改良线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的实验研究

目的通过对使用改良线栓法制作的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的实验研究,探讨规范合理的模型制作方法,使动物模型更加稳定。方法48只SD大鼠随机分为手术组(36只)、假手术组(6只)和对照组(6只),其中手术组再根据缺血再灌注时间不同分为脑缺血2h再灌注0.5h、2h、6h、12h、24h和48h组,每组6只;在Longa线栓法的基础上作如下改进来制作大脑中动脉阻塞再灌注动物模型大鼠体重与线栓直径的匹配以及线栓插入深度的控制;线栓前段包裹硅胶;采用显微手术技术;术中多功能生理监测;麻醉后拔线。2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色观察各组的脑梗死体积;HE染色观察大鼠脑组织的病理改变。结果成功率可高达88.9%,模型符合脑梗死病理过程。结论改进后的线栓法简便、易重复,降低了动物死亡率,提高了成功率,复制的可逆性局灶性脑缺血模型是研究脑缺血再灌注损伤较为理想的模型。     

大鼠局灶-局灶缺血预处理后脑组织c-fos的表达及神经细胞凋亡测定

目的:探讨脑缺血预处理后脑组织原癌基因c-fos的表达及其对神经细胞凋亡的影响.方法:90只大鼠随机等分为假手术组(A组)、假预处理缺血组(B组)和预处理缺血组(C组)3组.采用Longa法建立局灶脑缺血(MCAO模型,短暂性脑缺血20 min作为预处理(PC,PC)后24 h给予永久性MCAO(PMCAO.各组大鼠均于第2次手术12 h(n=25)或24 h(n=5)后用红四氯氮唑(TTC)染色观察脑梗死的体积,采用流式细胞仪检测大鼠前脑皮质细胞凋亡率,采用原位杂交和免疫组织化学方法对脑缺血再灌注后前脑皮质c-fos mRNA和蛋白进行检测.结果:C组PMCAO后12 h、24 h脑梗死体积较B组减小(P＜0.05);C组前脑皮质c-fos mRNA的表达高于A、B组(P＜0.05或0.01,c-fos)蛋白的表达高于A组(P＜0.01、低于B组(P＜0.05), 而凋亡细胞百分率较B组下降(P＜0.01).结论:脑缺血预处理可诱导c-fos mRNA和蛋白的表达,并抑制缺血诱导的神经细胞凋亡.     

大鼠局灶性脑缺血后脑含水量变化的实验性研究

目的探讨局灶性脑缺血后脑含水量的时程变化。方法SD大鼠随机分为正常组、假手术组、缺血 2h、4h、8h、15h、30h组 (均为n =4 ) ,采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型 ,各时间点断头取脑 ,测定脑组织含水量。结果正常组和假手术组含水量一致 ,缺血 2h含水量即有增高 ,至缺血 8h达到高峰 (p <0 .0 5 ) ,之后逐渐降低。结论局灶性脑缺血后脑含水量逐渐增高 ,至缺血 8h达到高峰 ,之后逐渐降低。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的制备和评价

目的:研究不同缺血时间对大鼠局灶性脑缺血再灌注模型脑梗塞灶体积及神经功能缺损的影响.方法:24只SD大鼠随机分为假手术组、缺血1 h再灌注组和缺血2 h再灌注组,每组8只,采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,假手术组仅将线栓插至颈总动脉(CCA),缺血1、2 h再灌注组分别于术后1、2 h行再灌注.用2% 2,3,5三苯基氯化四氮唑(TTC)染色计算梗死灶体积,并对大鼠神经功能缺损进行评分.结果:假手术组于再灌注各时间点神经功能缺损评分均为0分.缺血2 h再灌注组再灌注2、6 h神经功能缺损评分明显高于缺血1 h再灌注组(t值分别为2.546、3.000,P<0.05),再灌注24 h,2组神经功能缺损评分差异无统计学意义(t=-1.128,P＞0.05).缺血1 h再灌注组与缺血2 h再灌注组于再灌注24 h时,神经功能缺损评分均明显低于再灌注2、6 h时的评分(t值分别为-2.222、-2.778;-3.458、-4.447, P<0.05).再灌注24 h时,2组神经功能缺损评分及梗塞灶体积/同侧大脑半球体积比值差异无统计学意义(P＞0.05).结论:线栓法大鼠局灶性脑缺血再灌注模型选择缺血1 h后再灌注是合理的.     

脑缺血再灌注后大鼠氧化水平和神经功能损伤及异丙酚的影响

目的 观测大鼠脑缺血再灌注后神经损伤及血清氧化水平的变化及异丙酚的影响.方法 采用大脑中动脉线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,88只大鼠随机分为假手术组(n=8)、缺血再灌注模型组(n=40)和异丙酚(100mg/kg)干预组(n=40).分别于再灌注6、24h,2、4、7d对大鼠进行神经功能损伤评分,并行梗死灶的观察及分光光度法对血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的检测.结果 与模型组比较,异丙酚干预组大鼠缺血再灌注后的神经功能损伤评分低,24h、2 d差异有统计学意义(P<0.05);梗死灶面积减小,MDA降低,SOD的活性升高(P<0.05).结论 异丙酚能明显提高SOD的活性,减少MDA的积聚,缩小脑梗死体积,改善脑缺血再灌注损伤后神经损伤.     

线栓法大鼠局灶性脑缺血模型(PMCAO)的实验研究

目的探讨改进后的线栓法大鼠永久性大脑中动脉梗塞(PMCAO)局灶性脑缺血模型的使用价值.方法分离颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉,结扎颈外动脉,经由颈总动脉剪一小口,将制备好的栓线插入颈总动脉,并推进送入颈内动脉内,阻断大脑中动脉,制备成PMCAO模型,并观察大鼠脑组织的病理改变.结果成功率可高达95%,模型符合脑梗死病理过程.结论改进后的方法(PMCAO)简便、易重复,降低了动物死亡率,提高了成功率,可做为缺血性脑血管病研究的理想动物模型.     

雌激素对大鼠局灶性脑缺血神经细胞caspase-3表达的影响

目的:探讨雌激素对局灶性脑缺血大鼠神经细胞caspase-3表达的影响。方法:健康雌性Wistar大鼠30只,随机等分为假手术组、缺血对照组及雌激素用药组。采用栓线法阻断大脑中动脉建立局灶性脑缺血模型。缺血2 h再灌注24 h后断头取脑,用体积分数为1%四氮唑染色分别观察各组大鼠脑梗死灶的大小,应用免疫组织化学方法检测大鼠脑组织caspase-3的表达。结果:假手术组未发现脑梗死灶和caspase-3表达阴性;雌激素用药组(16.7±2.1)%脑梗死体积明显小于缺血对照组(21.9±4.3)%(P<0.01);caspase-3的表达雌激素用药组(131±15)个明显小于缺血对照组(86±11)个(P<0.01)。结论:雌激素可抑制大鼠脑神经细胞caspase-3活性,减少脑神经元凋亡,具有脑神经保护作用。     

线栓法大鼠局灶性脑缺血模型(PMCAO)的实验研究

目的:探讨改进后的线栓法大鼠永久性大脑中动脉梗塞(PMCAO)局灶性脑缺血模型的使用价值。方法:分离颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉,结扎颈外动脉,经由颈总动脉剪一小口,将制备好的栓线插入颈总动脉,并推进送入颈内动脉内,阻断大脑中动脉,制备成PMCAO模型,并观察大鼠脑组织的病理改变。结果:成功率可高达95%,模型符合脑梗死病理过程。结论:改进后的方法(PMCAO)简便、易重复,降低了动物死亡率,提高了成功率,可做为缺血性脑血管病研究的理想动物模型。     

高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及bcl-2蛋白表达的影响.方法:选取健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为假手术组(10只)、缺血对照组(25只)及缺血再灌注加高压氧治疗组(HBO组,25只).采用动脉线栓法制成大脑中动脉(MCA)局灶性脑缺血再灌注模型.用四氮唑染色观察局灶性脑缺血再灌注后120 h各组大鼠脑梗死灶的大小,应用TUNEL法及免疫组化方法检测缺血3 h再灌注6 h、24 h、48 h、72 h、120 h大鼠脑组织神经细胞凋亡及bcl-2蛋白的表达.结果:假手术组未发现脑梗死灶,凋亡细胞及bcl-2蛋白表达阴性.HBO组缺血再灌注后120 h大鼠梗死灶体积(15.9±4.2)明显小于缺血对照组(26.8±4.9)(P＜0.01);HBO组大鼠再灌注24 h,48 h,72 h各时点凋亡指数均低于缺血对照组,bcl-2蛋白表达均高于缺血对照组(P＜0.05).结论:脑缺血再灌注后凋亡细胞增多,bcl-2蛋白表达增强,高压氧治疗可以上调bcl-2蛋白的表达,抑制脑神经细胞凋亡,具有脑神经保护作用.     

UCP5在大鼠局灶性脑梗死周边神经细胞中的表达变化

目的 探讨UCP5在大鼠局灶性脑梗死周边神经细胞中的表达变化.方法 线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉永久性闭塞缺血模型.67只大鼠随机分为假手术组（n=7）和缺血组（n=60）,缺血组按缺血时间分成缺血6h、12h、1d、3d、7d五个亚组每组12只.采用2％ TTC染色和HE染色显示梗死灶,应用免疫组化方法观察各组大鼠脑内UCP5阳性反应神经细胞数量.结果 2％TTC染色显示,缺血组大鼠左侧大脑中动脉供血区域均可见不规则白色梗死灶;HE染色显示,缺血组大鼠左侧大脑皮质均可见坏死区域.假手术组左侧大脑皮质UCP5阳性细胞数为（1.32±1.49）个/视野,缺血6h组梗死灶周边为（3.66±3.01）个/视野,缺血12h组为（9.96±7.33）个/视野,缺血1d组为（21.06±14.36）个/视野,缺血3d组为（12.20±11.19）个/视野,缺血7d组为（6.08±1.93）个/视野.与假手术组比较,五个缺血亚组阳性细胞数均显著增高（P＜0.003）.缺血1d组分别与6h、12h、3d、7d组相比阳性细胞数显著增高（P＜0.003）.结论 大鼠局灶性脑梗死周边神经细胞UCP5的表达显著增高.随缺血时间延长UCP5表达呈现峰样改变,在缺血1d达到高峰,UCP5可能在脑梗死中发挥着脑保护作用.     

血液稀释对局部脑缺血大鼠脑血流及脑梗死的影响

为探讨中度急性等容血液稀释 (ANHD)对大鼠局部脑缺血模型的脑血流和脑梗死面积的影响 ,将Wistar脑缺血模型大鼠随机分为对照组 (n =8)和ANHD组 (n =8) ,于缺血前和缺血 1 2 0min内 ,用激光多普勒血流仪连续测定缺血周边皮质的局部脑血流 (LCBF)变化 ,缺血后 2 4h测定脑梗死面积。结果显示 2组在脑缺血后LCBF均显著下降 (P <0 .0 1 )。ANHD组下降的幅度显著小于对照组 (P <0 .0 1 ) ,并且缺血 2 4h后的脑梗死面积也显著小于对照组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 )。提示中度ANHD可增加大鼠局部脑缺血模型的缺血周边区的LCBF ,缩小脑梗死面积 ,在脑缺血情况下具有脑保护作用     

银杏叶注射液对实验性大鼠局灶性脑缺血的保护作用

以行为障碍、脑梗死范围、脑含水量、脑组织病理改变为观察指标,研究银杏叶注射液（ＧＢＥ）对大鼠大脑中动脉闭塞所致局部脑缺血的防治作用。结果表明,ＧＢＥ２０、４０ｍｇ／ｋｇ静脉注射可显著降低大鼠脑梗死范围和脑含水量,改善行为障碍。脑组织形态学检查显示,ＧＢＥ４０ｍｇ／ｋｇ组动物脑组织缺血病变较轻。提示ＧＢＥ对局灶性脑缺血具有保护作用。     

大鼠大脑中动脉永久性缺血和缺血再灌注模型的比较

目的:比较大鼠大脑中动脉永久性阻塞模型和缺血再灌注模型的差异,寻找一种制作简单,成功率高的脑缺血模型。方法:将150只SD雄性大鼠随机分为:永久性大脑中动脉阻塞60只,线栓阻塞大脑中动脉4h、8h、24h后生理盐水灌注后取脑;大脑中动脉缺血再灌注60只,线栓阻塞大脑中动脉100min后,拔出线栓形成再灌注,分别在再灌注4h、8h、24h后灌注取脑;对照组30只。比较模型制作的成功率、术后存活率、神经功能缺失评分、脑梗死体积及模型稳定性。结果:脑缺血再灌注组模型成功率高于永久性脑缺血组,差异有统计学意义(P<0.05);永久性脑缺血模型组死亡率较脑缺血再灌注模型组死亡率有升高趋势,但无统计学意义;TTC染色:永久性大脑中动脉阻塞梗死灶随着缺血时间的延长逐渐扩大,大脑中动脉缺血再灌注梗死灶随再灌注时间的延长无明显变化;结论:大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型手术方式简单、结果稳定、缺血时间可控,是一种较理想的模拟脑梗死的动物模型。     

黄体酮对脑梗死大鼠脑损伤程度及神经功能的影响

目的 研究黄体酮对脑梗死体积及行为学的影响,评价其对脑梗死大鼠的治疗价值.方法 按随机数字表法将健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠分为4组,即假手术组、模型组、溶剂治疗组和黄体酮治疗组.后3组采用线栓法制作大脑中动脉栓塞大鼠模型,假手术组只分离暴露血管、不结扎动脉、不插入尼龙鱼线;黄体酮治疗组造模成功后腹腔注射黄体酮,溶剂治疗组给予等体积的环糊精溶液治疗.分别于脑梗死后1d、2d、3d用Zea-Longer评分评价大鼠神经功能的缺损程度,并于脑梗死后3d通过TTC染色检测脑梗死体积.结果 Zea-Longer评分显示,造模前所有大鼠均没有神经功能缺损症状,评分为0.成模后,除假手术组外,其余大鼠均有不同程度的神经功能缺损;黄体酮治疗组大鼠[(3.00±0.63)分,(2.83±0.75)分,(2.00±0.89)分]在脑梗死后1d、2d、3d神经功能评分低于模型组[(4.00±0.89)分,(3.83±0.75)分,(3.16 ±0.75)分]及溶剂治疗组[(3.67±1.21)分,(3.50±1.05)分,(2.83±0.76)分],差异有显著性(P＜0.05).TTC染色表明,脑梗死体积在模型组[(23.74±4.48)％]与溶剂治疗组[(24.42±7.07)％]均比较大,且二者比较差异无统计学意义(P＞0.05);经黄体酮治疗后[(15.03±3.75)％]脑梗死体积明显缩小,较模型组与溶剂治疗组差异均有显著性(P＜0.05).结论 黄体酮治疗可以显著减小脑梗死体积并明显促进脑梗死大鼠神经功能的恢复,其对脑梗死大鼠动物模型具有很好的治疗价值.     

参麦注射液对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的观察参麦注射液对大鼠局灶性脑缺血损伤以及脑血流量的影响。方法采用大鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MACO）模型,观察参麦注射液对脑缺血大鼠神经功能、脑含水量、脑血流和脑组织超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）的活性及丙二醛（malondialde-hyde,MDA）、一氧化氮（nitric oxide,NO）含量的影响。结果参麦注射液能显著增加脑缺血组织的脑血流量（P〈0.05或P〈0.01）;改善脑梗死范围和脑水肿（P〈0.05或P〈0.01）,减轻脑组织海马区组织病理学改变;降低脑组织中NO、MDA含量和NOS活性（P〈0.05或P〈0.01）;升高SOD的活性（P〈0.05或P〈0.01）。结论参麦注射液对大鼠局灶性脑缺血损伤具有良好治疗效果,可能与其抗氧化作用有关。     

大鼠脑电近似熵在局灶性脑梗死时的变化

目的 观察大鼠发生局灶性脑梗死时脑电(EEG)参数近似熵(ApEn)的变化,探讨ApEn是否对脑梗死的发生具有监测作用.方法 选择SD大鼠24只,随机分为两组:脑梗死组(n=12),线栓法阻塞右侧大脑中动脉;对照组(n=12).行颈内动脉分离、结扎,不阻塞大脑中动脉.记录梗死组在梗死前(T_0)、梗死即刻(T_1)、梗死后5、15、30、60min(T_(2～5))时大鼠脑部缺血区域(C4)和正常区域(C3)的ApEn.按相同时间点记录对照组的ApEn.结果 对照组各时间点C3、C4间及假手术后与基础值相比较均无统计学差异(P>0.05).梗死组梗死前大鼠脑部C3、C4的EEG参数ApEn基本相同.梗死后,脑部C3、C4的ApEn较梗死前均升高,C4低于C3(P<0.05);ApEn随时间进行性下降;梗死后30 min时,C4的ApEn已低于梗死前的值(P<0.05).对照组C3、C4区域各个时间点的ApEn均无明显差异.两组在梗死前和假手术时的ApEn比较无明显差异.结论 ApEn可对大鼠脑部出现的单侧局灶性梗死进行监测,可能对梗死后的脑缺血程度有一定的判定作用.

Abstract：

Objective To investigate the changes of EEG approximate entropy(ApEn)in rats during focal cerebral infarction.Methods Twenty-four Sparague-Dawley(SD)rats were randomly divided into infarction group(n=12)with middle cerebral aaery occlusion and sham-operated group(n=12).The EEG data(ApEn)was recorded in the bilateral areas(C3,C4)of the rats with focal cerebral infarction before the infarction and immediately and at 5,15,30,and 60 min after the infarction.The same measurement was carried out in the sham-operated group.Results In the sham-operated group,ApEn in C3 and C4 showed no obvious differences at the time points(P>0.05),but in the infarction group,ApEn in C3 and C4 increased significantly after the infarction.ApEn in the ischemic area (C4) was significantly lower than that in the non-ischemic area (C3)(P<0.05).The bilateral ApEn decreased with the passage of time.ApEn in the ischemic area(C4)was significantly lowered at 30 min after the infarction in comparison with that before infarction(P<0.05).In the sham-operated group,ApEn showed no significant difference between C3 and C4.ApEn was comparable between the two groups before the operation.Conclusion ApEn can help monitor the occurrence of focal cerebral infarction of rats,and may be used to assess the extent of cerebral ischemia after infarction.     

缺血预处理对大鼠局灶性脑梗死后VEGF、GLUT1及BAI1表达的影响

目的研究缺血预处理(IP)对局灶性脑梗死后VEGF、GLUT1和BAI1表达的影响,探讨IP的脑保护作用机制。方法采用大鼠局灶性大脑中动脉线栓法进行缺血预处理15 min,再灌注48 h后制作永久性大脑中动脉梗塞(PMCAO)模型。观察脑缺血后神经功能评分、脑组织含水量、组织病理学改变,酶标记免疫吸附测定VEGF、GLUT1及BAI1表达的变化。结果 IP显著减轻PMCAO后大鼠神经功能损害和组织学损害,明显降低BAI1的表达,增加VEGF及GLUT1的表达,且BAI1与VEGF的表达水平呈负相关。结论缺血预处理能诱导脑缺血耐受的产生,可能是通过改善微循环,提供必需的能量,从而对其后PMCAO有明显的脑保护作用。     

缺血后处理对大鼠脑缺血再灌注的神经保护作用

目的 探讨缺血后处理对大鼠脑缺血再灌注的神经保护作用.方法 30只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(I/R组)和缺血后处理组(IP组).采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血模型,脑缺血2h后IP组给予缺血后处理.于脑缺血再灌注后24 h行神经行为学评分进行神经功能测定,TTC染色观察脑梗死体积,应用透射电镜观察神经细胞及髓鞘的超微结构变化,行各组间比较.结果 IP组大鼠行为学结果优于I/R组,IP组脑梗死体积明显小于I/R组,IP组大脑皮层神经元、髓鞘损伤均轻于I/R组.结论 缺血后处理可改善大鼠脑缺血再灌注后神经功能,减小梗死体积,减轻神经细胞损伤,具有神经保护作用.     

异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注时TGF-β1表达的影响

目的：观察异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注时TGF-β₁表达的影响,并探讨其脑保护的 机制。 方法：采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。45只雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注组(I/R)和缺血再灌注-异丙酚治疗组,大鼠经历2 h脑缺血,然后实行再灌注。分别于再灌注后3、6、24、72 h断头取脑,用免疫组化法检测脑组织TGF-β₁的表达;再灌注后24 h做神经功能缺陷评估及HE染色观察缺血皮层组织形态学变化。 结果：局灶性脑缺血再灌注后TGF-β₁明显表达, 24 h后达高峰(P<0.01), 72 h后降至正常。大鼠神经功能缺陷评分明显升高,组织形态学观察可见皮层水肿、淤血,神经细胞明显变性坏死;应用异丙酚能显著地促进TGF-β₁的表达,与脑缺血再灌注组比较,异丙酚治疗组TGF-β₁释放增多、高峰提前、延缓下降（P<0.05）,同时显著降低大鼠神经功能缺陷评分和减轻缺血皮层组织形态学损伤（P<0.05）。 结论：异丙酚的脑保护作用可能与促进TGF-β₁的表达有关。