人E2F1蛋白的表达及与Sedlin蛋白共定位研究

目的 研究人E2F1 蛋白在真核细胞内的表达及其与 Sedlin 蛋白的共定位. 方法 构建 pcDNA3. 1-E2F1-FLAG真核表达质粒,然后瞬时转染至 HEK 293T 细胞内, Western blot法检测E2F1蛋白的表达;瞬时单转E2F1-FLAG和共转E2F1-FLAG+Sedlin-绿色荧光蛋白( GFP)至非洲绿猴肾细胞( COS7 )内,免疫荧光制片,荧光显微镜下观察E2F1-FLAG在细胞内的定位及其和Sedlin的共定位. 结果真核表达质粒 pcDNA3. 1-E2F1-FLAG 构建成功,且在HEK 293T细胞中能够成功表达,在COS7 细胞中主要定位在细胞核,且与Sedlin共定位于细胞核. 结论 人E2F1 在HEK 293T、COS7细胞中都能够正常表达,且与 Sedlin蛋白存在共定位现象,为进一步了解人E2F1的功能及其蛋白质相互作用提供了一定的细胞学基础.     

子宫内膜癌中MDM2和E2F-1的表达及与恶性程度的相关性

目的临床检测MDM2和E2F-1在子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中表达情况,探讨MDM2在子宫内膜癌组织中存在及临床意义。方法采用传统的免疫组织化学S-P法检测子宫内膜癌、正常子宫内膜组织中MDM2和E2F-1的表达情况并进行统计学分析。结果子宫内膜癌组织中MDM2和E2F-1表达定位于细胞核,其阳性表达率分别为73.33%(66/90)和56.67%(51/90),明显高于正常子宫内膜组织8.33%(3/36)和2.78%(1/36)(P0.05);在不同组织分级、不同病理分期、是否有淋巴道转移及不同浸润深度的子宫内膜癌中MDM2和E2F-1的表达差异均有统计学意义(P0.05),而在不同组织学类型子宫内膜癌中两者的表达差异均无统计学意义(P0.05)。在子宫内膜癌组织中MDM2和E2F-1表达呈明显正相关性。结论 MDM2和E2F-1在子宫内膜癌表达水平较高,可以反应出子宫内膜癌的恶性程度,并且免疫组织化学方法已经普及临床,检测方法简便、易用,为临床对子宫内膜癌预后判断具有一定的指导意义。     

BIRC5表达上调在鼻咽癌发病过程的研究

目的寻找在鼻咽癌发病过程中起着重要作用的关键癌基因或抑癌基因。方法利用基因芯片比较混合的鼻咽癌细胞株与非鼻咽癌组织之间的差异表达基因,并以生物信息学的方法,寻找癌基因和抑癌基因,以半定量RT-PCR和免疫组化分析鉴定重要癌基因或抑癌基因表达结果的可靠性。结果鼻咽癌细胞中表达上调比较明显的BIRC5基因在凋亡抑制信号通路中起着重要的作用,参与鼻咽癌的发病过程。半定量RT-PCR分析显示BIRC5mRNA在肿瘤组中表达明显上调;免疫组化检测78个非癌鼻咽组织和82个鼻咽癌组织,Mann-Whitneytest统计分析发现,与非癌鼻咽组织相比,BIRC5蛋白在鼻咽癌组织中表达明显上调（P〈0.001）。结论BIRC5参与了鼻咽癌发病过程,其表达上调可能促进鼻咽癌的发病,但是否与转移、预后及复发等临床参数相关还有待进一步研究。     

甲状腺乳头状癌中E2F1和P16蛋白的表达及意义

目的探讨E2F1和P16蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及二者的关系,为甲状腺乳头状癌的发生发展及预后判断提供一定的依据。方法应用免疫组化EnVision法检测78例甲状腺乳头状癌和51例正常组织中E2F1和P16蛋白的表达情况,分析二者与临床病理因素的关系。结果 E2F1和在P16蛋白甲状腺乳头状癌中的阳性率分别为78.2%和39.7%,正常组织中阳性率分别为5.9%和58.8%,二者在癌组织与正常组织间比较均有统计学差异(P<0.05);E2F1与P16蛋白阳性表达与年龄、性别及肿瘤的发病部位无关(P>0.05),与淋巴结转移及临床病理分期有关(P<0.05);E2F1和P16蛋白在甲状腺乳头状癌中的阳性表达呈显著负相关(r=-0.269,P<0.05)。结论 E2F1、P16蛋白与甲状腺乳头状癌的发生发展有关,E2F1阳性表达和P16表达缺失与患者的预后相关,二者联合检测可能更有利于评价患者的预后。     

颌骨软骨肉瘤中E2F—1表达及意义

目的分析E2F-1在颌骨软骨肉瘤中的表达及意义。方法利用免疫组化ABC法检测E2F-1在20例颌骨软骨肉瘤和8例骨软骨瘤中的表达。结果软骨肉瘤中E2F-1的阳性表达率为65％(13/20),病理学分级间阳性表达率差异无显著性(P>0.05),原发与复发病例的阳性表达率差异无显著性(P>0.05);在骨软骨瘤中的阳性率为12.5％(1/8),与软骨肉瘤相比差异有显著性(P<0.05)。结论E2R1在颌骨软骨肉瘤中过表达并可作为癌基因标志之一。     

E2F-1在胃癌组织中突变与表达的研究

目的研究E2F-1在胃癌组织中的基因突变、表达情况。方法实验分为3组：胃癌组、癌旁正常黏膜组和正常对照组。采用聚合酶链式反应一单链构像多态性分析法（PCR—SSCP）对3组的E2F-1基因突变情况进行分析,采用免疫组织化学法检测三组中E2F-1的表达情况。结果PER扩增产物电泳显示胃癌组、癌旁正常黏膜组和正常对照组均未发现E2F-1基因突变或缺失,SSCP分析3组所有外显子均未出现异常条带;胃癌组中E2F-1的阳性表达率为72．5％（58／80）．癌旁正常黏膜组和正常对照组的E2F-1阳性表达率分别为30．0％（24／80）和22．5％（9／40）;胃癌组E2F-1表达率明显较其他两组高,3组间差异有显著性（P〈0．05）。结论E2F-1在胃癌的发生发展过程中是一个非常稳定、保守的基因,突变发生率极低;E2F-1在胃癌组织中呈高表达。     

子宫内膜癌中E2F-1和Survivin的表达及相关性

目的检测子宫内膜癌组织中E2F-1和Survivin表达情况并探讨其意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测60例子宫内膜癌、32例正常子宫内膜组织中两者的表达。结果子宫内膜癌组织中E2F-1和Survivin表达定位于细胞核,其阳性表达率分别为58.33%（35/60）和55.00%（33/60）,均明显高于正常子宫内膜组织0和0（P〈0.05）。两者的表达与有无淋巴结转移、浸润深度、临床分期及病理分期有关（P〈0.05）;通过相关性分析E2F-1和Survivin在子宫内膜癌组织中呈正相关（P〈0.05）。结论 E2F-1和Survivin在子宫内膜癌呈成过度表达,两者共同作用参与子宫内膜癌的发生、发展及转移。     

E2F-1蛋白在大鼠泌乳素瘤中的表达

目的通过检测腺病毒E2启动子结合因子1（E2F-1）在大鼠泌乳素（PRL）瘤中的表达来探讨E2F-1在PRL瘤发生发展过程中的作用。方法用皮下植入17β-雌二醇的方法诱发大鼠PRL瘤;免疫组化SP方法检测两组大鼠E2F-1蛋白的表达。结果雌二醇作用10周后,据垂体重量、垂体组织学变化和血清PRL水平证实PRL瘤诱导成功。PRL瘤组中,E2F-1蛋白明显高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论 E2F-1在大鼠PRL瘤中呈现高表达,提示E2F-1的高表达促进了大鼠PRL瘤的发生发展。     

BIRC5的表达与大肠癌淋巴结转移的关系

目的探讨凋亡抑制基因BIRC5是否参与大肠癌发病过程及是否与淋巴结转移相关。方法利用免疫组织化学方法分析比较40例大肠癌组织及其自体正常大肠组织,以及35例癌细胞淋巴结转移组织中BIRC5蛋白的表达情况。结果BIRC5蛋白在癌组织中的表达程度与非癌组织(正常大肠组织)比较,差别有统计学意义(P<0.001)。在淋巴结转移的癌组织中,BIRC5蛋白的表达与非淋巴结转移的大肠癌组织比较,差别亦有统计学意义(P<0.01)。结论BIRC5参与了大肠癌发病过程,并与癌细胞淋巴结转移相关。     

前列腺癌E2F3蛋白的表达及临床意义

目的探讨前列腺癌组织中E2F3蛋白的表达及临床意义。方法应用免疫组化EliVisionTMplus二步法,检测49例前列腺癌(prostate cancer,PCa),20例良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)及10例肾移植正常前列腺组织(nor-mal prostate,NP)中E2F3蛋白的表达,分析其表达与肿瘤分级、分期及血清PSA和预后间的关系。结果前列腺癌中E2F3的水平明显高于BPH(P<0.05)及NP(P<0.05),且与PCa病理分级和临床分期与血清PSA及预后有密切的联系。结论 E2F3可作为PCa新的标志物,检测E2F3有助于判定PCa恶性程度及预后。     

子宫腺肌病组织中Bcl-2、E2F-1蛋白的表达及其意义

目的 探讨凋亡抑制基因Bcl-2、转录因子E2F-1在子宫腺肌病发生发展中的作用.方法 用免疫组化技术(SP法)检测58例子宫腺肌病组织和30例正常子宫内膜组织中Bcl-2、E2F-1蛋白的表达情况.结果 子宫腺肌病组织中Bcl-2、E2F-1蛋白的表达较正常子宫内膜组织均明显增加,两组比较有显著性差异(P＜0.05).异位内膜组与在位内膜组间Bcl-2、E2F-1的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 子宫腺肌病组织中Bcl-2和E2F-1的过度表达与异位内膜组织的过度增生有关.提示Bel-2和E2F-1参与了子宫腺肌病的发生发展.     

BIRC5在肝癌中的表达及其表达与临床病理特征的关系

目的探讨凋亡抑制蛋白BIRC5在肝癌中的表达及其表达与临床病理牲的关系。方法免疫组化检测BIRC5在20例正常肝组织及80例肝癌组织中的表达,分析其表达与临床病理特征的关系。结果 BIRC5在肝癌组织中的阳性表达率为66.3%,明显高于正常肝组织（5%）,差异有统计学意义（P〈0.05）。此外,BIRC5在低分化肝细胞癌中的表达率（83.3%）明显高于高-中分化肝细胞癌（55.4%）;淋巴结转移患者中BIRC5的表达率（85.7%）明显高于无淋巴结转移患者（55.9%）;Ⅱ-Ⅲ期患者BIRC5的表达率（83.9%）明显高于Ⅰ期患者（57.1%）,差异有统计学意义（P〈0.05）;而BIRC5表达率与年龄、性别、肿瘤最大直径无明显相关（P〉0.05）。结论 BIRC5表达与肝癌的发生密切相关,可能成为肝癌诊断的新型标记物。     

逆转录病毒壳蛋白p15E在人肿瘤细胞的表达

肿瘤生长经常伴发免疫抑制。在其成因中有源于肿瘤的免疫抑制活性物质，但其性质大多未阐明。本文报道，采用免疫组化、酶联吸附、流式细胞、核酸原位杂交等技术，观察有免疫抑制活性的逆转录病毒壳蛋白ｐ１５Ｅ在人肿瘤细胞中不同水平的表达情况。结果揭示：肿瘤细胞表达ｐ１５Ｅ比较普遍，从人食管癌、鼻咽癌、直肠癌、卵巢癌（包括癌性腹水和建株细胞系）、胃癌、乳癌等均可被检出。ＲＴ－ＰＣＲ检测显示癌患者的活化淋巴细胞ｐ１５Ｅ表达略高。这些结果提示：来自肿瘤，也许还有来自活化淋巴细胞的ｐ１５Ｅ在肿瘤伴发的免疫抑制中可能起重要作用。     

pin1基因在卵巢恶性肿瘤组织中的表达及与Cyclin D1、Ki67的关系

目的 探讨卵巢恶性肿瘤组织中pin1、Cyclin D1、Ki67的表达水平以及三者相互关系.方法 应用免疫组织化学法检测53例卵巢肿瘤组织病理切片中pin1、Cyclin D1、Ki67的表达水平,其中卵巢恶性肿瘤组31例,对照组22例为卵巢良性肿瘤.收集研究对象的临床资料,应用logistic回归模型分析指标间的相关性.结果 卵巢恶性肿瘤组pin1高表达21例(67.74%),Ki67阳性表达27例(87.10%),Cyclin D1高表达19例(61.29%),对照组中pin1高表达1例(4.54%),Ki67阳性表达3例(13.64%),Cyclin D1高表达2例(9.10%),两组差异有统计学意义(均P<0.05).经统计学分析,卵巢恶性肿瘤不同临床分期及有无淋巴结转移之间pin1、Ki67、Cyclin D1的阳性表达差异无统计学意义(P>0.05). pin1高表达分别与Ki67阳性表达及Cyclin D1高表达有相关性(均P<0.05).结论 pin1基因在卵巢恶性肿瘤组织中表达上调;pin1基因的表达与卵巢恶性肿瘤的临床分期和淋巴结转移无明显相关性;卵巢恶性肿瘤组织中pin1基因表达水平与Ki 67、Cyclin D1表达水平相关,提示pin1基因可能参与细胞周期、细胞增殖的调控.     

结直肠癌组织中E2F-1、Bcl-2蛋白的表达及其临床意义

目的本研究旨在探讨转录因子E2F-1、凋亡抑制基因Bcl-2在结直肠癌组织中的表达情况及其临床意义。方法采用免疫组化技术（SP法）检测60例结直肠癌癌组织及癌旁正常粘膜中E2F-1、Bcl-2蛋白的表达情况。结果结直肠癌组织中E2F-1阳性表达率为56．7％,癌旁正常粘膜中为6．7％,二者比较有显著性差异（P〈0．01）;E2F—1在癌组织中的表达与其组织学分级、Dukes分期具有相关性（P〈0．05）。Bcl-2在结直肠癌中的阳性表达率为53．3％,在癌旁正常粘膜中为13．3％,二者比较有显著性差异（P〈0．01）;Bcl-2在癌组织中的表达与结直肠癌Dukes分期具有相关性（P〈0．05）。结论E2F—1、Bcl-2在结直肠癌细胞中共同过度表达,参与了结直肠癌的发生发展。     

E2F2在肝细胞肝癌组织中的表达及临床意义

目的观察E2F2在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达水平,并分析其与HCC患者的性别、年龄、血清AFP浓度、病理学分级、TNM分期及预后的关系。方法下载并处理癌症基因组图谱(TCGA)中有关HCC的基因组学数据和所研究个体的临床资料,利用SPSS统计软件分析E2F2在HCC组织和癌旁组织中的表达水平,探讨E2F2表达水平与HCC患者性别、年龄、血清AFP水平、病理学分级、TNM分期等临床资料的关系以及对HCC患者预后情况的影响。结果 E2F2在HCC组织中的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);血清AFP浓度高的患者E2F2表达水平高于血清AFP水平低的患者,差异有统计学意义(P<0.05);病理学分级中Ⅲ～Ⅳ级HCC患者E2F2表达水平高于Ⅰ～Ⅱ级HCC患者,差异有统计学意义(P<0.05)。E2F2高表达组患者整体生存率低于E2F2低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 E2F2参与肝细胞肝癌的进展过程,是早期诊断肝细胞肝癌的肿瘤分子标志物及预后判断因子。     

GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位

目的 研究GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位.方法 PCR扩增HPV16E5基因片段,将其连接到真核表达截体pEGFP-C1,双酶切及测序鉴定,构建表达截体pEGFP-C1/HPV16 E5;将质粒pEGFP-C1/HPV16 E5和pEGFP-C1分别转染HeLa细胞,在倒置荧光显微镜下现察GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位.结果 GFP 荧光均匀分布在细胞浆和细胞核;GFP-HPV16 E5融合蛋白组荧光分布在细胞浆.结论 GFP-HPV16 E5融合蛋白能在HeLa细胞内表达且定位于细胞浆.     

P16蛋白表达与非何杰金氏淋巴瘤的关系

为探索Ｐ１６蛋白表达与非何杰金氏淋巴瘤（ＮＨＬ）的关系，作者应用免疫组化技术检测４５例非何杰金氏淋巴瘤、４例淋巴结反应性增生（ＲＨＬＮ）和６例脾脏标本中肿瘤抑制基因Ｐ１６蛋白的表达。结果显示：ＲＨＬＮ和脾的淋巴小结周围和窦周围的淋巴细胞部分呈Ｐ１６蛋白阳性表达，ＮＨＬ的Ｐ１６蛋白阳性表达率为３７．８％（１７／４５），其中低度恶性组为６６．７％（１０／１５），中度恶性组为３７．５％（６／１６），高度恶性组为７．１％（１／１４），ＮＨＬ的低度与高度恶性程度组间比较，差异有高度显著性（Ｐ＜０．０１），提示Ｐ１６蛋白可能是ＮＨＬ预后判定的一个重要指标。