可避免的放射性对操作者的身体是有害的.胶体金法是一种优化的方法,其优点是速度快,10 min即可判读结果,但其同样只能做定性检测,且准确率低于ELISA,对于弱阳性的表现度较差,容易造成弱阳性标本的漏读和误读,性价比与准确度方面都略逊于传统的ELISA[3].因此,现主要介绍临床应用较多的几种方法.