卡氏肺孢子虫肺炎大、小鼠低死亡率动物模型的建立

为建立低死亡率卡氏肺孢子虫肺炎 (PCP)SD大鼠和ICR小鼠动物模型 ,本试验将雌性SD大鼠和ICR小鼠分别随机分为实验组和对照组 ,实验组采用按体重定量皮下注射地塞米松的方法 ,免疫抑制诱导建立PCP动物模型 ,对照组注射与地塞米松等体积的生理盐水。分别制作肺印片 ,经瑞 姬氏复合染色后 ,检查卡氏肺孢子虫包囊。制作肺组织病理切片 ,经HE染色后观察肺组织病理变化。用地塞米松诱导后 ,实验组SD大鼠和ICR小鼠死亡率均为 0 ,肺印片阳性率均为 76 7% (2 3 30和 2 3 30 )。肺组织出现典型的病理变化 ,并可观察到Pc包囊。实验组SD大鼠体重下降明显 ,与对照组体重比较具有极显著性差异 (P <0 0 1)。ICR小鼠经诱导后 ,体重变化不显著。采用按体重定量皮下注射地塞米松的方法可建立低死亡率PCP动物模型     

卡氏肺孢子虫病的诊断及其进展

卡氏肺孢子虫病诊断方面的研究表明，辅助诊断方法缺乏特异性，在确定病人是否有肺感染，感染的程度及疗效的考核上都有一定作用。但ＰＣ感染的最后确诊主要靠病原体检测。取材方法：对于肺感染者应以导痰为首选，其次是ＢＡＬ和ＴＢＬＢ。儿童可采用经皮穿刺肺吸引的方法取材。在前述方法无法实施的紧急情况下，才考虑开胸肺活检。肺外感染者可在病变局部穿刺取材。制片法：可用穿刺物或肺组织等做直接涂片，印片，或悬液滴片等简捷方法，也可采用组织切片。染色方法：常用Ｇｉｅｍｓａ、初检、ＴＢＯ或ＧＭＳ法进一步确诊。ＩＦ可提高检出率。ＰＣＲ技术检测孢子虫病更敏感和特异，有操作简便，易于推广应用等优点。     

双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠TNF-α水平的影响

目的研究双氢青蒿素治疗对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清和肺泡巨噬细胞培养上清液 TNF- α水平的影响。方法以醋酸可的松皮下注射 Wistar大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型 ,用 60 m g/ kg双氢青蒿素治疗实验大鼠 ,杀鼠取肺 ,用胶原酶消化法分离肺泡巨噬细胞 ,用 L PS刺激培养 72 h,同时设有感染组和正常对照。用 TNF- α试剂盒分别检测血清和培养上清液 TNF- α的水平。结果感染组和治疗组 TNF- α水平均高于正常对照 ,治疗组 TNF- α水平则低于感染组。结论卡氏肺孢子虫感染引起大鼠肺泡巨噬细胞分泌高水平的 TNF- α,但双氢青蒿素治疗后 PCP大鼠肺泡巨噬细胞产生 TNF- α水平降低。     

双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响

目的：检测双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响。方法：以醋酸可的松皮下洲Wistar大鼠建立PCP动物模型，对60mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠，杀鼠取肺，用胶原酶消化法分离肺泡巨噬细胞，可PI和TUNEL法检测其凋亡，同时设有正常大鼠对照组。结果：感染组和治疗组大鼠肺泡巨噬．细胞凋亡率显著高于正常对照组，治疗组大鼠肺泡巨噬细胞凋亡率明显低于感染组。结论：卡氏肺孢子虫感染引起大鼠肺泡巨噬细胞发生凋亡，经双氢青蒿素治疗后PCP大鼠肺泡巨噬细胞凋亡降低。     

卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清中TNF—α、IL-8和sICAM-1水平的变化

目的检测卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）大鼠血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1水平。方法建立清洁级SD大鼠PCP动物模型,同时设正常对照组,检测血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1含量。并观察肺脏病理学的变化。结果PCP模型组血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1含量分别是（3．65±0．73）ng／mL、（0．65±0．12）ng／mL和（1247．39±288．57）pg／mL,正常对照组的含量分别是（0．70±0．21）ng／mL、（0．14±0．10）ng／mL和（261．40±53．21）pg／mL,并且PCP模型组肺组织炎症反应明显。结论卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清中TNF-α、IL-8和sICAM-1的含量均升高,并且肺组织炎症反应明显。     

不伴肺阻力增加的大鼠支气管肺高嗜酸粒细胞模型的制备

为促进嗜酸粒细胞基础与临床研究的发展，本文提供了一种不伴肺阻力增加的ＳＤ大鼠支气管肺高嗜酸粒细胞模型的制备方法。结果显示：Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ２００造模组支气管肺灌洗液中嗜酸粒细胞与嗜酸粒细胞占白细胞的百分比较生理盐水对照组明显增加（Ｐ＝０．０１０１和０．００７６），两组之间白细胞数无明显差异（Ｐ＝０．６０３８）。不同剂量乙酰胆碱吸入均可明显增加两组ＳＤ大鼠的肺阻力（Ｐ＝０．０２４３和０．００４３），两组之间肺阻力的增加无明显差异。证明Ｓｅｐｈａｄｅｘ诱导的支气管肺嗜酸粒细胞增多不影响ＳＤ大鼠对乙酰胆碱吸入的反应性     

实验性卡氏肺孢子虫肺炎的病理学研究

Ｗｉｓｔａｒ大鼠皮下注射醋酸考的松诱发卡氏肺孢子虫肺炎，自第６～１２周，每周解剖病鼠２只观察，全部给药鼠均发病。肺部病变表现为：（１）肺印片查见卡氏肺孢子虫包囊和滋养体。（２）组织病理学改变：第６～８周ＨＥ染色切片呈间质性肺炎伴中度淋巴细胞浸润，肺泡内缺乏泡沫样渗出物，第９～１２周肺泡内出现泡沫样渗出物，ＰＡＳ染色该渗出物呈阳性反应，ＧＭＳ染色查见染成黑色的包囊。（３）停用醋酸考的松后４～６周，肺部炎症明显好转，提示大鼠卡氏肺孢子虫肺炎有自愈可能。电镜显示包囊、滋养体及受损肺泡上皮细胞的超微结构。     

微卡对哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的：研究微卡对哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响。 方法： 30只豚鼠随机分为生理盐水组、哮喘组及微卡组，每组10只。微卡组每只豚鼠在OVA致敏前10 d肌注22.5 μg微卡。应用TUNEL法检测肺组织嗜酸粒细胞的凋亡，免疫组化法检测肺组织Bcl-2蛋白的表达。 结果： 微卡组豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡指数（23.78±5.42）%显著高于哮喘组（4.56±0.68）%(P<0.01)；肺组织Bcl-2蛋白平均积分吸光度值（1 556.3±492.4）显著低于哮喘组（2 321.9±751.2）（P<0.05）。 结论： 微卡能诱导哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡，可能与其抑制Bcl-2蛋白在哮喘豚鼠肺组织的表达有关。     

Sephadex介导的大鼠高嗜酸粒细胞血症模型

近年来,随着对支气管哮喘认识的逐步深入,嗜酸粒细胞在支气管哮喘发生中所起的作用已引起了广泛的重视和关注,以嗜酸粒细胞为中心研究支气管哮喘的发病机制及治疗措施也已取得了长足进展[1]。为进一步促进嗜酸粒细胞基础与临床研究的发展,本文提供了一种由Sephadex介导的高嗜酸粒细胞血症模型。1　材料与方法1.1　实验动物　清洁级雄性SD大鼠45只,体重200～220g(由中科院上海实验动物中心提供,饲养及实验室室温为24±2°C,相对湿度为40%±20%),随机分为3组:Sephadex-G200造模组(n=15)、生理盐水组(n=15)和空白对照组(n=15)。1.2　模型制…     

双氢青蒿素对卜氏肺孢子虫肺炎大鼠TNF—α水平的影响

目的 研究双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清和肺泡巨噬细胞培养上清液TNF－α水平的影响。方法 以醋酸可的松皮下注射Wistar大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型,用60mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠,杀鼠取肺,用胶原酶消化法分离肺泡巨噬细胞,用LPS刺培养72h,同时设有感染组和正常对照,用TNF－α水平则低于感染组。结论 卡氏肺孢子虫感染引起大鼠肺泡巨噬细胞分泌高水平的TNF－α,但双氢青蒿素治疗后PCP大鼠肺泡巨噬细胞产生TNF－α水平降低。     

mtLSU-巢式PCR检测实验大鼠卡氏肺孢子虫的实验研究

目的对mtLSU-巢式PCR方法检测大鼠卡氏肺孢子虫的应用价值以及基因序列进行评价。方法采用地塞米松免疫抑制法诱导大鼠感染肺孢子虫;实验组10只,对照组1只;诱导至第7周时收集实验组及对照组大鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液（BALF）标本,采用mtLSU-巢式PCR方法对人源与鼠源肺孢子虫共有的基因进行扩增和序列测定,同时采用镜检法对实验组大鼠肺组织和肺泡灌洗液标本进行检测,评估两种方法的敏感性。结果采用mtLSU-巢式PCR方法对实验感染大鼠肺组织和BAL进行检测,卡氏肺孢子虫DNA阳性率分别为100%（10/10）、90%（9/10）。而GMS染色镜检法检测的阳性率分别为80%（8/10）、60%（6/10）。所测Wistar大鼠卡氏肺孢子虫mtLSU基因序列长度为155bp,与GenBank的大鼠源肺孢子虫（U20170）及人源肺孢子虫（DQ473446）同源性均为100%（154/154、155/155）。结论 mtLSU-巢式PCR方法应用于大鼠卡氏肺孢子虫检测敏感性高,特异性强;获得与人源耶氏肺孢子虫相同的Wistar大鼠卡氏肺孢子虫mtLSU的基因序列。     

抗体介导的支气管肺嗜酸粒细胞增多大鼠的气道阻力增加

在建立不伴气道阻力增加大的大鼠支气管肺嗜酸粒细胞增多的基础上，探索了抗体吸入对其气道阻力变化的影响。结果显示抗大鼠ＳＩｇＡ、ＩｇＡ、ＩｇＧ抗体能在体内显著增加支气管肺嗜酸粒细胞增多大鼠的气管阻力。     

肥大细胞和嗜酸粒细胞在大鼠异位子宫内膜中的变化

目的:观察腹腔子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)模型大鼠造模早期异位组织中肥大细胞和嗜酸粒细胞的变化,探讨它们与子宫内膜异位症发生、发展的关系。方法:建立大鼠EMT动物模型,光、电镜观察术后不同天数异位内膜的形态变化以及肥大细胞和嗜酸粒细胞的分布和数量变化。结果:术后第3天起模型大鼠异位内膜中见一些肥大细胞沿血管分布,8天后见大量肥大细胞浸润,基质中纤维增多,呈环形板层状。9天后基质中嗜酸粒细胞增多。结论:肥大细胞和嗜酸粒细胞的分布和数量变化与异位子宫内膜存活有关。     

卡氏肺大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达的变化

目的探讨卡氏肺孢子虫肺炎(Pneumocysitis carinii pneumonia,PCP)大鼠肺泡巨噬细胞(Alveolar macrophage,AM)TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达的变化。方法采用AM体外培养技术,应用RT-PCR法分别测定脂多糖(LPS)诱导的AM中TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达的动态变化。结果肺泡巨噬细胞受LPS刺激后,PCP模型大鼠TNF-αmRNA在1、4 h表达高于正常组(P<0.05),IL-1βmRNA表达在4、8 h时表达高于正常组(P<0.01),IL-6mRNA表达在8 h时PCP高于正常(P<0.05),表达峰值都提前,并且在4 h达到峰值。结论LPS刺激后,PCP大鼠肺泡巨噬细胞在早期可能更易分泌TNF-α、IL-1β、IL-6作为免疫分子,起免疫防御和免疫损伤作用。     

环介导等温扩增技术检测卡氏肺孢子虫的研究

目的 环介导等温扩增(LAMP)技术检测卡氏肺孢子虫(Pc).方法 醋酸可的松经皮下注射Wistar大鼠诱导Pc,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)提取Pc基因组DNA.设计4条扩增Pc线粒体核糖体大亚基(mtrRNA)基因的LAMP引物,以结核杆菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、弓形虫、大鼠白细胞为对照,进行LAMP反应.LAMP产物经显色、电泳及酶切鉴定.将Pc DNA 10倍稀释后同时进行LAMP和PCR,比较其敏感性.结果 Pc检测管经显色后呈绿色(阳性),对照组均呈棕色(阴性).Pc LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,扩增产物经Tail限制性内切酶酶切鉴定正确,对照组均无扩增产物.LAMP可检测到虫体DNA的最低浓度是lP9/pJ,为PCR的10倍.结论 检测Pc的LAMP方法敏感、特异及简便.     

哮喘青春期自然缓解者血嗜酸粒细胞阳离子蛋白、类胰蛋白酶和吸入性过敏原特异性IgE的变化

目的：对哮喘青春期自然缓解甚而自愈的现象进行探讨,为支气管哮喘的防治提供理论依据。方法：应用Pharmacia Unicap-100系统酶免疫荧光检测仪,分别对23例哮喘青春期缓解者、15例哮喘患者和29例正常人进行吸入性过敏原的特异性IgE抗体（phadiatop）、嗜酸粒细胞阳离子蛋白（ECP）及类胰蛋白酶（Tryptase）检测。结果：哮喘青春期缓解组特异性IgE抗体阳性率为66.66%、嗜酸粒细胞阳离子蛋白（ECP0及类胰蛋白酶（Tryptase）检测。结果：哮喘青春期缓解组特异性IgE抗体阳性率为66.66%、哮喘组阳性率71.42%、正常对照组阳性率为6.89%。哮喘青春期缓解组与哮喘组特异性IgE抗体阳性率接近,几无差别,但两组阳性率均明显高于正常对照组（P＜0.005）。血清ECP值,20％哮喘患者增高,而哮喘青春期缓解者和正常人ECP均无一例增高,哮喘组与绥解组比较,哮喘组与正常人比较均有差异（P＜0.05）和（P＜0.025),而青春期哮喘缓解组与青春期正常人比较,无明显差异（P＞0.05）。哮喘青春期绥解组Tryptase增高率为30.435,而哮喘患者的增高率为53.33％,青春期正常对照组Tryptase增高率为10.34%,3组Tryptase测定结果比较有显著差异（P＜0.0010,青春期哮喘缓解组Tryptase增高率明显低于期哮喘组,但又明显高于正常对照组。结论：期哮喘缓解者虽临床缓解3年以上,但针对吸入性过敏原的特异性IgE抗体及反映肥大细胞活化的Tryptase还处于异常。     

复方磺胺甲恶唑对肾移植后卡氏肺孢子虫肺炎的预防作用

背景：卡氏肺孢子虫肺炎是由卡氏肺孢子虫寄生于肺部引起的一种严重的致命性肺炎。复方磺胺甲恶唑是目前用于治疗卡氏肺孢子虫肺炎的一线药物,治疗量往往有明显的不良反应,小剂量预防用药临床疗效及毒副作用尚不清楚。 目的：观察复方磺胺甲恶唑对肾移植后卡氏肺孢子虫肺炎的预防效果。 方法：选择肾移植后1个月且无复方磺胺甲恶唑过敏者。肾移植后1个月至半年或1年常规服用复方磺胺甲恶唑(0.48 g/d)。观察移植肝肾功能,感染情况,药物不良反应。 结果与结论：2006年起,随访125例肾移植术后早期患者,73例术后1个月起常规服用复方磺胺甲恶唑(0.48 g/d)至术后半年者,1例停药4个月后感染卡氏肺孢子虫肺炎死亡,47例服用复方磺胺甲恶唑(0.48 g/d)至术后1年者,无感染卡氏肺孢子虫肺炎者,5例因复方磺胺甲恶唑过敏或医从性差未服用复方磺胺甲恶唑者,2例分别在术后4,5个月感染卡氏肺孢子虫肺炎,1例死亡。结果提示,肾移植术后1个月至1年常规服用复方磺胺甲恶唑(0.48 g/d),可有效预防卡氏肺孢子虫肺炎,临床无明显不良反应。     

支气管哮喘患者血清骨桥蛋白和嗜酸细胞趋化因子表达及临床意义

支气管哮喘是慢性气道炎症性疾病,嗜酸性粒细胞在气道炎症反应中起重要作用[1]。现认为细胞因子网络失衡是发病的基础,而Th2细胞因子、嗜酸细胞趋化因子(eotaxin)共同诱导的嗜酸性粒细胞募     

卡氏肺孢子虫的分类、命名、体外培养及其动物模型的建立

以往所称的“卡氏肺孢子虫” (Pneumocystiscarinii,Pc)能感染包括人和实验动物在内的多种哺乳动物 ,免疫力低下的宿主感染后能引起致命的卡氏肺孢子虫肺炎 (Pneumocystiscariniipneumonia,PCP )或称肺孢子虫病(Pneumocystosis)。国际上已将原感染人体的卡氏肺孢子虫 (Pneumocystiscarinii)更名为Pneumocystisjeroveci,国内张瑞娟、朱淮民( 2 0 0 3)将其译为耶氏肺孢子虫 ,然尚未被广泛应用。其生物学分类也由原来动物界的原虫定为真菌界的真菌类。重新命名和跨界的分类归属具有重要意义 ,然而 ,国内有关“卡氏肺孢子虫”的报道 ,尚未启…