体外光化学疗法处理的调节性树突细胞对T细胞增殖的影响

目的 探讨体外光化学疗法处理的调节性树突细胞对T细胞增殖的影响.方法 获取人外周血单个核细胞(PBMC),利用白介素-4重组人粒细、巨噬细胞集落刺激因子诱导生成未成熟的树突细胞(imDC).分离获取人脾脏淋巴细胞(SP),经光化学疗法(PUVA)处理后获得PUVA-SP;将imDC与PUVA-SP共培养得到体外光化学治疗性树突细胞(ecpDC);将imDC与SP共培养得到SPDC;imDC加入10ng/ml的脂多糖(LPS),培养1d后得到DC.收集4组细胞,检测其表面抗体CD11c、CD83、CD86的表达.采用混合淋巴细胞培养的方法 检测吞噬了供者凋亡的脾淋巴细胞后的受者imDC对受者T细胞增殖的影响.结果 经PUVA处理后细胞早期凋亡率为91.33%.表面分子CD83、CD86在ecpDC的阳性表达率为分别为22.83%±5.26%、22.06%±4.37%,与在imDC的阳性表达率(分别为15.06%±0.59%、15.19%±1.83%)相近(P>0.05),但明显低于在DC的阳性表达率(分别为99.79%±0.36%、99.85%±0.19%),差异有统计学意义(P<0.01).吞噬了供者凋亡的脾淋巴细胞后的受者imDC细胞可明显抑制受者T细胞的增殖.结论 体外光化学疗法诱导的凋亡脾淋巴细胞可抑制树突细胞的成熟,并可抑制受者T淋巴细胞的增殖.     

雷公藤甲素对调节性树突细胞的免疫效应及其机制研究

目的 探讨雷公藤甲素(TPT)对分泌IL-10的树突细胞(D C)亚群CDllclowCD45RBhighDC功能的影响.方法 采用磁珠分选技术获得C57BL/6小鼠脾脏CD11clowCD45RBhighDC和CD4+T淋巴细胞.CD11clowCD45RBhighDC分别加入1、10、20ng/ml TPT后进行培养,以不加TPT的细胞作为对照,流式细胞仪检测细胞表面分子CD40、CD80、CD86、I-a/e的表达,ELISA法检测培养液中IL-10的含量.将CD4+T淋巴细胞分为正常对照组(未作任何处理)、未刺激组(与未经TPT处理的CD11clowCD45RBhighDC混合培养)、高浓度TPT刺激组(与经20ng/ml TPT处理后的CD11clowCD45RBhighDC混合培养)、高浓度TPT刺激+抗体1(抗IL-10抗体)组、高浓度TPT刺激+抗体2(IL-10的同型对照抗体)组,采用MTT法测定CD4+T淋巴细胞的增殖活性,流式细胞仪检测CD4+T淋巴细胞培养液中IL-4和IFN-γ的含量.结果 与对照组相比,TPT能显著降低CD11clowCD45RBhighDC表面分子CD40和I-a/e的表达,增强CD86的表达及IL-10的分泌,其中IL-10的分泌水平随TPT浓度的增加而增加.高浓度TPT刺激组和高浓度TPT刺激+抗体2组细胞增殖活性及IFN-γ分泌水平明显低于未刺激组,IL-4分泌水平明显高于未刺激组,而高浓度TPT刺激+抗体1组细胞增殖活性及IFN-γ分泌水平明显高于未刺激组,IL-4分泌水平明显低于未刺激组.结论 TPT可促进CD11clowCD45RBhighDCIL-10的分泌,诱导CD4+T淋巴细胞向Th2型分化,并可通过激活CD11clowCD45RBhighDC介导机体的免疫抑制活性.     

树突状细胞:诱导移植免疫耐受的工具细胞和靶细胞

目前,树突状细胞（dendritic cells,DC）生物学研究的热点已由诱导免疫应答转向诱导免疫耐受。经典的髓细胞样DC（mDC）及最近新发现的类浆细胞样DC（pDC）亚群的致耐受作用已经明确;DC诱导耐受的特性可能与调节性T细胞（Treg）的作用密切相关;DC细胞具有独特的获取并交叉呈递外来抗原的能力。因此,在非炎性环境中DC可以诱导抗原特异性免疫耐受。本文综述了这三方面的研究现状,并探讨了DC诱导器官移植免疫耐受的应用前景。     

多器官功能障碍综合征肺IL-10的变化对树突细胞功能的影响

目的探讨多器官功能障碍综合征（MODS）模型小鼠肺IL-10对树突状细胞功能的影响及其在免疫紊乱中的作用与意义。方法采用腹腔注射酵母多糖法建立小鼠MODS模型。实验分为对照组与致伤后3-6h、12-48h、120-168h和240-288h组（实验组）。采用RT-PCR检测肺组织中CCR7 mRNA的表达。免疫组化标记检测肺趋化因子受体CCR7与IL-10的表达。流式细胞术检测外周血MHC-Ⅱ阳性的单个核细胞数量。结果与对照组比较,3-6h组肺内IL-10标记阳性细胞数和CCR7水平升高,外周血MHC-Ⅱ阳性的单个核细胞数量减少。12-48h组肺IL-10标记阳性细胞数和CCR7表达水平显著升高,外周血MHC-Ⅱ阳性的单个核细胞减少。240-288h组IL-10较对照组升高非常显著,CCR7表达水平较12-48h组明显下降,外周血MHC-Ⅱ阳性的单个核细胞数下降至最低点。结论MODS发生时,肺IL-10表达水平的升高一方面可以抑制由树突状细胞诱导的过度免疫损伤;另一方面,也可能通过抑制树突状细胞表达CCR7和降低外周血MHC-Ⅱ阳性的抗原提呈细胞数量最终诱导免疫麻痹的发生。     

吞噬PUVA处理的同种异基因细胞的树突细胞对抗原特异性CD4+CD25+Foxp3+调节T细胞的体外诱导作用

目的探讨吞噬体外光化学法(PUVA)处理的同种异基因淋巴细胞的树突细胞(DC)对抗原特异性CD4+ CD25 +Foxp3+调节性T细胞的体外诱导作用。方法分离LEW大鼠骨髓细胞,经大鼠重组IL-4和GM-CSF共同诱导培养制备骨髓来源的LEW大鼠DC。分离DA大鼠脾淋巴细胞(SP),制备经PUVA处理的DA大鼠脾淋巴细胞(PUVA-SP)并用流式细胞仪检测其凋亡率。在体外将DA大鼠的PUVA-SP或SP与LEW大鼠骨髓来源的DC共同培养,得到PUVA-SPDC和SPDC,以Luminex液相芯片法检测PUVA-SPDC和SPDC培养上清中IL-10、IL-12的含量。以CFSE标记PUVA-SP,流式细胞仪检测LEW大鼠DC对DA大鼠PUVA-SP的摄取情况。将LEW大鼠CD4+25-T细胞与PUVA-SPDC或SPDC混合培养5d,流式细胞仪检测诱导形成的CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞,同时分离培养体系中的CD4+ CD25+ T细胞,通过混合淋巴细胞反应(MLR)检测PUVA-SPDC诱生的CD4+ CD25+ T细胞对LEW大鼠CD4+ CD25- T细胞(效应性T细胞)体外增殖的抑制作用...     

原发性皮肤B细胞淋巴瘤的治疗进展

原发性皮肤B细胞淋巴瘤(primary cutaneous B-cell lymphoma，PCBCL)是一组起源于皮肤并常常只局限于皮肤的独立疾病。由于PCBCL预后好，可采用保守治疗方案。本文综述了近年PCBCL的主要治疗方式。包括放疗、联合化疗、免疫治疗，以及这几种方式的联合应用。     

IL-17在小鼠皮肤移植受者外周血及移植物中的表达

目的 探讨小鼠皮肤移植后IL-17蛋白及mRNA在外周血及移植物中的表达.方法建立三组小鼠皮肤移植动物模型:同基因组(BALBc→BALB/c)、异基因组(C57BL/6→BALB/c),脾细胞组(C57BL/6→BALB/c),每组40只.各组分别于移植后1、3、5、7d处死10只动物,采用ELISA法检测小鼠血清内IL-17水平,RT-PCR检测移植皮肤中的IL-17 mRNA的表达情况.结果 三组小鼠皮肤移植后第1天IL-17蛋白及mRNA表达有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).术后第3、5、7天异基因组IL-17蛋白及mRNA表达明显高于同基因组、脾细胞组(P<0.01),而后两组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 IL-7在小鼠皮肤移植后早期发生急性排斥反应时呈高表达,有望作为预测和纠正排斥反应的观察指标.受体输注供体脾细胞可明显减轻异基因皮肤移植的排斥反应.     

卡巴胆碱对小鼠多器官功能障碍综合征早期树突细胞作用的研究

目的 从调节树突细胞(DC)活性的角度探讨卡巴胆碱在多器官功能障碍综合征(MODS)防治中的作用机制.方法 采用腹腔注射酵母多糖的方法复制小鼠MODS模型.190只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(n=10),MODS 6、24、48h组(n=30)和MODS+卡巴胆碱6、24、48h组(n=30).致伤前24h MODS组灌胃注入生理盐水,MODS+卡巴胆碱组在致伤前24h内分3次灌胃注入卡巴胆碱(每次3μg/kg).取各组小鼠脾脏,采用流式细胞技术检测DC免疫表型,免疫组化技术检测脾脏白细胞介素-1β(IL-1β)的表达,ELISA法检测脾脏中IL-12p70水平.结果 MODS组脾脏成熟DC数量、IL-1β阳性细胞数量及脾脏组织匀浆中IL-12p70水平在伤后6h和24h明显增加,48h均降至正常水平.与MOCS组比,MODS十卡巴胆碱组脾脏成熟DC数量、IL-1β阳性细胞数量明显下降,脾脏组织匀浆IL-12p70水平降低.结论 卡巴胆碱可能通过抑制DC的活性而减弱MODS早期的炎症反应,防止全身炎症反应综合征的发生.     

RelB基因沉默对骨髓树突细胞生物学效应的影响

目的探讨核转录因子NFκ-B/RelB基因沉默对树突细胞(DC)生物学效应的影响。方法采用细胞因子诱导培养法体外扩增小鼠骨髓DC,并经免疫磁珠纯化,获得高纯度骨髓DC后,行RelB基因沉默,获得RNAi RelB-DC,扫描电镜和透射电镜观察细胞形态特点,并利用流式细胞术分析细胞表面分子的表达水平,同种异基因混合淋巴细胞反应(MLR)法分析RNAi RelB-DC刺激异基因T细胞增殖的能力。结果扫描电镜下RNAi RelB-DC细胞表面突起较少而短,细胞表面多皱褶;透射电镜下可见细胞内多吞噬泡样结构;流式细胞术分析显示细胞表面分子MHC-II、CD86和CD40的表达水平相对较低;MLR显示该DC刺激异基因T细胞增殖的能力相对较弱。结论RelB基因沉默DC的生物学效应表现为未成熟DC的特点,这种RNAi RelB-DC作为一种新型的致耐受DC,有望应用于免疫耐受的诱导研究。     

皮肤驻留调节性T细胞在烧伤创面愈合中的作用

目的探讨皮肤驻留调节性T细胞(Tregs)在烧伤小鼠创面愈合中的作用。方法选取叉头翼状螺旋转录因子p3(Foxp3)DTR型小鼠及野生型C57BL/6小鼠,分别设为Foxp3DTR型-白喉毒素注射组(F-DT组)和野生型-白喉毒素注射组(C-DT组),组内依据随机数字表法分为早期组(n=9)与晚期组(n=9)。早期组小鼠于烧伤早期(烧伤前1天、伤后第0天、伤后第3天)腹腔注射10 ng/g DT,晚期组于烧伤晚期(伤后第5、7、9天)注射。于不同时间点对小鼠创面拍照,并测量伤口面积以评估伤口愈合率;HE染色光镜下观察创面再上皮化情况;流式细胞术分析野生型小鼠伤后不同时间点皮肤Tregs局部浸润及功能表型的变化。结果早期耗竭Tregs后,F-DT组小鼠烧伤创面愈合率较C-DT组显著降低(P<0.05);晚期耗竭Tregs后,两组烧伤创面愈合率差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色显示,与C-DT组相比,F-DT早期组伤口关闭缓慢,瘢痕生成及结痂进程较慢,肉芽组织增生明显,血管生成及再上皮化进程显著减慢。流式细胞术分析皮肤Tregs浸润情况发现,CD4⁺     

重组hIL-10抗家兔皮肤移植排斥反应中血清IL-10及其抗体的检测

目的检测重组人白细胞介素-10（recombinant human interleukiu-10,rhIL-10）作用后皮肤移植家兔血清中IL-10及其抗体的变化,探讨外源性hIL-10诱生IL-10增强抑制效应和外源性hIL-10有无免疫原性,为rhIL-10的应用提供实验依据。方法家兔分为6组：①组rhIL-10低剂量,②组rhIL-10高剂量,③组环孢菌素（CsA）低剂量,④组CsA高剂量,⑤组rhIL-10＋CsA低剂量联合,⑥组生理盐水组。移植术前1d开始用药,连续用药10d,肌肉注射。术前1d、术后1d、4d、7d、14d、21d、28d分别取外周血,分离血清,以ELISA方法检测血清中IL-10及IL-10抗体水平。结果①移植家兔血清IL-10检测,术后各组结果较术前均有升高,在术后7d达到高峰,术后4d、术后7d rhIL-10低剂量及高剂量组IL-10水平高于其余各组（P〈0.05）。CsA低剂量及高剂量组IL-10水平低于rhIL-10组及联合组（P〈0.05）。②移植家兔血清抗IL-10抗体检测,术后各组检测结果较术前均无明显升高（P〉0.05）,与抗体阳性对照比较有显著差异（P〈0.05）。结论 rhIL-10抗家兔皮肤移植反应中,家兔血清IL-10含量在皮肤移植后明显升高,表明外源IL-10诱导内源性IL-10分泌,从而增强抑制排斥反应;外源IL-10注射后家兔血清中没有检测出特异性抗体,外源性rhIL-10进入机体没有免疫原性。     

60Co-γ射线全身低剂量率辐照对小鼠血浆中IL-12和IL-10的影响

目的研究低剂量电离辐射对小鼠免疫系统影响的剂量率效应。方法以^60Co-γ射线为辐照源，低、中和高3个辐射剂量（0．075、0．5、2．0Gy），恒定剂量率（0．5mGy／min）全身一次性照射小鼠，ELISA检测照射4h后血浆IL-12和IL-10的含量。结果低、中剂量照射后，血浆中IL-12、IL-10和IL-12／IL-10出现程度几乎相同地下降；但高剂量照射后，IL-12进一步显著下降，而IL-10上升至对照组水平，IL-12／IL-10比值进一步下降。结论恒定0．5mGy／min剂量率的^60Co-γ射线照射可损伤机体免疫功能，在0．075～0．5Gy剂量范围内损伤轻微，在2．0Gy时损伤明显，表明低剂量率电离辐射对免疫系统具有损伤作用。     

电离辐射对小鼠脾细胞中调节性T细胞及其相关分子表达的影响

目的 观察不同剂量X射线照射后不同时间小鼠脾细胞中调节性T细胞和叉头状转录因子(Foxp3)的表达变化,探讨X射线对调节性T细胞以及相关因子Foxp3的影响。方法 112只雄性ICR小鼠,随机平均分为低剂量(0.075 Gy)组和高剂量(2 Gy)组,用X射线深部治疗机分别进行0.075和2 Gy全身照射,于照射后0、4、8、16、24、48和72 h处死,取脾脏,分别应用流式细胞术和RT-PCR法检测调节性T细胞和Foxp3的表达水平。结果 0.075和2 GyX射线全身照射后,小鼠脾细胞CD4+CD25+Treg 细胞百分比均在照射后8 h达高峰,随后一直保持较高水平,高于照射前水平(2 Gy,在8、16、48、72h时,t=4.65、4.28、3.71、2.88,P<0.05; 0.075 Gy,在8、16、24、72h时,t=8.73、10.55、4.21、4.65,P<0.05)。Foxp3在mRNA水平,0.075 Gy照射后变化不明显,而2 Gy照射后于24 h形成峰值。Foxp3在蛋白质水平,0.075 Gy照射后并未有显著变化;而2 Gy照射后于16 h形成峰值,随后略有下降,但仍保持较高水平。结论 调节性T细胞及相关分子Foxp3的不同变化可能成为高、低剂量X射线诱导不同免疫效应的原因之一。     

电离辐射对小鼠脾细胞中调节性T细胞及其相关分子表达的影响

Objective To observe the changes in expressions of spleen regulatory T cells (Tregs)and the related factor forkhead box protein-3 (Foxp3) after irradiation with different doses of X-ray in mice at different times,and to elaborate the effects of X-rays on regulatory T cells and Foxp3.Methods 112male ICR mice were randomly divided into 2 groups and irradiated by X-rays at the doses of 0.075 and 2 Gy,respectively.The mice were killed at 0,4,8,16,24,48,and 72 h post-irradiation and the spleens removed.Flow cytometry was used to detect the percentage of CD4 + CD25 + Treg and protein expression of (Foxp3),and RT-PCR was used to exmiamine the mRNA expression of Fox3.Results Compared with those before irradiation,the CD4 + CD25 + Treg positive rates began to increase and peaked at 8 h post-irradiation with 0.075 Gy at 8,16,24,72 h(t = 8.73,10.55,4.21,4.65 ,P ＜ 0.05) and 2 Gy at 8,16,48,72 h(t = 4.65,4.28,3.71,2.88,P ＜ 0.05),and then slightly decreased,but still remained at high levels.The mRNA protein levels of Fox3 did not change significantly after exposure to the dose of 0.075 Gy,but began to significantly increase at 8 h after exposure to the dose of 2 Gy.However,the Foxp3 protein level began to increase 4 h post-irradiation,peaked at 16 h,and then slightly decreased,but still ramained at high levels (t =2.59,3.37,3.70,3.20,P＜0.05).Conclusions The changes in expressions of Tregs and Foxp3 after high- and low-dose X-ray irradiation may be used to explain the differences in immune effects induced by ionizing radiation at different doses.     

Forensic pathological study on temporal appearance of dendritic cells in skin wounds

International Journal of Legal Medicine - Dendritic cells (DCs) can essentially contribute to innate and adaptive immune system in various organs. A double-color immunofluorescence analysis was...     

125I-抗MIF McAb体内检测同种移植排斥过程中MIF的产生和分布

目的　探讨12 5I标记抗巨噬细胞移动抑制因子 (MIF)单克隆抗体 (McAb)体内检测小鼠同种皮肤移植排斥过程中MIF的产生和分布情况。方法　①利用Iodogen法 ,用Na12 5I标记抗MIFMcAb(Ⅲ D 9)及对照抗体 (HB4 5 )。②制备小鼠同种皮肤移植模型 ,并作组织学鉴定。③分别腹腔注射12 5I Ⅲ D 9和12 5I HB4 5 ,观察同种移植排斥过程中MIF在小鼠体内的产生和分布。结果　①12 5I Ⅲ D 9标记率为 76 6 7% ,比活度为 2 9 5 2TBq/mmol。②小鼠同种移植皮片的排斥期平均为 (13 4±2 5 )d。病理切片示 ,在排斥高峰期细胞浸润明显增多 ,主要为巨噬细胞和淋巴细胞。③移植术后早期 ,12 5I Ⅲ D 9和12 5I HB4 5在移植皮片中的放射性均高于正常皮肤 ,但两者无明显差异。在移植排斥期 (移植后 12d) ,12 5I Ⅲ D 9在移植皮片中的放射性明显高于12 5I HB4 5组 (P <0 0 1)。结论　小鼠同种皮肤移植排斥反应过程中MIF表达量随排斥反应出现明显增加 ,并在移植皮片局部呈特异性分布 ,提示MIF表达量增高与移植排斥反应密切相关。