冰冻红细胞解冻后残留甘油含量测定方法初探

目的　建立快速测定冰冻红细胞中残留甘油含量的方法。方法根据GPO PAP法测定甘油三脂的部分原理 ,将甘油用甘油激酶及三磷酸腺苷 (ATP)磷酸化 ,再以磷酸甘油氧化酶 ,氧化三磷酸甘油 ,生成H2 O2 ,并以4 氨基安替比林 (4 AAP)与 4 氯酚显色 ,显色程度与甘油含量成正比。结果含甘油 2 0 0 /L与 1 2 0 0 /L的样本批内CV值分别为 4 .4 9%、3.5 3% ,日间CV值为 4 .6 % ;甘油含 75 0～ 2 0 0 0 /L样本的回收率为 96 %～ 1 0 3% ;甘油浓度在 2 5 0～ 2 0 0 0 /L有较好的线性关系 ,r =0 .9999,Y =0 .0 0 0 5 6 2X +0 .0 0 0 7。结论甘油磷酸氧化酶法测定冰冻红细胞中残留甘油含量 ,具有方法简单、快速、特异、灵敏之特点 ,结果客观、准确、稳定     

2组洗涤溶液制备冰冻解冻去甘油红细胞的效果比较

目的观察2组洗涤溶液制备冰冻解冻去甘油红细胞的结果,比较洗涤溶液组合中是否加入羟乙基淀粉20氯化钠溶液对洗涤结果的影响。方法取44份全血,应用ACP215血液处理仪制备成冰冻红细胞,分A组:9%NaCl溶液、羟乙基淀粉20氯化钠注射液、0.9%NaCl溶液;B组:9%NaCl溶液、0.9%NaCl溶液2种洗涤溶液进行解冻去甘油。对2组红细胞回收率、残留白细胞、残留血小板、甘油含量、游离血红蛋白含量、体外溶血等指标进行检测分析。结果 A组解冻红细胞的红细胞回收率(86.0±3.4)%、残留白细胞(0.57±0.18)%、残留血小板0、甘油含量(3.4±0.8)g/L、游离血红蛋白含量(0.55±0.14)g/L、体外溶血试验(12±5)%均符合国家标准,B组红细胞回收率(87.0±2.3)%、残留白细胞(0.51±0.24)%、残留血小板0、甘油含量(3.5±0.7)g/L、游离血红蛋白含量(0.47±0.10)g/L、体外溶血试验(10±4)%也符合国家标准,2组解冻红细胞制品也均符合AABB标准和欧洲标准中对于红细胞回收率的要求,2组结果差异无统计学意义,P>0.05。结论羟乙基淀粉20氯化钠注射液对使用ACP215血液处理仪制备冰冻解冻去甘油红细胞的洗涤效果无影响,但洗涤液中不加入羟乙基淀粉20氯化钠溶液,其制品质量符合国家标准、AABB标准和欧洲标准,更加经济、省时。     

酶法检测解冻红细胞残留甘油含量

红细胞冰冻保存需要添加一定的保护剂 ,目前最常见的保护剂为甘油 ,但临床应用前须经一定的程序洗涤 ,尽量去除添加的外源性甘油。解冻洗涤处理过的冰冻红细胞内残留甘油的含量对于保证其质量至关重要 ,国家规定的标准为≤ 1 0 g/L[1 ]。目前血站对于冰冻红细胞内残留甘油的检测大多采用高碘酸法 [2 ] ,但其操作繁琐。本实验室利用甘油三酯试剂盒 (酶法 )检测解冻红细胞残留甘油含量 ,取得较好的效果 ,现报告如下。材料与方法1　仪器与试剂　三氯醋酸由上海凌峰化学试剂厂提供 ;甘油三酯测定试剂盒由浙江宁波慈城生化试剂厂提供 (试剂内含…     

深低温保存Rh阴性血液的质量控制

目的　确保深低温保存Rh阴性红细胞解冻后的质量。方法取ACD抗凝 ,4℃保存 6d内Rh阴性红细胞悬液或全血离心除去添加剂或血浆的浓缩红细胞 ,将红细胞经 (4 0 % )浓度甘油处理后 ,置 - 80℃冰冻保存。临床需要时 37℃水浴解冻复苏红细胞 ,依次用 9%NaCl羟乙基淀粉溶液 ,0 .9%NaCl羟乙基淀粉溶液 ,0 .9%NaCl各洗涤 1次。用生理盐水羟乙基淀粉溶液悬浮红细胞。结果 35袋冰冻解冻红细胞去甘油后红细胞回收率为(81 .1 7± 1 8.5 ) % ,游离血红蛋白为 (0 .6 3± 0 .1 6 ) g/L ,甘油残留量平均为 5 .3g/L ,体外溶血试验血红蛋白增加率为2 5 .1 9%。结论冰冻解冻去甘油红细胞各项指标均达到了国家规定的质量标准 ,临床输用效果良好     

不同方法检测冷冻红细胞甘油残留量的比较

目的通过比较过碘酸钠法、甘油三酯检测试剂盒和甘油检测试剂盒对冰冻红细胞甘油残留量的检测结果,选择一种快速简单、灵敏、结果准确、稳定、易于开展的甘油残留量检测方法。方法采用3种方法分别检测0.5g/L、1.0g/L、1.5g/L、2.0g/L甘油溶液,进行线性实验和回收率实验;并采用3种方法检测甘油含量均为1.0g/L的不同浓度血红蛋白甘油溶液;并分别测定本站成分科制备的20份冷冻解冻去甘油红细胞的甘油残留量。结果线性实验的r值均大于0.99,Y=0.05＋1.076X、Y=0.126＋0.912X、Y=0.006＋0.104X,表明甘油含量在（0.5-2）g/L范围内有较好的线性关系,回收率均在90%-110%,回收率较高;游离血红蛋白小于1g/L时,3种方法甘油回收率均在90%-110%,无明显干扰。过碘酸钠法血红蛋白浓度超过1.5g/L,甘油三酯检测试剂盒血红蛋白浓度超过2g/L,回收率超过110%,有较明显的干扰;用3种方法检测20份本站制备的冰冻解冻去甘油红细胞的甘油含量,经统计学处理,P均〉0.05,其游离血红蛋白均小于1g/L,甘油残留量均小于2g/L。结论游离血红蛋白在小于1g/L,甘油残留量小于2g/L时,3种方法均可用于冷冻去甘油红细胞甘油残留量的检测。甘油三酯试剂盒简单、快速、结果稳定、价格低廉,对仪器设备无特殊要求,更适合于一般实验室开展此项实验。     

甘油残留量测定方法改进性能确认

目的本文对测定甘油残留量方法进行改进,并对其方法的正确度、精密度、检测可报告范围及血站冰冻去解冻红细胞标本参考范围等指标进行性能确认。方法甘油残留量测定方法改进后与原法分别检测50例甘油残留量比对实验;分别重复检测甘油残留量低值、高值标本,观察精密度;高(H)低(L)两份样本按照5L,4L+1H,3L+2H,2L+3H,1L+4H,5H比例配制混合,形成系列标本,观察其检测可报告范围。结果甘油残留量测定方法改进后与原法比对实验线性回归y=1.009x+0.065,r~2=0.996 5;低值、高值批内不精密度分别4.05%、2.08%,低值、高值批间不精密度分别4.75%、2.57%,检测甘油残留量可报告范围0.05-10.00 g/L,结论甘油残留量测定方法改进后检测甘油残留量正确度、精密度、检测可报告范围等指标经性能确认符合血站操作规程(2012版)文件要求。     

冰冻保存红细胞简化洗涤程序的研究

目的　研究冰冻保存后红细胞沉降去甘油的方法。方法　 6份全血采自健康献血者 ,ACD抗凝 ,4℃保存 1d ,离心获压积红细胞 ,加入甘油到终浓度为 4 0 % ,- 80℃保存 7d。 4 2℃条件下冻融红细胞 ;分两组进行洗涤去甘油 ,离心组 :常规法洗涤红细胞 4遍。沉降组加入 9%NaCl、6 %羟乙基淀粉和 5 %羧甲基淀粉钠 ,沉降 30min ,弃上清 ;加入 6 %羟乙基淀粉、0 .9%NaC1和 6 %CMS ,沉降 2 0min ,去除上清 ;加入 0 .9%NaC1和 5 %羧甲基淀粉钠 ,沉降 15min ,去除上清 ;重复步骤 ;以生理盐水重悬红细胞。结果　洗涤后红细胞形态正常 ,离心洗涤和沉降洗涤后红细胞的回收率 (% )分别为 87.95± 8.6 0和 89.2 5± 4 .17、上清液中游离血红蛋白的含量 (g/L)为 0 .15± 0 .0 9和0 .2 3± 0 .19,上清液中晶体渗透压 (mOsm)为 2 90 .83± 4 .17和 2 95 .6 7± 8.0 7、ATP含量 (μm/ gHb) 34. 0 2± 9.0 7和 34.70± 11.0 1,红细胞的变形指数分别为 0 .5 9± 0 .0 9和 0 .6 1± 0 .0 6 ,统计学处理上述各项指标 ,两组实验比较 ,差异无显著性。结论　冰冻保存后的红细胞 ,以沉降法去甘油与常规离心法效果无显著差别 ,细胞质量符合血库的质量要求 ,同时具有操作简便的优点。     

两种定标方式对血清前白蛋白免疫透射比浊测定结果的影响

目的　比较不同定标方式对血清前白蛋白测定结果的影响。方法　采用免疫透射比浊两点定标和多点定标方式检测血清前白蛋白 ,其中低值组 ( <2 0 0mg/L) 81例 ,中值 ( 1)组 ( 2 0 0～ 3 0 0mg/L) 87例、中值 ( 2 )组( 3 0 1～ 40 0mg/L) 95例 ,高值组 ( >40 0mg/L) 5 2例 ,共 3 15例。 结果　两点定标方式下 ,4组血清前白蛋白测定结果分别为 ( 145 .80± 3 3 .68)mg/L、( 2 46.12± 2 5 .48)mg/L、( 3 5 5 .0 7± 2 3 .73 )mg/L、( 466.3 3± 2 6.13 )mg/L ,CV( % )分别为 2 3 .10 %、10 .3 5 %、6.68%、5 .60 % ;而同批样本用多点定标 ,并用多元回归确定标准曲线的测定结果分别为 ( 193 .16± 2 7.78)mg/L、( 2 5 9.97± 2 1.68)mg/L、( 3 3 4.5 7± 2 2 .66)mg/L、( 42 6.2 9± 18.78)mg/L ,CV( % )分别为 14.3 8%、8.0 3 %、6.77%、4.41%。结论　不同定标方式对测定结果有非常显著影响     

四氢嘧啶对人冰冻红细胞质量影响的初步研究

目的通过在红细胞深低温冰冻的冻存液中添加渗透压调节物-四氢嘧啶(ectoine),检测红细胞冰冻前后的质量,探讨ectoine用于深低温冰冻红细胞的可能性,为ectoine可用于红细胞深低温冰冻的研究提供实验依据。方法取悬浮红细胞样品8袋,每袋分为对照组(复方甘油组、甘油组)和实验组(1.5%ectoine甘油组、3%ectoine甘油组和4.5%ectoine甘油组)共5组。实验组:ectoine起始浓度为1.5%、3%与4.5%(W/V)(加红细胞后终浓度为1.05%、2.10%与3.15%)。将5组(2组对照组与3组实验组)冻存液分别加入红细胞,红细胞冰冻后解冻并洗涤。测定冰冻前(未加冻存液)及解冻洗涤后红细胞数、血红蛋白量、红细胞变形性、渗透脆性,并用电镜扫描,观察红细胞显微形态。结果与2组对照组相比,3%ectoine甘油组红细胞回收率最高(89.26±2.60)%(P0.05);3%ectoine甘油组解冻洗涤的红细胞与冰冻前红细胞,在50~(-1)、100~(-1)、200~(-1)和1 000~(-1)的剪切率值上相比P0.05,差异无统计学意义;1.5%ectoine甘油组解冻洗涤的红细胞,50%溶血率时氯化钠浓度为(4.57±0.08)g/L,3%ectoine甘油组(4.80±0.17)g/L,2组分别与复方甘油组(4.98±0.26)g/L相比P0.05,差异具有统计学意义;电镜扫描显示3组实验组红细胞与复方甘油组红细胞解冻洗涤后,均无棘状和球形红细胞,甘油组可见破膜、皱缩的红细胞。结论3%Ectoine作为渗透压调节物用于冰冻红细胞,可用于高浓度甘油冰冻红细胞时作为渗透压调节物,相对于3%乳酸钠的复方甘油(商品化复方甘油),可提高解冻洗涤的红细胞回收率,改善解冻洗涤的红细胞质量,具有在深低温冰冻红细胞的潜力。     

反相高效液相色谱法测定人血浆及尿样中普卢利沙星活性代谢物

目的建立分析人血浆及尿样中普卢利沙星活性代谢物浓度的反相高效液相色谱方法。方法样本用甲醇-乙腈(1 :1)沉淀后离心取上清液进行色谱分析。分析柱为Diamonsil C_(18)(250 mm×4．6 mm,5μm)。流动相为乙腈—0．05 mol/L磷酸二氢钾(pH2．2,含1%的四丁基溴化铵);血浆和尿样分析分别用20:80(V/V)、流速1．0 mL/min和12:88(V/V)、流速1．6 mL/mln。激发和发射波长分别为280 nm和425 nm。结果血浆和尿样测定的线性范围分别为0．005～5 mg/L(r= 0．9999)和0．05～5 mg/L(r=0．9999),最低检测浓度分别为0．002 mg/L和0．01mg/L。血浆5．00、0．50和0．05 mg/L浓度的相对回收率在100．64%～101．00%,日内和日间相对标准差(RSD)分别小于2．5%和4．6%。尿样2．50、0．50和0．10 mg/ L浓度的相对回收率在97．20%～100．20%,日内和日间RSD分别小于1．3%和4．3%。方法成功用于健康人口服普卢利沙星的药动学研究。结论本方法具有简便、快速、灵敏度高、重现性好等特点,适用于普卢利沙星的药动学研究。