miR-145-5p在结直肠癌中的表达及对GTPBP2基因靶向调控的研究

［摘要］　目的　探讨miR-145-5p在结直肠癌中的表达及对GTP结合蛋白2（GTPBP2）的调控作用。方法　选择2022年1月至12月在新乡医学院附属商丘市第一人民医院行结直肠癌根治性切除术的44例结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织。选择人正常结直肠黏膜细胞FHC、结直肠癌细胞HCT116进行基础实验。采用荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测癌组织、癌旁组织及细胞的miR-145-5p和GTPBP2 mRNA的表达水平。采用Western blot法检测细胞GTPBP2蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-145-5p与GTPBP2基因的靶向关系。分析结直肠癌组织miR-145-5p表达水平与患者临床病理特征的关联性。结果　与癌旁组织相比,癌组织中miR-145-5p表达水平显著降低（t=8.189,P<0.001）,GTPBP2 mRNA表达水平显著升高（t=11.230,P<0.001）。Pearson相关性分析结果显示,结直肠癌组织miR-145-5p表达水平与GTPBP2 mRNA表达水平呈负相关（r=-0.503,P<0.001）。miR-145-5p表达水平与结直肠癌远处转移、淋巴结转移以及TNM分期存在显著关联（P<0.05）,但与患者性别、年龄、病灶部位、临床T分期、肿瘤直径的关联性不显著（P>0.05）。与FHC细胞相比,HCT116细胞miR-145-5p表达水平显著降低（P<0.05）,GTPBP2 mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。过表达miR-145-5p可下调HCT116细胞GTPBP2 mRNA和蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验结果提示miR-145-5p和GTPBP2基因之间存在靶向关系。结论　miR-145-5p在结直肠癌中呈低表达,并与远处转移、淋巴结转移和TNM分期存在显著关联,其可能通过靶向调控GTPBP2表达而影响结直肠癌的发生、发展。     

miR-4516在鼻咽癌中的表达及临床病理意义研究

［摘要］　目的　探讨miR-4516在鼻咽癌中的表达及临床病理意义。方法　回顾性分析2010年2月至2016年10月广西壮族自治区人民医院收治的60例鼻咽部EB病毒相关性非角化性癌患者（鼻咽癌组）的临床病理资料,另选择同期15例鼻咽黏膜慢性炎患者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测两组病变黏膜组织miR-4516的表达水平并进行比较。分析miR-4516表达水平与鼻咽癌患者临床病理特征及生存预后的关联性。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析miR-4516对诊断鼻咽癌转移的效能。结果　鼻咽癌组miR-4516表达水平高于对照组,差异有统计学意义（Z=4.477,P<0.001）。对于发生转移的鼻咽癌患者,其病变组织miR-4516表达水平高于未发生转移者,差异有统计学意义（P<0.05）。miR-4516表达水平与患者性别、年龄、肿瘤部位、T分期、临床分期均无显著关联（P>0.05）。ROC曲线分析结果显示,miR-4516可用于鼻咽癌转移的诊断［AUC(95%CI)=0.696(0.541～0.851),P=0.037］,最佳截断值为6.28,其对应的灵敏度和特异度分别为0.63、0.75。miR-4516低表达组的生存预后显著优于miR-4516高表达组（log-rank检验： χ²=4.230,P=0.040）。结论　鼻咽癌组织miR-4516表达水平上调,可作为预测鼻咽癌转移和临床预后评估的分子标志物。     

ELMO3在胰腺癌中的表达及临床意义研究

［摘要］　目的　探讨吞噬和运动蛋白3(ELMO3)在胰腺癌中的表达及临床意义。方法　收集2000年1月至2007年12月于新疆军区总医院（63例）及郑州大学附属洛阳中心医院（65例）经胰腺癌切除术获得的标本128例,另取癌旁（约3 cm）正常胰腺组织标本11例作为对照。采用Western blot法及免疫组织化学染色法检测ELMO3在胰腺癌组织及癌旁正常胰腺组织中的表达情况,分析ELMO3表达与胰腺癌患者临床病理指标及预后的关联性。结果　胰腺癌组织ELMO3阳性率高于癌旁正常胰腺组织,差异有统计学意义（83.59% vs 27.27%; χ²=16.199,P<0.001）。Western blot检测结果显示,胰腺癌组织ELMO3表示水平显著高于癌旁正常胰腺组织（t=1.205,P=0.001）。ELMO3表达与肿瘤直径、分化程度、TNM分期及淋巴结转移存在显著关联（P<0.05）。ELMO3阳性组中位生存时间短于ELMO3阴性组（11个月 vs 35个月）,ELMO3阴性组生存预后优于ELMO3阳性组（log-rank检验： χ²=58.602,P<0.001）。Cox回归分析结果显示,ELMO3阳性表达、远处转移以及TNM分期为Ⅲ/Ⅳ期是胰腺癌患者生存预后不佳的独立危险因素（P<0.05）。结论　ELMO3阳性表达与胰腺癌恶性临床病理特征及预后不良有关。     

TRAF6和OTUD5在结直肠癌中的表达情况及其临床意义

［摘要］　目的　探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）和卵巢肿瘤结构域蛋白去泛素化酶5（OTUD5）在结直肠癌（CRC）中的表达情况及其在CRC发生、发展中的机制作用。方法　收集2017年3月至2018年3月在广西医科大学第一附属医院接受手术治疗的50例CRC患者的临床病理资料。选取患者肿瘤的CRC组织及其对应的癌旁组织（距离肿瘤边缘>10 cm）,采用免疫组织化学染色法检测TRAF6和OTUD5的表达情况,并分析其与患者临床病理特征的关联性。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）法检测TRAF6 mRNA和OTUD5 mRNA在人正常结肠上皮细胞株NCM460和CRC细胞株HT29的表达水平。构建过表达TRAF6的HT29细胞系,分析TRAF6与OTUD5的相关性。结果　CRC组织的TRAF6阳性表达率显著高于癌旁组织（84.00% vs 28.00%; χ²=31.818,P=0.000）,OTUD5阳性表达率显著低于癌旁组织（32.00% vs 54.00%; χ²=4.937,P=0.026）。TRAF6阴性组远处转移发生率显著高于TRAF6阳性组（P<0.05）。OTUD5阴性组TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期的人数比例大于OTUD5阳性组,且淋巴结转移和远处转移发生率高于OTUD5阳性组,差异有统计学意义（P<0.05）。HT29细胞的TRAF6 mRNA表达水平显著高于NCM460细胞（t=6.960,P=0.000）,OTUD5 mRNA表达水平显著低于NCM460细胞（t=13.840,P=0.000）。过表达TRAF6的HT29细胞的OTUD5 mRNA表达水平显著低于正常HT29细胞（t=32.555,P=0.000）。结论　TRAF6可能通过抑制OTUD5基因的表达调控CRC的发生、发展和转移。     

CLCA1在结直肠癌中的表达及其基因集富集分析

［摘要］　目的　探讨钙激活的氯离子通道辅助蛋白1（CLCA1）在结直肠癌（CRC）中的表达及其与临床病理特征和预后的关系,分析其基因集富集情况。方法　通过肿瘤基因组图谱（TCGA）数据库下载CLCA1 mRNA表达数据,应用GSEA软件进行CLCA1不同表型的基因集富集分析。分析CLCA1 mRNA在CRC组织与癌旁组织中的差异表达,并分析其与临床病理特征的关联性。采用免疫组织化学染色法分析CLCA1在CRC组织和癌旁组织中的差异。结果　CRC组织中CLCA1表达较癌旁组织明显降低。CRC组织的免疫组织化学染色评分显著低于癌旁组织［（2.46±1.09）分 vs （5.65±0.49）分;t=6.458,P=0.000］。癌旁组织的CLCA1 mRNA表达水平显著高于临床Ⅰ～Ⅱ期CRC组织和临床Ⅲ～Ⅳ期CRC组织（P<0.05）,临床Ⅰ～Ⅱ期CRC组织的CLCA1 mRNA表达水平显著高于临床Ⅲ～Ⅳ期CRC组织（P<0.05）。CLCA1高表达组临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、N分期为N₀期以及M分期为M₀期的人数比例显著大于CLCA1低表达组（P<0.05）。CLCA1高表达组的生存预后显著优于CLCA1低表达组（χ²=8.200,P=0.004）。基因集富集分析结果显示,有19个基因集显著富集于CLCA1高表达表型,未发现有基因集显著富集于CLCA1低表达表型。结论　CLCA1在CRC组织中表达下调,并且与患者的临床病理特征及预后有关,具有作为CRC诊断、治疗和预后预测标志物的潜力。     

耐索拉非尼肝癌细胞株的构建及耐药机制研究

［摘要］　目的　构建耐索拉非尼肝癌细胞株并探讨其耐药机制。方法　应用HepG2、Huh7细胞通过浓度递增法建立耐索拉非尼细胞模型。通过CCK8法检测细胞对不同浓度索拉非尼的敏感性。通过划痕实验检测细胞的迁移能力。通过流式细胞术分析细胞凋亡情况。通过荧光实时定量RT-PCR和Western blot实验检测凋亡相关因子caspase-3和自噬标志因子P62、LC3的表达水平。结果　获得耐索拉非尼肝癌细胞株HepG2-SR、Huh7-SR。随着索拉非尼药物干预浓度的升高，耐药细胞株及野生型细胞株的存活率均逐渐降低。HepG2-SR细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）显著高于HepG2细胞［（15.74±0.38）μM vs （7.27±0.44）μM ；t=5.450，P<0.001］；Huh7-SR细胞的IC₅₀显著高于Huh7细胞［（11.73±0.27）μM vs （4.92±0.31）μM；t=4.807，P<0.001］。相较于野生型细胞株，耐药细胞株具有更高的抗凋亡和迁徙能力。耐药细胞株的caspase-3、P62表达水平显著低于野生型细胞株（P<0.05），而LC3表达水平显著高于野生型细胞株（P<0.05）。结论　耐索拉非尼肝癌细胞株HepG2-SR、Huh7-SR具有更强的抗凋亡、抗生殖抑制和迁移能力，且自噬水平更高，为研究肝细胞癌对索拉非尼的耐药机制提供了基础。     

GOLPH3与VEGF在肺腺癌中的表达及其临床意义

［摘要］　目的　探讨高尔基体磷蛋白3（GOLPH3）与血管内皮生长因子（VEGF）在肺腺癌中的表达及其临床意义。方法　收集安徽医科大学无锡临床学院2015年1月至2017年6月进行手术治疗的66例肺腺癌患者的临床病理资料,分析GOLPH3及VEGF表达与临床病理资料及患者预后的关系。结果　GOLPH3及VEGF在肺腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织（P<0.05）。Cox回归分析显示TNM分期（HR=2.110,95%CI：1.048～4.250,P<0.05）、VEGF高表达（HR=2.136,95%CI：1.039～4.391,P<0.05）及GOLPH3高表达（HR=2.239,95%CI：1.075～4.661,P<0.05）是影响患者生存率的独立危险因素。结论　在肺腺癌中GOLPH3与VEGF高表达,可能促进了肿瘤的发展及转移,并且提示较差的预后。TNM分期、VEGF高表达及GOLPH3高表达是影响患者生存率的独立危险因素。     

癌-睾丸抗原NY-SAR-35在结直肠癌组织中的表达情况及其临床意义

［摘要］　目的　探讨癌-睾丸抗原NY-SAR-35在结直肠癌（CRC）组织中的表达情况及其临床意义。方法　选择2009年10月至2012年5月于广西医科大学第一附属医院普外科接受手术治疗的CRC患者59例。男42例,女17例;年龄30～86（55.55±14.36）岁;TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期38例,Ⅲ～Ⅳ期21例。均经手术取癌组织及配对的癌旁组织。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测组织NY-SAR-35 mRNA的表达情况。分析CRC组织NY-SAR-35 mRNA表达情况与患者临床特征及预后的关联性。结果　CRC组织中NY-SAR-35 mRNA阳性表达率显著高于癌旁组织（35.59% vs 13.56%,P<0.05）。CRC组织NY-SAR-35 mRNA阳性组肿瘤直径≥5 cm的人数比例显著大于阴性组（P<0.05）,但两组在性别、年龄、肿瘤位置、癌胚抗原（CEA）水平、T分期、N分期、M分期、TNM分期、组织学类型和分化程度方面比较差异无统计学意义（P>0.05）。NY-SAR-35 mRNA阴性组的生存预后优于阳性组（生存期：57.24个月 vs 40.71个月;log-rank检验： χ²=4.356,P=0.037）。Cox回归分析结果显示,T分期为T_3～4期、N分期为N_1～3期、M分期为M₁期以及NY-SAR-35 mRNA阳性表达是影响CRC患者生存预后的独立危险因素（P<0.05）。结论　NY-SAR-35 mRNA在CRC组织中高表达,且与患者不良预后具有相关性,具有作为CRC治疗靶点的潜在价值。     

急性冠脉综合征患者血清miR-139-5p表达水平与短期预后的关联性分析

［摘要］　目的　分析急性冠脉综合征（ACS）患者血清miR-139-5p表达水平与短期预后的关联性。方法　招募2021年1月至2021年9月安徽省第二人民医院收治的因胸痛入院的ACS患者176例,其中不稳定型心绞痛(UAP)患者100例（UAP组）、急性心肌梗死(AMI)患者76例（AMI组）。另选择同期因胸痛入院,并经冠脉造影检查排除冠心病的28例患者为对照组。于患者入院次日抽静脉血检测血清miR-139-5p和血管内皮细胞生长因子受体-1（VEGFR-1）表达水平,并收集患者其他临床资料。对所有患者进行6个月随访,记录其主要心血管不良事件（MACE）发生情况。结果　与对照组比较,UAP组和AMI组血清miR-139-5p表达水平更高,VEGFR-1表达水平更低,差异有统计学意义（P<0.05）。且AMI组血清miR-139-5p表达水平较UAP组显著升高（P<0.05）,但两组血清VEGFR-1表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。Pearson相关性分析结果显示,ACS患者血清miR-139-5p表达水平与VEGFR-1表达水平呈负相关（r=-0.189,P=0.010）。Cox回归分析结果显示,较高的血清miR-139-5p表达水平是促进MACE发生的危险因素（P<0.05）。受试者工作特征（ROC）曲线分析结果显示,血清miR-139-5p表达水平能有效预测术后MACE发生［AUC(95%CI)=0.81(0.73～0.89),P<0.001］,其最佳截断值为2.08,对应的灵敏度为82.83%,特异度为66.28%。K-M曲线分析结果显示,血清miR-139-5p表达水平≥2.08的ACS患者的无MACE生存时间较血清miR-139-5p表达水平<2.08者更短,差异有统计学意义（P<0.001）。结论　ACS患者具有较高的血清miR-139-5p表达水平,血清miR-139-5p表达水平≥2.08时提示患者发生MACE的风险较大,应引起临床医师关注。     

YTHDF1和EIF3C在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

［摘要］　目的　分析YTH结构域N6-甲基腺嘌呤RNA结合蛋白F1（YTHDF1）和真核翻译起始因子3C（EIF3C）在上皮性卵巢癌（EOC）中的表达及临床意义。方法　回顾性分析2016年1月至2020年1月徐州医科大学附属医院初诊收治的130例EOC患者的临床资料,另选取同期因卵巢良性囊肿行手术治疗的70例患者的正常卵巢组织作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测组织中YTHDF1 mRNA和EIF3C mRNA表达水平。采用免疫组化染色检测组织中YTHDF1蛋白和EIF3C蛋白表达情况。采用Pearson相关分析探讨YTHDF1 mRNA与EIF3C mRNA表达水平的相关性。分析YTHDF1蛋白、EIF3C蛋白表达情况与EOC患者临床病理特征的关联性。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。采用Cox回归分析EOC患者预后的影响因素。结果　EOC组织中YTHDF1 mRNA、EIF3C mRNA表达水平高于正常卵巢组织,差异有统计学意义(P<0.05)。EOC组织中YTHDF1蛋白、EIF3C蛋白阳性表达率高于正常卵巢组织,差异有统计学意义（P<0.05）。Pearson相关分析结果显示,EOC组织中YTHDF1 mRNA与EIF3C mRNA表达呈正相关（r=0.802,P<0.001）。EOC组织中YTHDF1蛋白、EIF3C蛋白表达情况与肿瘤FIGO分期、病理分级、淋巴结转移情况具有显著关联性（P<0.05）。YTHDF1阴性患者的生存预后优于阳性患者（log-rank检验： χ²=6.120,P=0.013）。EIF3C阴性患者的生存预后优于阳性患者（log-rank检验： χ²=10.610,P=0.001）。Cox回归分析结果显示,FIGO分期Ⅲ期、病理分级Ⅲ级、淋巴结转移、较高的CA125水平以及YTHDF1蛋白、EIF3C蛋白阳性表达是EOC患者不良预后的独立危险因素。结论　EOC组织中YTHDF1、EIF3C表达升高,与不良临床病理特征有关。YTHDF1和EIF3C是潜在的评估EOC预后的生物标志物。     

胆红素对肝星状细胞-T6增殖及细胞周期的影响

[目的]观察胆红素对肝星状细胞(HSC)-T6增殖及细胞周期影响.[方法]将培养细胞分成正常组和胆红素不同浓度(10 μmol/L、30 umol/L、50 /μmol/L、70 μmol/L、100 μmol/L)干预组,采用MTT法观察胆红素对HSC-T6增殖的影响,流式细胞仪观察各组细胞周期的变化.[结果]①不同浓度胆红素对HSC-T6均有促进增殖作用,且呈一定的量效关系,与正常组比较差异有统计学意义(P＜0.05);②10 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L浓度胆红素作用HSC-T6后,G0/G1期减少,S期增加,G2/M期增加,与正常组比较均P＜0.05.[结论]胆红素对HSC-T6均有促进增殖作用.     

睾酮对衰老心肌细胞及细胞周期调控因子的作用

目的 探讨不同剂量睾酮对心肌细胞衰老的干预作用及其可能机制.方法 用1 μmol/L、 100 nmol/L、10 nmol/L三种剂量睾酮干预自然衰老的小鼠心肌细胞,应用流式细胞仪检测各组细胞周期分布,用RT-PCR及Western印迹检测各组细胞p16INK4a、cyclinD1 mRNA、蛋白及去磷酸化RB蛋白的表达.结果 与衰老心肌细胞相比,1 μmol/L、100 nmol/L、10 nmol/L睾酮干预细胞G0/G1期比例明显降低(P＜0.05),这一作用具有剂量依赖性.睾酮干预可上调cyclinD1mRNA及蛋白表达,下调p16INK4a mRNA及蛋白表达,并使去磷酸化RB蛋白表达下降(P＜0.05),而这些作用均可被雄激素受体阻断剂而不被雌激素受体阻断剂所阻断(P＜0.05).结论 睾酮可剂量依赖性的抑制小鼠心肌细胞衰老,这一作用部分是通过睾酮上调cyclinD1表达,下调p16INK4a及去磷酸化RB蛋白表达而实现的.     

苦参素注射液对人食管癌Eca-109细胞周期的影响及机制研究

目的 探讨苦参素对人食管癌Eca-109细胞增殖周期的影响及其机制.方法 运用流式细胞术检测细胞周期变化和调控细胞增殖周期相关蛋白CyclinD1和CDK4的表达.结果 与阴性对照组和阳性对照组比较,苦参素对Eca-109细胞持续作用48 h后,G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少(P均<0.05);CyclinD1和CDK4的表达量均随苦参素剂量增加而减少.结论 苦参素可以明显将人食管癌Eca-109细胞阻滞于G0/G1期,其主要机制可能与CyclinD1及CDK4的低表达有关.     

Responses of the pancreatic A cell during hypoglycemia and hyperglycemia are dependent on the B cell

It is controversial whether stimulation of glucagon secretion by hypoglycemia or suppression by hyperglycemia is a direct effect of glucose on the A cell or whether it is mediated indirectly through the B cell. To determine the role of the B cell in the mediation of glucagon secretion adolescent male baboons were studied before and after successive injections of streptozocin designed to cause B-cell destruction in a series of stages. Following one dose of streptozocin, B-cell function was impaired but fasting blood glucose remained normal. B-cell function declined further with additional doses of streptozocin. As B-cell function declined, there was a corresponding reduction in the glucagon response to hypoglycemia (Ghyp). There were significant correlations between the percentage reduction in Ghyp and the percentage reduction in B-cell function (acute insulin response to arginine, r = .47; acute insulin response to glucose, r = .69; Kg, r = .79). In a second study the ability of hyperglycemia to suppress the acute glucagon response to arginine (AGRarg) was studied. Before streptozocin AGRarg was 128 +/- 26 pg/mL at a glucose level of 80 +/- 4 mg/dL and was suppressed to 74 +/- 20 pg/mL when glucose was raised and clamped at 209 +/- 14 mg/dL. After the initial dose of streptozocin, with mild B cell damage and fasting normoglycemia, AGRarg was not suppressed by hyperglycemia. With severe B cell dysfunction and fasting hyperglycemia, there was paradoxical enhancement of AGRarg by additional hyperglycemia. In conclusion, the ability of the A cell to respond appropriately to hypoglycemia and to arginine during hyperglycemia is dependent on normal B-cell function.     

曲古菌素A对人胃癌细胞增殖和细胞周期的作用

目的 观察曲古菌素A(TSA)对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖及细胞周期的影响,探讨其可能的机制.方法 TSA干预人胃癌SGC-7901细胞24 h后.采用四甲基偶氮唑盐法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期,实时PCR检测细胞周期素D1和p21 mRNA的表达情况.结果 经TSA干预24 h后,人胃癌SGC-7901细胞增殖受抑制,TSA 0.1、0.5和2.0μmol/L组抑制率分别为3.52%±6.11%、13.29%±4.13%和14.24%±2.80%;同时TSA 0.5μmol/L组(71.26%±0.51%)和TSA 2.0μmol/L组(71.03%±0.12%)的G0/Gl期细胞比例明显高于对照组(51.12%±1.17%);TSA 0.5μmol/L组(13.55%±0.44%)和TSA 2.0 μmol/L组(10.63%±0.63%)的S期细胞比例明显低于对照组(34.60%±0.60%).出现G0/G1细胞周期阻滞.TSA干预后细胞周期相关基因细胞周期素D1 mRNA表达下调和p21 mRNA表达上调.结论 TSA通过调控细胞周期相关基因细胞周期素D1和p21的表达,抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,引起G0/G1期细胞周期阻滞,最终影响肿瘤细胞的生长.     

T cell receptor binding kinetics required for T cell activation depend on the density of cognate ligand on the antigen-presenting cell

CD8(+) T cells recognize peptides of eight to nine amino acid residues long in the context of MHC class I molecules on the surface of antigen-presenting cells (APCs). This recognition event is highly sensitive, as evidenced by the fact that T cells can be activated by cognate peptide/MHC complex (pMHC) at extremely low densities (1-50 molecules). High sensitivity is particularly valuable for detection of antigens at low density, such as those derived from tumor cells and intracellular pathogens, which can down-modulate cognate pMHCs from the surface of APCs to evade recognition by the adaptive immune system. T cell activation is only triggered in response to interactions between the T cell receptor (TCR) and the pMHC ligand that reach a specific half-life threshold. However, interactions with excessively long half-lives result in impaired T cell activation. Thus, efficient T cell activation by pMHC on the surface of APCs requires an optimal dwell time of TCR-pMHC interaction. Here, we show that, although this is a requirement at low cognate pMHC density on the APC surface, at high epitope density there is no impairment of T cell activation by extended TCR-pMHC dwell times. This observation was predicted by mathematical simulations for T cell activation by pMHC at different densities and supported by experiments performed on APCs selected for varied expression of cognate pMHC. According to these results, effective T cell activation depends on a complex interplay between inherent TCR-pMHC binding kinetics and the epitope density on the APC.     

苦参总碱对血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨苦参总碱对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及细胞周期的影响.方法 MTT法检测不同浓度苦参总碱对VSMC增殖的影响;考马斯亮蓝法测定细胞总蛋白含量;采用流式细胞仪分析细胞周期.结果 与对照组相比,苦参总碱对VSMC增殖具有抑制作用,该作用呈浓度依赖性;流式细胞术检测结果表明,苦参总碱可以使处于Go/G1期的VSMC百分比增高.结论 苦参总碱是一种有效的抗VSMC增殖的药物.     

Differential effects of the cytoplasmic domains of cell adhesion molecules on cell aggregation and sorting-out.

Cell adhesion molecules (CAMs) are cell surface glycoproteins that play important roles in morphogenesis and histogenesis, particularly in defining discrete borders between cell populations. Previous studies have suggested that the cytoplasmic domains of CAMs play a significant role in their adhesion properties. These domains may also be involved in regulating other cellular interactions, such as those involved in the sorting-out of cells to form tissues. In the present studies, we have compared the effects of replacing the cytoplasmic domain of one CAM with that of another CAM of different homophilic binding specificity on cell adhesion and cell sorting-out. The molecules studied were liver CAM (L-CAM) and the neural CAM (N-CAM) sd polypeptide. One cDNA was constructed that encodes a chimeric molecule composed of the extracellular domain of L-CAM and the cytoplasmic plus transmembrane domains of the sd polypeptide of chicken N-CAM (called L/N-CAM). Another was constructed encoding a truncated L-CAM missing the last 50 residues of the cytoplasmic domain. Permanently transfected lines of mouse L cells were obtained expressing the truncated L-CAM ("L-L-50 cells") or the chimeric L/N-CAM ("L-L/N cells") and were compared with cells expressing intact L-CAM ("L-L cells"). Immunoblotting and ELISA analyses demonstrated that these various cell lines expressed similar amounts of CAMs at the cell surface. Aggregation of L-L and L-L/N cells occurred at similar rates in short-term aggregation assays and was inhibited by antibodies to the extracellular L-CAM binding domain. In contrast, L-L-50 cells did not aggregate. Incubation of transfected cells with cytochalasin D, which disrupts microfilaments, markedly inhibited aggregation of L-L cells but had no effect on L-L/N cell aggregation. Mixed L-L and L-L/N cells co-aggregated in short-term assays; in the longer-term sorting-out assays, however, they behaved differently: L-L cells sorted out from both L-L/N and untransfected cells, whereas L-L/N cells did not sort out from untransfected cells. These studies not only suggest that interactions of cytoplasmic domains of different CAMs with the cytoskeleton can modulate cell adhesion but also suggest that specific interactions with certain cytoskeletal components are required for events such as cell sorting and cell patterning.     

染色体缺失磷酸酶及张力蛋白同源物对胰腺癌细胞系细胞周期和增殖能力的影响

目的探讨10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)对胰腺癌细胞质(ASPC-1)血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达、细胞周期和增殖的影响.方法将质粒pEAK8-PTEN和pEAK8分别转染指数生长期的胰腺癌细胞株(ASPC-1),挑选阳性细胞克隆,扩增培养,用RT-PCR、Western印迹、流式细胞术、生长速率等方法分别检测PTEN对ASPC-1细胞VEGF蛋白、细胞周期及增殖能力的影响.结果ASPC-1细胞转染后,PTEN mRNA表达量是转染前的3倍;ASPC-1、ASPC-1-pEAK8、ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞PTEN蛋白表达量分别为13.2、12.6和21.6,VEGF蛋白表达量分别为17.2、16.5和13.1,转染后较转染前降低.细胞周期显示,ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞较ASPC-1、ASPC-1-pEAK8细胞G2/M、S期细胞增多,Gl期细胞减少,并出现少量凋亡细胞(P＜0.01).ASPC-1-pEAK8-PTEN细胞生长曲线平缓,生长速度较另两种细胞明显降低.结论 PTEN可使ASPC-1细胞VEGF蛋白表达下降,细胞阻滞在G2/M期,抑制肿瘤细胞增殖.