肾移植患者术后外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测及其与瘦素水平的相关性

目的:了解肾移植患者术后外周血中CD4 CD25 调节性T细胞的比例和瘦素水平的变化及其临床意义,探讨CD4 CD25 调节性T细胞与瘦素水平的相关性。方法:应用放射免疫方法检肾移植患者及健康对照者外周血中瘦素的水平,流式细胞术检测外周血中CD4 CD25 调节性T细胞占CD4 T细胞的比例。结果:移植近期组(1年)与对照组患者血浆中瘦素浓度比较无差异,但移植远期组的瘦素浓度(2.5年)高于对照组和移植近期组。且外周血中CD4 CD25 调节性T细胞的比例与瘦素呈显著负相关(r=-0.83,P<0.01)。结论:肾移植术后的远期高瘦素血症可能对CD4 CD25 调节性T细胞具有负性调节作用,也许不利于移植耐受的维持。     

CD4+CD25+调节性T细胞、Foxp3 mRNA及可溶性白细胞介素2受体检测在肾移植中的意义

目的 观察肾移植患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞水平及其表面特异性标志物Foxp3和可溶性白细胞介素2受体（sIL-2R）的变化,探讨其在诊断移植肾急性排斥反应中的作用和价值。 方法 选取42例维持性血液透析接受同种异体肾移植治疗的患者及30例健康体检对照者。在患者移植前、移植后1、2、4、8周或发生排斥反应时,以流式细胞仪检测外周血中CD4+CD25+调节性T细胞水平;荧光定量PCR检测Foxp3 mRNA表达;双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISB）检测血浆中sIL-2R水平。 结果 (1)移植后第1、2、4、8周急性排斥反应组CD4+CD25+调节性T细胞、Foxp3 mRNA水平明显低于同期未发生排斥的肾功能稳定组,而sIL-2R水平却显著高于肾功能稳定组。(2)血液透析患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞[(9.22±3.53)%]、Foxp3 mRNA[（0.82±0.36）×10-3]及sIL-2R[（856.30±108.24） U/ml]水平与健康对照组[分别为(6.09±1.99)%、(0.50±0.28)×10-3、(247.35±11.24) U/ml]比较,差异均有统计学意义(P < 0.01)。(3)肾移植后随着肾功能的恢复,外周血CD4+CD25+调节性T细胞[(16.53±4.14)%]、Foxp3 mRNA[(4.97±1.94)×10-3]显著升高(P < 0.01),而sIL-2R[（463.72±31.23）U/ml]水平明显降低(P < 0.01)。(4)当发生急性排斥反应时,CD4+CD25+调节性T细胞[(12.18±2.86)%]、Foxp3 mRNA[(3.15±1.22)×10-3]显著降低(P < 0.01),而sIL-2R[(748.36±115.41) U/ml]水平明显升高(P < 0.01),并且这些变化早于Scr的变化。(5)患者移植前后外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分率与Foxp3 mRNA水平均呈正相关（分别为r ＝ 0.904、0.932,P < 0.01）,但与sIL-2R水平无相关。 结论 外周血CD4+CD25+调节性T细胞、Foxp3 mRNA及sIL-2R水平的测定均可以作为肾移植患者移植后发生急性排斥反应的早期预测指标,并可判断预后。     

肾移植术后外周血自然杀伤细胞的CD158b表达及意义

目的探讨肾移植术后外周血自然杀伤细胞(NK细胞)的CD158b表达及意义。方法测定62例患者肾移植前、术后第1d、术后第7d、肾功能正常时以及疑有排斥反应时外周血NK细胞的CD158b表达水平。结果62例中,术后38例肾功能恢复正常,观察期内无排斥反应发生,移植前后外周血CD3-CD16/CD56 细胞(NK细胞)及CD3-CD16/CD56 CD158b 细胞稳定,NK细胞中CD158b 细胞的比例也稳定;24例术后7～14d发生急性排斥反应,其外周血CD3-CD16/CD56 细胞呈上升趋势,CD3-CD16/CD56 CD158b 细胞呈下降趋势,NK细胞中CD158b 细胞的比例也呈下降趋势,经单因素方差分析,各指标在不同测定时点的差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论干扰NK细胞表达CD158b的因素较少,在临床上做出排斥反应诊断前,患者外周血中NK细胞的CD158b表达即呈下降趋势,因此术后监测NK细胞的CD158b表达可为评价患者的免疫状况提供依据。     

性激素与CD4~+CD25~+调节性T细胞的相关性及在肾移植免疫耐受中的作用研究

目的:为明确肾移植术后因供肾、受肾性别差异而排斥反应发生率不同,移植肾存活率不同而进行性激素水平的研究,明确性激素与CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)的相关性及在肾移植免疫耐受中的作用。方法:选取正常对照组、肾移植组患者各20例,用ELISA法测定外周血性激素睾酮(T)、雌二醇(E_2)水平,用流式细胞术(FCM)测定CD4~+CD25~+Treg占CD~+T细胞比值。结果:肾移植术后女性E_2水平逐渐由高变低,男性T水平逐渐由低变高,CD~+CD25~+Treg水平也随时间相关性而逐渐升高,以单因素方差分析发现:E_2水平平稳期与正常对照组比较无显著差异(P0.05);T平稳期与正常对照组比较无显著差异(P0.05);肾移植男性受者早期2周内调节T细胞水平与正常值比较有明显差异(P0.05),门诊随访肾移植达2年患者其调节t细胞与正常对照组无明显差异(P0.05)。T与CD4~+CD25~+Treg术后均依时间相关性而逐渐上升,以直线相关性分析发现两者有明显相关性(P0.05)。结论:肾移植术后随着下丘脑-垂体-性腺轴的恢复,患者性激素水平及CD4~+CD25~+Treg水平均逐渐恢复正常。排除体重、年龄、透析时间、HLA配型、缺血时间、术后糖皮质激素、免疫抑制剂治疗方式等因素的影响,T与CD4~+CD25~+Treg有明显相关性,男性在肾移植术后不仅可以通过雄激素直接抑制效应T细胞发挥主要免疫抑制作用,还可以通过增加CD4~+CD25~+Treg水平来发挥次要免疫抑制作用。     

CD4+CD25+调节性T细胞与免疫耐受的研究进展

CD4＋CD25＋调节性T细胞的主要功能是抑制自身反应性T细胞,对于维持机体T细胞内环境的稳定,调节和保持对自身抗原耐受之间的平衡以及移植免疫耐受具有重要作用。本文主要就CD4＋CD25＋调节性T细胞的功能和作用机制以及免疫抑制药物对其的影响等研究进展进行综述。     

CD4+CD25+调节性T细胞与免疫耐受的研究进展

CD4 CD25 调节性T细胞的主要功能是抑制自身反应性T细胞,其在维持机体T细胞内环境稳定,调节和保持对自身抗原耐受之间的平衡以及移植免疫耐受方面具有重要作用。本文主要就CD4 CD25 调节性T细胞的功能、作用机制以及免疫抑制药物对调节性T细胞的影响等研究进展进行综述。     

CD4+CD25+调节性T细胞在肝移植术后腹腔感染中的表达及其作用

目的研究移植后细菌感染CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞（Treg）表达的变化。方法以DA大鼠为供体,LEW大鼠为受体,采用改良的Kamada二袖套法建立肝移植模型。术后随机分为3组,G1组术后3d腹腔生理盐水注射;G2组术后3d给予腹腔大肠杆菌注射;G3组术后常规给予免疫抑制药物CsA,3mg/（kg·d）。感染后7d处死动物,每组6个样本,检测血清ALT、TB,并采用流式细胞术检测脾脏Treg的水平,RT-PCR方法检测脾脏Foxp3和肝脏IL-10、TGF-β mRNA的表达。结果G3、G2组Treg表达水平显著升高,分别为：（16.72±0.95）%,（27.4±1.09）%,与G1（9.88±0.98）%比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;脾脏Foxp3和肝脏IL-10、TGF-β mRNA表达水平均增加;感染组的肝功虽然较差,与排斥组相比无统计学意义,但从病理切片观察该组肝脏的急性免疫排斥反应减轻,Banff评分有统计学意义。结论大鼠肝移植术后腹腔细菌感染增加了脾脏Treg的表达,促进了免疫抑制作用的发挥,部分减轻了急性排斥反应。     

地西他滨诱导体内Foxp3基因表达上调延长心脏移植小鼠的存活时间

目的 探讨甲基转移酶抑制剂地西他滨诱导体内叉状头螺旋转录因子(Foxp3)基因表达延长同种心脏移植小鼠存活时间的作用及其机制.方法 以经丝裂霉素处理的Balb/c小鼠和C57BL/6小鼠脾细胞作为刺激细胞,未经丝裂霉素处理的C57BL/6小鼠脾细胞作为反应细胞,进行体外单向混合淋巴细胞培养,观察地西他滨对培养体系中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)比例的影响.分别以Balb/c小鼠和C57BL/6小鼠作为供、受者,建立同种小鼠腹部异位心脏移植模型.实验组受鼠术后1～3 d经尾静脉注射地西他滨(1.5 mg/kg),同种对照组受鼠术后1～3 d经尾静脉注射等体积生理盐水.监测两组移植心存活时间,检测受鼠外周血CD4+ CD25+ Treg细胞比例及Foxp3 mRNA的表达,观察移植心组织病理学变化.结果 地西他滨能够上调体外同种混合淋巴细胞反应体系中CD4+ CD25+Treg细胞的水平.同种对照组和实验组移植心脏中位存活时间分别为7和11d,实验组较对照组明显延长(P＜0.01).与同种对照组相比,实验组CD4+ CD25+ Treg细胞比例和Foxp3 mRNA的表达均明显升高(P＜0.01);移植心肌炎症细胞浸润的程度明显减轻.结论 地西他滨能够诱导同种心脏移植小鼠体内Foxp3基因的表达,从而明显减轻急性排斥反应,延长移植心存活时间,其机制可能与Foxp3表达能够诱导CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞的增殖和分化密切相关.     

抗CD25单克隆抗体对肾移植受者末梢血淋巴细胞的影响

目的　探讨抗CD2 5单克隆抗体 (舒莱 )对肾移植受者末梢血活化T细胞的抑制作用。　方法　 4 6例肾移植受者随机分为舒莱治疗组 ( 2 3例 )和对照组 ( 2 3例 )。免疫抑制剂方案为新山地明胶囊 (Neoral)、硫唑嘌呤 (Aza)和泼尼松 (Pred) ,舒莱治疗组术前 2h和术后 4d各静脉滴注舒莱 2 0mg。应用流式细胞仪对 4 6例受者手术前后末梢血中不同表型淋巴细胞进行连续动态观察。 　结果　与对照组比较 ,舒莱组活化T细胞 (CD 2 5)在用药后 2 4h明显下降 ,从用药前的 ( 17.0 0± 3.70 ) %降至 ( 3.30± 2 .4 3) % ,1周后降至 ( 2 .5 2± 1.0 9) % ,并在整个观察过程中呈低水平表达 (P <0 .0 1) ;淋巴细胞总数和T细胞 (CD 3 CD-19)总数无明显变化 ;B淋巴细胞 (CD-3 CD 19)、NK细胞 (CD-3 CD 16CD 56)和非HLA限制性细胞毒性T细胞 (CD 3 CD 16CD 56)未见明显升高。　结论　舒莱对活化T细胞有明显抑制作用 ,其机理为克隆封闭而非杀伤或清除作用     

CD257/CD256及其受体在排斥反应移植肾组织中的表达

目的研究CD257/CD256及其受体在发生排斥反应移植肾组织中的作用。方法收集1987年1月至2007年7月间因移植肾失功切除的移植肾组织标本46份和2009年行程序性活组织检查的移植肾组织标本10份。运用免疫组织化学法分别检测了CD256、CD257、BAFF-R、BCMA、TACI及CD138、CD3和CD20等分子的表达。采用图像分析软件Histo Quest Analysis和统计分析软件SPSS16.0对表达结果进行统计分析。结果依据Banff 2005标准,对移植肾组织标本进行病理学分组：抗体介导的排斥反应（ABMR）组15例、T细胞介导的排斥反应（TCMR）组16例和未明原因病例（UAC）组15例。免疫组织化学结果显示,CD256、CD257及其受体BAFF-R、BCMA和TACI均表达于ABMR组和TCMR组肾小管上皮细胞的胞膜或胞浆,而UAC组和正常对照组无表达或弱表达。CD257在ABMR组、CD256在ABMR组和TCMR组的表达与其他组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。BAFF-R和BCMA在ABMR组的表达与其他组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;而TACI在ABMR组和TCMR组的表达与UAC组和正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。CD138＋细胞除浸润于肾组织间质外,也浸润于肾小管上皮细胞胞浆或胞膜。CD138＋细胞在ABMR组的表达水平高于其他组（P〈0.05）。CD3＋细胞主要浸润于肾组织间质,以散在分布为主,在ABMR组和TCMR组均有表达,但在TCMR组表达水平更高。CD20＋细胞亦主要分布于肾组织间质,成簇分布为主,在ABMR组和TCMR组的表达水平相似。相关性分析显示,CD256与BCMA、TACI和CD138＋细胞具有显著相关性;而CD257与BAFF-R、BCMA、TACI和CD138＋细胞均具有显著相关性。结论 CD256信号与CD257信号可能均参与了ABMR进程。     

排斥反应时血清可溶性白细胞相关免疫球蛋白样受体1的水平及意义

目的 探讨可溶性白细胞相关免疫球蛋白样受体1(sLAIR-1)与移植物排斥反应的相关性.方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定23例肝移植、139例肾移植患者的血清sLAIR-1水平,并以健康志愿者为对照.结果 健康志愿者的血清sLAIR-1水平为(4.3±2.3)μg/L,移植器官功能正常者(肝移植11例,肾移植87例)的sLAIR-1为(6.3±3.7)μg/L,二者比较,差异无统计学意义(P>0.05).肝移植后发生急性排斥反应的6例患者,其血清sLAIR-1水平为(47.2±25.9)μg/L;肾移植后后发生急性排斥反应的20例患者,其血清sLAIR-1水平(36.3±14.7)μg/L;移植肾功能丧失的5例患者,其血清sLAIR-1水平为(28.8±9.4)μg/L,上述三者的血清sLAIR-1水平均明显高于移植物功能正常者和健康志愿者(P<0.01).移植肝重度排斥反应的1例,其血清sLAIR-1高达117.3μg/L,为正常人的27倍.移植肝慢性排斥反应者(5例)和移植肾慢性排斥反应者(27例)的血清sLAIR-1水平分别为(16.1±6.4)μg/L和(13.1±5.5)μg/L,也明显高于移植物功能正常者和健康志愿者(P<0.05).结论 发生排斥反应者的血清sLAIR-1水平升高,其水平的升高可能是发生排斥反应的重要风险因素.     

肾移植术后早期血清可溶性CD14水平的检测及意义

目的了解肾移植术后早期血清可溶性CD14(sCD14)水平变化规律及意义。方法连续选取51例肾移植患者,检测术前1h和术后1～10d血清sCD14水平,观察肾功能恢复情况。根据术后2周内发生排斥反应与否分为排斥组和无排斥组,将2组患者的血清sCD14水平和血肌酐(Scr)水平进行比较。结果51例中发生排斥反应13例,发生排斥反应平均时间为7d。术前1h排斥组和无排斥组Scr分别为(789±221)和(742±234)μmol/L,2组比较差异无统计学意义。术后1～10d Scr水平排斥组高于无排斥组,其中第3、5～10天2组Scr水平差异有统计学意义(P＜0.05),分别为(237±104)和(160±70)、(176±85)和(117±46)、(174±81)和(112±40)、(173±81)和(112±39)、(209±53)和(112±38)、(203±73)和(103±35)、(181±50)和(102±31)μmol/L。术前1h血清sCD14排斥组为(9.55±5.71)mg/L,与无排斥组(8.99±3.89)mg/L相比差异无统计学意义。术后第1～5天血清sCD14水平排斥组均高于无排斥组,分别为(15.52±6.60)和(9.85±4.11)、(15.48±5.85)和(7.53±3.79)、(12.15±4.45)和(5.88±3.95)、(10.84±4.11)和(4.88±3.17)、(7.61±5.37)和(4.66±1.91)mg/L,差异有统计学意义(P＜0.05)；排斥组和无排斥组术后第1天血清sCD14水平均较术前明显升高,而后呈逐渐下降趋势。结论肾移植术后sCD14水平升高早于临床急性排斥反应,术后前5d内的sCD14水平可作为预测急性排斥反应的重要依据。     

Pretreatment of kidney allografts with monoclonal antibodies to CD 45: results of a multicentre study

Abstract The perfusion of human renal allografts with CD45-pecific monoclonal antibodies (mAbs) may reduce their immunogenicity and the incidence Of rejection. we performed a safety study in 40 patients receiving their first cadaveric renal transplant. Two milligrams each of the rat CD 45 specific mAbs YTH 24.5 and YTH 54.12 were perfused into the grafts prior to transplantation. The patients were followed for 3 months. No patient died, and four grafts were lost, three to vascular causes not considered to be related to antibody perfusion and one to severe rejection. Two patients developed an anti-rat antibody response. Immunohistological double-labelling performed on cortical biopsies taken post-perfusion and prior to wound closure showed that at least 60% of the CD 45+ cells were coated by perfused anti-CD 45 ('antibody uptake'). Among the patients studied for uptake and episodes of rejection, the incidence of rejection was 75% in 12 patients whose antibody uptake was < 95% compared with 22% in 18 patients with antibody uptake 2 95% ( P = 0.01). We conclude that this treatment was free of adverse effects and that there is a correlation between the uptake of antibody by passenger leucocytes and reduction in acute rejection episodes.     

CD4+ CD25+ Tr细胞与大鼠肝移植自发免疫耐受关系的研究

目的研究CD4^＋CD25^＋Tr细胞及其相关基因Foxp3与大鼠肝移植自发免疫耐受的关系。方法双袖套法建立大鼠原位肝移植模型;密度梯度离心法分离肝内淋巴细胞;免疫磁性分离法（MACS）分选CD4^＋CD25^＋Tr细胞,流式细胞术（FCM）检测所得细胞纯度。体外细胞增殖试验研究CD4^＋CD25^＋Tr细胞的免疫抑制作用。Western蛋白印迹法检测CD4^＋CD25^＋Tr细胞Scurfin蛋白表达。结果自发耐受组大鼠移植肝内CD4^＋CD25^＋Tr细胞含量显著高于急性排斥组。混合淋巴细胞反应中,LEW大鼠的脾细胞比DA大鼠自身的脾细胞更能刺激CD4^＋CD25^＋T细胞的增殖。CD4^＋CD25^-T细胞能抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖,当加入外源性IL-2（200U／ml）时,该抑制作用被逆转。结论转录因子Foxp3介导的CD4^＋CD25^＋Tr细胞的免疫抑制作用可能是诱导大鼠肝脏移植自发免疫耐受的机制之一。     

CD4+CD25+FOXP3+T细胞在肝癌肝移植肿瘤复发中的作用

目的 探讨肝癌肝移植病人移植前后外周血和肿瘤组织中CD4+CD25+FOXP3+T细胞比例变化及其临床意义.方法 用流式细胞仪检测肝癌肝移植病人和其他肝移植病人术后外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞的比例,并采用正常人作对照.用免疫组化法检测肝癌病人和非肝癌病人肿瘤组织中FoxP3的表达及CD8+T细胞浸润的比例.观察肝癌肝移植病人术后及肿瘤复发后调节性T细胞的变化及其对肿瘤复发的影响.结果 流式细胞检测显示肝癌肝移植、非肝癌肝移植的病人术后外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞占CD4+T细胞的比例较正常人明显升高,分别为(10.15±1.00)%、(5.30±1.64)%和(3.20±1.18)%,P<0.05.肝癌肝移植肿瘤复发病人较未复发病人外周血CD4+CD25+FOXP3+T比例明显升高,分别为(15.15±1.50)%和(6.80±1.50)%,P<0.01.免疫组化检测显示肿瘤组织中FOXP3+T细胞增多,CD8+T细胞浸润明显减少.结论 肝癌肝移植肿瘤复发的病人外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞比例升高.调节性T细胞可能通过减少CD8+T细胞浸润,加速肿瘤复发.