hOGG1基因多态性与肿瘤遗传易感性

活性氧(reactive oxygen species,ROS)攻击蛋白质、脂类和DNA,对细胞造成直接损伤,其中对DNA的损伤作用包括链的断裂和碱基修饰,对鸟嘌呤的氧化作用产生8-羟基鸟嘌呤(8-hydroxygualline,oh8Gua)。人类8-羟基鸟嘌呤糖苷酶1(human 8-oxoguanine DNA glycosylase 1,hOGGl)是去除DNA中oh8Gua的重要酶。研究表明,hOGG1基因具有单核苷酸多态性的特征,基因突变可能影响hOGG1的酶活性,导致DNA修复缺陷。因此,hOGG1基因多态性可能影响机体发生肿瘤的危险性。     

高本底地区辐射对8-OHdG和hMTH1的影响研究

目的探讨天然低水平放射性辐射对氧化损伤及其修复基因表达水平的影响。方法选择广东省阳西县天然放射性高本底辐射地区(HBRA)和恩平市天然放射性低本底辐射地区(CA)各48名50~58岁土生土长男性居民为研究对象,按年龄匹配,佩戴热释光剂量计测得外照射剂量。采集外周血并分离血浆和白细胞,ELISA法测定血浆8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)的含量,QPCR法测定血白细胞人8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶修复基因(Human Mut Thomologue,h MTH1)m RNA转录水平。结果 HBRA组和CA组居民外周血血浆中8-OHd G浓度分别为(0.27±0.11)μg/m L和(0.32±0.10)μg/m L,差异有统计学意义(P0.05),与个人剂量呈负相关(rs=-0.271,P=0.013);h MTH1 m RNAΔCt值分别为(9.61±2.51)和(10.01±1.24),差异无统计学意义(P0.05),但与个人剂量呈负相关(rs=-0.219,P=0.028)。结论长期暴露于天然放射性低本底辐射地区可降低居民氧化损伤水平、提高DNA损伤修复能力。     

还原型谷胱甘肽对高糖致大鼠腹膜间皮细胞8-羟基脱氧鸟苷及其修复酶8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶表达的影响

目的观察还原型谷胱甘肽(GSH)对高糖致大鼠腹膜间皮细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)及其修复酶8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(r OGG1)表达的影响,探讨其对高糖所致腹膜间皮细胞DNA氧化损伤的保护作用。方法将60只健康雄性SD大鼠按随机数字法分成3组:对照组(n=20,A组):每天1次腹腔注射生理盐水25 ml;模型组(n=20,B组):每天1次腹腔注射4.25%葡萄糖腹透液25 ml+每周1次腹腔注射乳酸红霉素6.25万IU;治疗组(n=20,C组):每天1次腹腔注射4.25%葡萄糖腹透液25 ml+GSH溶液150 mg/(kg·d)+每周1次腹腔注射乳酸红霉素6.25万IU。8周后分别处死每组各20只大鼠,取腹膜组织分别行HE及Masson染色病理学检查、酶联免疫吸附法(ELISA)测定壁层腹膜间皮细胞8-OHd G水平、实时荧光定量PCR检测壁层腹膜间皮细胞r OGG1的表达。结果 1与A组比较,B组腹膜间皮细胞8-OHd G表达上调(0.8843±0.0068,5.0733±2.0068,P<0.05),C组8-OHd G表达低于B组(5.0733±2.0068,1.6867±0.4867,P<0.05);2与A组比较,B组腹膜间皮细胞r OGG1表达减少(0.7576±0.0701,0.2226±0.0565,P<0.05),C组r OGG1表达增高(0.7576±0.0701,1.4793±0.3895,P<0.05);3与A组比较,HE染色时B组和C组可见腹膜间皮细胞变为圆形、柱形,间皮细胞肥大脱落,间皮下结缔组织明显增厚,可见血管生成以及纤维素样物质沉积,还可见成纤维细胞及单核巨噬细胞浸润,在B组表现尤为明显;4与A组比较,Masson染色显示腹膜组织有胶原沉积,B组比C组改变更明显。结论高糖致大鼠腹膜间皮细胞DNA氧化性损伤标记物8-OHd G表达增高,GSH可能通过上调DNA修复酶OGG1m RNA表达,对大鼠腹膜间皮细胞DNA具有保护和修复作用。     

MTH2蛋白与8-氧鸟嘌呤脱氧核苷在阿尔茨海默病患者海马组织中的表达变化

目的:观察8-氧鸟嘌呤脱氧核苷三磷酸酶同源蛋白2(MTH2)及8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxodG)在阿尔茨海默病(AD)患者海马组织标本中的表达变化,探讨在AD患者海马中二者表达的相关性.方法:选用临床及病理均诊断为AD的尸检海马组织石蜡切片作为实验组,年龄匹配且临床及病理诊断均排除AD的尸检海马组织石蜡切片作为对照组,每组各3例,用免疫组化的方法分别检测人脑海马中8-oxo-dG的含量及MTH2蛋白的表达.结果:免疫组化定量结果显示,在人脑海马组织CAl及CA3区.AD患者8-oxo-dC的表达显著高于年龄匹配对照组,而AD患者MTH2的表达显著低于年龄匹配的对照组.结论:在人脑海马组织中,DNA氧化产物8-oxo-dc含量在AD患者比年龄匹配对照组有显著提高,抗氧化修复蛋白MTH2的表达量却显著降低,提示人脑海马组织中MTH2蛋白表达量的减少及8-oxo-dG含量的增加与AD的发病过程相关.     

汽油尾气致大鼠肺组织氧化损伤机制的研究

目的 探讨汽油尾气对大鼠肺DNA损伤、8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶-1(OGG1)表达和细胞超微结构的影响.方法 将汽油尾气的颗粒物、冷凝物和半挥发性有机物的二氯甲烷提取物以0、5.6、16.7和50.0 L/kg的剂量经气管滴注染毒SD大鼠,每周一次,共4次,末次染毒24 h后处死动物,用彗星实验检测肺组织细胞中DNA单链断裂水平,免疫组化检测肺组织中OGG1的含量,并在电镜下观察各型肺细胞超微结构的变化.结果 在汽油尾气16.7和50.0 L/kg组,肺组织细胞的拖尾率明显高于溶剂对照组(P<0.05),并有随剂量增加而增加的趋势,但各剂量组尾长的增加均无统计学意义;而汽油尾气中、高剂量组OGGI蛋白水平明显增加(P<0.05);在汽油尾气50.0 L/kg组,肺组织各型细胞中的线粒体发生肿胀和空泡化,且线粒体数量明显减少.结论 汽油尾气可诱导大鼠肺组织DNA单链断裂、OGG1蛋白含量增加和线粒体的损伤.     

甲型H1N1流感病毒致宿主细胞脱氧核糖核酸氧化损伤的研究

目的:通过检测DNA损伤标志物8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxo-dG)在甲型H1N1型流感病毒感染MDCK细胞中的表达,初步探讨甲型H1N1型流感病毒诱导细胞凋亡的脱氧核糖核酸(DNA)损伤机制.方法:MDCK细胞培养后.甲型H1N1流感病毒感染继续培养0h、1h、3h、6h、12h、24h、48h,细胞爬片免疫组织化学方法检测各时间点DNA损伤标志物8-oxo-dG的表达.结果:甲型H1N1流感病毒感染后各时间点实验组MDCK细胞8-oxo-dC的表达均显著高于相应的正常对照组(P<0.05),病毒感染各组间两两比较发现各组间差异显著.结论:甲型H1N1流感病毒感染能造成宿主细胞DNA氧化损伤.     

8-羟基脱氧鸟苷检测方法的研究进展

活性氧基团引起的氧化损伤在许多慢性疾病中起着重要作用,8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)是DNA氧化损伤的修饰产物之一,可以通过高灵敏度、高选择性的检测手段来检测,目前已成为DNA氧化损伤中最常采用的生物标志物。本文主要介绍其来源、检测方法及在医学上的应用。     

食品添加剂诱导8-羟基鸟嘌呤糖基酶的实验研究

目的　探讨食品添加剂KBrO3对哺乳类组织中 8 羟基鸟嘌呤糖基酶的氧化诱导作用。方法　比较用KBrO3处理大鼠后 ,其肾和肝中修复酶活性的变化规律。酶活性分析用高效液相色谱 电化学检测法。结果　腹膜下给予 80mg kg剂量KBrO3后 ,在肾脏发现酶活性在 3h时显著升高 ,而在 6h时 ,其活性达到高大值 (1 2 5± 0 14 )pmol,该值是 0h的 6倍。然后 ,活性开始下降并在 12h回到 0h水平 ;不加处理时 ,其活性只有 (0 2 0± 0 0 6 )pmol,而在 2 0、4 0、80及 16 0mg kgKBrO3腹膜下给予时 ,其活性分别是 (0 33± 0 0 9)、(0 5 3± 0 10 )、(0 75± 0 13)及 (1 30± 0 0 8)pmol,在 4 0mg kg以上时活性显著增高 ,且显示剂量反应关系。在肾中观察到该酶活性变化是时间与剂量依赖性的 ,而在肝中未发现这种变化。结论　哺乳类组织中 8 羟基鸟嘌呤糖基酶能被氧化诱导 ,提示DNA中氧化损伤的修复是机体在有氧环境中生存的重要过程。     

RNA氧化及其在2型糖尿病中的研究进展

RNA氧化是氧化应激增强所致细胞内反应,由细胞内ROS修饰核糖核酸碱基形成,可干扰基因转录及翻译时RNA之间相互作用,导致蛋白合成异常,影响细胞活力,促进细胞凋亡。MicroRNA氧化是调控基因表达的表观转录机制。RNA氧化与衰老相关疾病关系密切。大量研究证实,RNA氧化与2型糖尿病心血管死亡风险密切相关,是诱发胰岛素抵抗和2型糖尿病危险因素,尿RNA氧化代谢产物8-氧化鸟嘌呤可作为2型糖尿病及其血管并发症的预警标志物。     

hOGG1低表达肿瘤细胞对阿霉素的敏感性研究

目的 研究8-羟基鸟嘌呤DNA 糖苷酶1基因(hOGG1)低表达细胞对阿霉素的敏感性,为化疗增敏提供实验依据.方法 用不同剂量的阿霉素处理肺腺癌A549细胞和通过稳定转染hOGG1核酶而获得的hOGG1低表达的A549-R细胞,用MTT法测定两种细胞的存活率;体外微核试验及单细胞凝胶电泳检测两种细胞微核率及DNA损伤与修复的差异;流式细胞术检测周期分布、凋亡率和细胞增殖指数.结果 A549-R细胞阿霉素半数抑制浓度(IC50)低于A549细胞 (P＜0.05);阿霉素可诱导两种细胞的微核率增高,而在相同阿霉素剂量作用下A549-R细胞微核率较A549细胞更高(P＜0.05);单细胞凝胶电泳结果显示阿霉素作用下两种细胞均有不同程度DNA损伤,A549-R细胞的拖尾率和DNA迁移长度大于A549细胞(P＜0.05);与A549细胞比较,A549-R细胞更不易修复.流式细胞术检测显示:阿霉素处理使两种细胞都表现为G0/G1期细胞阻滞,细胞凋亡随阿霉素浓度增加而增加,细胞增殖指数随阿霉素浓度增加而降低,这些变化均以A549-R细胞更为明显.结论 hOGG1低表达使细胞DNA修复能力降低,从而使细胞对阿霉素的敏感性增强.     

特发性弱精子症患者精子DNA氧化损伤

目的:探讨特发性弱精子症患者精浆的氧化应激及其精子DNA的氧化损伤。方法:选择2010年12月至2011年3月就诊于中南大学湘雅医院生殖中心门诊的不孕不育夫妇。以28名特发性弱精子症患者为实验组,选取24名精液分析正常且有生育史的男性为对照组,收集新鲜精液。应用鲁米诺化学发光法检测原始精浆活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;酶联免疫分析法检测精子DNA氧化产物8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG)浓度。结果:1) 实验组精浆ROS水平增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);两组前向运动精子活动率与精浆ROS水平呈负相关(r=-0.72,P<0.01)。2) 实验组精子8-OHdG浓度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);两组前向运动精子活动率与精子8-OHdG浓度也呈负相关(r=-0.73,P<0.01)。3) 两组患者精浆ROS水平与精子8-OHdG浓度呈正相关(r=0.77,P<0.01)。结论:特发性弱精子症患者的精子具有DNA氧化损伤,可能与氧化应激有关。过量活性氧产生可能是特发性弱精子症患者精子活力低下的原因之一。     

抑制OGG1增加替莫唑胺对神经胶质瘤细胞U251的敏感性及机制探讨

目的探讨8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶（OGG1）对脑神经胶质瘤细胞增殖及替莫唑胺(temozolomide,TMZ化疗敏感性的影响。方法采用光镜、CCK-8、活性氧（ROS）检测试剂盒DCFH-DA探针、Western blot观察及检测替莫唑胺处理后神经胶质瘤细胞的形态、细胞活力、细胞内活性氧水平及OGG1蛋白的表达水平; Real time-PCR技术检测OGG1m RNA干扰率; OGG1下调后,U251的细胞存活率及OGG1蛋白的表达水平。结果与对照组相比,替莫唑胺处理后,U251细胞的生存能力显著下降（P<0.05）,ROS水平显著增加（P<0.05）,OGG1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,当替莫唑胺剂量为100μmol/L时,对U251细胞的损伤最大（P<0.01）。当OGG1 si RNA干扰U251细胞OGG1后,OGG1 m RNA及OGG1蛋白的表达水平降低（P<0.05）,而利用低剂量的替莫唑胺对U251细胞处理时,细胞存活率显著降低（P <0.05）。结论 OGG1通过ROS通路,介导替莫唑胺对神经胶质瘤细胞U251的氧化损伤,OGG1抑制可增强神经胶质瘤细胞对TMZ的化疗敏感性。     

不同方法检测微囊藻毒素-LR致DNA氧化损伤

目的 观察微囊藻毒素-LR(MCLR)对人肝癌细胞HepG2的DNA氧化损伤效应.方法 应用高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)和免疫酶染色法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平.结果 用HPLC-ECD法分析,低、中剂量组8-OHdG水平显略有增高趋势,高剂量组(100μmol/L)8-OHdG水平显著高于空白对照组;用免疫酶染色法分析,各剂量组8-OHdG染色强度明显高于空白对照组,处理剂量与8-OHdG水平之间呈现剂量-反应关系.结论 MCLR引起人肝癌细胞DNA氧化损伤,HPLC-ECD法与免疫酶染色法所测损伤的趋势一致.免疫酶染色法能够更灵敏地检测DNA氧化损伤,可应用于人类疾病研究与环境监测.     

厄贝沙坦对糖尿病肾病患者尿8-OHdG及SOD的影响

目的 探讨厄贝沙坦对2型糖尿病肾病(DN)患者氧化损伤的影响.方法 选取24例近期未服用抗氧化药物,且有明显蛋白尿的2型DN患者.厄贝沙坦150 mg/d治疗10周,之后300 mg/d治疗10周.检测厄贝沙坦治疗前后24 h尿蛋白、尿肌酐、尿8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)、尿超氧化物歧化酶(SOD)和血生化水平.10例健康志愿者的尿液标本作为正常对照.结果 与正常对照组比较,DN患者尿8-OHdG水平明显升高(P<0.05),尿SOD明显降低(P<0.01).经厄贝沙坦150 mg/d、300 mg/d各治疗10周后,8-OHdG水平均明显降低(P均<0.05),尿SOD均升高(P<0.05).结论 DN患者氧化损伤明显,厄贝沙坦具有减轻DN患者氧化损伤作用,且无明显副作用.     

缺血性脑卒中患者外周血单个核细胞DNA氧化损伤及修复

目的检测缺血性脑卒中患者急性期和恢复期外周血单个核细胞的DNA氧化损伤及修复情况,与健康者进行比较,以判断缺血性脑卒中患者DNA氧化损伤水平的变化以及DNA氧化损伤水平与病程的关系。方法急性缺血性脑卒中患者36例,于发病3 d内抽取空腹静脉血10 mL进行8-羟基-2’-脱氧鸟嘌呤核苷(8-OhdG)、神经特异性烯醇化酶(NSE)及单个核细胞的彗星率及彗尾DNA百分比的检测,于病程18～21 d抽血2 mL再检测单个核细胞的彗星率及彗尾DNA百分比。同时选取医院门诊体检人群中与研究对象年龄、性别相匹配的健康者20例作为对照。10 mL空腹静脉血中,5 mL分离外周血单个核细胞,提取DNA,将DNA酶解,高效液相色谱—电化学检测方法检测8-OhdG;3 mL双抗体夹心放射免疫法检测血清中NSE;2 mL分离外周血单个核细胞,应用碱性单细胞凝胶电泳的方法检测单个核细胞的彗星率及彗尾DNA百分比,同时对缺血性脑卒中患者的神经功能缺损评分进行比较。结果缺血性脑卒中患者急性期外周血单个核细胞的8-OhdG和NSE含量均较对照组明显升高(P＜0．01),急性期患者外周血单个核细胞彗星率为90．13%±2．22%,彗尾DNA百分比为60．71%±4．18%。较恢复期患者的细胞彗星率60．89%±2．98%、彗尾DNA百分比39．20%±3．61%明显增高(P＜0．01);恢复期患者神经功能缺损评分较急性期患者明显下降(P＜0．01)。对照组血液中单个核细胞彗星率为6．4%±1．61%,彗尾DNA百分比3．37%±0．63%,较缺血性脑卒中患者明显减少(P＜0．01)。结论缺血性脑卒中患者急性期和恢复期外周血单个核细胞存在DNA氧化损伤。     

糖尿病肾病与8-羟基脱氧鸟苷酸水平的相关性研究

目的 探讨DNA氧化损伤标志物血清8-羟基脱氧鸟苷酸(8-Hydroxy-guanin,8-OHdG)与糖尿病肾病的关系.方法 采用酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法测定71例糖尿病肾病患者、73例2型糖尿病患者及47例正常对照的血清8-OHdG水平,...     

低剂量饮酒抑制大鼠肝组织DNA中8-oxo-dGsn水平

目的 检测低剂量饮酒大鼠肝组织DNA中氧化标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-oxo-dGsn)水平,评价低剂量饮酒对肝脏组织氧化应激的影响.方法 4月龄的健康雄性SD大鼠48只,随机分为对照组和饮酒组,饮酒组每天灌胃56度二锅头酒每天每公斤低于2g(＜2g/kg),对照组每天灌胃同等体积的生理盐水.在灌胃4、8、12周时,用放射性核素稀释高效液相-串联质谱(ID-LC-MS/MS)方法检测大鼠肝组织DNA中氧化标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-oxo-dGsn)含量;用分光光度法测定抗超氧阴离子(O2-)能力和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力.结果 低剂量饮酒4、8、12周后的肝组织DNA中8-oxo-dGsn含量均较同时间点对照组低,差异有统计学意义(P＜0.05);低剂量饮酒4、8、12周后的肝组织中抗O2-能力与GSH-PX活性均增强,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 低剂量饮酒可抑制大鼠肝组织DNA中的氧化水平,可能与肝脏中抗氧化酶活性的增高有关.     

慢性砷暴露对小鼠肾组织DNA损伤的研究

目的:通过检测8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)在砷暴露小鼠肾脏组织中的表达和分布,探讨砷的肾毒性作用机制。方法:昆明种小鼠40只,随机分为4组,每组10只,分别为低剂量组(1ppmAs2O3)、中剂量组(2ppm As2O3)、高剂量组(4ppm As2O3)和生理盐水对照组,连续染毒60天后断头处死,用HE染色法进行组织病理学观察,用免疫组化及图像分析方法检测肾组织内8-OHdG的水平。结果:与对照组相比,1ppm、2ppm和4ppm染砷组小鼠肾组织出现不同程度细胞肿胀,胞浆空泡变性,核固缩、溶解及血管扩张、充血等病理学改变,近曲小管较肾小球损伤严重。免疫组化结果表明,肾组织中8-OHdG含量明显增高,并呈现明显的剂量-反应关系,其总光密度值与对照组比较具有显著性差异(P<0.01)。而且,8-OHdG在近曲小管的表达明显高于肾小球区域。结论:慢性低剂量砷暴露可引起小鼠肾组织DNA的氧化损伤和病理变化,尤其对肾脏近曲小管的损伤作用较为明显。     

三氧化二砷对小鼠脑神经元DNA损伤作用

[目的]为探讨砷的中枢神经系统毒性作用机制提供实验依据.[方法]昆明种小鼠40只,随机分为4组:1、2、4 ppm三氧化二砷染毒组和生理盐水组.连续染毒60d,取大脑,用免疫组化方法观察脑皮质神经细胞8-羟基-2'-脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-dG)的表达,并用单细胞凝胶电泳试验检测脑神经元的单链DNA断裂程度.[结果]各染砷组小鼠脑皮质神经细胞出现肿胀、胞质内有空泡变性、核固缩、碎裂等病理学变化,神经组织中8-OH-dG呈现明显的高表达,而且神经细胞可见明显的彗尾、且随砷暴露剂量增高其彗尾变长.[结论]慢性低剂量砷暴露可诱发小鼠神经元的DNA损伤,脑皮质神经元可能是砷神经毒性作用的主要靶细胞.     

某地区老年人血8-羟基鸟嘌呤（8-OH-aG）水平调查

目的测定某地区老年人血中8-羟基鸟嘌呤（8-OH—dG）水平,了解其在老年人群中的分布。方法用Human-8-OH-dG酶联免疫试剂盒检测血中8-OH-dG水平。结果正常人群中老年人血8-OH—dG水平为（11．43±7．53）ng／mg,男性为（11．39±7．21）ng/mg,女性为11．48-8．00ng／mg,不同性别间没有显著性差异。按60～69岁、70～79岁和对照组（50岁以下）3个年龄组分层,男性、女性和全体人群中各年龄组间血8—OH—dG水平无显著性差异（P〉0．05）,但随着年龄增长血8-OH-dG水平有增高的趁势。结论该地区老年人血中8-羟基鸟嘌呤（8-OH—dG）水平男女性中位数分别为7．99ng／mg和7．38ng/mg;95％可信限其参考范围男性为0-28．68ng／mg,女性为0-27．83ng/mg。