SHG-44胶质瘤细胞表达β-1,-半乳糖基转移酶V后对鬼臼乙叉甙敏感性影响

目的研究鬼臼乙叉甙(Etoposide,P16)对表达β-1,-半乳糖基转移酶V(beta-1,-galactosyltransferase V,β-1,-GalT V)的SHG-44胶质瘤细胞死亡和凋亡的影响,为进一步探讨β-1,-GaIT V与化疗药物敏感性的关系莫定基础.方法通过流式细胞仪(FCM)和Hoechst 33258染色法,分析不同浓度的VP16处理转染了正义(GalTV-HA/SHG-44)、反义β-1,-GalT V(GaITV-AS/SHG-44)和空载体(Mock)的SHG-44细胞后细胞的凋亡和死亡情况.结果①低浓度的VP16(20 μmoL/L)处理24 h后,alTV-HA/SHG-44组的死亡细胞加上凋亡细胞的比例明显低于Mock组(t=4.550 6,＜0.01)和GalTV-AS/SHG-44组(t=5.086 5,＜0.001).GalTV-AS/SHG-44组的死亡细胞加上凋亡细胞比例明显高于Mock组(t=3.287 3,＜0.01).高浓度的VP16(120μmoL/L)处理48 h和72 h后,alTV-HA/SHG-44组死细胞所占比例明显低于Mock组(t=3.3664,P＜0.05;t=5.495 3,＜0.01)和GalTV-AS/SHG-44组(t=3.173 2,＜0.01;t=4.603 5,＜0.001).②MTr分析显示,P16处理48,2h后,alTV-HA/SHG-44组活细胞数明显高于Mock组(t=5.078 3,＜0.05;t=3.8923,＜0.01)和GalTV-AS/SHG-44组(t=4.566 7,P＜0.01;t=4.784 9,＜0.001).③VP16(20 μmoL/L)处理24 h后,用Hoochst 33258染色.镜下观察到死亡或者凋亡细胞中的细胞核仁及断裂的核片段呈新月形,或核固缩并深染.GalTV-AS/SHG-44组平均死亡和凋亡阳性率为41%,大大高于经同样处理的转染空载体和转染正义β-1,-GalT V的SHG-44细胞.结论β-1,-GalTV能够影响抗肿瘤药VP16的杀伤作用,过表达β-1,4-GalT V可以拮抗VP16的作用,为解释胶质瘤的化疗耐药性提供了新的依据.     

SHG-44胶质瘤细胞表达β-1,4-半乳糖基转移酶V后对鬼臼乙叉甙敏感性影响

目的:研究鬼臼乙叉甙(Etoposide,VP16)对表达β-1,4-半乳糖基转移酶V(beta-1,4-galactosyltransferaseV,β-1,4-GalTV)的SHG-44胶质瘤细胞死亡和凋亡的影响,为进一步探讨β-1,4-GalTV与化疗药物敏感性的关系奠定基础。方法:通过流式细胞仪(FCM)和Hoechst33258染色法,分析不同浓度的VP16处理转染了正义(GalTV-HA/SHG-44)、反义β-1,4-GalTV(GalTV-AS/SHG-44)和空载体(Mock)的SHG-44细胞后细胞的凋亡和死亡情况。结果:①低浓度的VP16(20μmoL/L)处理24h后,GalTV-HA/SHG-44组的死亡细胞加上凋亡细胞的比例明显低于Mock组(t=4.5506,P<0.01)和GalTV-AS/SHG-44组(t=5.0865,P<0.001)。GalTV-AS/SHG-44组的死亡细胞加上凋亡细胞比例明显高于Mock组(t=3.2873,P<0.01)。高浓度的VP16(120μmoL/L)处理48h和72h后,GalTV-HA/SHG-44组死细胞所占比例明显低于Mock组t=3.3664,(P<0.05;t=5.4953,P<0.01)和GalTV-AS/SHG-44组(t=3.1732,P<0.01;t=4.6035,P<0.001)。②MTT分析显示,VP16处理48,72h后,GalTV-HA/SHG-44组活细胞数明显高于Mock组(t=5.0783,P<0.05;t=3.8923,P<0.01)和GalTV-AS/SHG-44组(t=4.5667,P<0.01;t=4.7849,P<0.001)。③VP16(20μmoL/L)处理24h后,用Hoechst33258染色。镜下观察到死亡或者凋亡细胞中的细胞核     

鬼臼乙叉甙对SHG-44胶质瘤细胞表达β-1,4-半乳糖基转移酶V后粘附相关分子表达的影响

目的 研究人脑星形胶质细胞瘤SHG-44细胞表达(β-1,4-半乳糖基转移酶V(beta-1,4-galactosyltransferase V,β-1,4-GalT V)后对化疗药物敏感性的影响,分析鬼臼乙叉甙(VP16)处理表达β-1,4-半乳糖基转移酶V的SHG-44细胞后其细胞粘附作用相关因子水平的变化。方法 用120μmol／L的VP16处理转染了正义、反义β-1,4-GalT V和空载体的SHG-44细胞24h后,采用western blot检测整合蛋白β1表达变化及局部粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的蛋白水平和FAK的酪氨酸磷酸化水平。结果 在未经VP16处理的3株SHG-44细胞中,FAK的蛋白水平没有明显改变,而整合蛋白β1的蛋白表达在转正义β-1,4-GalT V的细胞中最高;经VP16处理后,SHG-44细胞中整合蛋白β1的表达水平增高,FAK及其磷酸化水平下降。但整合蛋白β1,FAK及其磷酸化水平随细胞中β-1,4-GalT V表达水平不同而变化。结论 VP16处理对表达不同水平的β-1．4-GalT V的SHG-44胶质瘤细胞的粘附影响有所不同,提示胶质瘤表达β-1,4-GalT V不仅与肿瘤的恶性行为有关,而且与肿瘤的化疗敏感性有关。     

不同剂量γ射线照射对体外培养胶质瘤细胞系的影响及对神经功能的保护作用

目的：比较不同剂量γ射线对胶质瘤细胞系C6和SHG-44的影响，建立γ射线诱导胶质瘤细胞系C6和SHG-44凋亡研究的生物模型，探索γ射线照射对胶质瘤细胞周期的影响。方法：采用对数生长期的C6和SHG-44胶质瘤细胞经4，8，16，32和64Gy的γ射线照射后培养48h，用流式细胞仪进行细胞凋亡检测并分析细胞周期的改变。结果：不同剂量γ射线照射均可诱导C6和SHG-44胶质瘤细胞凋亡。C6细胞对照组、4，8，16，32和64Gy组照射后48h的凋亡百分数分别为(3．1&;#177;0.5)，(16．7&;#177;0.6)，(27．9&;#177;0.8)，(27．3&;#177;0.4)，(33．8&;#177;0.7)和(36．7&;#177;0.7)，照射组凋亡率均高于对照组(t=30．16～67．65，P&;lt;0.01)。SHG-44细胞对照组，4，8，16，32和64Gy组照射后48h的凋亡率均高于对照组(t=35．51～103．79，P&;lt;0.01)，但两组细胞的坏死比例均无明显增加(P&;gt;0.05)。SHG-44细胞对电离辐射更加敏感。两种细胞G0／G1期的细胞比例与γ射线照射剂量呈正相关；S期的细胞比例与照射剂量呈负相关。结论：以γ射线照射C6和SHG-44胶质瘤细胞可建立理想的射线诱导的细胞凋亡模型，γ射线照射可引起两种胶质瘤细胞系G1期阻滞和S期延迟。     

椎管内局部灌注丹参注射液对急性脊髓损伤的保护

背景：脊髓损伤后的继发性损伤期大量细胞以凋亡的方式死亡。目的：探讨中药丹参注射液局部灌注对急性脊髓损伤后脊髓细胞坏死‘和调亡的影响。设计：随机对照实验。单位：陨阳医学院附属人民医院临床医学试验中心。对象：4～5个月龄的一级中国白兔44只，雌雄不限，体质量2．0～2．5kg。材料：选择实验于2002-06／2003-07在郧阳医学院附属人民医院临床医学试验中心完成。随机分成2组，丹参组和对照组，每组22只。两组动物均以改良Allen法造成兔不完全性脊髓损伤的模型。丹参组术后按0．3mL／(k只&;#183;d)的总量分4次(每6h1次)从硬膜下导管推人丹参注射液，对照组推入等量生理盐水。注射至损伤后8，24，72h分别处死动物，进行病理、组织形态学观察，过氧化物歧化酶和丙二醛检测，凋亡抑制基因B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)阳性细胞数检测。主要观察指标：脊髓损伤区细胞凋亡指数和细胞凋亡率。结果：44只兔均进入结果分析。①细胞凋亡结果：丹参组的凋亡指数明显少于对照组(13．10&;#177;1．38，20．39&;#177;2．96，t=4．101，P&;lt;O．01)：细胞凋亡率明显低于对照组[(9．67&;#177;1．09)％，(14．68&;#177;2．81)％，t：4．072，P&;lt;0．01]；Bcl-2的表达高于对照组[(19．12&;#177;4．74)个／mm^2，(13．37&;#177;3．68)个／mm2，t=2．347，P&;lt;0．0l]。②氧化物歧化酶含量：丹参组高于对照组[(136．20&;#177;13．64)NU／mL，(101．70&;#177;15．24)NU／mL．t=4．132。P&;lt;0．01]。③丙二醛含量：丹参组低于对照组[(1．27&;#177;0．22)nmol／mL，(2．54&;#177;0．69)nmol／mL，t=4．309，P&;lt;0.01]。④神经元和神经纤维变性及坏死：丹参组轻于对照组。结论：丹参局部灌注后，减少了脊髓损伤局部的细胞凋亡，抑制和减轻了急性脊髓损伤后细胞坏死。     

次声作用对大鼠海马细胞凋亡的影响

目的：探讨8Hz，90dB次声作用对海马细胞凋亡的影响。方法：将48只雄性SD大鼠单纯随机分为6个组，即对照组、次声作用1，7，14，21，28d组，每组8只。采用急性细胞分离技术，通过流式细胞仪观察大鼠脑海马细胞凋亡状况。结果：频率8Hz，声压级90dB次声分别作用2h／d后，次声暴露组与对照组比较，1d组未见海马细胞凋亡增高(P&;gt;0．05)，7d组可见海马细胞凋亡增高(F=42．18，P&;lt;0．01)，14d组明显升高(F=42．18，P&;lt;0．01)，21d组凋亡细胞较14d组明显减少(F=42．18，P&;lt;0．01)但仍高于对照组(F=42．18，P&;lt;0．05)，至28d组与对照组已差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：次声8Hz，90dB作用一定时间后可导致海马细胞凋亡数量有不同程度增高；随作用时间延长，海马细胞对次声作用产生适应性。8Hz，90dB次声作用对大鼠海马细胞具有一定的损伤效应。     

心肌梗死后心肌细胞凋亡及左室重塑过程中肝细胞生长因子的作用

目的：探讨外源性肝细胞生长因子(hepatoeyte growth factor，HGF)对心肌梗死后心肌细胞凋亡及左室重塑的影响。方法：将56只新西兰兔随机分为4组：假手术组、假手术+HGF组、对照组和干预组。结扎左冠状动脉前降支复制急性心肌梗死模型。干预组静脉注射给予HGF2mg／(kg&;#183;12h)，4周后测心功能、左室重塑指标，取出心脏，梗死区／缺血区重量比为梗死范围。TUNEL法染色检测细胞凋亡。Western blot法测定凋亡蛋白Bcl．2的表达。结果：与假手术组相比，对照组的左室舒张末容积、左室相对重量、左室壁厚度均显著升高(t=3．598，2．348，2．324，P&;lt;0．05-0．01)，左室缩短分数(left ventricular fraction of shortening，LVFS)、左室射血分数(left ventricular ejection fraction，LVEF)均显著降低(t=4．311，3．330，P&;lt;0．01)。HGF干预组LVESV，LVEDV显著低于对照组(t=2．810，2．449，P&;lt;0．01)；LVFS及LVEF均显著升高。HGF干预组细胞凋亡率、心肌梗死范围均低于对照组(t=2．302，2．344，P&;lt;0．01)。左室腔直径与心肌细胞凋亡率呈正相关(r=0．801，P&;lt;0．01)。干预组梗死心肌周围bcl-2表达(灰度值1．37)显著高于对照组(灰度值0．17)(t=21．043，P&;lt;0．01)。结论：HGF能减少心肌梗死范围、降低心肌细胞凋亡率并能限制心肌梗死后的左室重塑，改善心功能，其作用机制可能与其抗凋亡有关。     

白细胞介素-1对β淀粉样蛋白胞毒及基因表达的调节作用

目的：研究B淀粉样蛋白(β-amyloid protein，Aβ)的神经元毒性作用及白细胞介素1(interleukin-1β，IL-1β)对神经细胞β淀粉样蛋白前体(β-amyloid precursor protein，APP)基因表达以及对Aβ细胞毒性的调节作用。方法：以PC12细胞作为体外神经细胞模型，应用四唑盐(MTY)法检测Aβ，IL-1β对细胞活性的影响，应用RT-PCR法半定量分析IL-1β对APP基因表达的影响。结果：Aβ具有直接的神经细胞毒作用，与浓度以及聚集状态相关，以20μmol／L孵育3h毒性最大(q=5．62，P&;lt;0．01)，而孵育7d者几乎没有毒性。IL-1β(浓度为20μg／L)与Aβ25-35(浓度为20μmol／L孵育3h)共同作用于细胞时，Aβ25—35的细胞毒作用被扩大，细胞活性从36.7％降到了13．2％(q=3．8，P&;lt;0．05)；当IL-1β(浓度为20μg／L)与Aβ25-35(20μmol／L孵育7d)共同作用时，细胞活性迅速下降，从93％降到了7．7％(q=4．83，P&;lt;0．01)。IL-1β可以刺激PC12细胞APP751、770mRNA表达增加，与对照组相比，20μg／L组APP mRNA表达增加约为2倍(q=4．76，P&;lt;0．01)，此后增加不明显；APP mRNA的表达在IL-1β(20μg／L)刺激6h达高峰，约为对照组的2倍(q=4．92，P&;lt;0.01)。结论：Aβ具有直接细胞毒作用，与浓度以及聚集状态相关。IL-1β可以扩大Aβ的细胞毒性作用。IL-1β可以刺激PC12细胞APP mRNA表达增加，具有剂量及时间依赖性。     

糖尿病大鼠胃平滑肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达的意义

目的：探讨糖尿病大鼠胃平滑肌细胞凋亡以及凋亡相关基因蛋白表达变化，为糖尿病胃轻瘫的发生研究提供理论基础。方法：Wistar大鼠70只，随机分为糖尿病组(链脲菌素STZ60mg／Kg，腹腔注射)，对照组(腹腔注射等量的生理盐水)。2个月后大鼠色素胃排空和肠道传输速度测定，TUNEL法原位检测凋亡细胞。免疫组织化学方法和Western blotting免疫印迹检测bcl-2／bax基因表达。结果：糖尿病组的胃内色素残留率显著增加，小肠传输速率减慢(t=4．26，4．18，P&;lt;0．01)；糖尿病组平滑肌细胞凋亡细胞指数[(9．63&;#177;2．47)％]较正常对照组[（3．23&;#177;1．28)％]明显增高(t=4．02，P&;lt;0．01)；bcl-2基因表达下调。bax基因表达上调。结论:糖尿病胃肠道动力改变与胃平滑肌细胞凋亡密切相关，bcl-2凋亡途径参与了胃轻瘫的发生。     

灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后凋亡相关蛋白的干预

目的：探讨灯盏花素干预脑缺血再灌注损伤后对Bcl-2蛋白、c-Fos蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白的表达影响及其对大脑损伤的保护作用。方法：实验于2004-06／09在华中科技大学同济医学院生理学实验室进行，取SD大鼠30只，随机分为假手术组、模型组和灯盏花组3组，每组10只。假手术组不造模，模型组和灯盏花组建立脑缺血再灌注模型后分别腹腔注射生理盐水1mL／b和灯盏花素注射液1mL／kg。采用免疫组化法测定灯盏花素干预大鼠脑缺血24h后对BCl-2蛋白、c-Fos蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达的变化?结果：30只大鼠均进入结果分析。①Bcl-2蛋白：模型组大鼠脑组织中阳性细胞数与假手术组相比有显著差异[(40．83&;#177;2．69),(2．02&;#177;0．18)个／视野，t=7．12，P&;lt;0．01]，而灯盏花组又明显高于模型组[(64．88&;#177;3．13)个／视野，t=9．34，P&;lt;0．01]。②c-Fos蛋白：模型组大鼠脑组织中c-Fos蛋白表达水平显著高于假手术组[(72．47&;#177;4．23)．(2．30&;#177;0．34)个／视野，t=10．22，P&;lt;0．01]；灯盏花组较模型组明显减少[(48．23&;#177;5．12)个／视野，t=7．55，P&;lt;0．01]。③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白：模型组大鼠脑组织中阳性细胞数明显高于假手术组[(126．3l&;#177;7．12)，(2．30&;#177;0．64)个／视野，t=15．74，P&;lt;0．01]，灯盏花组大鼠脑组织中阳性细胞数明显低于模型组[(42．22&;#177;4．24)个／视野，t=7．36．P&;lt;0．01]。结论：灯盏花素可能通过上调原癌期蛋白质c-bcl-2下调原癌基因蛋白质C-fos和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白水平，从而，抑制脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡,对脑损伤产生保护作用。     

慢性气道阻塞性疾病的发病机制研究：转化生长因子β1对大鼠气道重塑的影响

目的：观察转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)对大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell，ASMC)增殖的影响。方法：ASMC取自1只健康雄性SD大鼠。应用体外培养的方法，加入不同浓度的TGF-β1，通过MTT法观察其对ASMC增殖的影响。实验分4组：对照组[20mL／L胎牛血清(FCS)／低糖Dulbecco最低必须培养液(DMEM)]，100mL／L FCS／DMEM组，10μg／L TGF-β1组和100μg／L TGF-β1组。结果：细胞培养第2天，MTT法检测的10μg／LTGF-β1组A值(O．36&;#177;0．043)和100μg／LTGF-β1组(0．37&;#177;0．050)明显高于对照组(0．126&;#177;0．052)(t=5．44，7．63，P&;lt;0．05)和100mL FCS／DMEM组(0．182&;#177;0．051)(t=5．97．5．88．P&;lt;0．05)。100mL FCS／DMEM组(0．38&;#177;0．034)于细胞培养第3天A值与对照组(0．20&;#177;0．035)比较增高(t=8．18，P&;lt;0．05)。镜下观察发现，10μg／L TGF-β1组和100μg／L TGF-β1组ASMC于培养第3天铺满96孔培养板，而100mL／L FCS／DMEM组细胞于第5天铺满培养板。结论：TGF-β1对气道平滑肌细胞的增殖具有明显的促进作用。     

雌二醇对骨形态发生蛋白受体表达的影响

目的：研究骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中，雌二醇对其骨形态发生蛋白受体(BMPR)IA，IB mRNA表达的影响，探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用，试阐明绝经后高转换骨代谢始动环节的可能机制。方法：SD大鼠骨髓基质细胞在生长培养基中传代培养后，用1，25(OH)2D3和地塞米松(DEX)诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化，17β-雌二醇(E2)处理培养细胞，观察E2对骨髓基质细胞分化过程中骨形态发生蛋白受体IA、IB mRNA、碱性磷酸酶(ALP)活性和Ⅰ型胶原合成的影响，β-actin作内对照半定量RT-PCR分析骨形态发生蛋白受体IA，IB mRNA的表达，以α-磷酸奈酚为底物，测定细胞碱性磷酸酶的活性，Van Gieson染色法显示Ⅰ型腔原的含量。结果：E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中BMPR-IA mRNA的表达，且呈剂量依赖性，随E2浓度增加(0～1&;#215;10^3nmol／L)BMPR-IA mRNA从(27．0&;#177;3．4)％降至(17．0&;#177;1．8)％(t=5．2，P&;lt;0．01)和(9．3&;#177;1．6)％(t=9．2，P&;lt;0．01)；BMPR-IB mRNA随E2浓度增加而增加，从(2．0&;#177;0．8)％增至(4．8&;#177;1．5)％(t=3．3，P&;lt;0．05)和(17．2&;#177;2．2)％(t=13，P&;lt;0．01)。Northernblot结果显示在上述E2浓度时BMPR-IA mRNA的表达从4．21&;#177;0．36降至1．24&;#177;0．10(t=18．2，P&;lt;0．01)；BMPR-IB mRNA的表达从1．72&;#177;0．11增至3．73&;#177;0．31(t=12．2，P&;lt;0．01)。ALP活性随E2浓度增加而降低，从(42．6&;#177;2．5)U／g蛋白降至(17．9&;#177;2．0)U／g蛋白(t=15，P&;lt;0．01)，(10．8&;#177;1．5)U／g蛋白（t=22，P&;lt;0．01)和(3．6&;#177;0．7)U原蛋白(t=30，P&;lt;0．01)；细胞I型胶原的含量随E2浓度增加而减少。VanGieson染色由鲜红、淡红到黄色，红色越深，表明胶原越多。绪论：E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中BMPR-IA mRNA的表达，降低ALP的活性和Ⅰ型胶原含量，增加BMPR-IB mRNA的表达)。     

螺旋藻多糖对衰老小鼠肺细胞凋亡与超微结构的影响

目的：研究螺旋藻多糖(polysaccharide from spirulina platensis，PSP)对衰老模型肺细胞凋亡、超微结构的作用及作用机制。方法：实验选用2月龄健康ICR品系小鼠50只，雌雄各半。随机数字表法随机分为模型组和PSP高、中、低3个剂量组及对照组，每组10只。取2月龄小鼠在常规条件下饲养11个月，制成自然衰老模型，应用PSF20，40，80mg／kg剂量分别灌服衰老小鼠6周，借助荧光显微镜研究肺组织细胞凋亡、电子显微镜下的形态学变化。结果：衰老可诱导肺组织细胞凋亡及肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的改变，PSP可明显抑制肺组织细胞凋亡，使凋亡细胞数减少，改善肺泡上皮细胞的结构与功能。PSP明显减轻衰老引起的肺细胞凋亡，PSP高剂量组对凋亡改变相应减轻，细胞凋亡率呈下降趋势且明显[(14．2&;#177;2．24)％]，与模型组[(23．7&;#177;5．53)％]比较，差异有非常显著性意义(t=4．6721，P&;lt;0．01)；PSP中、低剂量组[(16．3&;#177;3．79)％，(19．6&;#177;4．61)％]与模型组比较，差异有显著性意义(t=3．2054，P&;lt;0．01；t=1．6219，P&;lt;0．05)；PSP高中剂量与对照组[(12．8&;#177;3．54)％]比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)，PSP低剂量与对照组比较，差异有显著性意义(t=3．5193，P&;lt;0．01)。结论：螺旋藻多糖对衰老小鼠肺组织细胞的退行性变化具有改善或延缓作用。     

1，6—二磷酸果糖对白细胞介素1β损伤的胰岛细胞功能的影响

目的：应用离体培养乳鼠胰岛细胞，探讨1，6-二磷酸果糖(fructose-1,6-diphosphate，FDP)对白细胞介素1β(IL—1β)损伤的胰岛细胞是否具有保护作用。方法：实验选用出生1—3d的Wistar大鼠20只。分离培养后的胰岛细胞，将其随机分为对照组、FDP组、IL—1β损伤组、IL-1β+FDP组，每组平行孔为6孔。应用MTT法检测对照组、IL—1β损伤组以及不同浓度(2．5，5．0，7．5，10．0，12．5，15．0mmol／L)FDP保护组胰岛细胞的细胞活性。结果：IL-1β损伤组细胞活性(A值：0．116&;#177;0．012)明显低于对照组(0．252&;#177;0．020)(F=8．92，P&;lt;0．01)，加入5～10mmol／L FDP可使细胞活性增强(F=13．35，22．56，P&;lt;0．01)，但2．5，12．5，15．0mmol／L FDP与受损细胞共同孵育后未能使细胞活性升高(P&;gt;0.05）。10，40h时未见FDP对受损细胞活性的保护，20h时IL-1β+FDP组细胞活性(A值：0．219&;#177;0．004）明显高于IL-1β损伤组(0．178&;#177;0．010)(F=19．10，P&;lt;0．01)，30h IL-1β+FDP组细胞活性明显高于IL—1β损伤组(F=16．05，P&;lt;0．01）。结论：FDP对IL—1β损伤的胰岛细胞活性具有保护作用．且具有时间和剂量依从关系。     

不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1和PPAR-γ2 mRNA表达的影响

背量：绝经后骨质疏松的病理生理机制尚未完全阐明，研究表明骨丢失与雌激素缺乏相关，后者可导致多种细胞因子生成增加，继而引起成骨细胞和破骨细胞生成增多。骨吸收增强。雌二醇能否改变骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1和PPAR-γ2 mRNA的表达进而影响其向成骨细胞分化尚不清楚。目的：研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中，17β-雌二醇对其核结合因子a1(Cbfa1)及过氧化物酶增殖活化受体γ2(PPAR-γ2)mRNA表达的影响，探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。设计：非随机对照研究。地点和对象：所有实验均在成都军区总医院检验科和成都百奥生物技术有限公司完成，分离骨髓基质细胞所需大鼠由成都中医药大学实验动物研究中心提供。干预：1，25(OH)2D3和地塞米松诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化，用不同浓度[(O-1)&;#215;10^-6mol／L]雌二醇对细胞分化过程进行干预。主要观察指标：应用半定量RT-PCR及Northern blot技术，观察不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1及PPAR-γ2 mRNA表达的影响。结果：雌二醇能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1 mRNA的表达，雌二醇浓度为[(O-1)&;#215;10^-6mol／L]时，Cbfa1 mRNA的表达量从(25．0&;#177;3．3)％降至(19．8&;#177;2．2)％(t=2．62，P&;lt;0．05)，(14．5&;#177;1．3)％(t=5．92,P&;lt;0．01)和(6．5&;#177;1．9)％(t=9．72，P&;lt;0．01)；雌二醇能明显促进骨髓基质细胞在分化介质中PPAR-γ2 mRNA的表达，在上述雌二醇浓度时。PPAR-γ2 mRNA的表达从(1．75&;#177;0．5)％增至(9．5&;#177;2．1)％(t=7．18，P&;lt;0．01)和(19．3&;#177;3．0)％(t=11．5，P&;lt;0．01)；Northern blot结果显示随着雌二醇浓度的增加，Cbfa1 mRNA的表达量从4．42&;#177;0．39降至1．88&;#177;0．16(t=12．0，P&;lt;0．01)和1．19&;#177;0．11(t=15．8，P&;lt;0．01)；PPAR-γ2 mRNA的表达量从1．31&;#177;0．12增至2．81&;#177;0．22(t=10．5,P&;lt;0．01)和4．02&;#177;0．36(t=14．2，P&;lt;0．01)。细胞ALP活性明显受雌二醇的抑制，在上述雌二醇浓度时ALP的活性从(42．6&;#177;2．5)降至(3．6&;#177;0．7)U／g蛋白(t=29，P&;lt;0．01)。Ⅰ型胶原含量均随雌二醇浓度增加而降低。结论：雌二醇抑制体外培养的骨髓基质细胞向成骨细胞分化而促进其向脂肪细胞分化。     

实验性大鼠急性脑缺血细胞凋亡与相关蛋白表达的关系

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡及p53，Bcl-2蛋白家族表达的变化，并探讨它们在细胞凋亡中的作用。方法：实验在华北煤炭医学院形态实验室完成。54只大鼠用随机数字表法随机分成3组：脑缺血组(42只)、假手术组(6只)和正常组(6只)。脑缺血组又分为7组：即缺血2h再灌注1，3，6，12，24，48和72h组(n=6)。采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型，用TUNEL法检测细胞凋亡的变化，用免疫组化法检测p53，Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果：①缺血2h再灌注1h皮质区可见凋亡细胞[(7．83&;#177;1．72)个／高倍视野]，24～48h达高峰[(43．33&;#177;5．20)个／高倍视野，(48．50&;#177;6．25)个／高倍视野]，72h开始下降[(26．67&;#177;3．56)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见p53蛋白阳性细胞[(14．35&;#177;1．92)个／高倍视野]，24h达高峰[(48．00&;#177;6．42)个／高倍视野]，48h后开始下降[(31．00&;#177;6．60)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见Bcl-2蛋白阳性细胞[(28．62&;#177;6．80)个／高倍视野]，3h达高峰[(56．50&;#177;7．87)个／高倍视野]，6h后开始下降[(45．00&;#177;6．63)个／高倍视野](P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见Bax蛋白阳性细胞[(45．83&;#177;4．07)个／高倍视野]，24h达高峰[(61．00&;#177;8．88)个／高倍视野]，48h开始逐渐下降[(45．83&;#177;6．49)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)。②缺血再灌注后不同时间点细胞凋亡数与p53及Bax蛋白的阳性表达数呈正相关(r=0．843，P&;lt;0．001；r=0．840，P&;lt;0．001)，与Bcl-2蛋白的阳性表达数呈负相关(r=-0．387，P&;lt;0．05)。结论：大鼠脑缺血再灌注后，缺血周边区发生明显的细胞凋亡，同时伴有p53及Bax蛋白表达增加及Bcl-2表达降低，p53及Bax蛋白表达对细胞凋亡起促进作用，而Bcl-2蛋白表达则对细胞凋亡起抑制作用。     

甘精胰岛素干预游离脂肪酸诱导RIN-m细胞凋亡的变化

目的：观察甘精胰岛素对游离脂肪酸诱导的β细胞(RIN—m细胞)凋亡是否具有保护作用，并与普通胰岛素及胰岛素样生长因子1的干预效果进行对比。方法：本实验于2004—05／2004—10在中山大学附属第二医院林百欣医学科学研究中心完成。RIN—m细胞被培养并常规培养传代。诱导凋亡接种于6孔板或者96孔板后常规培养2d，待细胞长至70％满左右时，吸去培养基，加入含10g／L血清白蛋白，10mL／L乙醇，20mL／L胎牛血清的培养基(正常对照组)，或者含10g／L血清白蛋白，体积分数为0．01乙醇、体积分数为0．02胎牛血清和0．3mmol／L棕榈酸的培养基(凋亡对照组)，或者含10g／L牛血清白蛋白，体积分数为0．01乙醇、体积分数为0．02胎牛血清，0．3mmol／L棕榈酸以及100nmol／L甘精胰岛素(甘精胰岛素组)或者100nmol／L普通胰岛素(普通胰岛素组)或者10nmol／L胰岛素样生长因子1组的培养基，孵育24h后，将细胞接种于6孔板，诱导细胞凋亡。采用Hoechst33342染色、流式细胞仪以及酶联免疫吸附反应方法检测各组RIN-m细胞的凋亡，吸光度值代表细胞裂解液中核小体的数量，即DNA断裂的数量。结果：0．3mmol／L棕榈酸孵育后RIN-m细胞出现核皱缩、碎裂等典型凋亡表现。①甘精胰岛素组、普通胰岛素组、胰岛素样生长因子1组亚二倍体细胞比率[(32．00&;#177;3．08)％，(35．97&;#177;3．14)％，(25．25&;#177;1．66)％]明显高于正常对照组[(3．28&;#177;1．44)％](P&;lt;0．01)；但明显低于凋亡对照组(42．10&;#177;4．24)％(P&;lt;0．01)。②甘精胰岛素组、普通胰岛素组、胰岛素样生长因子1组细胞裂解液中核小体的数量(A值)(2．372&;#177;0．21，2．758&;#177;0．20，1．704&;#177;0．16)明显高于正常对照组(0．341&;#177;0．023)(P&;lt;0．01)；但明显低于凋亡对照组(3．333&;#177;0．23)(P&;lt;0．01)。甘精胰岛素组和胰岛素样生长因子1组裂解液中核小体的数量(A值)明显低于普通胰岛素组(P&;lt;0．05)。结论：甘精胰岛素对游离脂肪酸诱导的B细胞凋亡具有抑制作用，该种作用强于普通胰岛素。     

褪黑素对戊四氮致癫痫大鼠海马谷氨酸受体和γ-氨基丁酸受体的影响

目的：探讨褪黑素抗癫痫的机制。方法：应用SP法研究戊四氮致癫痫大鼠和褪黑素抗癫痫大鼠海马谷氨酸受体ζ1(N-methyl-D-aspartate recepterζ1，NMDAζ1)和γ-氨基丁酸受体Aα1(r-aminobutyric acid-A recepter α1，GABAAR α1)的变化。结果：海马NMDAζl表达在戊四氮致癫痫组明显高于正常对照组(q吸光度=6．34，P&;lt;0.01；q阳性率=9．394，P&;lt;0．01)，褪黑素抗癫痫组明显低于戊四氮致癫痫组(q吸光度=6．01，P&;lt;0．01；q阳性率=9．000，P&;lt;0．01)．褪黑素抗癫痫组与正常对照组之间差异无显著性意义(q吸光度=0．032，P&;gt;0．05；q阳性率=0．4015，P&;gt;0．05)；海马GABAARα1表达在戊四氮致癫痫组明显低于正常对照组(q吸光度=4．65，P&;lt;0．01；q阳性率=5．3，P&;lt;0．01)，褪黑素抗癫痫组明显高于戊四氮致癫痫组(q吸光度=4．58，P&;lt;0．01；q吸光度=5.21，P&;lt;0．01)，褪黑素抗癫痫组与正常对照组之间差异无显著性意义(q吸光度=0．07，P&;gt;0．05；q吸光度=0．097，P&;gt;0．05)。结论：褪黑素可能通过抑制海马兴奋性神经递质受体NMDAζ1和激活海马抑制性神经递质受体GABAARα1的活性与表达，降低大脑皮质的兴奋性，抑制癫痫的形成及发展来发挥抗癫痫作用。     

转录因子MSX-1对人牙乳头间充质细胞增殖在牙胚发育中的意义

目的 观察体外培养的人牙乳头间充质细胞经转化生长因子β1(TGF-β1)作用下，肌节同源盒基因l(MSX-1)的表达变化，探讨MSX—l基因在牙胚发育中的意义。方法 第5代体外培养的人牙乳头间充质细胞经50μg／L的TGF-β1刺激后，MTT方法及流式细胞仪分析观察对照组、TGF-β1处理组细胞的增殖变化，原位杂交检测两组细胞中MSX基因扩增水平的变化。结果 实验组细胞培养3d细胞增殖为0．44&;#177;0．03，培养5d为0．53&;#177;0．05，培养7d为0．83&;#177;0．07，与对照组比较差异具有显著性意义(P&;lt;0．0l，t=6．603，6．562，6．052)。对照组G1期细胞为94．7％，S期细胞为4．0％，G2M期细胞为1．3％，实验组细胞中的G1期降低(83．8％)，S期升高(7．8％)，G2M期细胞升高(9．3％)(t=5．327，P&;lt;0．01)，反映细胞增殖活力的增殖指数PrI值(S+G2M)对照组为5．3，实验组为17．1两者相比有显著差异(t=7．327，P&;lt;0．01)。结论 MSX基因有可能在TGF-β1的调控下表达，对人牙乳头间充质细胞的增殖分化可能具有重要的调节作用。     

丹皮酚对大鼠脑缺血再灌注后细胞间黏附分子-1表达的影响

目的：观察丹皮酚对大鼠脑缺血再灌注后细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)蛋白表达的影响。方法：利用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注24h模型，治疗组缺血时腹腔注射丹皮酚。行苏木精-伊红染色计数缺血区中性粒细胞浸润及坏死神经元的数目，应用免疫组化方法检测ICAM-1蛋白的表达情况。结果：丹皮酚治疗组坏死神经元百分率[(25．85&;#177;3．93)％]低于对照组[(31．13&;#177;4．58)％，t=2．770，P&;lt;0．05]。中性粒细胞的浸润数治疗组[(15．40&;#177;2．59)个／视野]较对照组[(19．10&;#177;2．81)个／视野]显著减少(t=3．063，P&;lt;0．01)。ICAM-1的表达治疗组[(13．90&;#177;2．18)条／视野]较对照组[(16．20&;#177;2．30)条／视野]下调(t=2．290，P&;lt;0．05)。结论：丹皮酚可能具有抑制大鼠脑缺血再灌注后ICAM-1蛋白表达的作用，从而减轻了神经元损伤。