淋巴因子激活的骨髓细胞对混合淋巴细胞培养的抑制作用

采用单向混合淋巴细胞培养（ＭＬＣ）方法，从不同主要组织相容性抗原（Ｈ－２）单型小鼠的多种组合中，验证淋巴因子激话的骨髓细胞（ＬＡＢＭＣ）的Ｖｅｔｏ效应。结果表明：ＬＡＢＭＣ于培养当天加入单向ＭＬＣ，在与反应细胞低比例时可特异住抑制与其带有相同Ｈ－２单型的刺激细胞参与组合的增殖应谷和杀伤效应的诱导；在与反应细胞高比例时其抑制不具特异住，但对与其带有相同Ｈ－２单型的刺激细胞参与组合的抑制较强，提示ＬＡＢＭＣ在低比例时具Ｖｅｔｏ活性，在高比例时同时具Ｖｅｔｏ和自然抑制（ＮＳ）活性。ＬＡＢＭｃ于培养第二天加入单向ＭＬＣ则不显示抑制效应，提示ＬＡＢＭＣ对ＭＬＣ的抑制具有时相效应，流式细胞术（ＦＣＭ）显示ＬＡＢＭＣ中ｌｙｔ－２（＋）细胞成分明显增加．     

体外定向诱导小鼠胚胎干细胞发育为造血干/祖细胞方法的初步研究

目的:探讨体外定向诱导胚胎干细胞(ESC)发育为造血干细胞(HSC)的方法。方法:将小鼠E14胚胎干细胞在含干细胞生长因子(SCF)和血管内皮生长因子(VEGF)的甲基纤维素培养基中首先诱导发育为胚胎体(EB),再将EB置于均含SCF、VEGF、IL-3、IL-6及促红细胞生成素(EPO)的3种不同培养体系中定向分化为HSC,并观察HSC表面标志性抗原、造血集落形成及瑞氏-姬姆萨染色的结果。结果:经两阶段诱导ESC分化为HSC,发现在甲基纤维素半固体培养体系中HSC发育缓慢,分化14d后CD34+/Sca-1+细胞数最高为(31.5±4.7)%;而在骨髓基质细胞饲养层上HSC发育较快,细胞数量较多,分化第10dCD34+/Sca-1+细胞数即达到峰值,为(47.8±6.3)%;骨髓基质细胞饲养层+胎肝基质细胞上清培养体系中HSC发育同样迅速,所产生的CD34+/Sca-1+细胞数量在3个体系中最高,为(53.6±7.2)%。经瑞氏-姬姆萨染色证实上述细胞为早期造血细胞,均有形成各系造血细胞集落的能力。结论:使用骨髓基质细胞饲养层+胎肝基质细胞上清培养体系及SCF、VEGF、IL-3、IL-6及EPO等细胞因子,通过两阶段诱导分化,可从小鼠ESC获得较高比例的HSC。     

小鼠胸腺基质细胞系（MTEC1）对裸鼠骨髓细胞的诱…

在体外建立的小鼠胸腺基质细胞系（ＭＴＥＣ１）及其培养上清（ＭＴＥＣ１－ＳＮ）与裸鼠骨髓（ＢＭ）细胞共同培养，通过直接荧光素标记抗体，ＦＡＣＳ分析其细胞表面标志表明，ＭＴＥＣ１及ＭＴＥＣ１－ＳＮ均有诱导促进Ｔｈｙ·１＾－ＣＤ＾－４ＣＤ＾－８的ＢＭ细胞表达Ｔｈｙ·１，ＣＤ４及ＣＤ８分子的作用。在培养或共育三天时，ＭＴＥＣ１－ＳＮ可促进ＢＭ细胞分化形成ＣＤ＾＋４Ｔｈｙ·１＾－，ＣＤ＾－４Ｔｈｙ·１＾＋细     

脐血造血干细胞对原发性肝细胞癌的抑制作用

背景：原发性肝细胞癌是一种临床常见的恶性肿瘤,虽然近年来各种治疗方式如外科手术、射频消融以及选择性动脉栓塞等治疗方式均取得了进展,但对于某些进展期肝癌患者,这些治疗方法具有一定的局限性。在这样的背景下,干细胞对恶性肿瘤的治疗或抑制作用正逐渐成为人们关注的焦点。 目的：对原发性肝细胞癌的发病情况、肿瘤免疫编辑过程、肿瘤微环境以及脐血造血干细胞对原发性肝细胞癌和其他实体肿瘤的抑制作用进行综述。 方法：检索万方医药网及外文生物医学期刊数据库2000-01/2010-09有关原发性肝细胞癌发病情况、免疫微环境以及造血干细胞对包括肝细胞癌在内的实体肿瘤抑制作用的文章,中文检索词为“肝癌,造血干细胞,免疫微环境”,英文检索词为“hepatocellular carcinoma, hematopoietic stem cell, microenvironment”。最终筛选出33篇文献作进一步分析。 结果与结论：肿瘤的发生及发展与机体免疫系统的变化密切相关,在已发生肿瘤的机体内,免疫系统处于抑制状态,对于恶性肿瘤细胞无反应或者低反应。脐血造血干细胞具有免疫原性低、分裂能力强、分化谱系广等特点,在接受移植的机体内能够分化为多种谱系的细胞,其中包括多种免疫细胞,从而弥补机体原有免疫系统的缺陷,起到杀伤肿瘤细胞、抑制肿瘤生长的作用。然而其作用机制、适应证及不良反应等仍需进一步深入研究。     

嵌套EP管法更快速获取更多小鼠骨髓细胞

目的：探讨更快速获取更多小鼠骨髓细胞的方法。方法：取同一只小鼠双下肢,两侧分别随机使用首创的嵌套EP管法或传统常用的注射器冲洗法获得骨髓细胞;记录获取骨髓细胞的时间、数量;采用流式细胞技术分析两种方法所得的活细胞比例;采用CCK-8方法检测两种方法获得的小鼠骨髓细胞的增殖能力。结果：与传统常用的注射器冲洗法相比,嵌套EP管法获取小鼠骨髓细胞的时间更短（P<0.000 1）。与传统常用的注射器冲洗法相比,嵌套EP管法获得的小鼠骨髓细胞数量更多（P<0.05）。两种方法获得的骨髓活细胞比例一致,增殖能力一致。结论：嵌套EP管法能更快速获得更多的骨髓细胞。     

八珍汤对^60Co照射小鼠骨髓细胞及相关细胞因子影响的实验研究

目的：探讨八珍汤对＾６０Ｃｏ照射小鼠骨髓细胞及相关细胞因子的影响。方法：利用＾６０Ｃｏγ射线４００ｒａｄ一次性全身照射造成小鼠骨髓损伤和免疫低下,观察受照后第七天小鼠骨髓细胞增殖能力,相关细胞因子产生能力以及体内给药八珍汤小,中,大３个剂量「小剂量：４．６ｇ／（ｋｇ．日）;中剂量：９．２ｇ（ｋｇ．日）,大剂量：１８．４ｇ／（ｋｇ．日）」后以上功能的恢复情况。结果;与正常对照组比较,受照后第７天骨髓     

柴油机排出颗粒物对小鼠骨髓细胞微核率的影响

对柴油机排出的颗粒物（ＤＥＰ）诱发小鼠骨髓细胞微核进行了研究，结果表明柴油机排出颗粒物（ＤＥＰ）在体内可产生明显的毒性作用。其提取物的剂量在８０－４００ｍｇ／ｋｇ之间，微核率由９．２‰升至３４．７‰，呈现明显的剂量－反应关系。各实验剂量组与对照组比较，均具极显著性差异（Ｐ＜０．０１）。这种遗传毒性作用可能是造成该颗粒致癌性和致突变性的机制之一     

八珍汤对血虚模型小鼠造血调控因子影响的实验研究

探讨八珍汤对由环磷酰胺引起的小鼠骨髓造血功能抑制的调控作用。采用环磷酰胺致小鼠血虚模型 ,测定八珍汤对骨髓抑制小鼠外周血象及其细胞因子产生的影响。结果表明 ,八珍汤对环磷酰胺所致血虚模型小鼠骨髓细胞有促进增殖作用 ;经八珍汤诱导制备的巨噬细胞、脾细胞、肺条件培养液和骨骼肌条件培养液能促进血虚模型小鼠骨髓细胞增殖 ,促进血虚模型小鼠骨髓基质细胞分泌肿瘤坏死因子 (TNF)。八珍汤对环磷酰胺所致化疗损伤的造血调控作用可能与直接或间接刺激造血微环境的基质细胞分泌正性和负性造血生长因子有关。     

葛根素抑制乙醇诱导的小鼠骨髓细胞成脂基因表达

乙醇能够诱导骨髓基质细胞（marrow stromal cells,MSCs）大量分化为脂肪细胞,与乙醇性股骨头坏死密切有关。本研究旨在观察葛根素掏乙醇导致MSCs成脂变化的基因表达。     

不同年龄大鼠骨髓基质干细胞的增殖特性

为了探讨年龄差异是否对大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)的增殖有影响。本研究采用免疫组织化学和苏木素染色检测体外培养的不同年龄大鼠BMSCs增殖能力的变化。结果显示:在培养的第5d,新生组增殖率为(78.7±5.3)%,成年组为(72.0±3.3)%,老年组为(65.4±3.9)%;在第7d增殖率分别是(78.3±3.2)%、(67.3±3.9)%和(52.6±6.0)%;在第9d,分别是(66.9±3.3)%、(46.4±3.9)%和(39.1±2.2)%。统计分析表明,在培养的第5、7、9d三个年龄组BMSCs的增殖率均有显著性差异(P<0.05)。结果提示:不同年龄的骨髓基质干细胞在体外均能快速增殖,但随着年龄的增大,其增殖能力明显下降。     

混合培养对骨髓基质细胞转分化为神经元的影响

目的　研究神经干细胞(NSCs)与骨髓基质细胞(BMSCs)混合培养对骨髓基质细胞转分化为神经元的 影响。　方法　将BMSCs传代培养2d,10μg LbFGF预诱导过夜,DAPI标记后加入到已贴壁分化2d的NSCs中,神 经元培养基混合培养7d后进行神经元特异性烯醇化酶(Nse)染色。对照组于BMSCs传代2d后,一组加bFGF处理 过夜,另一组不加,神经元培养基培养7d后NSE染色。　结果　实验组中部分BMSCs呈NSE染色强阳性,比例为 (13.38±5.79)%,对照组呈NSE阴性　结论　NSCs与BMSCs混合培养可诱导BMSCs转分化为神经元。     

成年大鼠骨髓基质细胞转分化为胰岛样细胞的实验研究

目的 探讨二甲基亚枫(DMSO)对成年大鼠骨髓基质干细胞(MSC)定向诱导分化为胰岛样细胞团的作用.方法 用长骨骨髓腔冲洗的方法对Wistar大鼠MSC进行分离和培养,加入1%DMSO诱导3 d后,HDMEM培养7～10 d.通过形态学观察、双硫棕(DTZ)染色、免疫细胞化学染色、葡萄糖刺激实验和RT-PCR,对诱导细胞进行体外结构和功能鉴定.结果 1%DMSO诱导后第3 d有胰岛样结构出现;免疫细胞化学显示,诱导后第1 d MSC呈nestin免疫反应阳性,诱导后第10 d细胞团表达胰岛素、胰高血糖素,而未诱导组细胞不表达上述蛋白;RT-PCR结果表明,诱导后第10 d检测到胰岛素1(Ins1)、胰岛素2(Ins2)、胰高血糖素(glu)和生长抑素(SS)基因的表达.结论 体外经DMSO诱导,大鼠骨髓基质干细胞可定向分化为胰岛样细胞.     

恒河猴骨髓间充质干细胞的生物学特性

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)的细胞生物学特性。方法 免疫细胞化学检测细胞ALPase、Vimentin和Laminin活性。流式细胞术测定细胞周期和细胞表面抗原。MTT法测定细胞的生长曲线。原位杂交检测细胞端粒酶活性。结果 MSCs ALPase和Laminin呈阴性,Vimentin呈阳性。细胞周期中G1、S、G2期的细胞所占百分比分别为89．5％、7．8％、7．7％;MSCs具有独特的表现特征,即CD166、CD29、CD44、CD105表达呈强阳性,阳性率高达96．7％以上,而CD34和HLA-DR呈阴性表达。细胞的平均倍增时间为32h。细胞端粒酶活性呈阳性反应。结论 培养的细胞为未分化的骨髓间充质于细胞,而不是造血于细胞和成纤维细胞,且细胞具有较强的增殖能力。     

大鼠骨髓间质干细胞体外诱导分化为胰岛素分泌细胞的实验研究

目的研究体外定向诱导大鼠骨髓间质干细胞（BMSCs）横向分化为胰岛素分泌细胞的可能性,并了解该细胞是否具备分泌胰岛素和胰高血糖素的功能.方法从健康成年大鼠骨髓中分离BMSCs,通过传代对细胞进行纯化和扩增.采用两期诱导方案,用诱导液1使BMSCs向巢蛋白（nestin）阳性的祖细胞分化;用诱导液2使nestin阳性的祖细胞向胰岛素分泌细胞分化.用双硫腙染色鉴定胰岛素分泌细胞团;免疫细胞化学法检测诱导前后nestin、胰岛素及胰高血糖素蛋白的表达;采用放射免疫分析法检测葡萄糖刺激后上清中胰岛素的量.结果BMSCs经第一期诱导5d可分化成nestin阳性的祖细胞,双硫腙染色阳性.免疫细胞化学显示,经两期,诱导后的细胞表达胰岛素、胰高血糖素等激素.放射免疫分析结果显示,诱导后的细胞团可以分泌胰岛素,糖反应性较弱.结论健康成年大鼠骨髓间质干细胞在体外可以被诱导分化为胰岛样细胞团,且具有可重复性.     

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞

目的 采用骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导为心肌样细胞,为干细胞移植治疗心衰提供一种新的细胞材料.方法 取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养MSCs,分别用终浓度为5、10、15、20 μmol/L的5-氮胞苷(5-aza)定向诱导,相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学、激光扫描共焦显微镜技术检测结蛋白(desmin),α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)、心肌特异性肌钙蛋白(C-TnT)的表达,透射电镜鉴定.在诱导后7d、21 d和28 d,3个时间点以半定量RT-PCR方法检测细胞心肌早期转录因子GATA4和心肌特异性肌凝蛋白重链αMHC的表达.结果 MSCs体外经5-aza诱导后分化的细胞desmin、α-sarcomericactin、C-TnT均表达阳性,5 μmol/L组阳性表达较高,透射电镜下可见到平行排列的肌丝.RT-PCR结果显示,GATA4于诱导后7 d弱表达,21 d表达增强,28 d表达减弱.αMHC在诱导后7 d不表达,21 d弱表达,28 d表达明显.结论 骨髓间充质干细胞能够在体外被诱导分化为心肌样细胞,是自体心肌细胞一种良好的供体来源.     

诱导大鼠间充质干细胞形成的神经元样细胞的形态特征

目的 研究诱导大鼠骨髓间充质于细胞(MSCs)形成的神经元样细胞的形态特征.方法 通过贴壁法培养鉴定大鼠骨髓MSCs,体外培养扩增纯化后加入新生鼠脑匀浆上清诱导48 h.倒置显微镜和透射电镜下观察诱导前后细胞的形态结构变化,免疫细胞化学方法鉴定诱导后细胞的性质.结果 倒置显微镜下可见MSCs呈纺锤形和多角形,核居中,有1或2个核仁,诱导后细胞呈神经元样,细胞伸出较长的轴突样和树突样突起;免疫组织化学方法显示NSE、NF阳性,GFAP阴性.透射电镜下可见诱导前MSCs胞质较丰富,有较多的细胞器,细胞核呈圆形或椭圆形,也可见不规则形核,核染色质较疏松,有明显核仁,多为1个.有的MSCs表面可见较多的微绒毛.诱导后细胞胞质丰富,细胞核多为不规则形,染色质疏松,核仁较大,1～3个不等,细胞表面有发达的微绒毛.结论 MSCs是一种多分化潜能的细胞,诱导后分化成为具有成熟细胞器的神经元.     

小鼠骨髓基质细胞和蚕丝丝素材料的体外生物相容性

目的 研究体外培养的小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)与蚕丝丝素材料的生物相容性,寻找BMSCs组织工程化神经的支架材料. 方法 通过贴壁法体外分离、培养小鼠(C57BL/6-GFP小鼠和C57BL/6小鼠)的BMSCs,与丝素共培养,通过光学显微镜和扫描电镜,观察细胞的黏附和生长情况.利用丝素浸出液培养BMSCs后,通过透射电镜观察细胞超微内部结构,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测丝素、羟基磷灰石、有机锡浸出液和普通IMDM培养基培养细胞12h、24h、48h、72h、7d的细胞活力,每组重复12次.流式细胞术检测丝素浸出液培养BMSCs的细胞周期及细胞表型,实验重复3次. 结果 通过光镜、电镜观察,发现小鼠BMSCs黏附着丝素纤维、并沿着丝素纤维延伸,一些BMSCs缠绕并包裹丝素纤维,黏附着丝素纤维的细胞有的呈圆,形有的呈梭形.与普通IMDM培养基培养的细胞相比,透射电镜下丝素浸山液培养后的BMSCs内部结构未见异常;丝素和羟基磷灰石浸出液对BMSCs的活力无显著性影响(P>0.05);丝素浸出液对骨髓基质细胞周期和表型无明显影响. 结论 蚕丝丝素与小鼠BMSCs有好的生物相容性,且丝素对BMSCs没有毒性作用,可作为BMSCs构建组织工程化神经的支架材料.