白花蛇舌草对小鼠活体腹水H22肝癌细胞及T细胞的影响

【目的】观察白花蛇舌草对小鼠腹水H22肝癌细胞形态学及腹水CD4 、CD8 T细胞表达的影响。【方法】将SPF级昆明种小鼠随机分成4组,每组10只,分别为模型组、白花蛇舌草组(剂量为25 g/kg)、党参对照组(25 g/kg)、热休克处理组;均采用活体腹水H22肝癌细胞腹腔移植法复制模型;采用涂片、瑞氏—姬姆萨染色及免疫组织化学标记方法观察各组荷瘤小鼠腹水H22肝癌细胞形态学变化及腹水CD4 、CD8 T细胞的表达。【结果】白花蛇舌草组及热休克处理组小鼠活体腹水H22肝癌细胞变形较为严重,胞膜不完整、发泡;部分细胞核见偏移或固缩。白花蛇舌草组腹水CD4 及CD8 T细胞表达均呈增高趋势,党参对照组及热休克处理组分别以CD4 和CD8 T细胞表达为主。【结论】白花蛇舌草能一定程度抑杀小鼠活体腹水H 22肝癌细胞,其机理可能与提高荷瘤小鼠的T细胞免疫功能及具有一定的细胞毒作用有关。     

白花蛇舌草对H22肝癌细胞热休克蛋白70表达的影响

【目的】观察H22肝癌细胞热休克蛋白70(HSP70)表达及清热解毒中药白花蛇舌草对其表达的影响。【方法】以培养的H22肝癌细胞腹腔接种于小鼠使小鼠致瘤,然后将荷瘤小鼠分为模型组、白花蛇舌草组(剂量为25 g/kg)、党参对照组(剂量为25 g/kg)及热休克处理组共4组。采用免疫组化标记法检测各组活体腹水H22肝癌细胞HSP70的表达情况。【结果】白花蛇舌草组及热休克处理组H22肝癌细胞HSP70的表达显著性高于模型组(P<0.05或P<0.01);党参对照组H22肝癌细胞的HSP70表达与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。【结论】白花蛇舌草可能通过诱导H22肝癌细胞HSP70表达,增强其免疫原性而发挥抗肿瘤作用。     

六味地黄丸对小鼠移植性肝癌自杀基因治疗的增效作用

【目的】观察六味地黄丸对小鼠皮下移植性肝细胞癌自杀基因治疗的增效作用,探讨建立中西医结合肿瘤自杀基因联合治疗方案的可行性。【方法】培养病毒包装细胞PT67/tk,病毒上清感染肝细胞癌细胞株H22后用G418筛选2周,获得抗性细胞克隆,命名为H22/tk并进行体外丙氧鸟苷(GCV)杀伤试验;证明杀伤活性后,将H22/tk与野生型H22按1∶4的比例混合后接种于昆明种小鼠皮下组织内造模,分为模型对照组、自杀基因治疗组、六味地黄丸治疗组和联合治疗组(N=20),并设正常对照组(N=10);六味地黄丸治疗从接种第2天起共15 d,GCV治疗从接种第6天起共11 d,观察疗效。【结果】体外实验中GCV对H22/tk肿瘤细胞具有明显的杀伤效应,表明体外病毒感染肝癌细胞成功,病毒携带的外源性自杀基因已表达且具有生物学活性。体内实验中于接种肿瘤细胞后第6天各组能触摸到肿瘤,成瘤率100%。自杀基因联合六味地黄丸治疗对小鼠移植性肝细胞癌生长速度具有明显抑制作用,以瘤块质量计算,其抑瘤率为63.0%(P<0.05);而单纯六味地黄丸治疗和单纯自杀基因治疗抑瘤率分别为46.3%和37.4%,但两者与模型组比较差异均无显著性意义。病理检查:各治疗组肉眼可见肿瘤体积均较模型对照组肿瘤体积小,以联合治疗组更明显。镜下可见各治疗组肿瘤细胞密度相对较低,肿瘤周围有较多纤维结缔组织增生及炎症细胞浸润,联合治疗组更明显,各组间差别以炎症细胞浸润最突出。【结论】六味地黄丸对小鼠移植性肝癌自杀基因治疗具有一定的增效作用,其疗效优于单纯自杀基因疗法或单纯六味地黄丸治疗。     

枸杞多糖对实验性肝癌小鼠肿瘤细胞FasL表达的影响及其抗肿瘤作用机制

【目的】观察枸杞多糖（LBP）对实验性肝癌小鼠肿瘤细胞死亡分子Fas配体（FasL）表达的影响,探讨其抗肿瘤作用机制。【方法】选用昆明种小鼠,随机分为模型组,LBP低、高剂量组（剂量分别为0．625、1．250g&#183;kg^-1&#183;d^-1）．各组均采用右侧腋下接种H22肝癌腹水型细胞复制荷瘤模型,从第3天开始按设计剂量给药,连续14d。采用苏木素一伊红（HE）染色观察各组肿瘤细胞密度、细胞核分裂计数及间质淋巴细胞浸润情况,采用免疫组化法观察各组小鼠肿瘤细胞FasL表达情况。【结果】LBP低、高剂量组均可显著降低肿瘤细胞核分裂计数（P〈0．05）;LBP高剂量组可升高肿瘤间质淋巴细胞浸润程度（P〈0．05）,HE染色显示在肿瘤边缘组织内见多量淋巴细胞浸润。LBP低、高剂量组均可显著降低小鼠肿瘤细胞FasL阳性表达指数（P〈0．05）;免疫纽化染色显示模型组FasL表达强阳性,LBP低刺量组部分肝癌细胞内FasL表达阳性,FasL仅在LBP高剂量组少量肝癌细胞中有表达。【结论】LBP抗实验性肝癌的效应可能与其能抑制FasL表达,减少免疫活性细胞凋亡有关。     

实脾消水乳膏对肝癌H22腹水瘤小鼠免疫调节作用的研究

目的:探讨实脾消水乳膏(SPX)对肝癌H22腹水瘤小鼠腹水形成的防治及免疫调节作用。方法:建立肝癌H22腹水瘤模型,24只小鼠随机分为4组,正常组、模型组、氢氯噻嗪组及SPX组,连续给药14d。测量小鼠腹围及腹水量,比较各组小鼠各脏器重量,检测外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞、调节性T细胞(Treg)数量及血清白介素-2(IL-2)、IL-10水平变化。结果:模型组小鼠体重及腹围较正常组增长迅速,大量腹水生成,胸腺重量减轻。流式结果显示CD4+T淋巴细胞减少,Treg细胞增加。血清IL-2水平降低、IL-10表达增加。与模型小鼠相比,SPX组小鼠体重腹围增长缓慢,腹水量减少,胸腺重量增加,血红蛋白量增加,淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞比例增加,IL-2表达升高,而对CD8+T淋巴细胞、Treg及IL-10表达未见调节作用。结论:实脾消水乳膏能够减少肝癌H22腹水瘤小鼠的腹水量,对肝癌H22腹水瘤小鼠的免疫功能具有正向调节作用。     

六味地黄丸对小鼠移植性肝癌自杀基因治疗增效作用的病理学研究

【目的】探讨六味地黄丸对小鼠移植性肝癌HSVt-k/GCV自杀基因治疗增效作用的病理学机制。【方法】昆明种小鼠90只,随机分为5组:正常对照组、模型对照组、六味地黄丸治疗组(剂量为10 g.kg-1.d-1)、自杀基因治疗组(腹腔注射丙氧鸟苷100 mg.kg-1.d-1)、联合治疗组;选用H22与H22/tk细胞株皮下接种建立小鼠荷肝癌模型,以自杀基因疗法联合六味地黄丸进行治疗并观察疗效;对肿瘤组织进行病理学观察和半定量分析;采用免疫组化技术及原位末端标记(TUNEL)技术观察肿瘤细胞增殖核抗原(PCNA)的表达及凋亡情况。【结果】HSVt-k/GCV自杀基因系统联合六味地黄丸治疗较单独应用HSVt-k/GCV系统或六味地黄丸能更显著地抑制肿瘤生长;免疫组化及凋亡TUNEL染色结果表明联合治疗组对肿瘤细胞增殖的抑制及对肿瘤细胞凋亡的诱导作用与模型对照组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。【结论】六味地黄丸对实验性肝癌的自杀基因治疗具有增效作用,其机制可能与六味地黄丸抑制了自杀基因治疗过程中肿瘤细胞的加速增殖有关,也与协同促进自杀基因治疗诱导的肿瘤细胞凋亡有关。     

小鼠肝癌细胞(H22)源外泌体的体内抗肝癌作用研究

目的在荷瘤动物模型观察小鼠肝癌细胞（H22）来源的外泌体（exosomes）激发宿主抗肝癌免疫应答的效应。方法用自行分离纯化的小鼠肝癌细胞H22源外泌体免疫小鼠,然后给小鼠皮下注射H22肿瘤细胞,观察肿瘤的生长状况。用MTT法检测小鼠脾细胞增殖情况和细胞毒活性;用免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞浸润情况。结果该外泌体使肿瘤出现时间延迟,肿瘤生长缓慢,小鼠生存率提高。促进脾淋巴细胞增殖并增强其细胞毒活性,促进CD4^＋和CD^8＋T细胞活化。结论小鼠肝癌细胞（H22）源外泌体能诱导抗肿瘤应答,有效地诱导特异性的杀伤肿瘤细胞活性,有针对亲本细胞的免疫保护作用。     

多种中药单体对人结肠癌HT-29细胞株TLR4 mRNA表达和IL-8分泌的影响

【目的】观察不同中药单体对人结肠癌细胞株HT-29细胞Toll样受体信使核糖核酸(TLR4 mRNA)表达及白细胞介素8(IL-8)分泌的影响。【方法】选用人结肠癌细胞株HT-29细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HT-29细胞的TLR4 mRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测HT-29细胞的IL-8分泌。【结果】黄芪甲苷组和大黄素组可抑制干扰素-γ(IFN-γ)诱导的TLR4 mRNA表达,而姜黄素组、柚皮苷组和栀子苷组则对TLR4 mRNA表达无显著性影响;大黄素能显著性降低IFN-γ 脂多糖(LPS)所诱导的HT-29细胞IL-8的产生。【结论】大黄素抗炎细胞分子机制可能与其能抑制IFN-γ诱导的HT-29细胞TLR4 mRNA表达和IFN-γ LPS诱导的IL-8分泌有关。     

转染肿瘤细胞总RNA的树突状细胞联合CIK细胞抗小鼠肝癌作用的实验研究

目的探讨转染小鼠肝癌H22细胞总RNA的树突状细胞(DC)疫苗体外抗小鼠肝癌的免疫作用。方法提取小鼠四肢长骨骨髓,在rmGM-CSF和rmIL-4体外刺激下增殖分化为DC。制备小鼠脾淋巴细胞,在体外经rmIFN-γ、anti-CD3、rmIL-2和rmIL-1b诱导成为细胞因子诱导的杀伤性细胞(CIK细胞)。制备肝癌H22细胞总RNA,体外转染DC,流式细胞仪检测转染前后的DC表面分子的表达情况。将转染H22细胞总RNA的DC和CIK细胞混合培养制备成为效应细胞,LDH释放法测定效应细胞对小鼠H22细胞、S180细胞的杀伤活性。结果经H22细胞总RNA转染后的DC,其MHCⅠ类分子、MHCⅡ类分子及CD83、CD86表达率明显增高,CD14表达率降低(P<0.05)。转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞的杀伤率高于其对S180细胞的杀伤率(P<0.05)。转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞的杀伤率高于其他各组效应细胞对H22细胞的杀伤率(P<0.05)。结论转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞具有高效而特异性的体外抗小鼠肝癌免疫作用。     

Study on Anti-mouse Hepatocellular Carcinoma Effect of Cytokine-induced Kill Cells Activated by Dendritic Cells Transfected With Mouse Hepatocellular Carcinoma Total RNA in vitro

目的 探讨转染小鼠肝癌H22细胞总RNA的树突状细胞(DC)疫苗体外抗小鼠肝癌的免疫作用.方法 提取小鼠四肢长骨骨髓,在rmGM-CSF和rmIL-4体外刺激下增殖分化为DC.制备小鼠脾淋巴细胞,在体外经rmIFN-γ、anti-CD3、rmIL-2和rmIL-1b诱导成为细胞因子诱导的杀伤性细胞(CIK细胞).制备肝癌H22细胞总RNA,体外转染DC,流式细胞仪检测转染前后的DC表面分子的表达情况.将转染H22细胞总RNA的DC和CIK细胞混合培养制备成为效应细胞,LDH释放法测定效应细胞对小鼠H22细胞、S180细胞的杀伤活性.结果 经H22细胞总RNA转染后的DC,其MHC Ⅰ类分子、MHC Ⅱ类分子及CD83、CD86表达率明显增高,CD14表达率降低(P＜0.05).转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞的杀伤率高于其对S180细胞的杀伤率(P＜0.05).转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞的杀伤率高于其他各组效应细胞对H22细胞的杀伤率(P＜0.05).结论 转染H22细胞总RNA的DC激活的CIK细胞对H22细胞具有高效而特异性的体外抗小鼠肝癌免疫作用.     

活血化瘀中药抗肿瘤血行转移的思路探讨

分析活血化瘀方法对恶性肿瘤血行转移的具体作用及其可能机制，活血化瘀方药可以改善肿瘤患者血液高粘状态，防止肿瘤栓子的形成，对脱离原发瘤并移进行进入血液循环的肿瘤细胞有直接或间接的抑杀作用，能够防治恶性肿瘤的血行转移。肿瘤转移异常复杂，涉及到许多因素，但按中医辨证论治的原则，具体分析肿瘤发展不同阶段血瘀证候证型的变化特点，正确选用活血化瘀方药，可以获得满意的疗效，取得一致的研究结论。     

紫花地丁和蒲公英的不同比例配伍对其体外抗菌活性的影响

【目的】通过对按不同比例配伍的紫花地丁和蒲公英体外抗菌活性的对比分析,探讨两药合用的最佳比例以及影响因素。【方法】采用琼脂二倍稀释法测定药物的最低抑菌浓度(MIC),采用肉汤稀释法测定药物的最低杀菌浓度(MBC),并绘制杀菌曲线;分析次抑菌浓度药物诱导细菌耐药情况,观察对各组药物体外抗菌活性影响的因素。【结果】紫花地丁和蒲公英按照质量比1∶4的比例配伍,对4种革兰氏阳性球菌和4种革兰氏阴性杆菌均有较好的抑菌作用,且对大肠埃希氏菌和克雷伯氏菌表现出一定的杀菌作用(50%ρMB/50%ρMI和90%ρMB/90%ρMI均为2);绘制的杀菌曲线表明,各组药物对不同菌株的杀菌作用均未呈现典型的杀菌曲线,但与对照组比较,均显现一定的抑菌趋势。细菌接种量、血清量以及pH值的变化对各组配伍药物的体外抗菌作用无明显影响。【结论】紫花地丁和蒲公英按照质量比1∶4配伍使用时体外抗菌活性较强。     

灵芝多糖对前列腺素E2抑制小鼠脾细胞增殖及IL-1α,IL-2 mRNA表达的拮抗作用

[目的]观察灵芝多糖(GLB)对前列腺素E2(PGE2)抑制小鼠脾细胞增殖及IL-1α、IL-2 mRNA表达的拮抗作用.[方法]采用混合淋巴细胞培养反应作为实验模型,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖程度,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测IL-1α及IL-2 mRNA的表达水平.[结果]PGE2连续作用48 h后,脾细胞增殖反应受到不同程度的抑制作用,当PGE2浓度在10 μmol/L以上时差异有显著性意义(P＜0.01);固定PGE2的浓度为20 μmol/L,并合用不同浓度的GLB(25、50、100、200 mg/L),当GLB为100 mg/L以上浓度时可部分对抗PGE2(20 μmoL/L)的抑制作用(P＜0.05);培养8 h及12 h后,PGE2(20 μmol/L)可抑制IL-1α及IL-2 mRNA的表达,GLB为100 mg/L以上浓度时可部分拮抗PGE2的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01).[结论]灵芝多糖可部分拮抗前列腺素E2对小鼠脾细胞增殖及IL-1α和IL-2 mRNA表达的抑制作用.     

连黛片药物血清对人胃癌细胞株MGC803的作用

目的 探讨比较中药连黛片及其主要单体成分在诱导癌凋亡及引起DNA损伤方面的不同药理作用。方法 用复方连黛片的大鼠药物血清,以及黄连的主要药效成分小檗碱、青黛的主要药效成分靛玉红分别作用于人胃癌细胞株MGC803,观察药物对细胞生长和凋亡的影响,及其对细胞DNA损伤的作用。结果 边黛片血清高低剂量组及小檗碱各剂量组细胞与相应对照组细胞生长形态相比较差异较大;甲基绿－派诺宁染色后,细胞表现出典型的凋亡形态;对细胞生长率均有明显抑制。靛玉红各浓度组对细胞生长抑制不明显。琼脂糖凝胶电泳分析表明：小檗碱各浓度组可使细胞DNA裂成大自然;连黛片血清各浓度组对MGC803细胞染色质DNA的损伤作用较小檗碱各浓度组小;靛玉红在实验浓度下对细胞的DNA无损伤作用。结论 中药连黛片大鼠药物血清与小檗碱一样均能抑制癌细胞生长及诱导细胞凋亡,但其作用比小檗碱弱,对DNA的损伤程度也较轻,这可能是连黛片血清组中由于血清影响了细胞对小檗碱的吸收所致。     

枸杞多糖对荷瘤小鼠淋巴细胞亚群及树突状细胞表达的影响

[目的]通过观察枸杞多糖(LBP)对荷瘤小鼠的免疫调整作用,探讨其抗肿瘤的机理。[方法]复制H22荷瘤小鼠模型,LRP高、低剂量(分别为1.25、0.625g·kg-1·d-1)连续灌胃治疗2周后,采用流式细胞仪检测外周血、肿瘤间质中浸润的T淋巴细胞亚群水平和肿瘤间质中树突状细胞(DCs)的数量及CD80表达的变化。[结果]LBP可增加外周血和肿瘤间质浸润的CD4+、CD8+细胞数量,其中外周血中CD4+细胞的增殖作用较CD8+显著,故外周血pCD4+/pCD8+比值轻度升高;并可增加肿瘤间质中浸润的DCs数量及CD80的表达,与T细胞亚群的变化呈现一定的平行关系,但各组间比较无显著性差异。[结论]枸杞多糖抗肿瘤作用机理与其拮抗荷瘤小鼠的免疫低下状态,增加体内CD4+、CD8+细胞数量,增强机体整体的抗肿瘤免疫功能有关。     

华蟾素对肺癌抗癌作用的影响

目的 探讨华蟾素注射液对肺癌抗癌作用的影响。方法 采用尾静脉及腹腔注射给药，观察华蟾素注射液对NIH小鼠的急性毒性；采用华蟾素注射液腹腔注射，观察高中低不同剂量（12．5，10．0，8．0g/kg)对局部肿瘤生长的抑制作用和对生存期的影响及其对自发性肺转移的影响。结果 华蟾素注射液按12.5g/kg静脉或腹腔注射NIH小鼠均未见有明显的毒性反应；华蟾素高，中，低不同剂量对Lewis肺癌小鼠瘤体生长均有抑制作用（与对照组比较，均P＜0．05）；对荷Lewis肺癌小鼠有延长生存期的作用（与对照组比，P＜0．05）；但无显著抑制Lewis肺癌自发转移的作用（与对照组比，P＞0．05）。结论 华蟾素注射液具有较确切的抗肺癌作用，且其毒性较低，对肺癌的临床治疗具有积极意义，值得进一步研究。     

自拟中药复方对耐药性金黄色葡萄球菌的抑菌作用研究

【目的】研究自拟中药复方(由黄芩、连翘、薄荷组成)对耐药性金黄色葡萄球菌的体内、体外抑菌作用。【方法】通过体外对耐药性金黄色葡萄球菌(MRSA)的抑菌实验及体内对MRSA感染小鼠的保护作用,观察自拟中药复方的抑菌作用。【结果】体外实验结果表明:自拟中药复方高剂量对MRSA的最低抑菌浓度是3.25 mg/mL,低剂量的最低抑菌浓度是2.23 mg/mL。体内实验结果表明:黄芩高剂量组(5.20 g.kg-1.d-1)和自拟中药复方低剂量组(5.72 g.kg-1.d-1)均可显著降低耐药性金黄色葡萄球菌感染小鼠的死亡率(P<0.05)。【结论】自拟中药复方对耐药性金黄色葡萄球菌具有一定的抑菌作用。     

麻黄及蜜麻黄超临界萃取物的化学成分比较

【目的】分析比较麻黄及蜜麻黄超临界萃取物的化学成分。【方法】采用超临界CO2萃取技术(SFE-CO2法)从麻黄及蜜麻黄中提取挥发油,并用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分离、鉴定,比较两者化学组成的不同。【结果】生麻黄中的硫酸二乙酯等20种成分在蜜麻黄中没有检出,而在蜜麻黄中检测到羟甲基糠醛等12种不同成分。挥发油得率：麻黄2．1％,蜜麻黄1．0％。【结论】麻黄与蜜麻黄超临界萃取物的化学成分有明显差异。     

亚砷酸对人肺腺癌细胞的体外抑制作用及机制研究

【目的】探讨中药砒霜有效成分亚砷酸的体外抑瘤作用及机理。【方法】以体外培养的人肺腺癌细胞株(LAC)细胞为研究对象,选用对数生长期细胞,培养24 h后,分别加入不同浓度的亚砷酸(0.75、1.0、1.5、2.0 mg/L),并设模型对照组;采用倒置相差显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测LAC细胞的生长抑制率;酶联免疫吸附(ELISA)法检测p53基因的表达变化情况。【结果】各浓度亚砷酸均能使LAC细胞发生凋亡特征性形态改变,能显著性抑制LAC株的增殖,且呈现一定的时间效应关系,并能显著性升高p53基因的含量(均P<0.05或P<0.01)。【结论】亚砷酸抗肺癌的作用可能是通过上调p53基因的表达来诱导LAC肿瘤细胞凋亡,从而抑制LAC细胞的增殖,这可能也是中药砒霜能治疗肿瘤的机理之一。