三氧化二砷对海马神经元细胞内钙离子浓度的影响

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对海马神经元细胞内钙离子([Ca2 ]i)浓度的影响与其神经毒性的可能机制.方法 用激光共聚焦显微镜结合Fluo-3-AM观察As2O3对大鼠原代培养的海马神经元[Ca2 ]i的影响.结果 有钙液中10 μmol/L、100 μmol/L As2O3升高海马神经元[Ca2 ]i与对照组相比[Ca2 ]i分别提高了0.24±0.09和0.41±0.08.20 μmol/L的维拉帕米不能阻断10 μmol/L As2O3升高[Ca2 ]i作用.无钙液中10 μmol/L、100 μmol/Ls2O3升高海马神经元[Ca2 ]i与对照组相比[Ca2 ]i分别提高了0.12±0.06和0.30±0.07.100 μmol/L 2-APB阻断了10 μmol/L As2O3升高[Ca2 ]i作用.结论 As2O3可以升高海马神经元[Ca2 ]i,IP3信号转导途径可能参与As2O3升高海马神经元[Ca2 ]i.     

吗啡对大鼠培养海马神经元钙离子作用机制的研究

目的 研究吗啡对海马神经元游离子浓度([Ca^2 ]i)影响的机制，探索吗啡成瘾的神经生物学机制及对吗啡成瘾可能的治疗途径。方法 运用新型荧光探针Fluo-4 , 利用激光共聚焦显微镜研究吗啡对大鼠培养海马神经元[Ca^2 ]i作用机制。结果 10μmol/L吗啡急性刺激引起海马神经元[Ca^2 ]i升高，μ阿片受体选择性拮抗剂CTOP（1μmol/L）不能阻断吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i增加，δ2阿片受体选择性拮抗剂Naltrindole(1μmol/L）阻断了吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i反应，特异性的内质网钙泵抑制剂Thapsigargin(TG,1μmol/L）预处理海马神经元组断吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i增加，L－钙通道阻断剂Verapamil(20μmol/L）预处理海马神经元不能完全抑制吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i增加；100μmol/L吗啡长时程（24h）作用于海马神经元，细胞内[Ca^2 ]i升高，加入10μmol/L纳络酮急性戒断后，不能阻断细胞内[Ca^2 ]i升高，反而引起[Ca^2 ]i异常升高。结论 吗啡急性刺激引起的海马神经元内钙增加主要来源于δ2阿片受体介导的IP3敏感的钙库释放。     

甲状旁腺素对心肌细胞钙离子移动的影响

目的:研究甲状旁腺素(PTH)对心肌细胞钙离子移动的影响及其机制。方法:培养的新生大鼠心肌细胞以荧光指示剂Fluo-3/AM负载,通过激光共聚焦显微镜(LSCM)动态观察不同浓度PTH_(1-34)对培养心肌细胞钙移动的作用,以及细胞外钙和钙拮抗剂的影响。结果:在细胞外Ca~(2+)为2.50mmol/L时,PTH_(1-34)在0.00、0.01、0.10和1.00μmol/L浓度下的刺激可使心肌细胞静息钙荧光强度(FI)分别从48.78±6.70、47.78±6.14、45.58±6.11、51.10±9.33,增高至48.82±6.31(P>0.05)、54.63±3.60(P<0.05)、63.82±9.21(P<0.01)、78.66±10.04(P0.05);如应用10.00μmol/L硝苯地平预处理,则FI从47.42±8.80上升到54.12±5.13(P>0.05)。结论:甲状旁腺素显著增加静息心肌细胞[Ca~(2+)]_i,并呈浓度依赖性,电压依赖性钙通道开放引起的细胞外钙内流为其重要机制之一。     

镁对缺氧大鼠皮质神经元保护作用的研究

目的研究镁对离体培养的缺氧大鼠脑皮质神经元的影响。方法将大鼠皮质神经元分别给予MgSO4和Mg^2＋-ATP处理后连续给予97．5％N2和2．5％CO2混合气体,制成大鼠皮质神经元体外缺氧试验模型,分别观察缺氧后1、2、4h不同时间神经元死亡率、神经细胞内Ca^2＋浓度（Fluo-3标记,激光共聚焦显微镜检测）的动态变化和培养液中LDH、K^＋、NSE浓度的变化。结果MgSO4和Mg^2＋-ATP能减少缺氧状态下的脑皮质神经元钙内流（P〈0．05）,降低培养液中LDH、K^＋、NSE浓度（P〈0．05）,明显降低神经元死亡率（P〈0．05）。结论镁对离体培养的皮质神经元缺氧损伤有肯定的保护作用。     

睾酮对自由基损伤的海马神经元神经保护作用中细胞内Ca2+变化

目的：观测睾酮对自由基损伤的海马神经元神经保护用中是否有细胞内Ca2＋变化。方法：原代培养海马神经元,暴露于自由基并损伤后,分为对照组、不同浓度过氧化氢组、睾酮组;利用荧光探针进行标记,激光共聚焦显微镜下观察加入睾酮前后细胞内Ca2＋变化。结果：以100μM和200μM H2O2组引起细胞内Ca2＋增加最为明显;与对照组相比,Fi值变化差异有统计学意义（P〈0.05）;预先加入睾酮后再暴露于100μM H2O2与单独暴露于相同浓度H2O2组相比,细胞内Ca2＋荧光比值明显降低,二者差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：自由基损伤能引起原代培养海马神经元内Ca2＋含量升高,睾酮能明显减轻由于自由基损伤引起的细胞内Ca2＋变化。     

重组人内抑素对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度的影响

目的通过探讨重组人内抑素（rhEndostatin）促进兔耳增生性瘢痕成纤维细胞（HSFs）凋亡的部分机制,为临床上药物治疗增生性瘢痕（HS）提供实验依据。方法取新西兰大耳兔6只制备瘢痕模型。以HSFs为研究对象,应用激光共聚焦显微镜（CLSM）结合Fluo-4/AM（Ca2+荧光指示剂）检测在Hanks与D-Hanks液中（有、无细胞外钙）rhEndostatin（100 μg/mL）对HSFs胞内Ca2+浓度（[Ca2+]i）的影响。结果当细胞外液为Hanks液时,rhEndostatin（100 μg/mL）可使HSF胞质内[Ca2+]i水平持续增加,当持续10 s给予rhEndostatin处理后,HSFs胞内[Ca2+]i可迅速增加达峰顶再缓慢下降,在停止药物处理后,HSFs胞内[Ca2+]i继续下降,停止处理约50 s后,胞内[Ca2+]i尚未至基线水平;而当细胞处于D-Hanks液中时,rhEndostatin对HSFs胞质内[Ca2+]i无明显影响。结论rhEndostatin可通过干扰HSFs胞内钙离子稳态,推动胞外Ca2+内流导致胞内钙超载来诱导HSFs凋亡。     

生长抑素对培养大鼠单个海马神经元内钙离子浓度的影响

生长抑素（ＳＯＭ）作为一种神经递质或调质,在癫痫患者及致痫动物脑组织中其含量升高［１］,但对其在癫痫发病中的作用看法不一。本研究采用Ｆｕｒａ２荧光检测法,检测了ＳＯＭ对培养的单个海马神经元内游离Ｃａ＋＋浓度（［Ｃａ＋＋］ｉ）的影响,并对其可能的机制...     

氧化应激后大鼠神经元内Nogo-A的表达变化

目的 :探讨大鼠大脑皮层神经元受到氧化应激后Nogo A表达的变化及其可能的作用 .方法 :体外原代培养大鼠大脑皮层神经元 ,给予不同浓度H2 O2 处理 8h后 ,倒置相差显微镜下观察神经元的形态学变化、Hoechst33342和PI染色观察凋亡和坏死情况 ,然后Westernblot观察Nogo A的表达变化 .结果 :大鼠皮层神经元受到 10和 10 0 μmol/LH2 O2刺激后 ,神经元出现胞体回缩、变圆甚至崩解 ,突起断裂、脱落等细胞受损的现象 ;Hoechst33342和PI染色观察到 1μmol/LH2 O2 时神经元凋亡和坏死比例与对照组相比没有差别 ,而 10和 10 0 μmol/LH2 O2 刺激后 ,神经元凋亡和坏死比例明显增加 (P <0 .0 5 ) .Westernblot结果显示 ,1μmol/LH2 O2 时No go A的表达量与对照组相比无明显差异 ,而在 10和 10 0μmol/L时Nogo A的表达量明显升高 (P <0 .0 5 ) .结论 :氧化应激可以上调神经元Nogo A的表达 .     

激光共焦显微镜测量细胞内钙离子时的几个关键因素

本文根据实际经验指出应用激光共焦显微镜测量细胞内钙离子的几个关键因素,掌握这几个关键因素有助于保证实验的成功率。     

大鼠皮质神经元的体外培养和纯化

目的：探讨大鼠皮质神经元分离纯化的有效方法。方法：取胎鼠大脑皮质细胞，分别在不同的培养液中进行原代培养，利用相差显微镜对培养的细胞进行动态观察；并以免疫细胞化学技术对神经元进行染色。结果：在相差显微镜下可见加用N2添加剂和胎牛血清培养的神经元生长良好，胞体形态多样，突起数目多，长度长，与邻近神经元的胞体或突起形成接触，而胶质细胞则大量死亡，神经元纯化率达94％以上，未加用N2添加剂培养的神经元胶质细胞大量存在，神经元纯化率达50％左右。结论：N2添加剂和胎牛血清联合应用可使大鼠皮质神经元得到良好的生长和有效纯化。     

Effect of combining different calcium concentration dialysate on calcium balance in peritoneal dialysis patients

Background  Calcium and phosphorus metabolic disturbance are common in dialysis patients and associated with increased morbidity and mortality. Therefore, maintaining the balance of calcium and phosphate metabolism and suitable intact parathyroid hormone (iPTH) level has become the focus of attention. We investigated the effects of different peritoneal dialysate calcium concentrations on calcium phosphate metabolism and iPTH in continuous ambulatory peritoneal dialysis (CAPD) patients.

Methods  Forty stable CAPD patients with normal serum calcium were followed for six months of treatment with 1.25 mmol/L calcium dialysate (DCa1.25, PD4, 22 patients) or a combination of 1.75 mmol/L calcium dialysate (DCa1.75, PD2) and PD4 (18 patients) twice a day respectively. Total serum calcium (after albumin correction), serum phosphorus, iPTH, alkaline phosphatase (ALP) and blood pressure were recorded before and 1, 3 and 6 months after treatment commenced.

Results  No significant difference was found in baseline serum calcium, phosphorus between the two patient groups, but the levels of iPTH were significantly different. No significant changes were found in the dosage of calcium carbonate and active vitamin D during 6 months. In the PD4 group, serum calcium level at the 1st, 3rd, 6th months were significantly lower than the baseline (P <0.05). There was no significant difference in serum phosphorus after 6 months treatment. iPTH was significantly higher (P <0.001) at the 1st, 3rd, and 6th months compared with the baseline. No differences were seen in ALP and blood pressure. In the PD4+PD2 group, no significant changes in serum calcium, phosphorus, iPTH, ALP and BP during the 6-month follow-up period.

Conclusions  Treatment with 1.25 mmol/L calcium dialysate for six months can decrease serum calcium, increase iPTH, without change in serum phosphorus, ALP, and BP. The combining of PD4 and PD2 can stabilize the serum calcium and avoid fluctuations in iPTH levels.

     

不同强度静磁场对成骨细胞细胞内钙离子浓度的影响

目的 对成骨细胞静磁场加载过程中细胞内的钙离子浓度进行动态定量检测,探讨成骨细胞静磁场加载过程中细胞内钙离子浓度的变化规律.方法 采用静磁场加载装置,对体外培养的成骨细胞分别在8、50 mT和160 mT的磁场强度下给予24、48 h和72 h的静磁场加载;0 mT作为对照组,不进行静磁场加载,只受地磁场的影响.应用邻甲酚酞络合铜(OCPC)微板法测量加载后细胞内钙离子浓度.结果 原代培养的细胞经鉴定具有成骨细胞的生物学特征,为成骨细胞.与0 mT组相比,8、50 mT和160 mT的静磁场加载后24、48、72 h成骨细胞内的钙离子浓度均降低(P<0.05).与0 mT组比较,8 mT组在24、48、72 h细胞内钙离子浓度降低率分别为27.48%、24.41%和10.46%,50 mT组降低率分别为19.03%、18.04%和15.54%,160 mT组降低率分别为8.58%、13.10%和19.03%.结论 一定强度的静磁场加载能够降低成骨细胞内的钙离子浓度.     

不同浓度一氧化氮对5种细菌生长的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)对细菌的体外抑菌作用。方法:表皮葡萄球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、白色念珠菌5种病菌,在温度37℃,湿度45%~60%条件下,分别暴露于室内空气及10×10-6g/L、25×10-6g/L、40×10-6g/L NO中24 h。结果:10×10-6g/L、25×10-6g/L、40×10-6g/L NO抑制白色念珠菌生长,对金黄色葡萄球菌无抑制;25×10-6g/L、40×10-6g/L NO对表皮葡萄球菌、大肠杆菌有抑菌作用;绿脓杆菌在40×10-6g/L NO中被抑制。结论:①NO对细菌具有选择性抑制作用。②不同细菌对NO敏感性不同,NO对部分细菌抑菌作用呈浓度依赖性。     

新型重组人肿瘤坏死因子对大鼠肝细胞及小鼠肝组织中钙稳度的影响

目的;研究新型重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－ＮＣ）对培养大鼠肝细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度（「Ｃａ＾２＋」ｉ）及小鼠肝组织中Ｃａ６２＋含量的影响。方法：以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为Ｃａ＾２＋荧光检测,荧光分光光度法测定培养大鼠肝细胞内「Ｃａ＾２＋」ｉ;原子吸收分光光度法测定小鼠肝组织中Ｃａ＾２＋含量。结果：在加入ｒｈＴＮＦ－ＮＣ ３ｈ后,可剂量依赖性地引起培养大鼠肝细胞内「Ｃａ＾２＋」ｉ显著升高。     

Orexin-A对体外培养的大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的:研究Orexin-A对体外培养的海马神经细胞凋亡的影响及其可能机制.方法:取体外培养的大鼠海马神经细胞分为7组,分别给予0,1.0,10.0,100.0 nmol/L及1.0、10.0、100.0 μmol/L的Orexin-A培养.另取大鼠海马神经细胞,预先加入Orexin-A受体(OX1R)阻断剂SB334867,然后同法分组及处理.观察海马神经细胞的形态学变化;采用Western Blot、逆转录PCR(RT-PGR)法检测OX1R蛋白和mRNA的表达;原位末端标记染色评价细胞凋亡率;Fura-2/AM荧光比值成像技术测定游离钙离子浓度[Ca2+]i.结果:随着Orexin-A浓度的增大,海马神经细胞凋亡增加(F=137.49,P＜0.01),同时呈剂量依赖性地触发[Ca2+]i的升高(F=961.44,P＜0.01),但是OX1R蛋白及mRNA的表达无明显变化.SB334867可以部分阻断这种现象.结论:大剂量Orexin-A对体外培养的海马神经细胞有促凋亡作用,其机制可能与增加了细胞内Ca2+浓度蓄积有关.     

多聚赖氨酸对胎鼠颌下腺细胞培养的影响

目的：研究以多聚赖氨酸为生长底物对体外培养胎鼠颌下腺上皮细胞生长的影响。方法：以多聚赖氨酸包被培养板，对胎鼠颌下腺上皮细胞进行分离培养，应用相差显微镜及电镜观察细胞生长特性，免疫组织化学方法对细胞来源进行鉴定。结果：颌下腺细胞在包被有多聚赖氨酸的培养皿表面生长分化良好，呈单层生长；免疫组织化学检测单克隆角蛋白、上皮膜抗体呈阳性表达。结论：多聚赖氨酸在体外培养的过程中，可以促进细胞的黏附与生长。     

不同取片方式对植入贫铀片大鼠组织铀浓度的影响

目的取出嵌入的贫铀弹片后,其周围组织中仍有高浓度的贫铀污染,研究何种取片方法能最低限度减轻这种污染,对减轻机体损伤有重要意义.方法动物麻醉状态下手术植入贫铀片,10 d后以各种不同的方法取出,分为常规手术组、术前4%碳酸氢钠去污组、创口去污组、更换手术器械组、剪去周围组织组和综合法组,在取片后第7、14、21天收集组织样本,测定铀含量.结果以常规手术组组织铀含量最高,术前去污组、切口去污组和更换器械组次之,剪去周围组织铀含量下降较大,综合组最低.结论综合应用各种方法实行手术,即术前4%碳酸氢钠去污 切口去污 更换器械 剪去周围组织效果最好,可大大减少铀吸收.     

芍药苷对大鼠背根神经元细胞内Ca2+的影响

摘要：目的：建立一种评价中药活性成分对大鼠背根神经节(DRG)神经元细胞内游离Ca2 浓度影响的方法。方法：显微解剖获取大鼠背根神经节,通过胰蛋白酶消化,过筛,用DF-12和抗有丝分裂培养液交替培养纯化,获得原代大鼠DRG神经元细胞,并采用细胞免疫荧光技术测定DRG神经元细胞纯度;采用激光共聚焦显微成像技术（LSCM）,观察细胞内Ca2 荧光强度的变化,并对Ca2 荧光强度变化率进行分析,探讨芍药苷对DRG细胞内游离钙离子浓度及辣椒素受体的影响。结果：采用上述方法分离得到的DRG细胞纯度可高达95%以上,辣椒平可通过阻断辣椒素激活的瞬时受体电位通道（TRPV1）的作用而抑制细胞内Ca2 的增加。芍药苷表现出与CAP类似的作用,可以阻断细胞外Ca2 内流。结论：芍药苷可能是通过作用于TRPV1通道,而抑制DRG细胞内Ca2 大量增加,本方法可以用于评价药物对大鼠DRG细胞内Ca2 浓度的影响。     

Effect of crystalloid cardioplegic solution at different calcium concentration on immature myocardium

OBJECTIVE To determine the myocardial protective effect of crystalloid cardioplegic solution at different calcium concentration on immature myocardium.

METHODS Isolated perfused neonatal rabbit hearts from three groups, arrested by intermittent infusion of St. Thomas II cardioplegic solution with different concentration of calcium (in each group, only calcium concentration of cardioplegic solution was modified, I. [Ca2+] 0.6 mmol/L; II. [Ca2+] 1.2 mmol/L; III. [Ca2+] 2.4 mmol/L), were kept ischemic globally at 20 degrees C for 90 minutes and then followed by 30 minutes of reperfusion in Langendorff mode.

RESULTS Although the recovery of LVDP, +dp/dtmax at calcium content of 2.4 mmol/L after 10 minutes of reperfusion was significantly higher than those at 0.6 and 1.2 mmol/L calcium (P < 0.05, P < 0.01, respectively). The declined tendency of left ventricular hemodynamics after 20 minutes of reperfusion in this group was detected. By the end of reperfusion, the left ventricular functional recovery at 2.4 mmol/L calcium did not differ from those at 1.2 and 0.6 mmol/L calcium. Conversely, postischemic left ventricular functions at 0.6 and 1.2 mmol/L calcium were gradually improved during 30 minutes of reperfusion. In 2.4 mmol/L calcium group, the Ca(2+)-ATPase activity significantly increased (P < 0.01, P < 0.001) whereas myocardial ATP content was lower when compared with 1.2 mmol/L (P < 0.001) and 0.6 mmol/L calcium groups.

CONCLUSIONS Our research demonstrated that there were no statistical differences with respect to hemodynamic recovery in three groups after 30 minutes of reperfusion although left ventricular functional recovery at 2.4 mmol/L calcium accelerated early after reperfusion. In addition, with 2.4 mmol/L calcium, myocardial ATP content was decreased significantly. We conclude that, from the point of view of myocardial energy metabolism, St. Thomas II cardioplegic solution at high concentration of calcium can not provide immature myocardium with optimal myocardial protection while with 1.2 mmol/L calcium, however, better high-energy store can be preserved.

     

烫伤血清对大鼠库普弗细胞胞浆游离钙浓度的影响

目的:观察烫伤血清对大鼠分离培养的库普弗细胞(KC)胞浆内游离钙([Ca2+]i)浓度的影响.方法:胶原酶灌注消化、梯度离心分离KC,在KC悬液中加入烫伤血清,Fura-2/AM荧光染色法测定[Ca2+]i.结果:分离培养的KC静息状态下[Ca2+],为(109.29±4.17)nmol/L,烫伤血清可以使[Ca2+]i显著升高,以烫伤后6 h的血清作用最明显;[Ca2+]i的浓度随血清浓度的升高而升高;烫伤血清作用1 min KC[Ca 2+]i已明显升高,2 min达高峰,20 min时仍明显高于假烫组.结论:烫伤血清能明显升高KC[Ca2+]i,作用快速而持久,且呈浓度依赖性.