蛋白激酶C对大鼠逼尿肌肌条收缩活动影响的实验研究

 目的 探讨蛋白激酶C对大鼠离体逼尿肌肌条自发收缩活动的影响.方法 建立逼尿肌不稳定(detrusor instability ,DI)大鼠模型,制做大鼠逼尿肌肌条,观察不同浓度(3×10-7～3×10-4) mol/L的PMA和H-7对DI及逼尿肌稳定(detrusor stability,DS)大鼠逼尿肌肌条自发收缩活动的影响.结果 3×10-7～3×10-6 mol/L的PMA可明显增加DI、DS大鼠逼尿肌肌条自发收缩频率及收缩幅度,且DI组收缩频率高于DS组(P<0.05),但(3×10-5～3×10-4) mol/L的PMA对DI、DS大鼠逼尿肌肌条自发收缩频率和收缩幅度的促进作用无统计学差别(P>0.05).H-7能逆转PMA诱发的DS肌条的收缩作用,可明显抑制DI肌条自发收缩频率(P<0.05),但对其收缩幅度无影响(P>0.05).结论 蛋白激酶C信号通路可能介导了DI逼尿肌自发兴奋性增高的细胞内信号转导过程.     

氧合血红蛋白诱导脑微血管内皮细胞凋亡中半胱天冬酶3和细胞色素C的变化

目的:探讨氧合血红蛋白(oxyhemoglobin,OxyHb)诱导体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMvECs)凋亡的可能机制. 方法:将原代培养的大鼠BMvECs分别与10 μmol/L和100 μmol/L的OxyHb共孵育,在孵育后6、12和24 h分别以流式细胞术、荧光分光光度计法和Western 印迹检测线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potentials,ΔΨm)、半胱天冬酶3(caspase-3)和细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)的表达水平. 结果:经10 μmol/L和100 μmol/L OxyHb刺激6～24 h后,与对照组相比,OxyHb能显著降低血管内皮细胞ΔΨm,而增强Cyt-C和caspase-3的表达,并呈刺激时间和刺激浓度依赖性.与10 μmol/L OxyHb分别孵育6、12和24 h,caspase-3的活性分别为0.103±0.010,0.126±0.010和0.234±0.031,而在OxyHb 100 μmol/L组,其6、12和24 h caspase-3的活性分别为0.154±0.012,0.205±0.020和0.302±0.015. 结论:ΔΨm的下降、caspase-3的激活以及Cyt-C的释放可能是OxyHb诱导BMvECs凋亡的重要机制.     

GDF 11改善老龄鼠内皮依赖性血管舒张功能的实验研究

  目的 探讨生长分化因子11(growth differentiation factor 11, GDF11)对老龄小鼠内皮依赖性血管舒张功能的影响。 方法 选择20只18个月龄C57小鼠随机分为实验组(GDF11组,n=10)和对照组(Vehi组,n=10), GDF11组按0.3 mg/(kg·d)的剂量腹腔注射重组GDF11,Vehi组注射等量生理盐水。4周后取材,检测脂代谢相关的血液学指标,分离小鼠的胸主动脉,测定血管舒张功能和主动脉Samd2/3的磷酸化水平。 结果 与Vehi组比较,GDF11干预显著增强乙酰胆碱(Ach)诱导的内皮依赖性血管舒张功能[10^-6 mol/L Ach: (37.1±5.2)% vs (59.7±4.3)%;10^-5 mol/L Ach: (48.2±4.0)% vs (78.4±5.6)%;10^-4 mol/L Ach: (61.1±4.7)% vs (90.2±7.4)%],降低血清中三酰甘油的水平[(76.6±11.2) vs (64.5±10.4) mg/dl],升高脂联素的浓度[(11.9±1.1) vs (14.2±1.7) μg/ml],并能提高主动脉Samd2/3的磷酸化水平[Smad2: (1.00±0.05) vs (1.78±0.10)]、Smad3 [(1.00±0.09) vs (1.57±0.12)]。 结论 GDF11对血管内皮细胞有保护作用。     

地塞米松对血管内皮细胞11β-HSD1基因表达的影响

目的 探讨地塞米松(Dex)对血管内皮细胞11β羟基类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)mRNA表达的影响,以及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和糖皮质激素(GC)受体在其中所起的作用.方法 先给予不同浓度(10-9、10-8、10-6、10-5、10-3mol/L)的Dex与血管内皮细胞共同培养24h,应用RT-PCR测定各浓度组中11β-HSD1 mRNA水平,其中不接触Dex的细胞为正常对照组;采用p38MAPK特异性抑制剂SB203580(10-2mol/L)及GC受体特异性抑制剂RU486(10-6mol/L)与细胞作用2h后,再加入Dex(10-6、10-3mol/L)作用24h,RT-PCR测定11β-HSD1 mRNA水平,其中仅用Dex处理的细胞作为阴性对照组,不加干扰因素的细胞作为正常对照组.结果 Dex(10-9、10-8、10-6、10-5、10-3mol/L)各个浓度组中11β-HSD1 mRNA/β-actin mRNA(分别为0.120±0.040、0.140±0.020、0.280±0.030、0.360±0.060、0.460±0.040)均不同程度高于正常对照组(0.030±0.004,P＜0.05),并且与Dex浓度呈剂量依赖性.在不同浓度Dex(10-6、10-3mol/L)处理的细胞中,SB20358组中11β-HSD1 mRNA/β-actin mRNA值(分别为0.28±0.03、0.46±0.04)与阴性对照组(分别为0.28±0.03、0.46±0.04)相比没有显著性差异(P＞0.05);而RU486组中11β-HSD1 mRNA/β-actin mRNA值(分别为0.21±0.02、0.36±0.05)与阴性对照组相比显著降低(P＜0.05).结论 Dex可能部分通过GC受体诱导11β-HSD1基因转录增强,而与p38MAPK通路的激活无关.     

精氨酸加压素对血管内皮细胞分泌VEGF的影响

为观察精氨酸加压素(AVP)对血管内皮细胞 (VEC)分泌血管内皮细胞生长因子 (VEGF)的影响 ,以培养的人大网膜VEC为模型 ,检测不同浓度AVP作用下VEGF浓度及蛋白激酶C(PKC)活性。结果显示 ,1× 10 -91× 10 -7mol/LAVP作用 6h后 ,VEGF浓度及PKC活性较对照组明显升高 (P<0 0 1)。提示AVP呈浓度依赖性地刺激VEC分泌VEGF ,PKC可能介导了AVP刺激VEC分泌VEGF的作用。     

高迁移率族蛋白1在大鼠动脉粥样硬化斑块中表达的研究

目的 观察动脉粥样硬化大鼠高迁移率族蛋白1（HMGB-1）的蛋白及基因表达变化,以揭示与炎症相关的动脉粥样硬化发病机制.方法 免疫组织化学染色法观察大鼠主动脉血管动脉粥样硬化斑块内HMGB-1的蛋白表达情况,RT-PCR法检测大鼠主动脉血管HMGB-1的基因表达变化.结果 正常血管壁内存在HMGB-1表达,位于血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞的细胞核内 动脉粥样硬化斑块内HMGB-1分布不均匀,炎症细胞浸润区和坏死区周边基质内表达明显增高,炎症细胞浸润区内以单核-巨噬细胞胞核、胞浆和间质内表达为主,后者成条带状分布于坏死区边缘.动脉粥样硬化斑块内HMGB-1水平均明显升高,与正常血管壁比较差异有显著性（P〈0.01）.结论 动脉粥样硬化大鼠主动脉血管HMGB-1的蛋白及基因表达均明显增强.     

左旋硝基精氨酸诱导的大鼠高血压主动脉血色素加氧酶mRNA表达及活性改变

 目的 研究血色素加氧酶(Heme Oxyenase,HO)在左旋硝基精氨酸(Nω-Nitro-arginine,L-NNA)诱导的大鼠高血压模型主动脉中的改变及HO底物血色素-左旋-赖氨酸(Heme-L-Lysinate,HLL)的影响.方法 对Wistar大鼠每日分别给予L-NNA 15 mg/kg、L-NNA 15 mg/kg并每日加HLL 15 mg/kg,观察大鼠动脉血压,主动脉HO活性、HO-1 mRNA表达的变化.结果 L-NNA可明显诱导大鼠血压升高,在第4周末,与对照组相比,血压平均升高59%(P<0.05).同时加用HLL组血压未见升高.大鼠主动脉HO活性分别增加31.2%和55.2%(与对照组比,P<0.05),HO-1mRNA表达分别增加31.8%和148.0%(均为P<0.05).同时注射HO底物血色素和L-NNA时,主动脉平滑肌HO活性及HO-1 mRNA表达较单纯L-NNA组增加更为明显.结果 表明,HO/CO通路在L-NNA诱导的大鼠高血压形成过程中可呈代偿性上调状态,HO活性的增加是可诱导的HO-1 mRNA表达增加的结果,加用HO底物可降低升高的血压.结论 HO/CO通路参与血管张力的调节,对L-NNA造成的高血压发生发展过程中NOS/NO系统的抑制有代偿作用.     

长期游泳运动对自发性高血压大鼠主动脉血管内皮细胞HSP90表达的影响

目的:研究长期游泳运动对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉血管内皮细胞HSP90(heat shock protein 90)表达的影响及其对血管内皮功能的作用。方法:16只自发性高血压大鼠随机分为SHR运动组8只,SHR对照组8只,8只雄性Wistar大鼠作为正常对照组。SHR运动组每天进行90 min无负重有氧游泳运动,每周6天,共8周。每周测定大鼠血压1次,8周后,测定各组大鼠主动脉血管内皮细胞HSP90含量。结果:与SHR对照组相比,SHR运动组血压显著降低,主动脉血管内皮细胞HSP90含量显著升高。与正常对照组相比,SHR运动组和SHR对照组主动脉血管内皮细胞HSP90含量升高,但无统计学意义。结果提示长期有氧运动可以促进主动脉血管内皮细胞HSP90表达的增加,降低血压。     

新辅助化疗对口腔鳞癌环氧化酶2的影响及意义

目的:探讨新辅助化疗对口腔鳞癌环氧化酶2(cycloxygenase 2,COX - 2)、增殖细胞核抗原Ki - 67表达和微血管密度(microvessel density,MVD)的影响及临床意义.方法:对从2004年1月～2007年6月间联合应用长春新碱和氨甲蝶呤行新辅助化疗的25例口腔鳞癌患者(辅助化疗组)与既往术前未作任何辅助治疗的28例口腔鳞癌患者(对照组)进行回顾性研究,应用免疫组织化学法检测两组肿瘤标本中的COX - 2(光密度)、Ki - 67(增殖指数)表达和微血管密度(MVD). 结果:辅助化疗组COX - 2、Ki - 67表达和MVD分别为(2.63±0.50)×105、(34.3±7.1)%和(25.6±4.2)条/HP,显著小于对照组的(3.47±0.67)×105、(44.6±9.6)%和(33.8±5.9)条/HP.COX - 2与Ki - 67和MVD均为正相关关系,相关系数分别为0.574(P＜0.0001)和0.462(P=0.0005). 结论:新辅助化疗可能通过抑制COX - 2的表达及降低肿瘤细胞增殖活性,达到减少肿瘤新生血管生成的作用.     

血红素加氧酶-一氧化碳系统舒张离体大鼠阴茎海绵体平滑肌作用的研究

 目的 探讨血红素加氧酶-一氧化碳(HO-CO)系统对离体大鼠阴茎海绵体平滑肌的舒张效应,并初步探讨其舒张作用的机制.方法 采用离体大鼠阴茎海绵体肌条张力记录法,观察氯高铁血红素(Hemin)诱导的HO-CO系统对去氧肾上腺素(PE)预收缩的阴茎海绵体肌条的舒张作用;采用放射免疫法,观察Hemin诱导的HO-CO系统对离体大鼠阴茎海绵体组织中cGMP和cAMP水平的影响.结果 Hemin对10 μmol/L PE诱导收缩的离体大鼠阴茎海绵体肌条具有浓度依赖性松弛作用,1、3、10、30、100 μmol/L的Hemin对PE诱导收缩的阴茎海绵体肌条的松弛效应分别为(3.2±1.2)%、(10.6±2.2)%、(21.5±2.7)%、(38.0±3.1)%和(66.5±3.8)%(P<0.01);100 μmol/L的Hemin对大鼠阴茎海绵体组织中cGMP和cAMP的水平均无影响.结论 HO-CO系统能有效舒张离体大鼠阴茎海绵体平滑肌,其机制可能与CO- cGMP或CO-cAMP通路无关.