低氧对C2C12细胞分化不同阶段自噬和肌细胞生成素表达的影响

目的:研究低氧对C2C12细胞分化不同阶段自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3B)和肌细胞生成素(myogenin)表达的影响。方法:C2C12细胞诱导分化1、2、3、4 d,在常氧和低氧状态下观察细胞分化情况。免疫细胞化学染色法检测自噬相关蛋白LC3B和Beclin1的表达。Western blot检测Beclin1、LC3B和myogenin的蛋白表达水平,采用SPSS 22.0软件对数据进行统计学分析。结果:1.与常氧组比较,低氧组分化形成的肌管数量较少,形态细小;2.免疫细胞化学染色结果显示,分化1、2、3、4 d低氧组细胞LC3B和Beclin1荧光强度均低于常氧组;3.Western blot结果显示分化前中期低氧组Beclin1、LC3B和myogenin蛋白表达水平显著低于常氧组(P<0.05)。随着分化时间的增加,低氧状态下LC3B的表达水平进一步降低,而myogenin表达水平回升。结论:低氧抑制C2C12细胞分化;低氧能降低细胞分化前中期Beclin1、LC3B和myogenin蛋白表达水平。     

低氧增强自噬促进舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭

目的探讨低氧条件下对舌鳞状细胞癌（TSCC）自噬活性和迁移能力的影响。 方法应用含1% O₂的低氧培养箱培养TSCC UM1细胞,Western blot检测低氧诱导3、6、9、12、24 h后低氧诱导因子1α（HIF-1α）和自噬标记蛋白Beclin-1、自噬相关蛋白5（ATG5）和微管相关蛋白轻链3（LC3）的表达变化;细胞划痕实验检测低氧诱导后细胞迁移能力的改变;Transwell侵袭小室实验检测低氧诱导后细胞的侵袭能力;SPSS 13.0统计软件进行数据分析。 结果低氧条件下,与对照组（0.527 ± 0.055）相比,TSCC UM1细胞自噬体双层膜标记蛋白LC3Ⅱ的表达（1.206 ± 0.053）增加（t= 12.96,P<0.001）,同时自噬相关蛋白Beclin-1表达量（1.151 ± 0.078）较对照组（0.775 ± 0.062）明显提高（t= 6.736,P= 0.001）,ATG5的表达（1.231 ± 0.06）较对照组（0.711 ± 0.052）也明显上升（t= 7.834,P= 0.001）。与对照组相比,低氧诱导后细胞迁移能力（0.349 ± 0.024）较对照组（0.788 ± 0.037）明显增加（t= 9.918,P= 0.001）,细胞侵袭能力（23 ± 2）较对照组（71 ± 4）明显增强（t= 9.528,P= 0.001）。 结论低氧条件下可以增强TSCC细胞自噬活性,促进其迁移和侵袭。     

自噬及其与肿瘤生长、侵袭、治疗的关系

自噬是真核细胞中一种高度保守的细胞生物学行为,是细胞内包裹细胞质成分的双层膜结构形成并与溶酶体结合产生自我吞噬性质的一种分解代谢过程。自噬的分解代谢作用可以清除细胞内的毒性物质,维持细胞内环境稳态,同时在这一过程中产生的氨基酸等小分子物质可被细胞代谢循环利用,为细胞的生存提供营养。自噬维持细胞内环境稳态的作用能抑制肿瘤的发生;但在已完成恶性转化的肿瘤细胞中,自噬能在不利于肿瘤生存的微环境内维持肿瘤细胞的基础代谢,保持细胞活性。在恶性肿瘤的增殖和侵袭转移过程中,自噬能调节肿瘤细胞的微环境,抑制细胞失巢凋亡,参与细胞休眠和上皮-间充质转化等一系列过程,从而发挥重要作用。     

自噬在Tca83细胞中的作用及自噬相关基因的表达

目的 探讨自噬与口腔癌发生、发展的关系及其在口腔癌Tca83细胞中的作用,以期为口腔癌的治疗提供新的靶点.方法 采用免疫组织化学方法,观察自噬相关基因Beclin-1和MAP1LC3在口腔癌和癌旁组织中的表达;在口腔癌Tca83细胞株中加入顺铂(cisplatin),甲基噻唑基四唑(methy thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞生存率的变化,激光共聚焦显微镜检测自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ的表达,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素流式细胞术检测细胞凋亡率的变化.结果 Beclin-1在口腔癌组织和癌旁组织中的表达率分别为40％(19/47)和12/16;MAP1LC3在口腔癌组织和癌旁组织中的表达率分别为30％(14/47)和10/16,Beclin-1和MAP1LC3在癌组织中的表达率明显低于癌旁组织,两组间差异均有统计学意义(P＜0.05).MTT结果显示,与对照组相比,使用顺铂作用于Tca83细胞,随时间的延长细胞生存率不断降低,P＜0.05;细胞免疫荧光结果显示,对照组荧光染色强度(213±20)显著低于2、6、12、24、48 h组(分别为233±16、315±27、298±46、259±36、225±27),P＜0.05;流式细胞术结果显示,对照组细胞凋亡率(0.68％)显著低于2、6、12、24、48 h组(分别为2.25％、3.08％、5.23％、7.56％、9.46％),P＜0.05.结论 自噬可能与口腔癌的发生、发展相关,不同水平的自噬对口腔癌Tca83细胞的作用不同,Tca83细胞自身基础水平的自噬可以保护Tca83细胞的生存,过度激活的自噬作为一种细胞程序性死亡与凋亡一起促进细胞死亡.     

线粒体自噬在牙周炎发生发展过程中的研究进展

牙周炎是一种由菌斑生物膜引起牙周支持组织破坏的慢性炎症性疾病,主要以牙龈炎症和牙槽骨进行性破坏为特征。线粒体自噬是通过自噬选择性清除细胞内功能失调或受损的线粒体来调节细胞内稳态的主要机制,在线粒体质量和数量控制中发挥关键作用。近年来有研究发现：线粒体自噬可以通过抑制牙周炎症反应、降低细胞凋亡、促进牙周韧带干细胞成骨分化等多种途径参与牙周病的发生和发展,为牙周病的治疗提供了有前景的治疗靶点。本文就线粒体自噬的分子机制及其在牙周病发生发展中的作用等方面的研究进展作一综述。     

低氧环境下自噬对颏舌肌卫星细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨低氧环境下自噬对颏舌肌卫星细胞(Genioglossus muscle satellite cells,GG MuSCs)增殖能力与凋亡蛋白表达的影响。方法:体外培养大鼠颏舌肌卫星细胞, MTT法筛选自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)无毒剂量并检测细胞增殖能力。实验设常氧组、常氧+25 μmol/L氯喹组、单纯低氧组、低氧+5 μmol/L氯喹组、低氧+15 μmol/L氯喹组、低氧+25 μmol/L氯喹组。Western blot检测自噬标志蛋白LC3、促凋亡蛋白caspase-3及细胞色素c(cytochrome c,Cyt c)的表达水平。结果:1)Western blot结果显示:与常氧组相比,单纯低氧组LC3-Ⅱ/Ⅰ、caspase-3、Cyt c表达均增加;与单纯低氧组相比,低氧+氯喹组中随着给药浓度增加,LC3-Ⅱ/Ⅰ、caspase-3、Cyt c的表达水平呈递增趋势。2)MTT结果显示:与常氧组相比,单纯低氧组细胞增殖能力显著增强;而低氧+氯喹组中随着给药浓度增加,细胞增殖能力受到明显抑制。结论:低氧诱发的自噬促进颏舌肌卫星细胞存活,抑制自噬导致细胞增殖能力下降,凋亡蛋白表达显著增加。这提示自噬可能是颏舌肌卫星细胞抵御低氧损伤的重要机制。     

维生素D、自噬与口腔疾病

自噬在真核生物进化过程中起着重要作用。在自噬过程中,细胞可通过降解自身的非必需成分来提供营养和能量,从而实现胞内物质转化和应对短暂的生存压力。自噬与多种口腔疾病关系密切。维生素D是一种重要的自噬激活因子,积极参与调节免疫和炎症反应。文章对维生素D、自噬与口腔疾病的关系做一综述。     

诱导自噬在口腔癌治疗中的研究进展

口腔癌恶性程度高,易复发、易转移,预后欠佳。自噬是细胞在应激条件下诱导的分解代谢过程。近年研究发现上皮细胞自噬激活可通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）,激活腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）信号通路等,激活口腔癌细胞自噬,抑制口腔癌细胞存活。诱导自噬可以降解真核起始因子4E蛋白,抑制口腔癌转移。在口腔癌治疗中发现,诱导口腔癌细胞自噬能抑制口腔癌细胞增殖,促进口腔癌细胞凋亡。与单独放化疗相比,联合使用自噬诱导剂有助于提高口腔癌患者的疗效和存活率。此外诱导口腔癌细胞自噬可提高机体免疫功能,增强口腔癌免疫疗法疗效。本文就自噬与口腔癌的关系,诱导自噬与放化疗及免疫治疗联合应用治疗口腔癌的作用研究进行综述,为诱导自噬治疗口腔癌,提高口腔癌治疗效果和患者存活率提供新思路。当前诱导自噬治疗口腔癌的作用机制尚不明确,研究其作用机制,精准调控诱导自...     

细胞自噬和炎症反应的相互调控与牙周炎

细胞自噬在真核细胞中广泛存在,其通路可将细胞内衰老损伤的蛋白质和细胞器等细胞成分运送至溶酶体进行降解、清除并循环利用降解后的营养物质。炎症反应是机体应答组织损伤和病原微生物感染等有害刺激的一种保护性反应,过度的炎症反应会导致组织损伤和疾病;而自噬可通过降解DNA、活性氧族等内源性刺激来抑制炎性小体聚集,降解白细胞介素（IL）-1β前体来抑制IL-1β等促炎因子的分泌。牙周致病菌的毒力因子参与牙周组织的破坏,通过其自身携带或释放的脂多糖、肽聚糖和细菌DNA等与宿主细胞的Toll样受体（TLR）等相互作用诱发组织局部炎性细胞浸润和释放炎症因子,导致牙周炎。在牙周局部组织中,病原相关分子模式和损伤相关分子模式通过与TRL或核苷酸结合寡聚化结构域蛋白样受体相互作用,在激活先天免疫反应时诱发自噬,而自噬同时可通过负向调控TLR信号来影响炎症反应。本文就自噬与炎症反应的相互调控作用和自噬与牙周炎的相关性等研究进展作一综述,旨在揭示牙周炎等炎症性疾病的发病机制,为其治疗探索新的途径。     

缺氧下激活成骨细胞自噬对细胞增殖的影响

目的探讨缺氧环境下诱导成骨细胞自噬对其增殖的影响。方法应用CoCl2制备细胞缺氧模型,蛋白质免疫印迹和细胞免疫荧光法检测自噬标记蛋白LC3表达,透射电镜检测自噬小体;MTT法和流式细胞术检测自噬诱导对细胞增殖的影响。结果 CoCl2处理后3h自噬体双膜形成蛋白LC3-II表达开始升高,在6h达到最高值,随后表达水平下降。免疫荧光结果显示,实验组LC3蛋白在细胞质中表达,强度高于对照组。透射电境观察结果显示,在实验组中有自噬小体形成。与对照组相比,CoCl2作用后细胞生长受抑制,12h达到峰值,随后抑制能力减弱（P＜0.05）;流式细胞术检测显示G1期细胞增多,同时S期及G2期细胞减少。结论缺氧环境可激活成骨细胞自噬活性从而抑制细胞增殖。     

缺氧对成骨细胞增殖及凋亡的影响

目的：通过在缺氧条件下体外培养成骨细胞,探讨缺氧对成骨细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用酶消化法传代培养乳SD大鼠颅盖骨细胞并建立缺氧模型。用台盼蓝染色法分别计数培养1、3、5、7天的细胞数;用流式细胞仪检测对照组与缺氧1、3、5天的细胞凋亡率。结果：缺氧组的细胞数少于正常氧组;对照组与缺氧1、3、5天的细胞凋亡率逐渐增高。结论：缺氧抑制成骨细胞的增殖,同时促进成骨细胞的凋亡。     

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自噬是细胞程序性死亡的一种方式,人类多种肿瘤存在自噬异常。自噬过程受自噬相关基因调控,Beclin1是目前惟一被证实的哺乳动物自噬基因,是自噬的直接执行者,通过诱导自噬、促进凋亡抑制肿瘤进程。本文就Beclin1与肿瘤发生、发展的关系进行综述,并对口腔癌自噬研究做一简要介绍。     

自噬在hAMSCs促进血管新生作用的初探

目的：：通过构建人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)与人脐静脉内皮细胞(hUVECs)3D共培养体系,探讨自噬与血管新生的相关性。方法：使用蛋白酶和胶原酶消化法及胶原酶消化法提取hAMSCs和hUVECs。通过流式细胞仪、免疫荧光及多向分化实验鉴定hAMSCs和hUVECs。通过3D成管实验观察0、3、6、12、24、48、72 h hAMSCs-hUVECs(共培养)组及hUVECs(单培养)组中hUVECs出芽的长度及面积,检测各时间点中反应自噬水平的蛋白ATG5、Beclin-1、LC3Ⅱ表达水平。结果：流式细胞仪检测发现,hAMSCs中间充质细胞表面分子标志呈阳性表达,造血干细胞及血管细胞相关的表面分子标志呈阴性表达;hUVECs中CD34呈阳性表达,CD45呈阴性表达。免疫荧光检测发现,hUVECs细胞膜上表达CD31,胞浆中表达抗血管性血友病因子(vWF)。多向分化实验证实hAMSCs具有向成骨细胞、成脂细胞及成软骨细胞分化的潜能。3D成管实验中共培养组在12 h以后出芽的长度及面积均高于单培养组,共培养组ATG5表达水平在3、6 h高于单培养组,共培养组Beclin-1表达水平在0、3、6 h高于单培养组,共培养组LC3Ⅱ表达水平在0、3、6、12 h高于单培养组。结论：本研究发现hAMSCs可以促进血管新生,并证明其促进作用与共培养体系建立早期的胞内自噬水平增高密切相关。     

Hypoxia promotes mineralization of human dental pulp cells

Introduction

Dental pulp can be exposed to hypoxic conditions in case of trauma or inflammation. Dental pulp cells (DPCs) have mineralization potential, which plays a key role in pulp repair and reparative dentinogenesis process. Little information is available about DPC mineralization in hypoxic condition. The purpose of this study was to assess the influence of hypoxia on DPC mineralization to pave the way for a better understanding of dental pulp regeneration and reparative dentin formation.

Methods

Human DPCs were obtained by using tissue explant technique in vitro and cultured in normoxia (20% O₂) or hypoxia (5% O₂). Cell viability was investigated by methyl-thiazol-tetrazolium assay. Cell mineralization was assessed by von Kossa staining and alizarin red S staining. Important mineral genes such as osteocalcin (OCN), dentin matrix acidic phosphoprotein-1 (DMP-1), bone sialoprotein (BSP), and dentin sialophosphoprotein (DSPP) were determined by real-time polymerase chain reaction.

Results

Cell viability of DPCs increased more in hypoxia than in normoxia from day 3 to day 5. Von Kossa staining and alizarin red S staining showed DPCs in hypoxia had higher mineralization activity than in normoxia. Expression of mRNAs for OCN, DMP-1, BSP, and DSPP was greater in hypoxia than in normoxia.

Conclusions

These results imply that hypoxia promotes DPC mineralization.     

细胞自噬在牙周炎中的作用与机制

牙周炎是由牙菌斑生物膜引起的牙周组织的慢性炎症性疾病。细胞自噬是宿主对抗细菌感染的有效武器。近年来研究发现,细胞自噬不仅可以促进感染细胞对细菌和毒素的清除,而且有助于抑制炎症反应,以维持细胞内环境稳态,与牙周炎的发生发展关系密切。本文从细胞自噬与牙周病原菌感染的相互作用,细胞自噬与免疫炎症反应的相互调控,以及细胞自噬与牙槽骨代谢的关系3个方面,对细胞自噬与牙周炎发生发展的关系进行综述,为深入地研究细胞自噬与牙周炎相关机制提供参考,为牙周炎防治的研究提供新的思路。