氟对体外器官培养的人牙胚凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响

目的 通过研究氟对凋亡抑制基因Bc1-2表达的影响,探讨氟在牙釉质发育中的作用机制。方法 采用体外牙胚器官培养方法及免疫组化技术,研究低浓度(10μg·L~(-1))和高浓度(25μg·L~(-1))氟对分泌前期的造釉器Bc1-2蛋白表达的影响。结果 氟处理组Bc1-2蛋白的表达明显减弱,氟对分泌前期的造釉器Bc1-2蛋白的表达具有显著抑制作用。结论 氟可能通过影响抗凋亡基因的表达而诱导凋亡的发生,导致牙齿发育异常。     

小鼠磨牙牙胚发育过程中Versican之多糖链的时空变化

目的检测versican之多糖链在小鼠磨牙牙胚发育过程中的时空变化。方法取胎龄分别为E11.5,E12.0,E13.5,E15.0,E16.5和E18.5 d的ICR胎鼠头部,常规组织学处理,制备5μm厚矢状或冠状切片,用免疫组织化学方法检测versican核心蛋白与其硫酸软骨素多糖链在下颌第一磨牙牙胚组织中的时空表达。结果从小鼠下颌第一磨牙牙胚开始发生到钟状晚期,versican核心蛋白与4-硫酸软骨素在牙源性上皮及其衍生组织共表达。在牙乳头间充质细胞中versican核心蛋白开始与6-硫酸软骨素共表达,从钟状早期4-硫酸软骨素开始在内釉细胞深层的牙乳头间充质细胞间表达,且其与6-硫酸软骨素呈互补表达模式。结论 versican之硫酸软骨素多糖链在牙胚发生过程中硫酸化模式呈现时间-空间特异性改变,这种特异性改变可能与小鼠磨牙牙胚的形态发生以及细胞增殖与分化密切相关。     

应用小鼠胚胎体外培养技术研究氟的胚胎发育毒性

目的　探讨无机氟的发育毒性及机理。方法　妊娠 8.5d大鼠胚胎于体外旋转培养系统中给予不同剂量的氟化钠 ,培养 48h后 ,测定卵黄囊直径 ,胚胎体长和头长 ,用Maele Fabry形态学评分系统进行器官形态评分 ,评价胚胎器官分化发育情况。结果　随着氟剂量的增加 ,反映胚胎生长发育和器官分化的各项指标呈现出下降趋势 ,有一定的剂量效应关系。其中 ,卵黄囊及血管网发育分化对氟较敏感 ,剂量为 5 .0mg·L- 1 时与对照比较已有显著性差异。大于或等于 1 0 .0mg·L- 1 时对多数指标影响显著 ,Maele Fabry形态学总评分与对照相比呈现显著差异。胚胎畸形发生率在剂量为 1 5 .0mg·L- 1 明显升高 ,主要表现为神经管闭合不全和体翻转不全。结论　无机氟有潜在的致畸性和发育毒性     

CD44在小鼠磨牙牙胚发育中的时空表达

目的：观察CD44在小鼠磨牙牙胚发育表达的时空顺序及分布,探讨CD44对牙齿发育的形态发生和细胞分化的作用及意义．方法：采用免疫组织化学方法,观察CD44在牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状形态发生期、分化期、分泌期、成熟期的表达．结果：在牙胚发育的蕾状期、帽状期,CD44在口腔上皮、牙板上皮、成釉器、牙乳头、牙囊呈弱阳性表达或无表达．在钟状期CD44在口腔上皮、牙板上皮强阳性表达;外釉上皮、星网状层、成牙本质细胞弱阳性表达;分泌期的成釉细胞和牙囊阳性表达．钟状分化期、分泌期、成熟期,中间层细胞CD44强阳性表达．结论：CD44参与牙齿形态发生及细胞分化,推测其在釉质矿化以及牙根和牙周组织的形成中起重要作用．     

小鼠胚胎体外发育的影响因素分析

为了建立适宜的胚胎体外培养体系，本试验对小鼠２－细胞胚胎体外发育及其影响因素进行了研究。结果表明，２－细胞胚胎在供试的三种培养基中均可进一步发育；血清、ＣＯ２气体纯度、培养基水的纯度等均可影响到胚胎的发育，从而优化了胚胎体外培养的实验室条件和方法。     

慢性氟中毒对小鼠切牙胚内釉上皮TGF-betal表达的影响

目的：观察慢性氟中毒对小鼠切牙胚内釉上皮表达TGF-betal的影响，探讨TGF-betal在氟牙症发生机制中的作用。方法：给小鼠分别喂以含0、50、100ppmNaF的饮水，6周后免疫组化观察结果。结果：图像分析显示加氟组TGF-betal的表达水平低于空白组。结论：氟可能通过抑制TGF-betal的表达干扰内釉上皮的分化和基质分泌，导致氟牙症的发生。     

过量氟对雌性小鼠生殖及其子鼠发育毒性的影响

目的 探讨微量元素氟在妊娠前后对母子两代产生的综合影响。方法 成年雌性小鼠分别在孕期及孕前期始自由饮用200mg/L含氟水，观察其交配率、受孕率、胎（仔）鼠体重变化，母子两代甲状腺形态与功能的变化。结果 各组小鼠的交配率及受孕率差异无显著性（P＞0．05）；实验组各期胎仔鼠的体重大于对照组，以出生后7d差别最明显（P＜0．001）；孕期摄氟组母子两代的血T4水平均高于对照线（P＜0．01或0．001）；实验组甲状腺形态与功能的变化相一致。结论 高氟对雌性小鼠的生殖和胎仔鼠的发育存在一定的毒性影响，对母子两代甲状腺形态与功能的影响与子代的发育有关。     

体外器官培养人牙胚的实验观察

目的 建立人牙胚发育的体外器官培养模型。方法 将3.5个月胎龄人胚胎的乳牙牙胚置于微孔滤膜上利用BGJb培养基培养,常规组织学观察。结果 人乳牙牙胚在体外培养期间继续发育,牙齿形成细胞(成釉细胞和成牙本质细胞)分化程度进—步提高。结论 这种培养条件可以保持人牙胚的体外发育。     

序贯培养对小白鼠胚胎体外发育的影响

目的:探索序贯培养技术对小白鼠胚胎体外发育的影响。方法:将 2 -细胞期的小鼠胚胎随机分为序贯培养组与传统培养组进行培养 ,观察分析两组的 8-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率及囊胚形成率。结果:序贯培养组 8-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率及囊胚形成率分别为 70 .5 %、6 8.2 %、6 5 .9% ,传统培养组分别为 4 5 .7%、4 5 .7%、34.3%。两组比较 ,序贯培养组高于传统培养组 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :采用适当的培养液进行序贯培养 ,更适合小白鼠胚胎的体外发育     

乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的Whitten氏培养液对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎分别进行体外培养，研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含0、0．1％、0．5％、1．0％、1．5％、2．0％、3．0％、5．0％、10．0％乙醇的Whitten氏培养液对2细胞胚胎进行培养，观察研究小鼠2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含1％和3％乙醇的Whitten氏培养液分别对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎进行培养。结果：含低浓度乙醇（1％以下）的培养液对8细胞胚胎和桑葚胚的囊胚形成有促进作用，而在2细胞和4细胞胚胎中则影响不明显。含高浓度乙醇（≥3％）的培养液则对各期胚胎有不同程度的抑制作用，但随着胚胎发育其对乙醇的耐受力将逐渐增强。     

L型钙离子通道在体外鼠牙胚发育中的表达

目的观察L型钙离子通道在体外培养的牙胚发育过程中表达的时空特异性。方法取20只18 d胎龄的ICR孕鼠下颌第一磨牙牙胚,用Trowell培养系统进行培养。分别培养4 d、7 d,用小鼠抗Cav1.1单克隆抗体、兔抗Cav 1.2、Cav 1.3、Cav 1.4多克隆抗体进行免疫组织化学染色,光镜下观察在小鼠牙胚发育的不同阶段L型钙离子通道各种亚型的表达情况。结果 Cav 1.2和Cav 1.3在E 18 d、培养4 d、培养7 d时在不同的部位都有表达,但表达的强弱不同。未见有Cav 1.1和Cav 1.4的表达。结论 L型钙离子通道在牙胚发育过程中的表达具有时空特异性。     

人牙胚体外器官培养模型的建立

目的 :建立人牙胚体外器官培养模型 .方法 :分泌前期人牙胚采用Trowell型支架培养法 ,RPMI 16 4 0培养基(含 2 0 0 g·L-1FBS ,2 0 0mg·L-1谷氨酰胺 ,2 0 0mg·L-1L 抗坏血酸 ,1× 10 -7mol·L-1维甲酸 ,10 0kU·L-1青霉素 ,10 0kU·L-1链霉素 ) ,在 37℃ ,5 0mL·L-1CO2 +95 0mL·L-1空气条件下进行培养 ,每 4 8h更换一次培养基 .体外培养 .2 ,4 ,6和 8d随机抽取牙胚进行组织学观察 .结果 :培养的牙胚组织结构关系与对照组一致 ,牙尖部形态进一步突出 ,细胞形态典型 .在 8d时 ,牙尖之间部分造釉器细胞和成牙本质细胞开始出现坏死 .结论 :为体外研究人类牙齿正常发育及各种因素对牙齿发育的影响提供了一个实用的模型     

氟化物对体外培养的小鼠成骨细胞增殖能力的影响

目的:观察氟化钠对体外培养的成骨细胞的增殖能力的影响。方法:采用四唑盐(MTT)比色法,观察不同剂量氟化钠在不同时间对体外培养的小鼠成骨细胞增殖活力的影响。结果:剂量为2.5、5.0mg/L的氟化钠作用2d时,可使成骨细胞增殖活力较对照组明显增强;≥20mg/L时随着氟化钠剂量的增加和作用时间的延长,成骨细胞的增殖活力明显减弱。结论:氟化钠对成骨细胞的增殖呈现双向调节,且随时间的延长对细胞增殖能力的抑制逐渐增强。     

EMMPRIN在小鼠下颌第一磨牙形态发生及硬组织形成中的功能性作用

目的研究小鼠下颌第一磨牙中后期牙胚发育过程中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）的表达情况及其对牙齿细胞外基质分泌和矿化的影响。方法采用免疫组织化学方法检测EMMPRIN在牙胚发育各个阶段中的表达定位;应用体外牙胚器官培养法以及抗体阻断的方法观察EMMPRIN功能性缺失对于牙胚形态发生的影响;采用Real—TimePCR技术检测EMMPRIN相关基因的表达变化。结果EMMPRIN蛋白特异性地表达于牙胚的帽状期、钟状期以及其后的分泌期;阻断体外培养牙胚中EMMPRIN的蛋白活性可导致牙釉质形成障碍,同时下调牙胚培养物中EMMPRIN相关基因MMP-9、MMP．13、MMP．20、ALPL、ameloblastin、amelogenin和enamelinmRNA的表达。结论EMMPRIN的表达贯穿于牙胚发生发育的多个阶段;EMMPRIN可能通过调控金属基质蛋白酶和（或）相关釉质基质蛋白而在成釉细胞的分化及釉质基质的分泌、矿化过程中发挥关键作用。     

EMMPRIN在小鼠磨牙牙胚形态发生过程中的表达

目的 研究细胞外基质金属蛋白酶诱导因子EMMPRIN（basigin/CD147）在小鼠磨牙牙胚发育各阶段的表达,探讨其可能的生物学作用.方法 选择不同胎龄（E11、E13、E14、E15、E16、E18）和出生后1 d （P1）小鼠作为实验对象.Real-Time PCR定量检测小鼠牙胚发育各阶段下颌（E11和E13）及牙胚（E14、E15、E16、E18和P1）组织中EMMPRIN mRNA表达.原位杂交和免疫荧光染色观察EMMPRIN mRNA和蛋白在牙胚组织及相应发育阶段的颌面部发育器官中的定位表达.结果 Real-Time PCR结果显示,E13胎鼠下颌标本中EMMPRIN mRNA的表达约为E11胎鼠1.6倍（P〈0.01）; P1小鼠牙胚组织中EMMPRIN mRNA表达约为E14胎鼠的2倍（P〈0.01）;EMMPRIN mRNA表达随牙胚组织发育呈现递增趋势.原位杂交和免疫荧光染色观察显示,在E14胎鼠牙胚组织中EMMPRIN mRNA和蛋白表达定位一致,但E15、E16、E18胎鼠 EMMPRIN mRNA与蛋白表达定位有所不同;相应发育时段胎鼠下颌骨的Meckel软骨（E14）、视网膜（E15）、大脑血脑屏障（E15）及颚骨骨化中心（E16）中EMMPRIN 蛋白表达均呈现强荧光信号.结论 EMMPRIN的表达贯穿于早期牙胚发生和发育的多个阶段,但牙胚发育帽状期和钟状期阶段EMMPRIN mRNA与蛋白表达并不完全一致.EMMPRIN有可能以外分泌或旁分泌方式,通过调控上皮间质的相互作用参与牙胚发育及形态发生.     

小鼠原始生殖细胞分离培养方式和生物特性研究

目的：探索一种简单高效的分离、培养小鼠原始生殖细胞（PGCs）的方法,为小鼠模型提供充足的PGCs来源。方法体外分离小鼠12.5 dpc胚胎生殖嵴,剪碎后用含血清、胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂、卵泡刺激素、重组表皮生长因子的α-M EM培养基进行组织块贴壁培养;于倒置显微镜下观察细胞形态,采用流式细胞术检测阶段性特异性胚胎抗原,采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）、细胞免疫荧光等方法检测干细胞的多能性基因Oct4及减数分裂Ⅰ期的几个特异性基因的表达。结果体外分离培养的小鼠 PGCs具有良好的细胞形态、极强的增殖能力,SSEA-1表达阳性,SSEA-4表达阴性,同时检测到Oct4、Stra8、Vasa、SCP3、ZP3表达均为阳性。结论利用该实验方法能培养出高纯度、具有良好干性及极强增殖能力的小鼠PGCs ,并使该细胞进入减数分裂。     

IVF实验室质控中影响鼠胚体外培养的因素分析

目的 :建立适宜的小鼠胚胎体外培养体系 ,探讨CO2 气体纯度和培养器皿对小鼠胚胎体外发育的影响。 方法 :采用微滴法培养 2 细胞鼠胚 ,以 4～ 8 细胞鼠胚和桑椹胚形成率作为判断培养效果的指标。 结果 :普通纯度CO2 气体培养组的 4～ 8 细胞形成率、桑椹胚形成率分别为 12 .5 %、0 .0 % ,高纯度CO2 气体培养组分别为6 7.6 %、4 4 .1% ,两组比较差异有统计学意义 (P均 <0 .0 0 1)。国产玻璃器皿培养组的 4～ 8 细胞形成率、桑椹胚形成率分别为 74 .4 %、5 3.5 % ,进口一次性器皿培养组分别为 85 .7%、6 2 .8% ,两组比较差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :高纯度CO2 气体更适宜鼠胚的体外发育 ;国产玻璃器皿与进口一次性器皿对鼠胚体外发育的效果相近