缺氧诱导体外绒毛组织转化生长因子3β表达及调控

 目的探讨低氧对体外培养的绒毛组织转化生长因子3β(TGF-3β)表达的诱导作用,以及缺氧诱导因子1(HIF-1)对TGF-3β表达的调控作用.方法取孕早期绒毛组织分4组培养:正常对照组、缺氧组、HIF-1α反义组和HIF-1α正义组.HIF-1α反义组和HIF-1α正义组先加入HIF-1α寡核甘酸,低氧条件培养48h.48h后,收集培养的绒毛组织,实时定量PCR方法检测TGF-3β和HIF-1α mRNA表达水平;Westem blot方法检测TGF-3β和HIF-1α蛋白表达水平.结果与正常对照组相比,缺氧组的HIF-1α mRNA和蛋白表达增加,TGF-3β mRNA和蛋白表达也升高;与HIF-1α正义组比较,HIF-1α反义组HIF-1α mRNA和蛋白表达降低,TGF-3βmRNA和蛋白表达也下降.结论缺氧可以诱导体外培养的绒毛组织TGF-3β表达,且缺氧对TGF-3β表达的诱导作用可能通过HIF-1调控.     

血小板反应蛋白-1、转化生长因子-β、基质金属蛋白酶-9在心脏瓣膜置换术后新发心房颤动中表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、转化生长因子-β(TGF-β)、血小板反应蛋白-1(TSP-1)在心脏瓣膜置换术后新发心房颤动(AF)中的表达及意义。方法选取自2015年12月至2016年12月北部战区总医院收治的择期行瓣膜置换术的60例风湿性心脏病患者为研究对象,根据术后心电图有无持续性AF将所有患者分为窦性心律(SR)组和AF组,每组各30例。通过酶联免疫吸附(ELISA)、蛋白质印迹法(Western blot)和石蜡切片染色检测TSP-1、TGF-β、MMP-9表达情况及心房纤维化情况。结果术后AF组患者血清及右心耳TSP-1、TGF-β、MMP-9水平明显高于SR组,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,AF组术后右心耳TSP-1、TGF-β、MMP-9表达水平显著升高。AF组患者右心耳TSP-1、TGF-β、MMP-9表达水平均显著高于SR组,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示,TSP-1、TGF-β、MMP-9表达变化与心肌胶原容积分数呈正相关(P<0.05)。结论脏瓣膜置换术后患者TSP-1、TGF-β、MMP-9表达水平升高是术后AF的重要影响因素,血清及心房组织中TSP-1、TGF-β、MMP-9表达水平测定为临床预防及治疗术后AF提供了依据。     

缺氧诱导因子-1α对肺动脉平滑肌细胞端粒酶反转录酶的转录调节作用

目的 研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对缺氧状态下大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)中端粒酶反转录酶(TERT)表达的调控作用.方法 培养大鼠PASMC,采用RT-PCR分别检测HIF-1α激动剂(CoCl2、DFX)、HIF-1α抑制剂(FAS)、代谢抑制剂(CBZ-LLL)、反义寡核苷酸等作用后及缺氧条件下HIF-1α、TERT mRNA的表达,Western blotting检测HIF-1α蛋白的表达.结果 缺氧4h条件下HIF-1α、TERT mRNA的表达量(分别为0.59±0.07、0.60±0.06)明显高于对照组(分别为0.11±0.02、0.10±0.01,P＜0.05).与对照组相比,加入DFX后,HIF-1α、TERT mRNA表达量(分别为0.52±0.06、0.45±0.04)明显升高(P＜0.05);加入CoCl2后,HIF-1α、TERT mRNA表达量(分别为0.99±0.08、0.72±0.07)也明显升高(P＜0.05).加入FAS后,HIF-1α、TERT的mRNA表达量(分别为0.09±0.01、0.13±0.01)较缺氧组(分别为0.65±0.06、0.52±0.04)明显降低(P＜0.05).加入CBZ-LLL后,HIF-1α mRNA表达量(0.09±0.01)与对照组(0.06±0.01)比较无明显差异(P＞0.05),但TERT mRNA表达量(0.82±0.07)较对照组(0.08±0.01)明显升高(P＜0.05).加入CoCl2和CBZ-LLL后,HIF-1α蛋白表达量(分别为12.0±1.1、9.0±0.8)较对照组(1.0±0.1)明显升高(P＜0.05).缺氧条件下,加入反义寡核苷酸后TERT mRNA表达量(0.20±0.01)较缺氧组(0.75±0.06)明显降低(P＜0.05),但加入错配寡核苷酸的TERT mRNA表达量(0.70±0.06)与缺氧组相比无明显差异(P＞0.05);常氧条件下,同时加入反义寡核苷酸、CoCl2后PASMC的TERT mRNA表达量(0.45±0.04)较CoCl2组(0.95±0.08)明显降低(P＜0.05).结论 HIF-1α对缺氧状态下大鼠PASMC中TERT的表达具有调控作用.     

基质金属蛋白酶-2与低氧诱导因子-1α在子宫内膜异位症中的表达及其意义

目的通过观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在子宫内膜异位症中的表达,探讨子宫内膜异位症的发病机制及MMP-2与HIF-1α的关系。方法应用免疫组化法检测子宫异位内膜(异位内膜组40例)、子宫在位内膜(在位内膜组40例)及正常内膜(正常内膜组20例)中MMP-2、HIF-1α蛋白的表达水平。结果 MMP-2、HIF-1α的阳性表达分别位于腺上皮细胞的细胞膜和细胞质及细胞核和细胞质,异位内膜组阳性表达高于在位内膜组与正常内膜组(P<0.05),在位内膜组阳性表达高于正常内膜组(P<0.05);MMP-2与HIF-1α表达强度的变化呈正相关(r=0.657,P<0.05)。结论在子宫内膜异位症组织中MMP-2和HIF-1α的表达明显增高,且HIF-1α可能参与调控MMP-2的表达。     

电离辐射诱导HIF-1α-Survivin通路在人淋巴瘤细胞中的活化

目的 研究电离辐射对人非霍奇金淋巴瘤细胞中HIF-1α-Survivin通路活化状态的影响,探讨恶性淋巴瘤放射抗性的机制.方法 采用Western blot方法检测辐射后3种淋巴瘤细胞中HIF-1α和Survivin蛋白的表达水平,观察应用HIF-1α抑制剂Echinomycin及转染反义HIF-1a siRNA对Survivin蛋白及mRNA表达的影响.结果 在人非霍奇金淋巴瘤细胞中存在HIF-1α和Survivin蛋白的表达,X射线照射后10～20 h出现HIF～1α蛋白表达增加,照射后24 h Survivin蛋白表达增加,与对照组比较差异有统计学意义(t =7.53 ～31.31,P＜0.01).与单纯照射组比较,采用HIF-1α抑制剂预处理肿瘤细胞后,Survivin蛋白表达下降,且具有药物浓度依赖性(t=7.21 ～32.81,P＜0.01).而转染反义HIF-1α siRNA后,照射未诱导产生survivin mRNA和蛋白表达增加.结论 电离辐射能够活化人非霍奇金淋巴瘤细胞中的HIF-1α-Survivin通路,可能与肿瘤的放射抗性有关.     

银杏叶片对大鼠肝纤维化的影响

目的 研究银杏叶片对大鼠肝纤维化的治疗效果,为其在临床上的应用提供理论依据.方法 70只Wistar大鼠随机分成空白对照组(10只)和模型组(60只).应用复合造模方法(CCl4、高脂饮食和乙醇)处理2个月后,随机杀取3只大鼠确认造模成功并留取肝组织.将造模后剩余的30只模型组大鼠再分为自然恢复组和高、低剂量治疗组3组,其中高、低剂量治疗组正常进食水且每日以银杏叶片灌胃,空白对照组及自然恢复组正常进食水,同时每日予以等量自来水灌胃.2个月后留取血清、肝组织,测血清透明质酸(HA)含量及肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,行组织病理学检查评价肝纤维化形成情况,行免疫组化分析TGF-β1、α-SMA表达情况.结果 自然恢复组血清HA及肝组织Hyp较空白对照组显著升高(P＜0.05),高、低剂量治疗组较自然恢复组显著下降(P＜0.05);免疫组化结果显示自然恢复组TGF-β1、α-SMA较空白对照组升高(P＜0.05),高、低剂量治疗组较自然恢复组显著下降,且TGF-β1与α-SMA之间具有正性相关(高剂量治疗组:r=0.735,P＜0.05;低剂量治疗组:r=0.936,P＜0.01).结论 银杏叶片可通过FGF-β1途径调节肝星状细胞(HSC)的活性而达到抗纤维化的作用.     

熊果酸对TGF-β1诱导肝细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的 研究熊果酸(UA)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肝细胞凋亡的干预作用及其机制.方法 采用原位灌注法分离健康SD大鼠原代肝细胞,随机分成空白对照组、UA自身对照组(UA 25μmol/L)、TGF-β1组(TGF-β12.5ng/ml)、UA干预组(UA 25μmol/L+TGF-β12.5ng/ml)、DPI干预组(DPI 0.5μmol/L+TGF-β12.5ng/ml).药物作用相应时间后,采用流式细胞术检测肝细胞增殖及凋亡情况,荧光定量PCR法检测肝细胞内CD95(Fas) mRNA的表达,Western blotting检测肝细胞内CD95蛋白的表达以及NADPH氧化酶(NOX)亚基p47phox移位至胞膜的蛋白量,并采用活性氧(ROS)检测试剂盒检测肝细胞内ROS水平.结果 在TGF-β1刺激肝细胞前30min加入UA进行干预可明显降低TGF-β1诱导的肝细胞凋亡率(80.53％±1.56％vs 63.97％±3.19％,P＜0.01),肝细胞增殖指数明显增加(10.83％±2.03％vs 18.67％±1.60％,P＜0.01),细胞内CD95 mRNA及蛋白表达均明显下调(2.40±0.25 vs 1.28±0.15,P＜0.01;1.37±0.18vs 1.05 ± 0.15,P＜0.05),p47phox向膜移位明显减少(1.76±0.22 vs 1.13±0.12,P＜0.01),肝细胞中ROS水平明显降低(3.23±0.53vs2.12±0.45,P＜0.01).结论 UA可能通过抑制肝细胞内NOX激活,减少ROS产生,下调CD95的表达来抑制TGF-β1诱导的肝细胞凋亡.     

电离辐射诱导NF-κB-HIF-1α通路在人淋巴瘤细胞中的活化

目的 观察电离辐射对恶性淋巴瘤细胞中NF-κB-HIF-1α通路的活化状态的影响,探讨恶性淋巴瘤放射抗拒的可能机制.方法 采用Western blot免疫印迹分析方法,检测5 Gy X射线照射1、4、10和20 h后,Namalwa、Ramos和Raji 3种恶性淋巴瘤细胞系中NF-κB、HIF-1α及其相关蛋白IKK的表达水平,观察1、10和50 nmol/L NF-κB抑制剂QNZ对HIF-1α等蛋白表达的影响.结果 照射4 h后,3种淋巴瘤细胞中IKK蛋白表达增加(t=8.01、5.14和5.42,P＜0.01).10 h后,3种淋巴瘤细胞核p-P65蛋白表达增加(t=11.25、17.43和22.09,P＜0.01),至20 h时表达开始下降.10～20 h时,3种淋巴瘤细胞HIF-1α蛋白表达增加,与0 h相比,差异均有统计学意义(t=19.05、12.44和12.88,P＜0.01).与单纯照射组相比,采用NF-κB抑制剂预处理3种肿瘤细胞24 h后,HIF-1α蛋白表达下降,且随药物浓度的增加而下降(t=18.69、19.35和12.26,P＜0.01).结论 电离辐射能够活化恶性淋巴瘤细胞中的NF-κB-HIF-1α通路,可能是肿瘤放射抗拒的机制之一.

Abstract：

Objective To observe the effect of X-ray radiation on NF-κB-HIF-1α pathway activation in three malignant lymphoma and to explore the mechanism of radioresistance mediated by this pathway.Methods Expression levels of p-P65,IKK and HIF-1α in Namalwa,Ramos and Raji cells were determined by Western blot 1,4,10 and 20 h after 5 Gy X-ray irradiation.The effect of QNZ on HIF-1α expression was also observed.Results Expression level of IKK protein was up-regulated 4 h after irradiation in the 3 lymphoma cell strains( t = 8.01,5.14,5.42,P ＜ 0.01 ),followed by up-regulation of p-P65 protein expression level at 10 h and HIF-1α at 10-20 h after X-ray irradiation (t = 11.25,17.43,22.09,P ＜ 0.01 ).Pretreatment of QNZ 24 h before X-ray irradiation significantly reduced the upregulation of HIF-1α protein expression induced by simple ion radiation ( t = 18.69,19.35,12.26,P ＜0.01 ).Conclusion NF-κB - HIF-1α pathway was activated in human lymphoma cells after ion radiation and may be involved in the mechanism of radioresistance.     

慢病毒载体介导HIF-1α RNAi对人胰腺癌细胞Patu8988相关基因表达的影响

目的 探讨慢病毒表达载体介导HIF-1α RNA干扰(RNAi)对人胰腺癌细胞Patu8988HIF-1α和Glut-1表达的影响.方法 构建针对HIF-1α基因的RNAi慢病毒表达载体LV-RNAi-HIF-1α.乏氧条件下体外培养4h,转染LV-RNAi-HIF-1α的Patu8988细胞为实验组;转染空病毒载体和未转染任何病毒载体Patu8988细胞分别为阴性对照组和空白对照组.采用荧光定量RT-PCR和Western印迹法检测Patu8988细胞HIF-1α表达情况,采用RT-PCR法检测转染LV-RNAi-HIF-1α后Patu8988细胞Glut-1的表达情况.采用SPSS 17.0软件行单因素方差分析和两样本t检验分析各组之间的差异.结果 构建的慢病毒表达载体LV-RNAi-HIF-1α,在常氧和乏氧状态下致HIF-1α mRNA表达分别下降65.1％(0.209/0.321)和80.6％ (0.791/0.982)(t=10.52和15.24,均P＜0.05),阴性对照组分别为0.6％(0.002/0.321)和7.2％(0.071/0.982)(t=5.26和7.38,均P＜0.05);乏氧状态下实验组、阴性对照组和空白对照组HIF-1α蛋白的表达分别为0.159±0.010、0.745±0.012和0.711±0.023,差异有统计学意义(F=35.52,t=6.72和10.56,均P＜0.05),实验组较其他2组表达下降;乏氧条件下实验组Glut-1 mRNA表达(0.040±0.003)较阴性对照组(0.054±0.003)和空白对照组(0.062±0.004)均有明显下降(F=35.28,t=5.94和8.55,均P＜0.01).结论 通过构建LV-RNAi-HIF-1α慢病毒表达载体沉默HIF-1α基因表达,可降低Patu8988胰腺癌细胞Glut-1 mRNA表达.     

RNA干扰阻滞胸腺素β4表达对TGF-β1诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化的抑制作用

目的 探讨RNA干扰阻滞胸腺素β1表达对TGF-β1诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)的抑制作用.方法 构建能表达针对胸腺素β1的小干扰RNA(siRNA)的重组腺病毒载体,以及表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照载体,分别感染人肾小管上皮细胞株(HKC),得到胸腺素β1表达受抑制的HKC-siTβ4和胸腺素β4表达未受影响的HKC-siC.根据用TGF-β1处理HKC、HKC-siTβ4和HKC-siC的情况,将培养的细胞分为4组:正常HKC组(C组),TGF-β1处理HKC组(T C组),TGF-β1处理HKC-siTβ1组(T siTβ1组)和TGF-β1处理HKC-sic组(T siC组).48h后,分别采用RT-PCR和Western blotting检测各组胸腺素β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏素表达,并分析胸腺素β1和α-SMA表达量的相关性.结果 C组胸腺素β4表达弱阳性,α-SMA表达阴性,E-钙黏素表达强阳性;T C组胸腺素β1和α-SMA表达强阳性,E_钙黏素表达较C组减弱(P＜0.01);T siTβ1组胸腺素β1和α-SMA表达弱阳性,表达量显著低于T C组(P＜0.01),E-钙黏素显著高于T C组(P＜0.01);T siC组胸腺素β1、α-SMA和E-钙黏素表达与T C组相比均无显著差异(P＞0.05).胸腺素β4和α-SMA表达呈显著正相关.结论 RNAi阻滞胸腺素β4表达能有效地抑制TGF-β1诱导EMT,提示胸腺素β4是介导TGF-β1诱导EMT的重要分子.     

PLC/PIP2信号通路在辐射诱导NRP1+Treg 细胞中的作用机制

目的 观察X射线照射后小鼠胸腺细胞中CD4+ CD25+ NRP1+ Treg细胞数量及TGF-β1分泌量的变化,并探索PLC/ PIP2信号通路在其中的作用机制.方法 36只ICR小鼠按随机数字表法分为假照组、0.5、1.0、2.0、4.0和6.0 Gy的不同剂量组,X射线深部治疗机进行全身照射,于照射后16 h应用流式细胞仪分析小鼠胸腺细胞中CD4+ CD25+ NRP1+ Treg细胞的变化,ELISA法检测胸腺细胞TGF-β1含量的变化.EL-4细胞株经PKC激动剂(PMA)、Ca2+阻断剂(TMB-8)作用2h后并经4 GyX射线照射,于照射后48 h应用流式细胞术及ELISA法分别检测CD4+CD25+ NRP1+ Treg细胞及TGF-β1含量的变化.结果 小鼠胸腺细胞中NRP1+ Treg在0.5 GyX射线作用后稍有下降,于1.0 Gy降至最低(t=6.96,P＜0.01),而后呈剂量依赖性升高,于6.0 Gy升至最高(t =6.70,P＜0.01);胸腺细胞TGF-β1在0.5 GyX射线照射后显著下降(t=12.53,P＜0.01),而1.0～4.0 Gy照射后则呈剂量依赖性升高,于6.0 Gy仍保持高水平(t=10.40 ～ 15.30,P＜0.01).PMA作用后,与假照组相比,单独PMA组NRP1+ Treg细胞表达显著降低(t=3.06,P＜0.01),而联合照射后表达则明显上调(t=8.27,P＜0.01),TGF-β1无论受照与否,其含量均明显降低(t=10.46 ～39.69,P＜0.01);而TMB-8作用后,无论受照与否CD4+ CD25+ NRP1+ Treg的表达及TGF-β1的分泌量均显著上调(t=5.53～44.26,P＜0.01).结论 高剂量电离辐射可以诱导小鼠胸腺细胞中NRP1+ Treg细胞表达并增加TGF-β1的含量,此现象可能与启动PLC/PIP2信号通路有关.     

阿托伐他汀对心房纤维化大鼠中转化生长因子-β1的调节作用

目的：采用大鼠心房纤维化模型,探讨阿托伐他汀对转化生长因子-β1的调节作用。方法：将30只雄性Wistar大鼠随机等分为对照组（A）、异丙肾组（B）、异丙肾＋阿托伐他汀组（C）,并造模给药。8周后处死,Masson染色法测心房纤维化程度;免疫组化法测定及半定量分析心肌组织TGF-β1的分布特征,RT-PCR测心肌组织TGF-β1 mRNA表达情况。结果：C组大鼠心房纤维化程度较B组明显减轻;组织中TGF-β1含量及mRNA表达量明显减少（P〈0.05）;C组大鼠较A组各指标均无明显变化。结论：阿托伐他汀能显著改善大鼠心房纤维化程度,该作用可能与其减少大鼠心肌中TGF-β1含量有关。     

苦参素对慢性乙型肝炎患者血清TGF-β1、TNF -α及肝纤维化指标的影响

 目的探讨苦参素在慢性乙型肝炎中抗肝纤维化的作用机制.方法采用ELISA和RIA方法对治疗Ⅰ组(对照组)和治疗Ⅱ组(苦参素组)患者治疗前及治疗3月后的慢性肝炎轻度、中度、重度及肝硬化患者171例血清转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PcⅢ)、Ⅳ胶原(C-Ⅳ)、层连蛋白(LN)含量进行测定,并设立30例健康献血人员作为正常组.结果治疗前两组患者血清TGF-β1、TNF-α、HA、PcⅢ、C-Ⅳ、LN均不同程度的升高,与正常组相比差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01);治疗后均有不同程度的降低,治疗Ⅱ组治疗后与治疗前相比明显下降(P＜0.05或P＜0.01),并与治疗Ⅰ组在慢性肝炎中度、重度、肝硬化间差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01).结论苦参素具有逆转肝纤维化的作用,有部分机制通过抑制TGF-β1、TNF-α的分泌,并且具有良好的耐受性.     

糜酶介导自发性高血压大鼠心肌纤维化的作用机制

目的:观察糜酶对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的影响及作用机制。方法:采用RT-PCR检测心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原和糜酶mRNA表达,Western blot检测转化生长因子β1(TGF-β1)和过氧化酶体增殖物激活受体α(PPARα)蛋白表达。结果:SHR组和糜酶抑制剂(CHI)组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA、TGF-β1蛋白高于对照组,PPARα蛋白低于对照组(P<0.01,P<0.05)。SHR组糜酶mRNA高于对照组(P<0.01)。结论:糜酶参与心肌纤维化,其机制与TGF-β1蛋白上调、PPARα蛋白下调有关。     

活性维生素D对肾病大鼠的肾脏保护作用

目的观察转化生长因子-β1（TGF-β1）、α3β1整合素在Heymann肾病鼠肾小球的表达以及活性维生素D1,25-（OH）2D3对两者表达的影响。方法SD大鼠随机分为正常对照组（NC）和Heymann肾病模型组;后者经腹腔注射肾小管刷状缘抗原诱导肾病模型,再随机分为Heymann肾病组（HN）和1,25-（OH）2D3治疗组（HT）。HT组皮下埋置渗透性微量泵,给予1,25-（OH）2D3,3ng/（100g.d）,连用4周。检测大鼠血清中的肌酐（Cr）、钙（Ca）、磷（P）、甲状旁腺素（PTH）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）,尿蛋白（UP）、尿足细胞（UPC）。电镜观察每视野足细胞数、足突平均宽度。逆转录-聚含酶链反应法检测肾小球TGF-β1,α3整合素mRNA表达水平的变化。蛋白印迹检测肾小球TGF-β1,α3整合素蛋白的表达。结果与NC组相比,HN组大鼠Cr、P、PTH、AngⅡ明显升高,Ca降低;UP、UPC排泄明显增多;足细胞数目减少,足突宽度增加;肾小球TGF-β1mRNA和蛋白的表达水平明显增加,而α3整合素mRNA和蛋白表达明显降低。与HN组相比,HT组Ca无显著差异,PTH、AngⅡ明显降低;UP、UPC排泄明显减少;足细胞数目增加,足突宽度变窄;肾小球TGF-β1mRNA和蛋白的表达下调,α3整合素表达上调。结论1,25-（OH）2D3可能是AngⅡ的负向调节因子,可减少Heymann肾病鼠尿蛋白及尿足细胞的排泄,下调肾小球TGF-β1的表达,增加α3β1整合素的表达,从而减少足细胞脱落,维持肾小球足细胞数量。     

Wnt阻滞剂Dickkopf-1对肾小管上皮细胞转分化的抑制作用

目的 研究Wnt阻滞剂Dickkopf-1 (Dkk-1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响.方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞(HKC),收集后分3组:对照组细胞以含10％胎牛血清的培养基常规培养,TGF-β1组在常规培养基中加入TGF-β1(终浓度20ng/ml),TGF-β1+Dkk-1组同时加入TGF-β1(终浓度20ng/ml)和Dkk-1(终浓度100ng/ml).培养48h后在倒置相差显微镜下进行形态观察,分别采用RT-PCR和Western blotting检测Wnt4、β-catenin、E-cadherin、α-SMA mRNA及蛋白表达情况,细胞免疫荧光染色观察E-cadherin和α-SMA的表达.结果与对照组比较,TGF-β1组和TGF-β1+Dkk-1组Wnt4 mRNA和蛋白表达水平均显著增高(P＜0.05),后两组间差异无统计学意义(P＞0.05).β-catenin mRNA表达在各组之间差异无统计学意义(P＞0.05).β-catenin蛋白在对照组呈低表达,TGF-β1组表达明显上调,TGF-β1+Dkk-1组较TGF-β1组表达下调(P＜0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).E-cadherin mRNA和蛋白在对照组呈高表达,TGF-β1组表达明显降低,TGF-β1+Dkk-1组较TGF-β1组表达显著增高(P＜0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).α -SMA mRNA和蛋白表达在对照组和TGF-β1+Dkk-1组的表达均较TGF-β1组明显降低(P＜0.05).细胞免疫荧光染色显示E-cadherin和α-SMA表达与RT-PCR和Western blotting检测结果一致.结论Wnt阻滞剂DickkopGl能抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化.     

SIRT1基因沉默在辐射诱导的NLRP3和IL-1β表达中的作用研究

目的 研究沉默信息调节因子1（SIRT1）基因沉默对间充质干细胞（MSCs）受照后Nod样受体蛋白3（NLRP3）和IL-1β表达的影响,探讨SIRT1激活剂——白藜芦醇的辐射防护作用及其机理。 方法 将MSCs分为空白对照组、单纯照射组、RNA干扰组、白藜芦醇组和RNA干扰+白藜芦醇组。采用酶联免疫吸附测定、Western blot和RT-PCR等方法检测IL-1β、SIRT1和NLRP3在蛋白和mRNA水平的表达。 结果 辐射可导致MSCs细胞外IL-1β分泌水平明显升高,给予白藜芦醇后,细胞IL-1β分泌水平较单纯照射组显著下降（t=21.68,P＜0.01）,NLRP3和IL-1β mRNA水平较单纯照射组明显降低（t=14.44,P＜0.01;t=12.35,P＜0.01）,SIRT1基因沉默后,NLRP3和IL-1β的mRNA水平回升至单纯照射组水平（t=14.86,P＜0.01;t=11.12,P＜0.01）,即使再给予白藜芦醇,NLRP3和IL-1β的mRNA水平仍明显高于白藜芦醇组（t=11.31,P＜0.01;t=10.54,P＜0.01）。 结论 SIRT1基因沉默减弱了白藜芦醇对辐射诱导的NLRP3和IL-1β的抑制作用,说明白藜芦醇可能通过激活SIRT1、抑制NLRP3、降低IL-1β的表达,从而减轻辐射引起的细胞损伤。     

缺氧诱导因子-1α在兔VX2肝癌模型TACE术后的表达及其临床意义

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在兔VX2肝癌模型TACE术后的表达及其与肿瘤血管生成的相关性.方法 24只荷VX2瘤兔随机分为3组,每组8只.对照组:经肝动脉注入生理盐水2ml;TAE组:单纯碘油(UFLP)0.5～0.8 ml栓塞,TACE组:碘油抗癌药混悬液(UFLP THP)栓塞,UFLP 0.5～O.8 ml,THP 2 mg.于术后2周应用免疫组化法分别检测肿瘤组织中HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,用CD34单克隆抗体标记肿瘤血管内皮细胞,计数肿瘤组织中的微血管密度(MVD).结果 TAE组和TACE组HIF-1α、VEGF表达与MVD值均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),HIF-1α与VEGF的表达及MVD的变化呈正相关(rs=0.537,P＜0.01;rs=0.423,P＜0.05).结论 TACE能明显上调HIF-1α的表达,HIF-1α通过调控其下级基因VEGF的表达而促进肿瘤血管的生成,影响肝癌的预后.     

ShRNA介导的Smad4基因沉默对C2C12成肌细胞纤维化的影响

目的:研究慢病毒介导的Smad4-shRNA对TGF-β1诱导的纤维化进程的影响。方法:(1)设计并选择抑制效能最高的Smad4-shRNA,包装生产慢病毒,转染C2C12成肌细胞,并检测转染后细胞的Smad4表达;(2)根据TGF-β1诱导C2C12成肌细胞向成肌纤维细胞分化的模型,以慢病毒介导的Smad4-shRNA转染细胞,将不同处理的细胞分为A、B、C、D四组,分别为C2C12细胞组、TGF-β1诱导组、C2C12细胞转染组和TGF-β1诱导后转染组。通过荧光Realtime-PCR和Westerblot检测各组collagen I和α-SMA表达水平。结果:(1)慢病毒介导Smad4-shRNA1转染C2C12细胞后,其Smad4 mRNA和蛋白表达显著低于未转染组(P<0.05);(2)TGF-β1诱导组α-SMA和Collagen I mRNA及蛋白表达均显著高于C2C12细胞组(P<0.05);(3)TGF-β1诱导后转染组α-SMA与collagen I mRNA及蛋白表达显著低于TGF-β1诱导组(P<0.05),与C2C12细胞组和C2C12细胞转染组相比则无明显差异(P>0.05)。结论:降低Smad4表达能有效抑制成肌细胞及受TGF-β1诱导成肌纤维细胞的纤维化过程,提示Smad4可能成为拮抗骨骼肌纤维化的靶点。     

尾悬吊模拟失重大鼠卵巢组织中缺氧诱导因子-1α表达变化

目的 研究模拟失重环境下大鼠卵巢组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达变化.方法 取性成熟期健康雌性Wistar大鼠60只作为研究对象,体重200±20g,随机分为10组(n=6),按模拟失重时相分为悬吊0.25、0.5、1、2、3、5、7、14、21d组和0d组(对照组).采用尾悬吊法建立模拟失重动物模型.各组大鼠卵巢组织中HIF-1 α的表达分别应用免疫组织化学和RT-PCR方法进行检测.结果 各实验组及对照组大鼠卵巢卵泡卵母细胞、颗粒细胞和膜细胞中均可见HIF-1α阳性染色细胞.对照组大鼠卵巢HIF-1 α染色阳性颗粒主要位于细胞质中,悬吊0.25d和0.5d组大鼠卵巢卵母细胞、颗粒细胞和膜细胞的HIF-1α颗粒由细胞质向细胞核转移;尾悬吊1d组HIF-1 α表达情况与对照组接近,HIF-1α核染色消失.尾悬吊0.25d、0.5d大鼠卵巢HIF-1α mRNA表达水平显著高于对照组(P＜0.05),持续尾悬吊1d以后各组卵巢HIF-1α的蛋白和mRNA水平逐渐恢复至对照组水平.结论 尾悬吊模拟失重使大鼠卵巢组织中HIF-1α蛋白及mRNA表达发生明显变化,早期同步过表达,提示卵巢HIF-1α表达变化与失重应激反应和失重耐受有密切关系.