人参皂甙和TNF对小鼠腹腔巨噬细胞ADCC活性的影响

人参皂甙和ＴＮＦ对小鼠腹腔巨噬细胞ＡＤＣＣ活性的影响陆平成，杨进，马健，马登尚（南京中医药大学南京２１００２９）人参皂甙（ＲＳ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在小鼠实验性肿瘤的治疗上有明显的协同作用［１］，为进一步研究其机理，本文研究了人参皂甙和ＴＮＦ对小...     

人参皂甙Rb1对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬及细胞因子和NO分泌的影响

目的:研究人参皂甙Rb1(Ginsenoside Rb1)对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬及细胞因子和一氧化氮(NO)分泌的影响。方法:分离制备小鼠腹腔巨噬细胞悬液;MTT法检测不同终浓度的人参皂甙Rb1对巨噬细胞的毒性;流式细胞术检测Rb1对巨噬细胞吞噬直径1μm微球的影响;用Griess试剂盒检测Rb1对巨噬细胞NO量的影响;使用流式液相蛋白定量检测技术Cytometric Bead Array(CBA)检测Rb1对LPS刺激巨噬细胞分泌细胞因子的影响。结果:终浓度为5、10、20μmol/L的Rb1对巨噬细胞的吞噬功能具有促进作用,明显抑制LPS诱导的吞噬作用(P<0.05);Rb1能抑制巨噬细胞NO的产生(P<0.01);Rb1能够调节LPS诱导的细胞因子的产生。结论:Rb1对巨噬细胞可能具有双向调节作用,通过抑制LPS信号的转导,调节巨噬细胞因子的分泌,抑制其活化,使NO减少;对于未活化的巨噬细胞,可能通过上调其吞噬功能,增强固有免疫系统来抵御病原体侵入。     

人参茎叶皂甙对小鼠免疫功能的影响

肌注人参(根)皂甙或人参茎叶皂甙50mg/kg,一周均能明显对抗环磷酰胺所致小鼠免疫器官重量减轻,血清特异性抗体水平下降及淋转功能降低,并使其恢复接近正常对照水平,使地塞米松所致小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能下降和血中ANAE~ 淋巴细胞比率降低提高到正常水平,促进抗体生成作用,人参(根)皂甙比人参茎叶皂甙更强。     

人参皂甙诱导骨髓巨噬细胞表达造血生长因子的研究

目的 探讨人参皂甙对巨噬细胞表达造血生长因子的影响。方法 采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学与核酸原位杂交等技术，研究人参总皂甙(TSPG)对大鼠骨髓巨噬细胞(rBMMφ)和人单核细胞株(THP-1)表达造血生长因子的影响。结果 经TSPG(10～50mg／L)诱导制备的rBMMφ和THP-1的培养上清液可显著提高大鼠和人的CF/U-Mix、CFU-GM和CFU-E的集落产率；经PSPG诱导后rBMMφ和THP-1表达EPO、GM-CSF、IL-3、IL-6的蛋白水平有不同程度提高；经TSPG诱导后rBMMφ和THP-1表达EPO、GM—CSF和IL-3的mRNA水平和强度显著提高。结论 TSPG可通过直接和／或间接途径刺激造血诱导微环境的巨噬细胞，从蛋白水平和基因转录水平两级层次上促进造血调控因子(如EPO、GM-CSF、IL-3和IL-6等)的合成和分泌，进而促进造血干／祖细胞的增殖分化，这或许足人参调节血细胞生成的可能途径之一。     

人参皂苷Rg1对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的研究人参皂苷Rg1对小鼠腹腔巨噬细胞的影响,并探讨其作用机制。方法无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入不同终浓度的人参皂苷Rg1 4 h后,细菌脂多糖LPS(10μg/ml)作用24 h,直径1μm的微球(1×1010/L)结合流式细胞术分析Rg1对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的影响;Griess试剂盒检测NO的释放;H2DCFDA染色检测ROS的含量;Fluo-4/AM染色检测Rg1对Ca2+超载的影响;Sytox R Green染色,荧光酶标仪检测Rg1对CHX、CTX诱导的细胞凋亡的影响。结果 10、20μmol/L的Rg1时能明显抑制LPS诱导的巨噬细胞NO和ROS的产生以及吞噬微球的能力;10μmol/L的Rg1能显著抑制Ion诱导的的巨噬细胞Ca2+的超载以及CHX、CTX诱导的细胞的凋亡。结论 Rg1具有显著的抗炎作用,并可抵抗多种因素诱导的细胞凋亡,为进一步开发为免疫治疗药物提供了依据。     

黄芪皂苷对培养的小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用

目的：观察黄芪皂苷(AS)对巨噬细胞的免疫激活作用,探讨其调节机体免疫功能的机制。方法：在体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中加入不同浓度的AS后，观察其对巨噬细胞一氧化氮(NO)合成及对肿瘤细胞杀伤活性的影响；透射电子显微镜观察巨噬细胞的超微结构改变；应用激光扫描共聚焦显微术，结合荧光探针Fluo-3/AM、观察AS引起巨噬细胞内Ca²⁺的变化。结果：50-800 mg/L AS 作用细胞24 h后，NO分泌量增加，杀瘤活性加强，且呈量－效依赖关系。400 mg/L AS作用细胞24 h后，透射电子显微镜观察可见细胞表面突起增多、增粗、增长；滑面内质网、溶酶体增多；50-800 mg/L AS 作用细胞4 h后，细胞内Ca²⁺的浓度升高，并与药物浓度呈正相关。结论：AS 可通过使巨噬细胞NO分泌水平增加、细胞毒作用增强从而增强巨噬细胞的免疫调节功能，其调节机制可能与其引起细胞内Ca2+ 的浓度升高有关。     

人参提取液对小鼠巨噬细胞的辐射防护作用

本文利用图象分析系统(TAS)定量细胞化学和环核苷酸免疫荧光细胞化学技术观察了人参提取液对小鼠巨噬细胞的辐射防护作用。定量测定表明人参可明显提高受照小鼠巨噬细胞内ANAE、AcPase、ATPase和PAS阳性物质的含量。同时,环核苷酸免疫细胞化学亦显示受照小鼠施加人参后巨噬细胞cAMP和cGMP免疫荧光的定位和强度发生变化,恢复至正常定位和强度。本文对结果的意义进行了讨论     

人参皂甙对小鼠脾脏树突状细胞增殖的影响

树突状细胞 (DC )是已知机体内功能最强的抗原递呈细胞 (APC ) ,能在体内外直接激活初始 (naive)T细胞 ,是自体、异体混合淋巴细胞反应中重要的刺激细胞 ,其作用比其他APC强 10～ 10 0倍[1] 。目前DC在感染免疫、移植排斥、肿瘤免疫及免疫缺陷等病理过程中所起的作用越来越受到人们的重视。但DC数量极微 ,分离纯化困难 ,给DC的研究和应用带来极大困难。目前 ,体外扩增DC多采用GM CSF与IL 4联用[2 ,3 ] ,但其成本较高。本实验应用人参皂甙 (ginsensides,GS )观察其对小鼠脾脏DC增殖的影响 ,以期为DC的体外扩增提供新的方法。1　…     

香菇多糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮生成的影响及其机理

为进一步探讨香菇多糖（Lentinan,LTN）的免疫调节和抗肿瘤作用机理,本实验研究了LTN对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮（NO）生成和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的影响。结果显示,LTN能明显促进小鼠腹腔巨噬细胞NO生成,并且同干扰素-γ（IFN－γ）具有协同促进作用。结果还表明,LTN的这一促进作用能被RNA转录抑制剂放线菌素D、蛋白质合成抑制剂放线菌酮和一氧化氮合酶（NOS）抑制剂L－NMA所抑制。提示LTN的免疫调节和抗肿瘤作用机理可能与其诱导巨噬细胞iNOS合成、促进NO生成有关。     

人参皂苷Re对重症急性胰腺炎小鼠小肠黏膜的影响及调控机制

目的 探讨人参皂苷Re通过调控Janus激酶2/信号转导子与转录激活子3(JAK2/STAT3)通路对重症急性胰腺炎(SAP)小鼠小肠黏膜的影响及作用机制.方法 48只小鼠分为对照组、SAP组、SAP+人参皂苷Re组和SAP+人参皂苷Re+LY2784544组(n= 12).通过腹腔注射雨蛙肽溶液(禁食12 h后,10...     

地塞米松诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中[Ca~(2 )]i的变化

目的　研究地塞米松诱导凋亡小鼠腹腔巨噬细胞 [Ca2 ]i的变化及其对凋亡的影响以及信使分子对凋亡和 [Ca2 ]i变化的影响。方法　激光扫描共聚焦显微术、流式细胞术和荧光标记术。结果　 1 凋亡巨噬细胞内fluo 3荧光强度逐渐增强。胞内钙库受体抑制剂 ,尤其是Ca2 内流阻断剂抑制细胞内fluo 3荧光强度变化 ,同时使细胞凋亡率降低 ;2 .staurosporine和DcAMP显著降低巨噬细胞凋亡率并明显抑制fluo 3荧光强度改变。genistein和亚甲蓝稍降低巨噬细胞凋亡率 ,并降低fluo 3荧光强度升高幅度。结论　 1 胞外Ca2 内流和内源性Ca2 释放 ,主要是胞外Ca2 内流使[Ca2 ]i逐渐升高并促进巨噬细胞凋亡 ;2 .PKC促进 [Ca2 ]i升高和巨噬细胞凋亡。cAMP抑制[Ca2 ]i升高和巨噬细胞凋亡。cGMP、TPK降低 [Ca2 ]i升高幅度并稍抑制巨噬细胞凋亡。结果提示 ,[Ca2 ]i是信使分子调控巨噬细胞凋亡的主要靶点。     

人参皂苷Rg1对大鼠胸腺结构与功能的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对大鼠胸腺组织结构与功能的影响及相关机制。 方法 SD大鼠随机分为2组,每组10只。Rg1注射组,腹腔注射Rg1 20mg/kg,qd×28d;对照组,等时注射等量生理盐水。药物注射完成后第2天,取胸腺称重测定胸腺指数,石蜡切片与HE染色观察胸腺组织结构;衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色检测胸腺细胞衰老,细胞计数试剂盒（CCK-8）检测胸腺细胞对刀豆蛋白A（ConA）刺激的增殖能力,ELISA检测胸腺细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、白细胞介素（IL)-2与IL-6的能力,流式细胞术检测胸腺细胞周期、细胞凋亡率与活性氧（ROS）含量,酶学检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量与还原性谷胱甘肽（GSH）与氧化性谷胱甘肽（GSSH）的比值,Western blotting 检测细胞衰老相关蛋白P21、P53、Rb表达。 结果 与对照组相比,注射Rg1能提升大鼠胸腺指数,增加胸腺皮质面积比例,提高胸腺细胞增殖能力和S期比例,降低G₁期与G₂/M期细胞比例,减少胸腺细胞凋亡和SA-β-Gal阳性细胞百分率,促进胸腺细胞分泌GM-CSF,TNF-α、IL-2、IL-6,提升胸腺细胞SOD活性和GSH/GSSG比例,降低ROS、MDA含量,下调P53、P21、RB蛋白表达。 结论 人参皂苷Rg1对大鼠胸腺结构与功能有明确的保护作用,其机制可能与抑制氧化损伤和下调p53/p21/Rb信号通路有关。     

Glucocorticoids exert opposing effects on macrophage function dependent on their concentration

Glucocorticoids (GCs) are involved in the modulation of macrophage function and thereby control the host's immune responses to pathogens. However, neither the role of hormone concentration nor the differential contribution of the glucocorticoid (GR) and the mineralocorticoid receptors (MR) to these activities are known. Here we show that low levels of corticosterone enhance NO production as well as mRNA expression of pro-inflammatory cytokines, chemokines and enzymes required for mediator synthesis. In contrast, at high corticosterone concentrations macrophage function was strongly repressed. Importantly, inactivation of the GR by lentiviral delivery of siRNAs abrogated both the immunostimulatory and the immunosuppressive GC actions whereas inactivation of the MR had no effect. Furthermore, removal of endogenous GCs by adrenalectomy in vivo induced a preactivated state in macrophages that could be modulated by corticosterone. We conclude that GCs exert distinct effects on macrophage function dependent on their concentration, and that they primarily act through the GR despite concomitant expression of the MR.     

The CaSR/TRPV4 coupling mediates pro-inflammatory macrophage function

Aim

Although calcium-sensing receptor (CaSR) and transient receptor potential vanilloid 4 (TRPV4) channels are functionally expressed on macrophages, it is unclear if they work coordinately to mediate macrophage function. The present study investigates whether CaSR couples to TRPV4 channels and mediates macrophage polarization via Ca²⁺ signaling.

Methods

The role of CaSR/TRPV4/Ca²⁺ signaling was assessed in lipopolysaccharide (LPS)-treated peritoneal macrophages (PMs) from wild-type (WT) and TRPV4 knockout (TRPV4 KO) mice. The expression and function of CaSR and TRPV4 in PMs were analyzed by immunofluorescence and digital Ca²⁺ imaging. The correlation factors of M1 polarization, CCR7, IL-1β, and TNFα were detected using q-PCR, western blot, and ELISA.

Results

We found that PMs expressed CaSR and TRPV4, and CaSR activation-induced marked Ca²⁺ signaling predominately through extracellular Ca²⁺ entry, which was inhibited by selective pharmacological blockers of CaSR and TRPV4 channels. The CaSR activation-induced Ca²⁺ signaling was significantly attenuated in PMs from TRPV4 KO mice compared to those from WT mice. Moreover, the CaSR activation-induced Ca²⁺ entry via TRPV4 channels was inhibited by blocking phospholipases A2 (PLA2)/cytochromeP450 (CYP450) and phospholipase C (PLC)/Protein kinase C (PKC) pathways. Finally, CaSR activation promoted the expression and release of M1-associated cytokines IL-1β and TNFɑ, which were attenuated in PMs from TRPV4 KO mice.

Conclusion

We reveal a novel coupling of the CaSR and TRPV4 channels via PLA2/CYP450 and PLC/PKC pathways, promoting a Ca²⁺-dependent M1 macrophage polarization. Modulation of this coupling and downstream pathways may become a potential strategy for the prevention/treatment of immune-related disease.     

人参皂苷Rb1促进小鼠坐骨神经损伤修复的作用及机制研究

目的 构建小鼠坐骨神经损伤（SNI）模型,探讨人参皂苷Rb1对小鼠坐骨神经损伤修复的促进作用及机制。 方法 选取成年雄性昆明小鼠78只,随机分为假手术组（26只）、模型组（26只）、治疗组（26只）。模型制作采用钳夹损伤法,假手术组仅游离坐骨神经。模型制作后30 min,治疗组腹腔注射10 mg/kg人参皂苷Rb1,模型组与假手术组给予同等体积的生理盐水。采用坐骨神经功能指数（SFI）对小鼠坐骨神经功能进行追踪评价;利用HE染色及生长相关蛋白43(GAP43)免疫荧光染色检测损伤14 d后坐骨神经再生修复情况;利用透射电子显微镜观察损伤节段髓鞘的结构改变。损伤后14 d,检测脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)mRNA水平的表达变化。模型制作后3 d、7 d,利用Ki67、S100β免疫荧光染色检测施万细胞的增殖、迁移能力;利用Real-time PCR检测炎症相关因子以及施万细胞激活相关转录因子mRNA表达水平;通过Western blotting对Sox10在蛋白水平的变化进行验证。 结果 治疗组SFI评分高于模型组小鼠,神经近端、远端HE染色较均一。透射电子显微镜提示,治疗组髓鞘结构、厚度较模型组明显改善,髓鞘内神经纤维排列较为整齐。免疫荧光染色结果显示,治疗组坐骨神经GAP43+轴突伸长明显优于模型组,BDNF、NGF等营养因子表达升高。进一步检测发现,给予Rb1后损伤节段附近Ki67+细胞增殖、S100β+施万细胞迁移明显增多。Real-time PCR结果显示,治疗组肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β mRNA表达水平明显下降,施万细胞激活相关转录因子表达水平上升。 结论 10 mg/kg Rb1能降低再生组织环境中炎症因子表达水平,增加BDNF、NGF等营养因子的表达水平,促进施万细胞激活,从而促进小鼠坐骨神经损伤后的神经再生。     

人参皂苷Rg1和Rh1对树突状细胞功能的影响

目的:研究人参皂苷Rg1和Rh1对树突状细胞(dendriticcell,DC)功能的影响。方法:用ELISA法检测人参皂苷Rg1及Rh1对DC的IL-12p40蛋白产生量的影响,用RT-PCR检测人参皂苷Rg1及Rh1对DCIL-12p40mRNA表达水平的影响。用中性红吞噬法检测人参皂苷Rg1及Rh1对DC-LPAK对肿瘤细胞的杀伤作用。结果:ELISA结果表明,Rg1和Rh1各剂量组均能显著提高DCIL-12p40蛋白的产量。与对照组相比,Rg11mg/L及Rh1100mg/L可明显增加DCIL-12p40mRNA的转录,与其蛋白表达相一致。Rg1及Rh1均能促进DC-LPAK对乳头瘤细胞的杀伤能力;在对L929杀伤实验中,效靶比为5∶1时,Rg1各剂量均能显著促进DC-LPAK的杀伤活性(P<0.01,P＜0.05),而Rh1仅中剂量能提高DC-LPAK的杀伤活力(P<0.05)。结论:Rg1和Rh1通过增强IL-12p40mRNA的表达来增加其蛋白的产量。并且,由于IL-12产量的增加从而增强了DC-LPAK对肿瘤细胞的杀伤能力。     

A rapid and efficient method for establishing peritoneal macrophage cell lines

Inoculation of the murine J2 retrovirus into the peritoneal cavity of mice which have been previously injected with Brewer's thioglycolate medium, results in the immortalization of peritoneal macrophage (PM) cells maintaining intact many of their morphological and functional properties. J2 virus immortalizes PM in vivo in a very efficient manner, and since no extra manipulation of the cells, exogenous growth factors, or feeder layers are required for the in vitro proliferation of the immortalized cells, numerous continuous cell lines can be readily established. This method of utilizing the J2 virus in vivo represents a novel technique for obtaining hematopoietic cell lines that are difficult to immortalize in vitro.     

NO对小鼠腹膜淋巴孔的调控作用与腹膜透析失超滤机理研究

目的:研究一氧化氮(NO)对腹膜淋巴孔的调控作用, 探讨腹膜透析(PD)失超滤机理。方法:①应用Baxter腹透液建立腹膜透析小鼠模型;②小鼠腹腔注射NO供体硝普钠(SNP)和NOS的抑制剂N^G-单甲基-L-精氨酸(L-NMMA);③全自动酶标仪测定血清NO₂^-量;④腹膜淋巴孔的扫描电镜观察和计算机图像处理。结果:①随着腹膜透析进行, 大量巨噬细胞经腹膜淋巴孔游出, 进入腹膜腔形成乳斑;血清NO₂^-量逐渐增高, 腹膜淋巴孔孔径增大、分布密度增高。停止腹膜透析、乳斑减少, NO₂^-量逐渐降低, 腹膜淋巴孔渐趋正常。②随SNP剂量增加, 小鼠血中NO₂^-浓度显著提高, 淋巴孔的直径和密度明显增加。③随着L-NMMA剂量增加, 小鼠血中NO₂^-浓度明显降低, 腹膜淋巴孔开放数量减少, 淋巴孔密度降低, 淋巴孔孔径变小。结论:NO有调控腹膜淋巴孔的作用;长期腹膜透析使血清NO₂^-浓度逐渐增高, 高浓度NO₂^-可舒张腹膜淋巴孔, 使腹膜淋巴孔对腹透液吸收增加, 导致腹膜透析失超滤。