低密度脂蛋白受体基因敲除鼠极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分诱导J774巨噬细胞胆固醇酯蓄积

为探讨低密度脂蛋白受体基因敲除鼠血浆极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分致动脉粥样硬化的作用,采用密度梯度序列超速离心法从低密度脂蛋白受体基因敲除鼠血浆分离极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分,用日立７４５０ 自动分析仪测定其脂含量,琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其电泳迁移率和载脂蛋白组成,并与鼠腹腔巨噬细胞共同孵育,观察它与巨噬细胞的相互作用。结果发现, 低密度脂蛋白受体基因敲除鼠血浆极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分与Ｊ７７４ 巨噬细胞孵育后,细胞胆固醇酯水平［（７３±０ ．５） μｍｏｌ（ｇ．ｃｅｌｌｐｒｏｔｅｉｎ）］ 非常显著地大于空白对照组（ Ｐ＜ ０．００５） , 是天然低密度脂蛋白诱导细胞胆固醇酯［（８±７） μｍｏｌ（ｇ．ｃｅｌｌｐｒｏｔｅｉｎ）］蓄积的９ 倍。结果提示,低密度脂蛋白受体缺失鼠血浆非修饰极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分可被Ｊ７７４ 巨噬细胞摄取,转巨噬细胞为泡沫细胞。     

极低密度脂蛋白受体在泡沫细胞形成中的作用地位

为探讨极低密度脂蛋白受体在摄取富含甘油三酯的脂蛋白及泡沫细胞形成中的作用，在体外实验中，将极低密度脂蛋白、β极低密度脂蛋白及低密度脂蛋白分别与小鼠腹腔巨噬细胞孵育24及48h后，检测细胞内甘油三酯及总胆固醇的含量，油红O染色观察泡沫细胞的形成，半定量逆转录聚合酶链反应检测极低密度脂蛋白受体、LRP及极低密度脂蛋白受体的mRNA表达变化。结果发现，三种脂蛋白与巨噬细胞均能升高细胞内甘油三酯、总胆固醇含量；极低密度脂蛋白受体受极低密度脂蛋白、β极低密度脂蛋白的刺激表达上调，低密度脂蛋白受体表达下调，LRP表达略有上调。在稳定表达极低密度脂蛋白受体细胞中的实验表明，极低密度脂蛋白受体介导对富含甘油三酯的脂蛋白的摄取在胞内脂质聚集及泡沫细胞形成过程中具有重要作用。     

A型清道夫受体基因敲除小鼠的腹腔巨噬细胞特异性氧化型低密度脂蛋白受体

为研究巨噬细胞表面是否存在特异性氧化型低密度脂蛋白受体 ,选用A型清道夫受体基因敲除小鼠来进行研究。竞争抑制实验发现 ,在乙酰化低密度脂蛋白存在 (终浓度为 2 0 0mg L)的情况下 ,A型清道夫受体基因敲除小鼠的腹腔巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取降低了 2 4 .8% ,还有大约 80 %的氧化型低密度脂蛋白可能通过特异性受体途径被摄取。蛋白配基印迹技术发现一种膜蛋白 ,分子量为 84～ 97kDa,它不结合乙酰化低密度脂蛋白 ,只结合氧化型低密度脂蛋白 ,并且未标记1 2 5I的氧化型低密度脂蛋白能竞争性抑制1 2 5I标记氧化型低密度脂蛋白与该膜蛋白的结合 ,上述结果提示这种膜蛋白是特异性氧化型低密度脂蛋白受体     

低密度脂蛋白受体基因敲除鼠极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分诱导J774巨噬细胞胆固醇酯蓄积

为探讨低密度脂蛋白受体基因敲除鼠血浆极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分致动脉粥样硬化的作用,采用密度梯度超速离心法从低密度脂蛋白受体基因除鼠血浆分离极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分,用日立７４５０自动分析仪测定其脂含量,琼类糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其电泳迁移率和载脂与鼠腹腔巨噬细胞共同孵育,观察它与巨噬细胞的相互作用。结果发现,低密度脂蛋白受体基因扈除鼠血浆极低密度脂收白和中间密度脂收     

脂蛋白对巨噬细胞的作用研究进展

脂蛋白的种类、组成、氧化修饰以及基因突变等影响脂蛋白与巨噬细胞的相互作用.载脂蛋白E基因敲除鼠血浆极低密度和中间密度脂蛋白组分通过一种特异而不依赖载脂蛋白E途径诱导巨噬细胞胆固醇酯蓄积,是体内主要致动脉粥样硬化脂蛋白.低密度脂蛋白受体基因敲除鼠血浆极低密度和中间密度脂蛋白组分也显著诱导巨噬细胞胆固醇酯蓄积.人载脂蛋白AⅠ第235位谷氨酸残基缺失明显降低其促巨噬细胞胆固醇外流能力.人极低密度、低密度、高密度脂蛋白以及脂蛋白(a)等氧化后,不仅诱导巨噬细胞胆固醇酯蓄积,也具有显著促巨噬细胞增殖效应.     

低密度脂蛋白受体抑制剂对低密度脂蛋白和脂蛋白(a)代谢的影响

应用低密度脂蛋白受体抑制剂乳酸肝褐质和受体结合蛋白经刺猬腋下静脉注入，２ｍｉｎ后注射１２５Ⅰ－低密度脂蛋白或１２５Ⅰ－脂蛋白（３），６ｈ后处死，测定血、肝、肾、脾、胆汁和肾上腺的放射活性。实验发现：乳酸肝褐质和受体结合蛋白均能抑制低密度脂蛋白受体活性，使各组织摄取低密度脂蛋白分别降低１５％～８６％以上，但乳酸肝褐质和全体结合蛋白对脂蛋白（ａ）的组织摄取不但无抑制作用，反而能使脂蛋白（ａ）进入组织量增加，激活率分别达４０％～１２６％。实验结果说明：脂蛋白（ａ）虽然与低密度脂蛋白结构相似，含有７０％载脂蛋白Ｂ１００，但由于与载脂蛋白（ａ）以二硫键的形式连接，改变了空间结构，失去了与低密度脂蛋白受体结合的能力，并且推测乳酸肝褐质和受体结合蛋白在抑制低密度脂蛋白受体的同时，可能激活了细胞膜的其它机制，从而利于脂蛋白（ａ）进入细胞内。     

敲除清道夫受体A iv/一七基因对小鼠氧化型低密度脂蛋白组织分布和清除的影响

目的应用清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠及其野生对照小鼠,观察在正常饮食和高脂饮食情况下,清道夫受体AⅠ/Ⅱ对小鼠氧化型低密度脂蛋白分布和清除的影响。方法用Southernblot和免疫组织化学法鉴定实验小鼠清道夫受体AⅠ/ⅡDNA和蛋白的表达。将2月龄雄性野生对照小鼠和清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠各50只随机分为4组:清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠和野生对照小鼠各38只,给予高脂饮食(常规饲料加15%油脂和1.25%胆固醇)8周,观察实验前后血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、载脂蛋白A、载脂蛋白B及血肌酐等水平的变化;清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠和野生对照小鼠各12只,高脂饮食3天后从尾静脉注射125I标记的氧化型低密度脂蛋白,于10min、1、3和6h获取血液、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、肠、脂肪和肌肉等标本,分别称取质量并用γ射线计数仪检测其放射性强度。结果正常饮食下,清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠和野生对照小鼠血脂水平接近;高脂饮食下两组小鼠血脂水平均明显升高,但清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠血浆低密度脂蛋白水平明显高于野生对照小鼠;清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因敲除小鼠在注射125I标记的氧化型低密度脂蛋白10min后的清除率明显低于野生对照小鼠,注射125I标记的氧化型低密度脂蛋白6h后其主要分布于肝脏,在心脏和肾脏也有高分布;高脂饮食条件下,敲除清道夫受体AⅠ/Ⅱ基因对经尾静脉注射的125I标记的氧化型低密度脂蛋白在体内的分布不同于野生对照小鼠。结论敲除清道夫受体AⅠ/Ⅱ后,小鼠脂质代谢的调节能力受到损伤,机体对血液中氧化型低密度脂蛋白的清除能力下降,组织细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取减少,血低密度脂蛋白水平升高。     

天然及氧化型脂蛋白(a)与巨噬细胞表面结合

为探讨脂蛋白 (a)及氧化型脂蛋白 (a)在巨噬细胞上的结合和降解途径 ,将生物素标记的脂蛋白与小鼠腹腔巨噬细胞进行结合和竞争性结合试验。结果发现 ,脂蛋白 (a)能以一定的亲和力、可饱和性地与巨噬细胞表面结合 ;低密度脂蛋白对其结合无明显抑制作用 ,而氧化型低密度脂蛋白、氧化型脂蛋白 (a)均能不同程度地抑制这种结合。脂蛋白 (a)经氧化修饰后 ,与巨噬细胞的结合量显著增加。脂蛋白 (a)、低密度脂蛋白不能有效竞争氧化型脂蛋白 (a)的结合 ,而氧化型脂蛋白 (a)和氧化型低密度脂蛋白为有效的竞争性抑制剂。提示脂蛋白 (a)主要经清道夫受体与巨噬细胞表面结合 ;氧化型脂蛋白 (a)除经清道夫受体介导外 ,可能还通过其它特异性受体与巨噬细胞表面结合。     

低密度脂蛋白免疫复合物对单核细胞源性巨噬细胞胆固醇代谢及低密度脂蛋白受体表达的影响

目的 研究动脉粥样硬化过程中低密度脂蛋白免疫复合物对单核细胞源性巨噬细胞胆固醇代谢和低密度脂蛋白受体表达的影响。方法 以佛波酯刺激分化的THP-1细胞作为单核细胞源性巨噬细胞模型。通过胆固醇酶联法测定细胞内胆圊醇含量，逆转录-聚合酶链反应检测细胞低密度脂蛋白受体mRNA的表达，Western blot检测细胞低密度脂蛋白受体蛋白的表达。结果 与低密度脂蛋白组、阴性组及IgG免疫复合物组比较，低密度脂蛋白免疫复合物组细胞内胆固醇水平明显增高，并且低密度脂蛋白受体mRNA及蛋白的表达增加。结论 低密度脂蛋白免疫复合物能显著增加巨噬细胞内胆固醇含量，亦能够促进低密度脂蛋白受体mRNA与蛋白的表达，提示低密度脂蛋白免疫复合物在动脉粥样硬化进展过程中起重要的作用。     

ApoE敲除小鼠神经功能障碍的研究进展

载脂蛋白E（ApoE）是低密度脂蛋白（LDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）与脂蛋白相关蛋白（LRP）受体的配体，在脂质代谢中发挥重要作用。近年来有关ApoE与老年性痴呆的密切关系得到广泛关注，为了更好地研究ApoE在中枢神经系统中的作用，有关ApoE敲除小鼠神经功能障碍的研究正逐步得到重视，现将有关成果作如下综述。     

巨噬细胞集落刺激因子对小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体途径和细胞内胆固醇酯积聚的影响

为探索巨噬细胞集落刺激因子、清道夫受体、氧化型低密度脂蛋白与动脉粥样硬化的关系，观察了重组人巨噬细胞集落刺激因子对小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体途径的影响以及重组人巨噬细胞集落刺激因子对氧化型低密度脂蛋白所致细胞内胆固醇酯积聚的影响．结果发现重组人巨噬细胞集落刺激因子能增加培养的小鼠腹腔巨噬细胞表面的清道夫受体数目，使之对氧化型低密度脂蛋白的结合和降解呈现剂量和时间依赖性增加，并使细胞内胆固醇酯积聚增多．表明巨噬细胞集落刺激因子可通过增加清道夫受体数目使小鼠腹腔巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的结合和降解增多，从而增加细胞内胆固醇酯含量，促进动脉壁内泡沫细胞形成．     

电针对阿尔茨海默病小鼠海马晚期糖基化终末产物受体和低密度脂蛋白受体相关蛋白1的影响及机制

目的探讨电针(EA)对阿尔茨海默病(AD)小鼠海马晚期糖基化终末产物受体(RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)1的影响及机制。方法复制AD小鼠模型,小鼠随机分为对照组,模型组,治疗组(多奈哌齐0.001 g/kg),EA(针刺肾俞、百会、大椎),8只/组。采用小鼠双侧海马微量注射(10μg)β-淀粉样蛋白1~42(Aβ_(1~42),2 g/L)诱导AD小鼠,1次/d,持续30 d。采用Morris水迷宫测试小鼠学习记忆能力,电镜观察海马结构,检测小鼠脏器指数。采用双抗体夹心法测定海马APP、Aβ_(1~40)和血清Aβ_(1~40),海马组织RAGE和LRP1。采用RT-PCR检测海马RAGE和LRP1 mRNA表达。结果与模型组比较,EA组小鼠海马学习记忆能力明显改善(P0.05),海马神经元结构明显改善,脾和胸腺脏器指数明显增加(P0.05),海马APP、Aβ_(1~40)和RAGE水平明显降低(P0.05),血清Aβ_(1~40)和海马LRP1明显增加(P0.05)。结论 EA通过下调海马RAGE和上调海马LRP1表达改善AD小鼠学习记忆能力、海马电镜结构、脾指数、胸腺指数和海马Aβ_(1~40)水平。     

巨噬细胞修饰低密度脂蛋白对细胞受体活性的影响及前列腺素E2的作用

为研究低密度脂蛋白经细胞修饰后对细胞受体的影响及前列腺素Ｅ２的作用，利用免疫细胞化学和生物亲和素－酶联免疫吸附法分析检测小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体、小鼠皮肤纤维母细胞低密度脂蛋白受体的结合活性，结果发现修饰组的巨噬细胞浆及胞膜有强阳性黄褐色颗粒，而药物组仅中度着色；     

巨噬细胞集落刺激因子对小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体途径和细胞内胆固醇酯积聚的影响

为探索巨噬细胞集落刺激因子，清道夫受体、氧化型低密度脂蛋白与动脉粥样硬化的关系，观察了重组人巨噬细胞集落刺激因子对小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体途径的影响以及重组人巨细胞内胆固醇酯积聚的影响。结果发现重组人巨噬细胞集落刺激因子能增加培养小鼠的腹腔巨噬细胞表面的清道夫受体数目，使之对氧化型低密度脂蛋白的结合和降解呈现剂量和时间依赖性增加，并使细胞内胆固醇酯积聚增多。     

血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1与动脉粥样硬化

作为氧化型低密度脂蛋白主要受体，血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1首先在内皮细胞表面发现，后来发现在巨噬细胞以及SMC表面也有表达。这种受体被氧化型低密度脂蛋白活化后，可导致内皮功能改变，诱导粘附分子的表达及内皮细胞的凋亡。这种受体能被一些炎症因子、氧化应激、机械刺激以及高血压、高血脂和糖尿病等诱导表达；能识别结合多种与动脉粥样硬化形成有关的配体，参与动脉粥样硬化进程。     

低密度脂蛋白受体抑制剂对低密度脂蛋白和脂蛋白(a)代谢的影响

应用低密度脂蛋白受体抑制剂乳酸杆褐质和受体结构蛋白经刺猬腋下静脉注入，２ｍｉｎ后注射＾１２５Ｉ－低密度脂蛋白或＾１２５Ｉ－脂蛋白（ａ），６ｈ后处死，测定血，肝，肾，脾，胆汁和肾上腺的放射活性，实验发现，乳酸肝褐质和受体结合蛋白均能抑制低密度脂蛋白受体活性，使各组织摄取低密度脂蛋白分别降低１５％～８６％以上，但乳酸肝褐质和受体结构蛋白脂蛋白（ａ）的组织摄取不但无抑制作用，反而能使脂蛋白（ａ）进入组织     

低密度脂蛋白对THP-1源性巨噬细胞PCSK9和低密度脂蛋白受体表达的影响

目的用低密度脂蛋白处理THP-1源性巨噬细胞后,检测低密度脂蛋白受体和PCSK9(proprotein convertase subtilisin/kexintype9)的表达并研究PCSK9与低密度脂蛋白受体之间的相关性。方法160nmol/L佛波酯孵育THP-1源性巨噬细胞24h,使其诱导分化成贴壁的巨噬细胞后,分别用0、10、20和     

C反应蛋白和高密度脂蛋白对血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的观察C反应蛋白和高密度脂蛋白对单核细胞株THP-1来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达的影响,以及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的变化与细胞内胆固醇含量变化的关系。方法THP-1单核细胞株经佛波酯诱导分化为巨噬细胞。用不同浓度C反应蛋白或高密度脂蛋白在体外干预巨噬细胞,测定干预前后巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达的变化,并采用高效液相色谱测定巨噬细胞内胆固醇含量的变化。结果与对照组相比,C反应蛋白或高密度脂蛋白均可以诱导THP-1来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达增加(P<0.05),C反应蛋白使巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量显著增加(P<0.01),而高密度脂蛋白使细胞内总胆固醇和胆固醇酯显著降低(P<0.01)。结论C反应蛋白和高密度脂蛋白都能引起THP-1来源的巨噬细胞表面血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达上调,提示血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1并不是介导巨噬细胞参与炎症反应病理生理变化的关键性受体。     

低密度脂蛋白受体相关蛋白与动脉粥样硬化的关系

低密度脂蛋白受体相关蛋白（low density lipoprotein receptor—related protein，LRP）是近年来发观的一种细胞表面蛋白，属于一种内吞性受体，系低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptor，LDLR）基因家族中的一员。同于其能够与多种结构及功能各异的配体相互作用，不仅可以对血脂的动态平衡及纤溶功能的稳定进行调节。而且能参与多种生长因子、细胞激酶生物学效应的发挥．近来有研究表明LRP与动脉粥样硬化发生发展的多个环节密切相关并将其视为动脉粥样硬化性疾病又一新的危险因子。因而对其理化特件及生物学功能进行深入研究具有重要的理论及实际意义。     

巨噬细胞修饰低密度脂蛋白对细胞受体活性的影响及前列腺素E_2的作用

为研究低密度脂蛋白经细胞修饰后对细胞受体的影响及前列腺素E2的作用，利用免疫细胞化学和生物亲和素-酶联免疫吸附法分别检测小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体、小鼠皮肤纤维母细胞低密度脂蛋白受体的结合活性，结果发现修饰组的巨噬细胞胞浆及胞膜有强阳性黄褐色颗粒，而药物组仅中度着色；修饰组低密度脂蛋白与其受体结合量（54±13μg／g细胞蛋白）较对照组（144±μg／g细胞蛋白）显著下降（P＜0．01）；药物组受体结合量（100±11μg／g细胞蛋白）较修饰组明显提高（P＜0．05）。表明细胞修饰低密度脂蛋白能够刺激清道夫受体活性，抑制低密度脂蛋白受体活性；前列腺素E2（20mg／L）可对抗细胞修饰低密度脂蛋白对此二种受体的作用。