电刺激小脑顶核对缺氧缺血性脑损伤新生鼠海马神经胶质细胞的影响

目的：探讨电刺激小脑顶核对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠海马神经胶质细胞的影响及可能机制。方法：新生 7 日龄 Sprague-Dawley 大鼠 180 只随机分为假手术组（对照组）、模型组及电刺激组,每组各 60 只。参照 Rice-Vennucci 法制备 HIBD 模型,电刺激组大鼠于造模后 24 h 开始给予电刺激治疗,每日1次,每次30 min,对照组及模型组不予电刺激,相应时段仅予捕捉固定。各组分别于电刺激 3 d、7 d、14 d、21 d取海马组织,免疫组化观察胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达;电镜观察胶质细胞超微结构变化。结果：免疫组化显示模型组及电刺激组 GFAP 的表达在 3 d 时较对照组即有升高,7 d 达到高峰,在14 d、21 d 时表达仍较对照组高,电刺激组 GFAP 的表达在各时间点均较模型组低;电镜发现模型组神经胶质细胞水肿明显,细胞器减少,电刺激组较之肿胀较轻,且细胞器完整。结论：电刺激可抑制神经胶质细胞的过度增生,减轻缺氧缺血后细胞的结构性损伤。     

碱性成纤维细胞生长因子对新生鼠缺氧缺血性脑损伤胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后海马胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。方法通过结扎并剪断7日龄新生Wistar大鼠右侧颈总动脉，吸入8％氧气和92％氮气2h制备新生鼠HIBD模型，设假手术组、生理盐水对照组、bFGF治疗组。通过免疫组织化学方法和计算机图像分析技术检测3组大鼠不同时点（术后d4、7、10、17、24）海马CAI区GFAP表达强度变化。结果假手术组海马内GFAP阳性细胞数量和染色强度术后d7达高峰：对照组、治疗组GFAP表达较假手术组增多，治疗组增多更明显，术后d10达高峰，GFAP阳性细胞主要分布于海马CAI、CA3区．术后d4、10、17组比较差异有显著性（P均〈0．05）。结论1．新生鼠HIBD后脑缺血易损伤区GFAP表达增加，可能与脑损伤后神经细胞再生有关；2．外源性给予bFGF可增强新生鼠脑缺氧缺血后中枢神经系统GFAP表达，在神经细胞损伤的修复中发挥一定保护作用。     

外周应用神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血脑损伤的保护作用

神经生长因子（NGF）对神经细胞的发育、成熟、分化及存活起着重要的作用。外周给予NGF治疗中枢神经系统疾病时，由于血脑屏障的阻碍作用，使其临床应用受限。本研究旨在探讨NGF对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）是否存在保护作用，为其治疗新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）提供理论依据。     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤脑组织Nogo-A mRNA和Nogo-A蛋白表达及意义

Nogo—A是最近发现的一种髓鞘源性神经生长抑制蛋白,它已成为当前研究中枢神经再生的新热点,并有望成为解开中枢神经系统（CNS）再生之谜的一把金钥匙。本实验旨在检测HIBD新生大鼠脑组织Nogo-A mRNA和Nogo-A蛋白表达的变化,以探讨缺氧缺血脑损伤（HIBD）时抑制坏死神经元再生的分子机制,为HIBD后神经元的损伤修复机制及治疗干预提供实验室资料及理论依据。     

亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤自由基影响的研究

目的 研究亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后自由基的影响。方法 7日龄大鼠行左侧颈总动脉结扎后吸入8%氧气2h,制成缺氧缺血性脑损伤模型。动物随机分成五组：假手术组、缺氧缺血组、缺氧缺血后30min给予亚低温组、缺氧缺血后1h给予亚低温组、缺氧缺血后3h给予亚低温组。脑皮质细胞匀浆用于测定丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 缺氧缺血组MDA含量明显高于假手术组,而亚低温各组MDA含量均低于缺氧缺血组,而且亚低温应用越早者MDA含量减少越明显。结论 亚低温可以通过减少自由基的产生发挥对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。     

细胞红蛋白基因在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时的表达

目的 探讨缺氧缺血性脑损伤时脑中细胞红蛋白基因的表达及变化.方法 将出生7d的SD大鼠50只分成5组,其中实验组在手术后制成脑损伤模型,并且在血流阻断4、12、24、48 h取脑;对照组为假手术组,术后即取脑.设计细胞红蛋白基因引物,提取脑组织总RNA,进行PCR.以GraphPadPrism统计软件包的One-way单因素方差分析进行数据统计分析.结果 设计的新生大鼠细胞红蛋白cDNA序列引物可靠,扩增产物与设计相符.实验组细胞红蛋白mRNA的表达在缺血4h开始升高,24 h达到高峰,48 h开始下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后细胞红蛋白mRNA表达增强,提示细胞红蛋白可能在脑缺氧的适应性调节过程中起重要作用.     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经元特异性烯醇化酶的影响

目的 研究神经生长因子（NGF）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的作用。方法 应用新生7日龄SD大鼠制备HIBD模型,于缺氧缺血（HI）后即刻腹腔注射NGF 100U／只或等量生理盐水,用放射免疫法测定缺氧缺血后24、48h血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）水平,用免疫组化法检测脑组织NSE蛋白表达变化。结果 NGF可降低血清NSE,增加左侧（缺血侧）脑组织中NSE蛋白水平表达。结论 腹腔注射NGF对HIBD具有保护作用。     

丹参对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤远期智能的影响

目的 探讨丹参对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后远期智能的影响。方法 建立新生大鼠HIBD模型,给予丹参注射液150mg/10g腹腔内注射,采用迷宫实验观察远期学习记忆能力的改变。结果 丹参组学习记忆能力明显好于HIBD组,表现在达标所需反映次数明显低于HIBD组(P<0.05),而正确率却明显高于HIBD组(P<0.05)。丹参组大鼠脑部改变仅见轻微的脑皮层萎缩,HIBD大鼠脑部可见皮层萎缩、液化及空洞形成,病理组织学可见筛状软化灶形成、胶质结节和钙化灶形成等。结论 丹参可预防和治疗新生大鼠HIBD所致的智能障碍。     

神经生长因子对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后神经再生的影响

目的 探讨外源性神经生长因子(NGF)对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经再生的影响.方法 通过7日龄新生Wistar大鼠制作HIBD模型,设置假手术组、HIBD对照组、NGF治疗组,应用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记新生神经细胞,免疫组化方法和计算机图像分析技术检测不同时点(术后4、7、14、21 d)海马齿状回(DG)巢蛋白(nestin)表达、BrdU阳性细胞数的变化.结果 各时点HIBD对照组nestin、BrdU阳性细胞数较假手术组增加(P均＜0.05);各时点NGF治疗组nestin、BrdU阳性细胞数较假手术组和HIBD对照组增加(P均＜0.01).结论 早期给予外源性NGF治疗可促使新生鼠脑缺氧缺血后中枢神经系统nestin、BrdU的表达增加,NGF治疗可促进受损神经细胞的增殖再生,在神经细胞损伤的修复巾发挥一定的保护作用.     

褪黑素对脂多糖致脑损伤幼鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白表达的抑制作用

目的 探讨褪黑素(MT)对脂多糖(LPS)致脑损伤幼鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响及意义.方法 160只1月龄SD大鼠随机分为LPS组、9 g/L盐水组(NS组)、MT保护A组(MT加LPS,提前15 min予MT)及MT保护B组(MT加LPS,即时给予MT)4组,每组40只.各组均按观察时间分为24、48 h2个时间点,每组各时间点均为20只,其中均有10只不注射伊文思蓝(EB),观察至相应时间点取其脑组织.以甲酰胺法检测其脑组织EB水平,免疫组织化学染色法检测其GFAP表达,采用上海山富数字图像分析系统进行半定量分析.结果 LPS组脑组织EB水平、GFAP阳性区面积与NS组各相应时间点比较差异均有统计学意义(Pa<0.01);MT保护组EB水平、GFAP阳性区面积均显著高于NS组(Pa<0.01);MT保护组EB水平、GFAP阳性区面积均显著低于LPS组(Pa<0.01);MT保护组组间比较无显著性差异(P>0.05).结论 LPS可诱导内毒素致大鼠感染性脑损伤GFAP的表达;MT可能在治疗感染性脑损伤中发挥作用.     

线粒体自噬对新生大鼠缺氧缺血脑损伤的影响

目的了解缺氧缺血脑损伤的动物模型中线粒体自噬情况,探讨其在缺氧缺血脑损伤中的作用。方法将120只新生7日龄Sprague-Dawley大鼠分为假手术组、缺氧缺血脑损伤(HIBD)组、自噬抑制剂干预组(3MA组)。HIBD组行右侧颈总动脉结扎后置于低氧仓(8%氧气和92%氮气)2.5 h,3MA组腹腔注射2μL 3MA 30 min后再进行结扎和低氧处理,假手术组不予结扎和低氧处理。在造模后提取各组单细胞悬液,用Mitotracker标记线粒体、Lysotracker标记自噬小体、LC3标记自噬进行免疫荧光共定位观察线粒体自噬情况;荧光探针JC-1染色后,采用流式细胞仪检测线粒体膜电位。TTC染色法检测脑梗死灶大小。提取皮质神经元中的细胞浆蛋白,Western blot法检测线粒体自噬相关蛋白的表达情况。结果与假手术组相比,HIBD组线粒体膜电位明显降低(P0.05),线粒体自噬增加(P0.05),线粒体分裂相关蛋白Drp1、Fis1的表达升高,线粒体外膜蛋白受体Tom20与内膜蛋白受体Tim23的表达降低(P0.05);3MA组膜电位比HIBD组降低更为明显(P0.05),但线粒体自噬程度明显减少(P0.05)。3MA组大鼠脑组织梗死程度较HIBD组明显增加(P0.05)。结论 HIBD能够增加线粒体自噬的发生,抑制线粒体自噬会加重新生大鼠HIBD的损伤程度。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织小RNA表达的变化

目的：观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）皮层小RNA（microRNA,miRNA）差异表达,以研究其在HIBD的病理生理中的作用。方法：建立新生大鼠HIBD模型14 d后,取皮层脑组织,miRNA表达谱芯片检测miRNA差异表达。实时定量PCR检测miR-126-26a、-674-5p、-21、-25、-290和miR-124、-125b-5p、-9a等9个miRNA。结果：miRNA表达谱芯片结果提示,与对照组比较,HIBD大鼠皮层脑组织中27个已知miRNA表达上调2倍以上;60个表达下调2倍以上。实时定量PCR检测所选择的9个miRNA结果与miRNA芯片结果具有同样趋势。结论：HIBD模型大鼠miRNA表达有明显差异,这些改变可能在HIBD的病理生理中起着重要作用。［中国当代儿科杂志,2010,12（5）：373-376］     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤血管内皮生长因子表达与新生血管形成关系的研究

目的观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后不同时间脑组织中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达以及血管新生情况，探讨HIBD时脑组织VEGF蛋白表达与血管新生之间的相互关系。方法7日龄Wistar大鼠176只随机分成实验组（n=88）和对照组（n=88），两组分别在缺氧缺血（HI）后0、4、8、12、24、48、72h及7、14、21、28d（每个时间点8只）应用免疫组织化学染色方法检测VEGF蛋白的表达及血管新生情况。结果正常7日龄Wistar大鼠于脑组织多种细胞的胞浆中可见VEGF表达，9日龄时达高峰；HIBD后VEGF蛋白于HI后4h表达逐渐增加，于48h达高峰后逐渐下降，并且于HI后4h～14dVEGF表达明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。正常新生大鼠脑皮质中新生毛细血管数各时间点平均为3～8条／HP；而实验组于HI后3～28d的新生血管数为10～12条／HP，显著多于对照组（P〈0．01），并于HI后4～72hVEGF表达程度与新血管形成之间呈显著正相关（r=0．928，P〈0．05）。结论正常7～35日龄新生大鼠脑组织内有不同程度的VEGF蛋白表达。HI可诱导VEGF表达增加：VEGF参与了HIRD后腩组织新生血管的形成。     

他克莫司对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马GAP-43表达的影响

目的：新生儿缺氧缺血性脑损伤（HIBD）是新生儿期常见病,具有较高的致死率和神经系统致残率,目前尚无有效干预措施。新型的免疫抑制剂他克莫司（FK506）已在成年动物缺血性脑损伤模型中显示神经保护作用,目前尚无新生动物模型研究。该研究旨在探讨FK506对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马生长相关蛋白（GAP-43)表达的影响。方法：7日龄Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、HIBD组和FK506干预组,HIBD组和干预组制备HIBD模型,干预组缺氧后即刻腹腔内注射FK506 1 mg/kg,连续注射3 d。大鼠分别于缺氧后24 h,72 h,7 d,14 d 断头取脑,切片行苏木精-伊红染色及免疫组化Envision法检测海马GAP-43的表达。结果：同HIBD组相比,干预组神经细胞灶性坏死减少。HIBD组海马GAP-43的表达较假手术组增加,在缺氧后72 h至 14 d 差异有显著性意义（P<0.05）。干预组海马GAP-43的表达在缺氧后7 d达到高峰,与HIBD组相比,在缺氧后72 h、7 d表达增加,差异有显著性（P<0.05）。结论：FK506可能对HIBD新生大鼠具有神经保护作用。 ［中国当代儿科杂志,2009,11（1）：65-68］     

雄激素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织芳香化酶和神经生长因子表达的影响

目的：观察雄激素对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠皮质及海马区芳香化酶细胞色素P450（AROM）与神经生长因子（NGF）表达及脑组织超微结构的影响，探讨雄激素的神经保护作用机制。方法：96只7日龄Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、HIBD组和雄激素组，每组32只。雄激素组和HIBD组制作HIBD模型。缺氧缺血（HI）后两组动物分别给予腹腔注射丙酸睾丸酮(25 mg/kg)和等量的花生油。于HI后24 h、72 h、7 d、10 d观察各组海马和皮层神经元超微结构变化及AROM和NGF表达的变化。结果：电镜下可见HIBD组神经细胞水肿，细胞器减少，核肿胀，染色质凝集成块状，线粒体减少、肿胀，可见大量凋亡细胞。与HIBD组相比，雄激素干预组神经细胞排列较整齐，神经元核膜完整，染色质均匀, 细胞凋亡少见，神经元轴突再生明显。HIBD组HI后24 h NGF与AROM表达出现阳性反应，HI后72 h 明显增多，7 d达高峰，10 d后开始下降，但仍高于假手术组。雄激素组皮层和海马NGF与AROM的表达在HI后72 h、7 d 和10 d 明显高于HIBD组和假手术组，均有统计学意义（P<0.01）。结论：雄激素干预可增加脑组织NGF和AROM的表达，促进神经细胞形态的恢复及神经元轴突再生，减少细胞凋亡，具有明显的神经保护作用。     

鸢尾素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的作用及机制

目的 探索鸢尾素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的作用和机制。方法 将248只7日龄Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、鸢尾素干预低剂量组及高剂量组（n=62）。模型组和鸢尾素干预组大鼠行右侧颈总动脉结扎后再行缺氧处理,建立缺氧缺血脑损伤模型。假手术组只分离右侧颈总动脉而不做结扎和缺氧处理。高、低剂量组大鼠分别于侧脑室注射0.15 μg、0.30 μg重组鸢尾素多肽,模型组及假手术组注射等量PBS。采用水迷宫实验检测各组大鼠神经行为学差异;采用TTC染色、苏木精-伊红染色和TUNEL染色检测各组大鼠脑组织病理改变;采用Western blot检测凋亡相关分子cleaved-caspase-3（CC3）及BCL-2/BAX的表达差异。结果 与假手术组相比,模型组大鼠潜伏期延长,穿越平台次数减少（P < 0.05）;高剂量组大鼠潜伏期较模型组缩短,穿越平台次数较模型组增加（P < 0.05）。与假手术组比较,模型组大鼠右侧大脑半球出现大面积梗死,细胞核固缩及核裂解明显增多;高剂量组大鼠与模型组大鼠相比,右侧大脑半球梗死面积减少,细胞核固缩及核裂解减少。模型组大鼠右侧大脑皮层及海马区细胞凋亡率明显高于假手术组,高剂量组细胞凋亡率明显低于模型组（P < 0.05）。造模后24 h及48 h,假手术组CC3水平明显低于模型组（P < 0.05）;高剂量组CC3水平明显低于模型组,BCL-2/BAX值明显高于模型组（P < 0.05）。低剂量组上述实验指标及脑组织病理变化情况与模型组类似。结论 鸢尾素可以有效减轻新生大鼠缺氧缺血性脑损伤,且疗效与鸢尾素使用剂量有关,其作用机制可能与减少大脑皮层及海马区域细胞凋亡相关。     

神经生长因子对新生鼠缺氧缺血性脑损伤神经修复作用的研究

目的研究神经生长因子(NGF)对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后,神经干细胞巢蛋白(nestin)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其神经修复作用机制。方法7日龄新生SD大鼠84只,建立HIBD模型后,随机分为假手术组、缺氧缺血组及NGF干预组各28只。神经生长因子干预组腹腔内注射NGF(6000U/kg/d),缺氧缺血组同步注射等量生理盐水。采用免疫组化法检测NGF对新生大鼠HIBD后不同时间内Nestin及VEGF表达的影响。结果缺氧缺血性脑损伤后12、24h,3、7、14d,NGF干预组在大脑皮质、海马和室旁区的Nestin表达高于缺氧缺血组(P<0.05),且高峰提前到3d。HIBD后即刻、3、12、24h及3d,NGF干预组在大脑皮质、海马区VEGF的表达高于缺氧缺血组(P<0.05),且高峰提前到3h。结论NGF对HIBD具有神经修复作用可能是通过上调nestin及VEGF的表达而实现的。     

神经生长因子对新生鼠缺氧缺血性脑损伤神经修复作用的研究

目的研究神经生长因子（NGF）对新生鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后，神经干细胞巢蛋白（nestin）及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响，探讨其神经修复作用机制。方法7日龄新生SD大鼠84只，建立HIBD模型后，随机分为假手术组、缺氧缺血组及NGF干预组各28只。神经生长因子干预组腹腔内注射NGF（6000U／kgJd），缺氧缺血组同步注射等量生理盐水。采用免疫组化法检测NGF对新生大鼠HIBD后不同时间内Nestin及VEGF表达的影响。结果缺氧缺血性脑损伤后12、24h，3、7、14d，NGF干预组在大脑皮质、海马和室旁区的Nestin表达高于缺氧缺血组（P〈0．05），且高峰提前到3d。HIBD后即刻、3、12、24h及3d，NGF干预组在大脑皮质、海马区VEGF的表达高于缺氧缺血组（P〈0．05），且高峰提前到3h。结论NGF对HIBD具有神经修复作用可能是通过上调nestin及VEGF的表达而实现的。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠松果体钟基因表达的变化

目的：观察缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage, HIBD）新生大鼠松果体中CLOCK、BMAL1蛋白表达的变化,探讨钟基因表达异常在HIBD导致的昼夜节律紊乱中的作用。方法：72只7 日龄新生Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组与HIBD模型组,每组36只。采用改良Levine法建立HIBD模型,用Western blot方法测定两组新生大鼠术后0、2、12、24、36、48 h松果体中CLOCK、BMAL1蛋白水平。结果：HIBD模型组松果体的CLOCK及BMAL1蛋白表达水平在HIBD后48 h高于假手术组（P0.05）。结论：HIBD新生大鼠松果体中CLOCK和BMAL1蛋白在损伤48 h后有显著升高,提示两者可能共同参与缺氧缺血时昼夜节律紊乱的发生。