晚期糖基化终末产物对表皮角质形成细胞功能的影响及其机制

目的研究晚期糖基化终末产物（AGEs）对表皮角质形成细胞（KCs）功能的影响及其生物学机制。方法分离培养正常SD大鼠KCs，加入不同浓度AGEs干预48h，选择细胞反应敏感，差异显著的100μg／ml AGEs干预组进行以下实验：用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐（MTT）法测定细胞增殖速度；检测KCs周期和凋亡，观察细胞核中NF—κB的活化状态；检测KCs迁移能力。结果100μg／ml AGEs可以明显抑制KCs的增殖和分裂；诱导细胞进入早期凋亡状态；促进KCs迁移。抑制NF—κB的活性后，部分恢复细胞的增殖能力；逆转细胞的早期凋亡；使细胞的迁移能力趋于正常。结论AGEs可以通过NF—κB途径影响KCs迁移、增殖和凋亡。     

糖基化终末产物对人表皮角质形成细胞周期调控的影响机制

目的通过体外试验探讨糖基化终末产物（AGEs）对表皮角质形成细胞周期调控的影响机制。方法体外培养的人表皮角质形成细胞经AGEs（150mg／m1）作用后,用噻唑兰（MTT）法研究其增殖活力、流式细胞仪研究细胞周期和凋亡率。用小片断RNA干扰（siRNA）的方法阻断细胞中AGEs受体（receptor of AGEs,RAGE）mRNA的表达,realtime PCR鉴定其阻断效率。RT-PCR法检测RAGE阻断前后各组细胞内RAF-1、黏着斑激酶（FAK）、周期素（cyclin）D1、cyclinBl、周期表依赖性激酶4（CDK4）的核酸水平表达差异。结果经AGEs干预后表皮角质形成细胞增殖活性下降,凋亡率升高,细胞周期G2期的比例显著增高,而细胞周期调控相关因子及信号因子RAF．1、cyclinDl、cyelinBl、CDK4的核酸表达较对照组却明显升高,用RAGE阻断以上因子后表达则与对照组相比无差异。结论在上述体外模型下,表皮角质形成细胞的周期调控因子升高,而增殖却下降且凋亡增加,可能是AGEs干预后细胞内启动内源性代偿调控机制,且这种调控机制与其受体（RAGE）途径相关;AGEs也可能还通过以上细胞周期调控因子以外的其他途径或机制影响细胞生物学功能。     

利拉鲁肽对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的影响

 目的 探究胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)类似物利拉鲁肽(GLP-1 analogue,Liraglutide)对大鼠心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells, CMEC)缺氧复氧损伤的影响。方法 双酶消化法体外分离培养SD大鼠CMEC,实验的细胞分为正常对照组、Liraglutide(0~100 nM)组、H/R组、H/R+Liraglutide组。建立缺氧复氧模型(hypoxia/reoxygenation model,H/R)诱导的细胞氧化应激凋亡模型,流式细胞学检测细胞凋亡率,DCFHDA荧光探针检测胞内ROS的变化免疫荧光染色和Western Blot检测XO、caspase3等蛋白分子的表达情况,通过比较各组中XO、ROS以及凋亡相关蛋白caspase3的表达情况阐明Liraglutide在抗细胞氧化应激过程中的保护作用机制。结果 与正常对照组细胞相比,H/R模型条件诱导细胞中XO表达增加,生成过量ROS及凋亡蛋白的表达,最终导致凋亡细胞数量显著提高至20.66%±1.30%。Liraglutide预处理12 h抑制了H/R诱导的XO的激活,最终降低胞浆过量ROS并将细胞的凋亡数量降低至8.36±1.19%。结论 H/R模型导致XO-ROS激活,生成过量胞浆ROS,最终介导了CMEC的线粒体凋亡通路激活,而予以Liraglutide预处理可以逆转上述过程。     

血清高迁移率组蛋白B1、可溶性晚期糖基化终末产物受体、脱氧核糖核酸酶与TACE早期疗效相关性研究

目的 探讨原发性肝癌患者血清高迁移率组蛋白B1(HMGBl)、人可溶性晚期糖基化终末产物(sRAGE)、脱氧核糖核酸酶(DNase)对TACE近期疗效的评估价值.方法 对收住的42例患者(共计56次TACE治疗)分别在TACE术前、术后24h采集外周静脉血标本,用ELISA法检测外周血清中HMGB1、sRAGE、DNase的表达水平.根据mRECIST标准进行TACE术后疗效评估,将完全缓解+部分缓解+疾病稳定的病例归为获益组,疾病进展者归为无效组.比较TACE术前、术后,获益组及无效组之间的血清HMGB1、sRAGE、Dnase的表达水平,并进行统计学分析.结果 TACE术前与术后24 h血清HMGB1、sRAGE、DNase表达水平比较差异有显著统计学意义(P=0.003,P=000,P=0.001),且术后较术前呈升高趋势.56例次TACE中,24例次为稳定(SD),2例次部分缓解(PR),30例次为肿瘤进展(PD),将SD和PR患者归为获益组(n=26),PD患者为无效组(n=30).在TACE术前,获益组与无效组血清HMGB1、DNase表达水平比较差异无统计意义(P=0.395,P=0.091);在TACE术后24 h,血清HMGB1、DNase在获益组和无效组对比差异也无统计学意义(P=0.354,P=0.182).而sRAGE在获益组与无效组之间的表达水平在术前差异无统计学意义(P=0.143),而在术后24h,两组间sRAGE表达水平差异有统计学意义(P=0.030).结论 ①TACE术后血清HMGB1、sRAGE、DNase表达水平较术前升高;②中晚期肝癌患者外周血清中sRAGE与TACE疗效相关,可以作为TACE治疗肝癌疗效早期评估的指标.     

二甲双胍联合利拉鲁肽对多囊卵巢大鼠炎性因子及性激素水平的影响

 目的 研究二甲双胍联合利拉鲁肽对经脱氢表雄酮诱导的多囊卵巢(PCOS)大鼠外周血清炎性因子及性激素水平的影响。方法 将80只PCOS(经脱氢表雄酮诱导)大鼠随机分为对照组(n=40)和干预组(n=40)。对照组大鼠每天给予二甲双胍(270 mg/kg·d)灌胃,干预组大鼠每天给予二甲双胍(270 mg/kg·d)灌胃+利拉鲁肽(5 μg/kg·d)皮下注射, 连续治疗28 d。治疗结束后测定两组大鼠外周血清炎性因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)]、激素水平[卵泡雌激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌激素(E₂)、睾酮(T)]。结果 治疗后两组大鼠外周血清IL-6(23.88±7.32)pg/ml、TNF-α(13.24±2.23)ng/L、CRP(1.10±0.19)mg/L、LH(6.57±1.37)mIU/ml、LH/FSH(1.17±0.28)、E₂(1.11±0.18)pg/ml、T(12.21±1.32)ng/dL均较治疗前有所降低且差异有统计学意义(P<0.05),干预组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后两组大鼠FSH (5.63±0.77) mIU/ml较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05),干预组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 二甲双胍联合利拉鲁肽能很好的降低PCOS大鼠外周血清炎性因子浓度,改善激素水平,为临床实践提供一定的指导。     

hGLP-1类似物基因转染对糖尿病大鼠血糖、血清胰岛素水平及胰岛细胞的影响

目的 研究尾静脉注射人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因(2×Val~2-hGLP-1)重组表达质粒对糖尿病模型大鼠血糖、血清胰岛素水平及胰岛细胞的影响.方法 建立链脲佐黹素(STZ)诱导SD糖尿病大鼠模型,随机分为含有hGLP-1类似物基因的重组质粒(plRFLS2-FGFP/Val~2-hGLP-1)转染组、空质粒(pIRES2-EGFP)转染组、糖尿病模型对照组,每组8只.另取8只未经处理的SD大鼠作为正常对照组.重组质粒转染组和空质粒转染组分别通过尾静脉注射含相应质粒(110μg/只)的溶液,糖尿病模型对照组和正常对照组给予等量的生理盐水.实验动物共干预30d,实验结束后,观察各组大鼠血糖及血清胰岛素水半的变化,采用糖耐量及胰岛素耐量实验检测大鼠胰岛素敏感性然后处死动物,HE染色观察胰岛细胞病变情况,免疫组化法分析胰岛素分泌情况.结果 与正常对照组、糖尿病模型对照组和空质粒转染组比较,重组质粒转染组血糖水平明显降低(P<0.01),血清胰岛素水平显著升高(P<0.01).基因治疗改善了糖尿病大鼠的糖耐量,降低了胰岛素抵抗,提高了机体对胰岛素的敏感性(P<0.01).空质粒转染组与糖尿病模型对照组比较,以上指标的差异均无统计学意义(P>0.05).同时,重组质粒转染组的胰岛素分泌水平提高,与糖尿病模型对照组比较,胰岛细胞病变程度明显改善.结论 hGLP-1类似物基因转染可促进胰岛细胞增殖,提高胰岛素敏感性,从而显著降低糖尿病大鼠的血糖水平,并改善胰岛组织病变程度.     

苏黄止咳胶囊联合脾氨肽治疗小儿支气管哮喘疗效及对血清炎症因子的影响

目的 探讨苏黄止咳胶囊联合脾氨肽治疗小儿支气管哮喘疗效及对血清炎症因子的影响.方法 选取2019年4月-2020年4月收治的支气管哮喘患儿112例,根据随机数字表分为对照组与研究组,各56例,对照组患儿予常规治疗联合脾氨肽,在此基础上予研究组苏黄止咳胶囊,连续治疗2周,比较两组患者治疗前后血清炎症因子、第一秒呼吸气体的...     

利拉鲁肽对缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载和细胞凋亡的影响

 目的 研究利拉鲁肽对缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载和细胞凋亡的影响。方法 采用原代培养的乳鼠心肌细胞,建立缺氧和高糖模型。实验分为:正常对照组、利拉鲁肽对照组、缺氧和高糖模型组、利拉鲁肽处理组、胰高血糖素样肽-1 (glucagon like peptide-1, GLP-1)受体抑制剂组、高渗对照组6组。采用荧光分光光度法检测心肌细胞内钙离子变化,化学荧光法检测活性氧族(reactive oxygen species, ROS)水平、利用生化方法检测Ca²⁺-ATP 和Na⁺-K⁺-ATP酶活性、RT-PCR技术检测钙敏感的钙蛋白酶(μ-calpain)基因表达、流式细胞仪测定细胞凋亡率、ELISA法检测细胞caspase-3活性。结果 与正常对照组相比,缺氧高糖模型组细胞内ROS水平、μ-calpain mRNA表达量、caspase-3活性均显著升高(P<0.01);Ca²⁺-ATP 和Na⁺-K⁺-ATP酶活性显著降低(P<0.01);游离钙离子浓度由(117.19±15.04)nmol/L增加至(508.53±26.11)nmol/L,细胞凋亡率由(3.95±0.12)%增加至(31.03±4.30)%(P<0.01)。利拉鲁肽处理组细胞较缺氧高糖模型组上述参数均明显改善,游离钙离子浓度和细胞凋亡率显著降低(P<0.01);GLP-1R抑制剂exendin(9-39)可拮抗利拉鲁肽的上述作用(P<0.05)。结论 利拉鲁肽可明显抑制缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载及μ-calpain基因的上调,降低caspase-3水平,减少心肌细胞凋亡,对心肌细胞具有保护作用。     

Roux-en-Y胃转流术对GK大鼠炎症因子与胰岛素抵抗影响的实验研究

目的探讨Roux-en-Y胃转流术对自发糖尿病GK大鼠炎症因子与胰岛素抵抗的影响及其意义。方法 40只GK大鼠随机平均分为手术组与对照组。手术组行Roux-en-Y胃转流术,对照组行胃窦十二指肠离断后原位吻合术。分别于术前,术后1、2、4周动态检测两组大鼠血液中空腹血糖、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)2 h血糖,空腹胰岛素;并于术前及术后4周测定大鼠血液中游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C-反应蛋白(CRP),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果手术组术后空腹及OGTT2h血糖值均呈明显的下降趋势,至术后第4周时其血糖值显著低于术前(9.8±2.6)mmol/L降至(7.3±2.2)mmol/L及OGTT2h血糖(27.3±3.1)mmol/L降至(23.6±3.4)mmol/L(P<0.05);对照组手术前后空腹及OGTT2h血糖值无显著变化(P>0.05)。术后第4周,手术组大鼠血液FFA较术前显著降低(204.2±55.6)umol/L降至(179.4±32.54)umol/L(P<0.05);术后4周血中TNF-α的含量较术前显著降低(32.4±1.3)pg/ml降至(24.9±1.0)pg/ml(P<0.01);术后4周CRP的含量显著低于术前(648.5±36.23)ng/ml降至(32.9±37.8)ng/ml(P<0.01);而手术前后空腹胰岛素水平无显著变化(P>0.05),其HOMA-IR指数较术前显著降低(8.46±1.66降至5.20±0.79)(P<0.05);而对照组术后4周上述指标无显著差异(P>0.05)。结论 Roux-en-Y胃转流术能显著降低GK大鼠的血糖,其可能机制是手术后通过降低体内游离脂肪酸含量,导致炎症因子释放减少,从而使胰岛素抵抗得到缓解。     

白藜芦醇对大鼠脑创伤后血清炎性因子影响的实验研究

目的：检测白藜芦醇治疗前后大鼠血清炎性因子TNF-α和IL-1β的浓度变化,以探讨白藜芦醇的脑保护作用。方法：SD大鼠75只,随机分为创伤组、对照组和治疗组,每组分伤后3、12、24、48、72 h共5个时间点,各时间点每组动物5只,Feeney法自由落体致伤动物,治疗组给予白藜芦醇（50 mg/kg体重）腹腔注射治疗,伤前一天治疗一次,伤后每天治疗一次,直至采血时间点;对照组同法给予等量生理盐水治疗;创伤组不予治疗,正常喂食水。分别于伤后各时间点股静脉取血,静置分层后离心,取血清低温保存,放射免疫法检测血清TNF-α和IL-1β浓度。结果：伤后治疗组TNF-α和IL-1β浓度比对照组明显降低（P〈0.05）,TNF-α和IL-1β在创伤组与对照组无明显差异（P〉0.05）。结论：白藜芦醇可以减少伤后血清TNF-α和IL-1β浓度,减轻炎症反应,对脑创伤有保护作用。     

黄体酮对鼠脑外伤后脑组织炎性信号因子表达的干预作用

目的观察黄体酮对脑外伤后脑组织内炎症反应信号转导因子核因子-κB（NF-κB）、炎症细胞因子子如瘤坏死因子（TNF-α）和白介素-1β（IL—1β）水平的影响，探讨其对创伤性脑外伤（TBI）继发性脑损伤的保护作用及可能的作用机制。方法采用Freeney法造成大鼠脑挫裂伤模型，在伤后1、3、5、7天不同时相点用ELISA法、免疫组化法分别检测4组大鼠脑组织中NF-κB、TNF-α、IL-1β水平的变化。结果伤后注射黄体酮治疗组脑组织NF—κB、TNF—α、IL-1β3种炎性因子水平均比脑创伤组低（P〈0.05）。结论注射黄体酮能降低脑外伤后炎性信号因子表达，减轻脑外伤后脑组织的炎症反应，对脑组织起一定的保护作用。     

黄体酮对鼠脑外伤后脑组织炎性信号因子表达的干预作用

目的 观察黄体酮对脑外伤后脑组织内炎症反应信号转导因子核因子-κB(NF-κB)、炎症细胞因子如肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平的影响,探讨其对创伤性脑外伤(TBI)继发性脑损伤的保护作用及可能的作用机制.方法 采用Freeney法造成大鼠脑挫裂伤模型,在伤后1、3、5、7天不同时相点用ELISA法、免疫组化法分别检测4组大鼠脑组织中NF-κB、TNF-α、IL-1β水平的变化.结果 伤后注射黄体酮治疗组脑组织NF-κB、TNF-α、IL-1β 3种炎性因子水平均比脑创伤组低(P＜0.05).结论 注射黄体酮能降低脑外伤后炎性信号因子表达,减轻脑外伤后脑组织的炎症反应,对脑组织起一定的保护作用.     

甲状旁腺全切术对血清FGF-23及炎性因子的影响

 目的 分析继发性甲状旁腺功能亢进(secondary hyperpar hyroidism,SHPT)患者行甲状旁腺全切术(T-parathyroidectomy,T-PTX)前后血清成纤维细胞生长因子-23(fibroblast growth factor -23 ,FGF-23)及炎性因子的变化,并探讨其变化的意义。方法 选取2011-01至 2013-01武警总医院肾内科行T-PTX术成功的患者40例做为研究对象,术后均行普通血液透析治疗,排除血液透析滤过及灌流对实验的影响,收集其术前、术后1 d、1、3、6个月血清,对比不同时间点血清FGF23、全段甲状旁腺激素(iPTH)和血清钙、血磷、hsCRP检测结果。结果 (1)术后1 d及1、3、6个月血清FGF-23、iPTH、血清钙、血磷水平明显低于术前,差异有统计学意义(P<0.05);(2)术后1 d血清hsCRP水平较术前无统计学意义,术后1、3、6个月血清hsCRP水平[(2.64±1.32 vs 20.31±8.56)mg/L、(2.16±1.08 vs 20.31±8.56)mg/L、(1.38±0.17 vs 20.31±8.56)mg/L]明显低于术前的(11.72±5.21 vs 20.31±8.56)mg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 T-PTX可有效降低患者血清FGF23、PTH及炎性因子水平,纠正钙磷代谢紊乱,对减少远期心血管事件及骨矿物质代谢疾病有重要意义。     

高压氧对大鼠脊髓损伤后炎症因子的影响

目的 观察高压氧对大鼠脊髓损伤后外周血中炎症细胞因子及其运动功能恢复的影响。方法采用改良Allen’s法制作大鼠脊髓损伤模型。75只SD大鼠,随机分为三组：假手术组（n=15）,对照组（n=30）和高压氧组（n=30）。分别于治疗后4h、12h、1d、3d及5d时间点,利用BBB评分法对大鼠进行运动功能评分,同时应用放射免疫检测技术测定各时间点大鼠外周血中TNF-α、IL-6、IL-8及IL-10的含量。结果对照组和高压氧组的各炎性细胞因子水平,较假手术组均有不同程度升高（P〈0．05）;高压氧组BBB评分较对照组升高（P＜0．05）;高压氧组外周血中上述炎性细胞因子在各时间点均较对照组降低（P＜0．01）。结论高压氧可抑制外周血中炎性细胞活性,降低各炎性细胞因子水平,促进损伤恢复,具有保护受损脊髓组织的作用。     

β-七叶皂甙钠对高血压并发脑出血患者血清炎性因子的影响

目的：观察高血压并发脑出血内科治疗患者血清C-反应蛋白（CRP）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平变化,及β-七叶皂甙钠对其的影响。方法：将37例高血压并发脑出血内科治疗患者临床资料进行分析,其中18例进行了内科常规治疗（常规组）,另19例除常规治疗外,使用β-七叶皂甙钠进行辅助治疗（辅助组）,统计两组患者治疗后3、7、14、21d血清CRP、ICAM-1、TNF-α、MDA含量和SOD活性,并进行NIHSS评分比较。结果：治疗后第3d,两组患者血清CR、ICAM-1、TNF—α、MDA含量和SOD活性无显著差异（P〉0．05）;第7、14、21d时,辅助组CRP、ICAM-1、TNF-α、MDA含量低于常规组（P〈0．05）,SOD活性高于常规组（P〈0．05）;第14、21d时,辅助组NIHSS评分低于常规组（P〈0．05）。结论：CRP、ICAM-1等炎性因子及脂质过氧化反应参与了高血压并发脑出血后的病理生理过程,β-七叶皂甙钠能降低其血清炎性因子水平并改善预后。     

白藜芦醇对重症急性胰腺炎大鼠炎性细胞因子的影响

目的观察白藜芦醇对重症急性胰腺炎（severeacutepancreatitis,SAP）大鼠血清炎性细胞因子的影响。方法取SD大鼠,经胆胰管逆行注射5％牛磺胆酸钠制备SAP模型,分为假手术组、模型组、白藜芦醇组（20、10、5ms／kg）,每组16只。采用尾静脉注射给药,术后6h和12h分别于光镜下观察胰腺组织的病理学改变,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白介素-1（IL-1）和IL-6水平。结果白藜芦醇各剂量均能减轻胰腺组织的炎性反应,病理评分与模型组比较,明显降低（P〈0．01）;术后6h各剂量对应TNF-α[（89．0±19．2）、（84．7±16．0）、（105．6±22．3）ns／L]、IL-1[（109．3±19．8）、（114．5±30．2）、（135．5±29．2）ns／L]和IL-6[（185．3±28．8）、（201．5±44．0）、（213．0±30．7）ns／L],水平均明显低于模型组（P〈0．05或P〈0．01）。术后12h情况同术后6h。结论白藜芦醇通过减少炎性细胞因子的过度释放,对大鼠SAP具有保护作用。     

MG-132对慢性肾衰竭大鼠主动脉及循环炎症细胞因子表达的抑制作用

目的探讨慢性肾衰竭大鼠主动脉及循环炎症细胞因子的表达变化及蛋白酶体抑制剂MG-132的抑制作用。方法采用单肾切除、对侧肾动脉部分结扎法建立慢性肾衰竭模型,30只大鼠按随机数字表法分为假手术对照组(CON)、慢性肾衰竭组(CRF)、慢性肾衰 MG-132治疗组(CRF M),每组10只。采用免疫组织化学方法检测主动脉TNF-α蛋白表达水平并进行图像定量分析,以ELISA法测定血清和血管内皮细胞、血管平滑肌细胞培养上清中TNF-α、IL-1β含量。结果与CON组比较,术后4个月和6个月时CRF组大鼠主动脉TNF-α阳性面积(分别为10·7%±1·3%vs4·3%±1·7%,12·6%±2·2%vs4·3%±1·1%)显著升高(P<0·01),血浆中TNF-α(分别为50·02±9·52、96·60±38·62μg/ml,P<0·01)和IL-1β(分别为9·02±1·29、11·92±0·39μg/ml,P<0·01)含量也明显增加,而大鼠体重、血浆白蛋白、血红蛋白水平却显著下降,与血浆TNF-α、IL-1β含量呈显著负相关(P<0·01)。6个月时外周血单个核细胞(PBMC)基础分泌和激发分泌TNF-α(分别为384·4±14·8、987·5±18·2pg/ml)的能力均显著增强(P<0·01)。CRF M组应用MG-132治疗后可明显抑制慢性肾衰竭大鼠主动脉TNF-α蛋白质表达、PBMCTNF-α分泌并降低血浆中TNF-α、IL-1β含量。结论慢性肾衰竭时大鼠主动脉及循环炎症细胞因子表达均显著升高。     

腹腔镜胃肠修补术联合生长抑素在腹部损伤治疗中的体会

近年来,通过对急诊腹部损伤患者采取腹腔镜手术,患者术后恢复良好。生长抑素对胃肠道细胞的增殖、腺体分泌及平滑肌的收缩均具有一定的抑制性作用[1],前列腺素E2(PGE2)对于机体的免疫作用具有明显的抑制作用[2]。腹部损伤患者腹腔镜胃肠修补术后使用生长抑素治疗,有效降低患者病灶部位炎性因子以及血清PEG2水平,提升患者免疫功能和胃肠动力,值得在临床进行推广。