白血病bcr/abl融合基因的定量检测及临床意义

目的探讨慢性粒细胞性白血病(ehron ic myeloid leukem ia CML)ber/ab l融合基因检测及意义。方法采用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测56例慢性粒细胞性白血病中ber/ab l融合基因的表达。结果对照组bcr/ab l基因表达均为阴性。56例慢性粒细胞性白血病病人bcr/ab l基因表达阳性率为87.5%(49/56),表达值范围3.0×107-7.9×107基因拷贝/L;33例CML患者Ph染色体分析结果中25例为Ph( )/bcr(十),2例为Ph(-)/bcr( ),4例Ph( )/bcr(-),1例Ph(-)/bcr(-);8例CML患者治疗前ber/ab l基因表达均值为(2.60±0.9)×107基因拷贝/L,治疗后为(1.78±0.6)×107基因拷贝/L,两者具有显著性差异(P<0.05=。结论bcr/ab l融合基因表达水平的定量检测及动态观察,对CML的临床诊断、疗效观察和预后具有重要意义。     

慢性粒细胞白血病和原发性骨髓纤维化患者bcr/abl融合基因表达及临床意义

目的探讨bcr/abl融合基因的表达水平在慢性粒细胞白血病(CML)和原发性骨髓纤维化(MF)患者的诊断、疗效及预后观察中的意义.方法采用荧光定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,对18例初、复治CML、7例MF患者的骨髓或外周血单个核细胞进行了bcr/abl融合基因检测,并对其中2例行异基因骨髓移植(allo-BMT)患者进行了短期随防.结果 13例慢性期(CP)CML,12例不同程度表达bcr/abl融合基因,占92.3%,3例加速期(AP),急变期(BC)CML,2例表达bcr/abl融合基因,占66.7%,2例患者allo-BMT后一年内未检出 bcr/abl融合基因,三者之间有非常显著差异P＜0.01;8例初诊患者WBC数及bcr/abl融合基因表达水平明显高于常规治疗组;7例MF患者有1例表达bcr/abl基因.结论 bcr/abl基因是CML发病的分子基础,定量检测bcr/abl融合基因对于CML的诊断、临床分型、疗效观察及预后判断有重要意义;MF患者可能与CML关系密切,对MF患者应进行跟踪观察.     

双色荧光原位杂交检测慢性粒细胞白血病的bcr/abl融合基因

自１９８４年发现了慢性粒细胞白血病（ｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ,ＣＭＬ）具有ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因［１,２］,检测ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因就成为诊断ＣＭＬ的关键。Ｔｋａｃｈｕｋ等［３］使用间接标记的荧光原位杂交（ｆｌｕｏ－ｒｅｓｃｅｎ...     

慢性髓系白血病bcr—abl融合基因的克隆及其在COS …

目的 克隆慢性髓系白血病（ＣＭＬ）融合基因ｂｃｒ－ａｂｌ的ｃＤＮＡ序列,并在真核细胞中表达。方法 以设计的两条引物扩增ｂｃｒ－ａｂｌ融合位点两侧的ｃＤＮＡ,测序后克隆至真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１,转染ＣＯＳ－７细胞。取常规培养的细胞进行ＲＴ－ＰＣＲ鉴定。结果 ①ＰＣＲ扩增出４９０ｂｐ大小的ｃＤＮＡ,其序列测定除第４５２位的碱基Ｃ突变为Ｔ外,其余序列均正确。②ＲＴ－ＰＣＲ法检测到转染细胞系中,有ｂ     

慢性粒细胞性白血病急变的相关分子研究进展

慢性粒细胞性白血病（ＣＭＬ）是由ｔ（９，２２）（ｑ３４，ｑ１１）易位引起的一种血液系统恶性疾病。该易位重排形成的ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因及其所编码的Ｐ２１０蛋白在ＣＭＬ发生中的作用已被确认。近年研究表明ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因、抑瘤基因（如ｐ５３，Ｒｂ，ｐ１６等）及其它分子（如ＥＶＩ１，ｃｍｙｃ等）均与ＣＭＬ急变有关。分析这些相关分子对ＣＭＬ急变的直接或间接影响，对ＣＭＬ的分子病理学及其治疗研究均具指导意义。     

bcr／abl基因在人慢性髓性白血病发病中的作用

ｂｃｒ／ａｂｌ基因在人慢性髓性白血病发病中的作用尤胜国（中国医学科学院血液学研究所天津３０００２０）人慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）是一种骨髓多能造血干细胞的恶性疾患。该病具有明显的双时相病程；在疾病初始的慢性期，其骨髓中造血定向髓系祖细胞在数目上明显增...     

重组PCR构建bcr—abl mRNA竞争RT—PCR内标物

目的竞争ＰＣＲ可用于ｍＲＮＡ的定量测定，为了得到白血病中ｂｃｒ－ａｂｌｍＲＮＡ定量ＰＣＲ的竞争内标物。方法利用重组ＰＣＲ技术，实施对ｂ３ａ２型ｂｃｒ－ａｂｌｃＤＮＡ中一２７６ｂｐ片段的缺失法定点突变。结果经ＤＮＡ序列分析证实，重组后的ｃＤＮＡ片段与重组前相比，５′和３′端大部分序列相同，仅中间５５ｂｐ的部分序列缺失，同时引入１９ｂｐ外源ＤＮＡ片段，即净缺失３６ｂｐ，得到２４０ｂｐ的重组ＰＣＲ产物。较ｂ２ａ２型ｂｃｒ－ａｂｌｃＤＮＡ相应的２０１ｂｐ扩增片段长３９ｂｐ，使之适于作为ｂ３ａ２和ｂ２ａ２型两类ｂｃｒ－ａｂｌｍＲＮＡ定量ＰＣＲ的通用内标物。结论表明重组ＰＣＲ是一种获得靶基因的竞争性内标物的简便而可靠的方法     

温热处理对K562细胞系bcr／abl融合基因mRNA转录和Caspase-3表达的影响

目的观察不同温度刺激对K562细胞bcr／abl融合基因mRNA转录和Caspase-3蛋白表达的影响。方法将培养获得的K562细胞分别进行40℃、43℃、46℃恒温刺激30min,以37％作为对照;RT-PCR技术检测bcr／abl融合基因mRNA的转录,Westernbloting技术检测Caspase-3的表达。结果K562细胞热刺激30min后,bcr／abl融合基因mRNA的转录随温度升高而下调,Caspase-3的表达随温度升高而上调。结论温热刺激可降低K562细胞内bcr／abl融合基因mRNA的转录,提高Caspase-3的表达。     

PCNA与慢性粒细胞白血病急变关系的研究

目的：探讨增殖细胞核抗原（PCNA）与慢性粒细胞白血病（CML）急变之间的关系。方法：采用流式细胞仪技术检测CML患者在慢性期和急变期以及治疗后外周血中的PCNA表达水平。结果：CML慢性期与正常对照组的PCNA表达差异有统计学意义（P〈0．01）,在急变期PCNA表达水平显著高于慢性期（P〈0．01）,而在治疗达完全缓解后PCNA表达水平显著降低。结论：PCNA表达增高可能是引起CML急变的一个重要原因。     

66例血液病患者bcr/abl融合基因、Ph染色体结果分析

CML特异性费城染色体（Philadephia,Ph）是由t（9：22）（q34：11）易位形成。9号染色体原癌基因abl（Abelson protooncogene）易位至22号染色体的断裂点簇集区（breakpoint cluster region,bcr）,发生重排,产生bcr／abl融合基因,引起CML的始动突变。融合基因bcr／abl几乎见于所有的慢性粒细胞性自血病、25％-50％的急性B系淋巴细胞性白血病（ALL）和约5％的急性粒细胞性白血病中,本文统计了进行染色体和ber／abl融合基因检查的初诊血液病66例,对其骨髓细胞染色体核型及bcr／abl融合基因进行分析。     

53例慢性髓系白血病细胞遗传学和bcr/abl融合基因检测

目的了解我院慢性粒细胞白血病(慢粒)染色体变异及融合基因表达与临床诊断和分期间的关系。方法染色体制备采用骨髓或外周血短期培养法,G显带,分析核型;融合基因检测则用逆转录-聚合酶链反应法(PCR法)。结果发现慢粒急变期的染色体,除具典型的Ph染色体外,还有 8、 9、i(16)q、i(17)q、-18等其它染色体改变。bcr/ab l融合基因显示慢粒急变期的患者,同时具有165bp和90bp扩增带。结论我们宜将细胞遗传学和PCR法结合,对慢粒白血病进行检测,即有助于对其诊断、预测急变、判断疗效及预后情况的深入了解。     

PTD—bcr／abl融合癌蛋白片段的表达及其跨膜转运

目的 探讨蛋白转导结构域（PTD）介导的转导bcr/abl癌蛋白片段的方法,为进行免疫治疗提供实验依据。方法 合成编码PTD的基因片段,并与PCR扩增的慢性粒细胞白血病癌蛋bcr/abl基因片段融合,在胸有成竹肠杆菌中表达,将纯化的融合蛋白PTD-bcr/abl与HL-60细胞共孵育,用Western blot分析融合蛋白的跨膜转运。结果 PTD基序可介导bcr/abl蛋白由细胞外跨膜转导进行细胞内。结论 这一结果可能为应用外源蛋白负载（loading)抗原提呈细胞（APC）提供新的途径。     

25例慢性粒细胞白血病患者bcr/abl融合基因结果分析

目的探讨逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)在检测慢性粒细胞白血病(CML)bcr/abl融合基因方面的应用价值。方法对25例慢性粒细胞白血病患儿血标本提取细胞RNA,用RT—PCR方法检测bcr/abl融合基因。结果 25例慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因分析,阳性24例(96%);阴性1例(4%)。结论 RT—PCR检测bcr/abl融合基因敏感性好,稳定性高,对临床治疗和预后判断具有指导意义。     

BCR/ABL融合基因与慢性粒细胞白血病的发生

BCR/ABL融合基因是一个重要的凋亡抑制基因,具有较强的PTK活性。 src激酶﹑蛋白激酶家族C﹑信号转导和转录激活因子（STAT）等在BCR/ABL融合基因介导的肿瘤恶性转化中起着重要的作用。     

对18例慢粒白血病患者检测bcr/abl融合基因结果分析

采用ＲＮＡ－ＰＣＲ方法，对我省的慢性粒细胞性白血病患者外周血细胞进行了ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因检测，均查出ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因扩增产物，其中１４例为ｂ３ａ２型，２例为ｂ２ａ２型，２例为ｂ３ａ２＋ｂ２ａ２型。应用１０％丙聚烯酰胺凝胶电泳对分析结果较有帮助。     

α-2b干扰素联合低剂量阿糖胞苷治疗慢性粒细胞白血病

α- 2 b干扰素 ( IFNα- 2 b)与低剂量阿糖胞苷 ( L D Ara- C)联合应用具有相加作用 ,可以减少或消除 Ph染色体阳性细胞和 bcr/ abl融合基因 ,显著提高慢性粒细胞白血病 ( CML)患者的血液学和细胞遗传学缓解率 ,延长 CML 患者的生存期 ,被认为是目前治疗 CML 最有前途的方案之一     

抗PTD-bcr/abl多克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备多克隆抗体并初步用于PTD－bcr/abl融合的研究，为慢性粒细胞白血病的免疫治疗提供实验依据。方法 在大肠杆菌中表达PTD－bcr/abl融合蛋白，用所获得的蛋白免疫家兔得到多克隆抗体，并用免疫组化染色，Western-blot等方法进行此抗体的鉴定。结果 （1）表达PTD－bcr/abl融合蛋白。（2）制备了抗PTD－bcr/abl融合蛋白多克隆抗体。（3）并用多克隆抗体以多种方法，检测PTD－bcr/abl融合蛋白，证实此抗体效价高，特异性强。结论 此抗体可用于PTD－bcr/abl融合蛋白的进一步研究。