红景天对大鼠肝纤维化肝脏组织Smad4、Smad7表达的影响

目的 探讨红景天对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化肝组织Smad4、Smad7基因表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠60只随机分组:①正常对照组;②肝纤维化模型组;③红景天干预组.每组20只.以CCl4腹腔注射法诱导大鼠肝纤维化,红景天干预组大鼠在造模的同时给予红景天灌胃,正常对照组给予橄榄油和生理盐水,8 w实验结束时处死动物,留取的肝脏组织做HE按0～4期标准判定肝纤维化程度,应用半定量RT-PCR及免疫组化法检测肝组织中Smad4、Smad7的表达.结果 模型组肝纤维化程度处于2～4期,其中大部分达3期以上,红景天干预组大鼠肝纤维化程度明显减轻,只有少部分达3期.红景天干预组大鼠肝脏Smad4蛋白、Smad4mRNA表达阳性率均低于模型组(P＜0.05);红景天干预组大鼠Smad7蛋白、Smad7mRNA阳性率高于模型组(P＜0.01).肝组织Smads蛋白表达与Smads mRNA水平变化一致.结论 红景天防治可显著抑制肝脏Smad4表达及促进Smad7的表达,从而减弱了由TGFβ1介导的肝纤维化信号,可能是其发挥抗肝纤维化作用的分子机制之一.     

中药肝炎平对CCl4诱导的肝纤维化大鼠TGFβ1/Smad信号通路的影响

目的:研究中药肝炎平对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏TGFβ1及其受体TβR Ⅰ,TβR Ⅱ水平和 Smad3,Smad7及前胶原α2(Ⅰ)(Colla2)mRNA 表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制．方法:健康Wistar大鼠38R随机分为正常对照组(N组)、模型对照组(A组)以及肝炎平治疗组(B组)．N组每日以生理盐水10μL/g灌胃,A 组及B组用CCl4制备大鼠肝纤维化模型,B组 4wk后开始以肝炎平10μL/g灌胃给药,A组同时以生理盐水10μL／g灌胃,每日1次．9 wk 后处死大鼠,取肝组织作病理学检查,免疫组化检测TGFβ1及其受体TβR Ⅰ,TβR Ⅱ的表达, RT-PCR检测胞内信号蛋白Smad3,Smad7以及 Coila2 mRNA的表达．结果:与正常对照组相比,模型组TGFβ1、 TβR Ⅰ、TβRⅡ、Smad3、Colla2表达明显增强,Smad7表达明显下降．经肝炎平治疗后大鼠肝脏TGFβ1及其受体TβR Ⅰ,TβR Ⅱ表达均比模型组减弱(TGFβ1:4．30±0．16 vs 4．18 ±0．17．P<0．05;TβR Ⅰ:4．35±0．14 vs 4．24± 0．10．P<0．05;TβRⅡ:4.37±0．11 vs 4．27±0．08． P<0．05)．肝炎平同时下调Smad3和Colla2 mRNA的表达(Smad3:0．93±0．05 vs 0．90± 0．41．P<0．05;Colla2:0．95±0．03 vs 0．92±0．03． P<0．05),上调Smad7 mRNA的表达(0．84±0．05 vs 0．87±0．03,P<0．05)．另外,肝炎平组大鼠肝脏病理变化显著改善．结论:肝炎平对大鼠肝纤维化肝脏TGFβ1/ Smad信号通路有明显的影响,能抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能为抑制 TGFβ1．及其受体TβR Ⅰ,TβRⅡ蛋白表达,下调Smad3 mRNA,上调Smad7 mRNA的表达, 并最终下调了作为主要细胞外基质的Colla2 mRNA的表达．     

外源Smad7基因对原代肝星状细胞活性和基因表达调控的影响

目的研究外源Smad7基因对原代肝星状细胞（HSC）活性和基因表达调控的影响。方法采用胶原酶原位灌注、密度梯度离心法分离SD大鼠原代HSC，并予转化生长因子口。（TGFβ1）刺激，同时分别以重组腺病毒AdSmad7和对照病毒AdGFP感染原代HSC，RT—PCR法检测TGFβ1、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA在HSC中的表达，免疫细胞化学法检测HSC中a一平滑肌肌动蛋白（a—SMA）和Smad7表达。结果RT—PCR显示，与TGFβ1对照组比较，AdSmad7组Smad7 mRNA表达显著上调（P〈0．05），但TGFβ1、和Smad3 mRNA表达差异无统计学意义。免疫细胞化学染色显示，与其他各组比较，AdSmad7组HSC胞质中Smad7表达最高，α—SMA表达则明显降低（P〈0．01）。结论重组复制缺陷型腺病毒AdSmad7可在HSC中高效表达；外源Smad7基因可阻断TGFβ1，对HSC的活化作用，但对Smad3和TGFβ1，mRNA表达无明显影响。     

银杏叶提取物对大鼠肝组织TGF—β1mRNA表达及胶原沉积的影响

目的：研究银杏叶提取物（GbE)对CCl4大鼠肝组织TGF－β1mRNA表达及胶原沉积的影响。方法：Wistar大鼠40只随机分成正常组10只。四氯化碳（CCl4)组15只和GbE组（CCl4 GbE)组15只。12W后,观察各组大鼠肝纤维化程度;逆转录PCR法测定TGFβ1mRNA表达;测定肝组织丙二醛（MDA）及血浆血小板活化因子（PAF）含量。结果：CCl4组8只大鼠肝脏内形成假小叶,GbE组中3只大鼠肝脏有假小叶形成。GbE组大鼠TGFβ1mRNA表达、肝组织中MDA及血浆PAF含量明显低于CCl4组（P＜0．05）。结论：GbE能下调CCl4大鼠肝组织TGFβ1mRNA表达并抑制胶原沉积。     

β胡萝卜素对实验性大鼠肝纤维化的影响

目的：研究β胡萝卜素对四氯化碳（CCl4）诱导的实验性大鼠肝纤维化的影响,并探讨其作用机制。方法：（1）在CCl4诱导实验性大鼠肝纤维化3周后,同时给予β胡萝卜素250000U/kg体重,每周2次灌胃,同时设正常及CCl4对照组(2) 脏组织学及超微结构改变,检测大鼠肝组织羟脯氨酸含量（生化法）、α2Ⅰ型胶原RNA（点杂交法）和转化生长因子β1（TGFβ1,免疫组化法）的表达。结果：β胡萝卜素防治组中,肝纤维化程度计分显著低于CCl4组（P＜0．05）,肝星形细胞中的脂滴数量少于正常对照组,但多于CCl4对照组β胡萝卜素防治组中,肝组织羟脯氨酸含量显著低于CCl4组（P＜0．05）;肝脏α2（Ⅰ）型前胶原RNA和TGFβ1表达显著低于CCl4组（P＜0．05）。结论上述剂量的β胡萝卜素,能显著降低由CCl4诱导的大鼠肝纤维化的程度,其作用机制可能与抑制TGFβ1在肝组织中的表达和减少肝脏星形细胞中的视黄醇脂滴的丢失有关。     

五灵胶囊调节TGF-β／Smad信号通路蛋白对胶原I、Ⅲ型表达的影响

目的探讨五灵胶囊（WL）调节肝纤维化大鼠肝组织及星状细胞（HSC）TGF-β／Smads信号转导蛋白对胶原I和Ⅲ型（COL～I、COL-Ⅲ）表达的影响。方法SD大鼠以高脂低蛋白饲养、饮用10％乙醇,皮下注射40％CCl4,隔4天注射1次,连续6周制备肝纤维化模型,灌胃给予WL3．86g／kg和秋水仙碱0．1mg／kg治疗1月;另体外分离HSC,以不同剂量的WL与HSC培养24h,最后3h加入TGF-β1 10ng／ml。实验结束后镜检肝细胞变性和肝组织纤维化程度,同时ELISA法测定血清COL-I、COL-Ⅲ和培养液COL—I含量,RT-PCR检测肝组织COL-I、COL-Ⅲ、TGF-β1 mRNA的表达。Western blot检测肝组织及HSC内COL—I、ProCOL—I、LN、α—SMA、ERK、p-ERK、TβRI、TβRⅡ、Smad2／3、Smad7蛋白表达。结果WL组大鼠肝细胞变性和肝纤维化程度明显减轻,血清COL-I、CoL-Ⅲ含量增加,COL-I、COL-ⅢmRNA表达降低。Western blot结果显示,WL能明显下调肝组织α—SMA、LN、p-ERK、TβRI、COL—I、ProCOL-I蛋白表达,对ERK、TβRⅡ、Smad2／3、Smad7蛋白表达无影响;显著下调HSCα—SMA、TβRII、p-ERK、Smad7表达,呈浓度依赖性抑制HSC分泌COL-I。结论WL抑制肝纤维化大鼠肝组织COL-I、COL-Ⅲ合成并增加COL—I降解,其作用位点是下调肝组织和HSCTGF-β／Smad、Ras／ERK信号通路蛋白p—ERK、TβRⅡ表达。     

Smad7和尿激酶型纤溶酶原激活剂基因共表达对大鼠肝纤维化的治疗作用

目的观察Smad7和尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）基因共表达对CCl4诱导大鼠肝纤维化的治疗作用。方法40只SD大鼠皮下注射CCl4建立肝纤维化模型。将动物分为模型组、Adsmad7／uPA组（尾静脉注射AdSmad7／uPA）、AdSmad7组（尾静脉注射AdSmad7）和AdGFP组[尾静脉注射仅表达绿色萤光蛋白（GFP）的腺病毒载体]，每组10只，另取10只大鼠作为正常对照组。采用放射免疫法测定血清Ⅲ型前胶原（PCⅢ）和层粘连蛋白（LN）水平；碱水解法检测肝组织羟脯氨酸含量；免疫组化法检测肝组织Smad7和uPA表达；天狼星红染色法检测肝纤维化程度。结果注射3d后，AdSmad7／uPA组肝组织Smad7和uPA表达量均显著增加，血清ALT、AST、PCIl、LN和羟脯氨酸水平较AdGFP和AdSmad7组明显下降（P值均〈0．05）。AdSmad7／uPA组的肝纤维化面积为（5．96±2，72）％，明显低于AdGFP组的（13．32±2．47）％和AdSmad7组的（8．73±2．30）％（P值均〈0．05）。结论Smad7和uPA双基因共表达可协同阻断CCl4诱导大鼠肝纤维化进程。     

转化生长因子β1的小干扰RNA对肝纤维化大鼠Smad蛋白表达的影响

目的 研究转化生长因子(TGF) β1的小干扰RNA (siRNA)对CCl4诱导肝纤维化大鼠TGFβ1/Smad信号通路的影响.方法 以前期研究的TGFβ1siRNA治疗前后肝纤维化大鼠肝脏组织作为研究对象,分为正常组、模型组、TGF β 1 siRNA 0.125 mg/kg组、TGFβ1 siRNA 0.25 mg/kg组和阴性对照组(0.25 mg/kg非特异性靶序列).用免疫组织化学和Western blot检测Smad2、3、4、7的蛋白表达;Real-time PCR法检测Smad2、3、4、7的mRNA表达.多组间数据比较用方差分析,两两比较采用q检验. 结果 免疫组织化学结果显示TGF-β1 siRNA 0.25mg/kg组及0.125 mg/kg组Smad2/3、4的蛋白表达量较模型组、阴性对照组明显减少(F值分别为115.538,117.178,P＜ 0.01),TGFβ 1 siRNA 0.25 mg/kg组表达量较0.125 mg/kg组少(P＜0.05).TGFβ 1 siRNA 0.25 mg/kg组及0.125 mg/kg组Smad7的蛋白表达量较模型组、阴性对照组增加(F=125.34,P＜ 0.01),TGFβ 1 siRNA 0.25mg/kg组表达量较0.125 mg/kg组多(P＜0.05).Western blot结果与之相似.Real-time PCR结果显示,与模型组和阴性对照组比较,TGFβ1 siRNA可以明显抑制Smad 2、3、4基因的表达,且TGFβ1 siRNA 0.25 mg/kg组Smad2、3、4的mRNA表达量(相对表达量分别为2.870±0.705、2.904±0.414、2.667±0.466)较TGF β1siRNA 0.125 mg/kg组(相对表达量分别为5.998±0.329、5.827±0.781、5.102±0.102)明显减少(P＜0.05).TGFβ1 siRNA 0.25mg/kg组及0.125 mg/kg组Smad7的mRNA表达量较模型组、阴性对照组增加(F=29.615,P＜0.01),TGFβ1 siRNA 0.25 mg/kg组表达量较0.125mg/kg组多(P＜0.05).结论 TGFβ1 siRNA干扰大鼠TGFβ1表达后,Smad2、3、4表达量明显降低,而Smad7表达仍维持在较高水平,这利于肝纤维化的改善.     

培哚普利和缬沙坦对肝纤维化大鼠TGF β1及其Ⅱ型受体mRNA与Smad3、7表达的影响

目的观察培哚普利和缬沙坦抗大鼠肝纤维化的疗效和对转化生长因子β1(TGFβ1)及其Ⅱ型受体(TGFβ1RⅡ)mRNA与Smad3、smad17的影响。方法大鼠随机分为止常对照组，模型组、培哚普利治疗组和缬沙坦治疗组。四氯化碳皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型，治疗组于造模第4周开始分别予以培哚普利和缬沙坦灌胃。采用RT-PCR检测肝组织TGFβ1与TGFβ1RⅡ mRNA；免疫组织化学技术检测TGFβ1、Smad3及smad7在肝内的表达及定位，检测肝组织病理改变，检测肝组织羟脯氢酸和血清透明质酸。结果与模型组大鼠比较，经培哚普利或缬沙坦治疗大鼠肝内TGFβ1与TGFβ1RⅡ mRNA表达明显下降、以及smad3蛋白表达明显降低，而Smad7的表达增加。TGFβ1与Smad3的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆，Smad7主要在肝细胞浆表达，上述物质在两种药物组之间表达差异无显著性。培哚普利或缬沙坦治疗后肝组织羟脯氨酸及血清透明质酸含量较模型组显著降低；肝小叶结构均趋于正常，纤维间隔明显变溥。结论培哚普利或缬沙坦均能有效地减轻肝纤维化大鼠的肝脏损伤及纤维化程度，其机制可能与直接或间接抑制肝内TGFβ1与TGFβ1RⅡ mRNA及Smad3表达，并促进Smad7表达有关。     

自拟中药对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝组织Smad3表达的影响

目的研究自拟中药对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏Smad3表达的影响，探讨其抗纤维化的作用机制。方法Wistar大鼠40只，随机分成正常对照组、模型组、自拟中药组、鳖甲软肝片组，采用CCl4背部皮下注射构建肝纤维化模型，行HE和VG染色，光镜下观察肝组织肝纤维化程度。同时免疫组化SABC方法检测各组Smad3的表达。结果与正常对照组比，模型组Smad3表达明显增强，自拟中药组大鼠肝脏Smad3的表达（0．279±0．085对0．885±0．904，P〈0．05）显著下调。另外，自拟中药组大鼠肝脏肝纤维化病理变化显著改善。结论自拟中药对CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型肝脏Smad3表达有明显的下调作用，可能是其抗肝纤维化的主要作用机制之一。     

Smad1 and Smad5 differentially regulate embryonic hematopoiesis

The bone morphogenetic protein (BMP) signaling pathway regulates multiple steps of hematopoiesis, mediated through receptor-regulated Smads, including Smad1 and Smad5. Here, we use loss-of-function approaches in zebrafish to compare the roles of Smad1 and Smad5 during embryonic hematopoiesis. We show that knockdown of Smad1 or Smad5 generates distinct and even opposite hematopoietic phenotypes. Embryos depleted for Smad1 have an increased number of primitive erythrocytes, but fail to produce mature embryonic macrophages. In contrast, Smad5-depleted embryos are defective in primitive erythropoiesis, yet have normal numbers of macrophages. Loss of either Smad1 or Smad5 causes a failure in the generation of definitive hematopoietic progenitors. To investigate the mechanism behind these phenotypes, we used rescue experiments and found that Smad5 is unable to rescue the Smad1 loss-of-function phenotype, indicating that the 2 highly related proteins have inherently distinct activities. Microarray experiments revealed that the 2 proteins redundantly regulate the key initiators of the hemato-vascular program, including scl, lmo2, and gfi1. However, each also regulates a remarkably distinct genetic program, with Smad5 uniquely regulating the BMP signaling pathway itself. Our results suggest that specificity of BMP signaling output, with respect to hematopoiesis, can be explained by differential functions of Smad1 and Smad5.     

胰腺癌组织中Smad6和Smad7表达水平的研究

背景:转化生长因子(TGF)-β信号转导通路异常可能在胰腺癌的发病机制中占有重要地位.Smad蛋白家族是TGF-β在细胞内的信号转导分子,有关Smad6和Smad7在胰腺癌组织中是否有表达改变,目前报道尚少且结论不一.目的:研究Smad6和Smad7在胰腺癌组织中的表达及其与肿瘤临床病理特征的关系,探讨两者在胰腺癌发生、发展中的可能作用.方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测17例胰腺癌和6例正常胰腺组织中Smad6和Smad7 mRNA的表达.结果:胰腺癌组织中Smad6和Smad7 mRNA的表达量分别为1.15±0.51和1.44±0.84,显著高于正常胰腺组织的0.47±0.18和0.39±0.29(P＜0.05),两者的表达与患者的性别、年龄以及肿瘤的TNM分期和分化程度均无相关性.结论:Smad6和Smad7在胰腺癌组织中存在过表达,两者可能作为癌基因参与了胰腺癌的发生、发展过程.     

Smad 4、Smad 6、Smad 7在胰腺癌中的改变及其相互关系

目的研究Smad4、Smad6和Smad7在胰腺癌组织中的改变及其相互关系。方法采用半定量RT-PCR法分别检测了17例胰腺癌和6例正常胰腺组织中Smad4、Smad6和Smad7的mRNA表达情况。结果5例胰腺癌组织不表达Smad4,占29.4%;胰腺癌组织中Smad6和Smad7的表达水平分别为1.15±0.51和1.44±0.84,正常胰腺组织S mad6和Smad7的表达水平分别为0.47±0.18和0.39±0.29,两者相比有统计学意义(P<0.05);Smad6和Smad7的表达水平和Smad4表达无相关性。结论Smad4纯合性缺失在胰腺癌中的发生率约为30%,在胰腺癌的发病机制中占有值得重视的地位;Smad6和Smad7在胰腺癌组织中存在过表达现象,可能是导致胰腺癌发生的原因之一。     

Smad3 and Smad3 Phosphoisoforms Are Prognostic Markers of Gastric Carcinoma

Background

The transforming growth factor-β/Smads signaling pathway plays an important role in tumorigenesis and progression in cancer, and may closely be related to the biological behaviors of some malignant tumors, such as gastric carcinoma. In this study, we investigated the roles of Smad3 and Smad3 phosphoisoforms in the prognosis of gastric carcinoma.

Methods

We investigated the expressions of Smad3, pSmad3C(S423/425), pSmad3L(T179), pSmad3L(S204), and pSmad3L(S213) in tumor tissue microarrays of 442 gastric carcinoma patients who underwent curative surgery using immunohistochemistry and assessed their correlation with clinical outcome.

Results

Positive Smad3 expression was observed in 33.5 % of gastric carcinoma. The rates of positive Smad3 phosphoisoforms expression varied according to the location of phosphorylation within Smad3: pSmad3C(S423/425) 28.5 %, pSmad3L(T179) 5.9 %, pSmad3L(S204) 1.8 %, and pSmad3L(S213) 20.8 %. Positive Smad3 expression was associated with diffuse type (p = 0.003), poorer histologic differentiation (p = 0.005), more frequent lymph node metastasis (p = 0.001), and higher AJCC stage (p = 0.006). Multivariate analyses revealed that Smad3 expression (p = 0.041), pSmad3L(T179) expression (p = 0.011), pSmad3L(S213) expression (p = 0.003), and American Joint Committee on Cancer (AJCC) stage were independent predictors of shorter disease-free survival. Smad3 expression (p = 0.033), pSmad3L(T179) expression (p = 0.012), pSmad3L(S213) expression (p = 0.005), and AJCC stage were also independent predictors of shorter overall survival. pSmad3C(S423/425) expression tended to show favorable influences on both disease-free survival (p = 0.134) and overall survival (p = 0.232).

Conclusions

Smad3, pSmad3L(T179), and pSmad3L(S213) expression might be independent predictors of both shorter disease-free survival and shorter overall survival in gastric carcinoma patients after curative surgery, and might help clinicians identify patients at high risk of recurrence.     

转化生长因子-β1、Smad3、Smad4和Smad7在结直肠癌发生中的作用

结直肠腺瘤-腺癌序列是目前公认的结直肠癌发生学说，但关于结直肠腺瘤，特别是高危型结直肠腺瘤中转化生长因子（TGF）-β1通路蛋白表达的临床研究较少。目的：探讨TGF—β1、Smad3、Smad4和Smad7在结直肠癌发生中的作用。方法：选取2000年8月-2006年12月六安市人民医院结直肠息肉标本110例（包括腺瘤性和非腺瘤性息肉）、结直肠癌40例和正常结直肠组织20例，以免疫组化染色检测TGF—β1、Smad3、Smad4和Smad7在各组中的表达．并分析高危型腺瘤中TGF-IM、Smad3、Smad4和Smad7表达与临床病理特征的关系。结果：TGF-IM、Smad3、Smad4、Smad7在息肉组、结直肠癌组和对照组中的表达有显著差异（P〈0．05），其表达与高危型腺瘤患者的临床病理特征均不相关。高危型腺瘤和DukesA期结直肠癌中TGF-IM、Smad3、Smad7的表达有显著差异（P〈0．05），而Smad4表达无显著差异。结论：TGF—β1通路可能参与了结直肠癌的发生过程，TGF—β1、Smad3和Smad7可能在结直肠腺瘤的癌变早期起作用。     

Smad7与肝纤维化

转化生长因子-β1(TGF-β1)在肝纤维化形成过程中具有重要作用.Smad蛋白家族是TGF-β细胞内信号转导的重要分子,其中Smad7能够抑制TGF-β信号转导通路,介导细胞内负反馈,从而阻断TGF-β介导的肝纤维化.此文就Smad7抑制肝纤维化机制作一综述.     

外源Smad7基因对肝星状细胞Smad7 mRNA及蛋白表达的影响

目的观察外源Smad7基因能否有效转染肝星状细胞及其对Smad7 mRNA和蛋白表达的影响。方法构建鼠Smad7真核表达重组质粒，脂质体介导转染HSC—T6细胞，以RT—PCR和Western blot检测正常对照组、空质粒组及转染组中Smad7表达情况。结果Smad7真核表达质粒构建成功；外源Smad7体外转染肝星状细胞后，Smad7 mRNA和蛋白水平均显著上调，Smad7转染组与正常对照、空质粒组比较：Smad7 mRNA表达显著增加（P=0．009，0．011），蛋白水平显著上调（P=0．020，0．026），正常对照组、空质粒组Smad7 mRNA和蛋白水平表达差异无统计学意义（P=0．944，0．644）。结论Smad7真核表达质粒构建成功，外源Smad7基因可有效转染肝星状细胞，并显著上调Smad7 mRNA和蛋白水平。