急性淋巴细胞白血病Ki-67抗原和Bcl-2的表达及临床意义

目的：通过增殖相关抗原Ki-67和抗凋亡蛋白Bcl-2的检测，观察其在急性淋巴细胞白血病（ALL）和慢性淋巴细胞白血病（CLL）中的表达，探讨其与ALL免疫学分型，临床疗效和预后的关系。方法：采用链霉菌抗生物素蛋白-碱性磷酸酶（SAP）免疫组织化学染色的方法，对120例白血病患者的骨髓或外周血进行Ki-67抗原和Bcl-2蛋白的检测。结果：（1）Ki-67抗原在成人ALL中的表达高于其在急性非淋巴细胞白血病（ANLL），CLL中的表达，Bcl-2蛋白在成人ALL中的表达明显低于ANLL，CLL中的表达。（2）在成人ALL各免疫表型中，T细胞，伴有髓系抗原标记的急性淋巴细胞白血病（My^ ALL)的Ki-67和Bcl-2阳性表达率较高。（3）完全缓解（CR）率在Ki-67和Bcl-2两项同时低表达组中最高，在仅一项低表达组中次之，在两项均高表达组中最低。（4）Ki-67高表达组的生存期比低表达组短，且差异有显著性意义。而Bcl-2的表达在两组之间无差异。结论：对成人ALL患者进行增殖相关抗原Ki-67和抗凋亡蛋白Bcl-2的检测，能反映患者肿瘤细胞的增殖活性和凋亡抑制情况，与白血病的类型，临床疗效和预后密切相关。     

线粒体与细胞凋亡

通过近几年对细胞凋亡的研究 ,人们发现线粒体在凋亡后期仍能保持完好的功能结构 ,其在凋亡中的作用日益受到关注。1　凋亡相关基因在细胞内的定位B细胞淋巴瘤 /白血病基因 - 2 (Bcl- 2 )及其家族是调节细胞程序性死亡的主要原因 ,要探明其对凋亡的调节机制需要完善的膜定位。过去有报道认为 Bcl- 2定位于线粒体内膜 ,现通过共焦显微镜、免疫电镜及化学分离法进行了大量的研究 ,发现 Bcl- 2定位于核膜的细胞胞浆面、线粒体外膜及内质网。Bcl- 2家族中的另外一些基因如 Bcl- X1 及 Bcl- Xs,有人认为其定位于线粒体 ,并另有人认为是在线粒…     

齐墩果酸靶向Bcl-2诱导鼻咽癌细胞发生线粒体主导的凋亡

目的 探索齐墩果酸(OA)对高分化鼻咽癌细胞CNE-1的抑制作用并阐明其机制。方法 选择不同浓度OA处理CNE-1细胞，CCK-8实验检测细胞活力，膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法和流式细胞术分析细胞凋亡情况。检索数据库ChEMBL筛选OA调控细胞凋亡的潜在靶点，通过Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白表达情况。结果 OA导致CNE-1细胞活力降低与细胞凋亡增加。靶标预测发现抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2是OA的潜在靶点。Western印迹结果也证实OA导致线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3水平增加，而Bcl-2水平下降。结论 OA能够靶向Bcl-2通过线粒体途径诱导鼻咽癌细胞CNE-1的凋亡，有望作为鼻咽癌治疗的候选药物。     

高浓度葡萄糖对牛视网膜血管周细胞凋亡及凋亡调节基因表达的影响

目的 研究不同浓度葡萄糖培养条件对牛视网膜血管周细胞凋亡及凋亡调节基因Bel-2、Bax表达的影响,探讨Bcl-2、Bax对周细胞凋亡的调控.方法 在体外培养第3代近融合的视网膜血管周细胞中加入不同浓度的葡萄糖(5.5 mmol/L、15.0 mmol/L、25.0 mmol/L和35.0mmol/L)孵育6 d后,应用MTT方法检测高糖下牛视网膜周细胞增殖情况,TUNEL法特异性标记凋亡细胞,免疫组化染色法和RT-PCR测定Bcl-2、Bax基因的表达. 结果 周细胞在高浓度葡萄糖培养下,细胞增殖受抑制,呈现出典型的细胞凋亡特征,凋亡率分别为(28.4±0.8)%、(40.4±0.9)%与(50.2±0.6)%.高浓度葡萄糖培养呈剂量依赖性促周细胞凋亡(r=0.959,P＜0.01)和凋亡调节基因Bax的表达(蛋白水平r=0.966,P＜0.01;mNRA水平r=0.874,P＜0.01)及抑制凋亡调节基因Bcl-2的表达(蛋白水平r=-0.964,P＜0.01;mNRA水平r=-0.912,P＜0.01);周细胞的凋亡率与Bax/Bcl-2比率呈正相关(r=0.810,P＜0.01).结论 高浓度葡萄糖培养以剂量依赖的方式促进周细胞凋亡,Bcl-2、Bax基因表达的改变参与了细胞凋亡的调控.     

氧化苦参碱诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的机制

目的探讨氧化苦参碱诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用及机制。方法以不同剂量的氧化苦参碱作用于人结肠癌细胞株SW480,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞的增殖能力,Hoechst 33258染色法观测细胞凋亡。免疫印迹法测定B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,荧光法测定半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3的活性。结果氧化苦参碱可剂量依赖性地抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡。Western印迹方法显示氧化苦参碱可抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,提高促凋亡蛋白Bax的表达,同时激活凋亡效应分子caspase-3。结论氧化苦参碱能够抑制结肠癌SW480细胞的增殖,通过提高Bax的表达、抑制Bcl-2的表达、激活caspase-3发挥其诱导细胞凋亡的作用。     

糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡与Bax和Bcl-2基因表达

目的　观察糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡、Bax和 Bcl- 2表达及二者的相关性。　方法　单侧肾切除大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病 ,采用原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡 ;流式细胞术和免疫组化检测肾皮质 Bax和 Bcl- 2表达水平 ;原位杂交检测 Bax和 Bcl- 2 m RNA表达 ,并观察尿蛋白、BU N、尿肌酐等反映肾功能的有关指标。　结果　在制模后 2、4、8、12周时 ,糖尿病组大鼠较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多 ,Bax、Bcl- 2蛋白和 m RNA的表达显著增强 (P<0 .0 5 )。随着大鼠糖尿病病程延长 ,肾功能恶化 ,肾脏凋亡细胞数逐渐增多 ,Bax表达亦逐渐增强 ,Bax/Bcl- 2比增加 ,且肾脏凋亡细胞数与 Bax及 Bax/Bcl- 2比具有相关性 (P<0 .0 5 )。　结论　肾脏凋亡细胞的不断增加可能是糖尿病肾病发生、发展的原因之一 ,Bax和 Bcl- 2可能参与肾脏细胞凋亡的调控。     

Bcl-2和Bax在多巴胺诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨多巴胺诱导PC12细胞凋亡的可能机制。方法流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白的表达率。结果多巴胺诱导PC12细胞凋亡,两者间呈明显的量效和时效关系。0.45mmol/L多巴胺作用24h,细胞的凋亡率为53.3%±3.1%。在凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达随之增高。诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)抑制剂和半胱氨酸蛋白酶3(CPP32)抑制剂对抗多巴胺诱导PC12细胞的凋亡作用与Bcl-2蛋白增加、Bax蛋白降低有关。结论Bcl-2和Bax蛋白是多巴胺诱导PC12细胞凋亡的重要调节蛋白,iNOS和CPP32在凋亡过程中可能具有重要作用。     

Bowen病细胞凋亡的原位检测及p53、Bcl-2的表达

目的探讨细胞凋亡及p53、Bcl-2蛋白在Bowen病发生、发展及转归中的作用。方法运用TUNEL技术和免疫组织化学技术原位观察15例Bowen病患者的细胞凋亡及凋亡调控基因p53、Bcl-2的表达。结果Bowen病细胞凋亡指数为(15.3±9.01);P53蛋白表达阳性率为73.3%;Bcl-2蛋白表达阳性率为53.3%,且均高于对照组(P<0.01)。结论Bowen病的发病可能与细胞凋亡降低有关。     

二氮嗪联合环孢菌素A减轻突触核蛋白片段对PC12细胞凋亡的作用机制

目的探讨线粒体ATP敏感钾离子通道开放剂二氮嗪、线粒体膜渗透性转换孔抑制剂环孢菌素A,以及两者协同对α-突触核蛋白片段的非淀粉样成分(NAC)致PC12多巴胺能细胞凋亡的分子机制。方法采用25μmol/L的NAC对PC12细胞进行诱导建立帕金森病细胞模型,分为对照组、NAC处理组(NAC组)、NAC+二氮嗪干预组(干预1组)、NAC+环孢菌素A干预组(干预2组)、NAC+二氮嗪+环孢菌素A干预组(干预3组)。二氮嗪、环孢菌素A及两者协同对其干预48h,用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞色素C、Bcl-2、Bax、Bcl-2/Bax比值情况。结果与对照组比较,NAC组细胞凋亡率、细胞色素C明显升高,Bcl-2、Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01),Bax未见明显变化(P>0.05);与NAC组比较,干预1组、干预2组、干预3组细胞凋亡率、细胞色素C明显降低,Bcl-2、Bcl-2/Bax比值明显升高(P<0.01),Bax未见明显变化(P>0.05)。结论二氮嗪、环孢菌素A及两者协同作用通过抑制线粒体凋亡通路相关蛋白的表达来拮抗NAC的细胞凋亡作用。     

琐琐葡萄多糖对β淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的影响

目的探讨琐琐葡萄多糖(VTP)对β淀粉样蛋白(Aβ25~35)诱导PC12细胞凋亡的影响及作用机制。方法 Aβ25~35诱导PC12细胞建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,VTP(20、40、80 mg/L)作用于细胞模型,CCK-8法检测各组细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Real-time PCR检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达。结果 VTP可提高PC12细胞活性,降低细胞凋亡率,增强Bcl-2 mRNA表达,抑制Bax mRNA表达。结论VTP对Aβ25~35诱导的PC12细胞凋亡具有明显的保护作用,其机制可能是通过增强Bcl-2 mRNA表达、降低Bax mRNA表达,抑制细胞凋亡。     

热疗联合表柔比星对胃癌MGC803细胞的体外抑制及凋亡的影响

目的 观察表柔比星(EPI)温热化疗对人胃癌MGC803细胞的体外抑制及凋亡的影响,探讨其作用机制.方法 采用四氮甲唑蓝(MTT)法确定作用48 h抑制率为50%的药物浓度作为实验的工作浓度.以48 h的IC50的药物浓度进行化疗或与热疗的联合,热疗选择温度为43℃,体外作用于MGC803细胞,实验分四组:对照组(C)、热疗组(H)、化疗组(D)、热化疗组(HD).MTT法检测各处理组对肿瘤细胞增殖的抑制作用;应用RT-PCR观察各处理组诱导MGC803细胞凋亡的作用及对Caspase-3和Bcl-2表达变化的影响.结果 单纯热疗和化疗对MGC803细胞系均有抑制作用(P<0.05);EPI温热化疗可明显增强EPI对MGC803细胞的抑制作用(P<0.05);与对照组比,热疗组、化疗组及热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高,各组之间均有差异(P<0.05);Bcl-2表达下调、Caspase-3表达上调,各组之间均有差异(P<0.05).Caspase-3与Bcl-2蛋白的表达呈明显负相关(r=-0.990,n=12),细胞凋亡率与Bcl-2蛋白表达负相关(r=-0.924,n=12),而与Caspase-3蛋白表达正相关(r=0.891,n=12).结论 EPI联合热疗能显著抑制MGC803细胞生长并诱导细胞凋亡,可能与下调Bcl-2,上调Caspase-3的表达及二者相互作用有关.     

红景天苷诱导小鼠肝癌细胞凋亡作用的机制

目的探讨红景天苷诱导小鼠肿瘤细胞凋亡的形态特征及其诱导细胞凋亡分子的机制。方法建立小鼠肝癌细胞(Hep A)模型,随机分为模型对照组、环磷酰胺组(CTX组)、红景天苷组(Sa组),分析红景天苷对肿瘤组织凋亡形态以及凋亡抑制基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平的影响。结果经红景天苷处理的肿瘤细胞凋亡数量较对照组多,细胞凋亡指数达到20.16%,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01),Bcl-2表达减少而Bax表达增加。结论红景天苷通过诱导细胞凋亡抑制肿瘤细胞生长,诱导凋亡的机制为激活凋亡的线粒体途径。     

恒定及波动高糖下牛视网膜血管周细胞凋亡的线粒体机制

目的 研究恒定及波动高糖培养对牛视网膜血管周细胞凋亡的影响,并探讨其线粒体调控机制.方法 体外培养接近融合的视网膜血管周细胞在恒定及波动高糖中孵育6 d后,采用电镜观察周细胞超微结构改变;TUNEL法检测周细胞凋亡;激光共聚焦显微镜检测周细胞线粒体跨膜电位的改变;分光光度计检测周细胞胞质细胞色素c的变化;免疫组化和RT-PCR测定Bax、Bel-2基因的表达.结果 (1)恒定及波动高糖卜周细胞呈现出典型的细胞凋亡改,变,恒定高糖作用强于波动高糖组;(2)恒定及波动高糖培养使用细胞线粒体跨膜电位降低,周细胞线粒体跨膜电位与周细胞凋亡率负相关(r=-0.89,P<0.01);(3)恒定及波动高糖促使周细胞线粒体细胞色素c转移到胞质,胞质细胞色素c浓度增加,与细胞凋亡率正相关(P<0.01);(4)恒定及波动高糖能诱导凋亡基因Bax表达增加,抑制Bcl-2的表达,Bax/Bcl-2比值增加.Bax/Bcl-2比值与线粒体跨膜电位负相关,与胞质细胞色素c浓度正相关,与周细胞凋亡率正相关(均P<0.01).结论 恒定及波动高糖均可诱导培养的周细胞线粒体跨膜电位降低,细胞色素c释放,细胞发生凋亡,且恒定高糖作用强于波动高糖;线粒体凋亡途径在周细胞凋亡中起重要作用,凋亡基因Bax、Bcl-2可能参与其调控.     

急性白血病化疗24小时体内细胞凋亡预测化疗疗效29例

目的 :观察体内细胞凋亡和急性白血病化疗的关系 ,为白血病个体化治疗提供早期预测疗效的指标。方法 :采用流式细胞术膜联蛋白 (AnnexinV)法检测 2 9例急性白血病患者化疗前及化疗 2 4h体内细胞凋亡 ,并观察其与患者化疗一疗程疗效之间的关系。结果 :化疗前和化疗 2 4h急性白血病细胞的凋亡率分别为(5 .74± 2 .4 7) %和 (9.77± 3.5 4 ) % ,化疗后凋亡细胞显著增加 (P <0 .0 1)。将完全缓解及部分缓解患者归为有效组 ,未缓解患者归为无效组。有效组化疗 2 4h的细胞凋亡率为 (11.4 5± 3.0 9) % ,细胞凋亡增加 (5 .91±3.4 8) % ;无效组化疗 2 4h的细胞凋亡率为 (8.15± 3.6 6 ) % ,细胞凋亡增加 (2 .2 8± 3.5 8) %。有效组化疗后凋亡增加明显高于无效组 (P <0 .0 5 )。其特异性为 83.3% ,敏感性为 84 .6 %。结论 :AnnexinV法检测白血病细胞体内凋亡是一个较为敏感的预测化疗疗效的早期指标     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞凋亡的影响

探讨抗纤软肝颗粒对肝星状细胞(HSC)凋亡的影响.方法:传代培养的大鼠肝星状细胞系HSC-T6与中药复方抗纤软肝颗粒(终浓度为5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml)及药物血清(5%、10%、20%)共同培养48小时后,应用TUNEL法及流式细胞仪测定细胞凋亡、免疫组化检测Bcl-2/Bax.结果:TUNEL法及流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物及含药血清均可诱导HSC凋亡(P＜0.05);并能下调凋亡抑制分子Bcl-2,上调促凋亡分子Bax(P＜0.01).结论:抗纤软肝颗粒可下调Bcl-2/Bax比率,以增加细胞对凋亡的敏感性,从而促进HSC凋亡.     

银杏叶提取物对培养中的胎儿血管平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达量的影响

目的观察银杏叶提取物(Egb)对培养中的胎儿血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡相关蛋白Bcl-2的影响。方法采用酶消化法结合组织贴块法培养VSMC。加不同浓度Egb干预不同时间段,形态学观察凋亡现象,利用Annexin-V结合PI,流式细胞仪技术检测细胞凋亡率,检测Bcl-2蛋白的表达量变化。结果与对照组相比,随着时间的延长,Egb浓度的增加,细胞凋亡率增加,细胞Bcl-2蛋白表达率明显减少。结论Egb可以诱导培养中的胎儿VSMC凋亡,并可以抑制VSMC凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,并且这两种作用呈时间及浓度依赖性。     

老年急性淋巴细胞白血病的治疗

老年急性淋巴细胞白血病(ALL)的治疗手段是化疗。化疗药物及化疗原则如下。     

剔毒肝方介导HEPG2细胞凋亡的实验研究

目的探讨剔毒护肝方介导HEPG2细胞凋亡的可能机制.方法培养24h的HEPG2细胞,分别给予剔毒护肝方(12.5mg/dl)及阿霉素(10μmol/ml)作用8d,同时设空白对照组,细胞凋亡采用流式细胞仪测定,Bcl-2、Bax、Fas采用S-P免疫组化法检测.结果剔毒护肝方、阿霉素及空白对照组的凋亡率分别为24.43%、10.58%、2.05%.剔毒护肝方组细胞Bcl-2、Bax、Fas的表达量分别为0.118±0.015、0.152±0.028、0.121±0.018,与空白对照组及阿霉素组相比有显著性差异(P＜0.01).结论剔毒护肝方有明显介导HEPG2细胞凋亡的作用,并可能通过介导凋亡调控基因Fas、Bax的高表达及下调Bcl-2基因的水平来介导凋亡.     

氯化甲基汞诱导NCI-H446细胞凋亡的体外实验研究

目的 探讨氯化甲基汞(MMC)诱导NCI-H446细胞凋亡发生的可能机制.方法 通过分子生物学方法,检测调控细胞凋亡的关键基因Bcl-2、Bax和caspase-3在mRNA水平的表达情况.结果 MMC组细胞Bcl-2 mRNA水平低于对照组,并存在着时间依赖性降低趋势,至24 h达到最低;Bax及caspase-3 mRNA水平高于对照组,并存在着时间依赖性增高趋势,至24 h达到最高.结论 MMC能够在体外诱导NCI-H446细胞发生凋亡.     

Bcl-2家族对细胞凋亡的作用及其在胰腺癌中的表达

Bcl-2基因是最早被发现与细胞凋亡有关的调控基因之一。Bcl-2家族中促进凋亡和抑制凋亡成员形成的二聚体结构对凋亡前的信号传导起重要作用。Bcl-2家族在胰腺癌组织中表达失调，且此现象与细胞凋亡和胰腺癌转移等表现相关。