亚砷酸钠亚慢性染毒对小鼠体内谷胱甘肽S-转移酶活力及其基因表达的影响

目的 探讨亚砷酸钠亚慢性染毒对小鼠肝脏和肾脏谷胱甘肽S-转移酶(GST)活力及其基因表达的影响.方法 采用亚慢性毒性实验方法.昆明种小鼠60 只,按体重随机分成正常对照组(C)、低剂量组(L)、中剂量组(M) 和高剂量组(H) 4组,每组15只,分别自由饮用蒸馏水、0.125 mg/kg、0.5 mg/kg和2.0 mg/kg 的亚砷酸钠水溶液,连续染毒90 d,酶联免疫吸附法测定小鼠肝、肾组织谷胱甘肽S-转移酶(GST)活力,采用RT-PCR 法检测GSTO1 mRNA表达.结果 小鼠肝脏和肾脏组织中GST 活力随着砷染毒剂量的增加呈现先升高随后降低的趋势(P<0.05);与正常对照组比较,中、高剂量组小鼠肝、肾GSTO1 mRNA表达上调(P<0.05～0.01).结论 小鼠经不同剂量的亚砷酸钠染毒后,肝脏、肾脏GSTO1 mRNA表达与GST 活力变化一致,提示砷对GST 活力的影响与GSTO1 mRNA表达有关.     

光气染毒对小鼠肝脏的损伤作用

目的:研究小鼠光气染毒对肝脏的损伤作用与枯否氏细胞的变化.方法:40只小鼠,雌雄各半,随机分为4组. 正常对照组小鼠以空气为对照,染毒组小鼠给予11.9 mg/L剂量的光气,时间为5 min, 染毒后2, 4, 8 h,测定各组小鼠肝脏的丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、还原型谷胱甘肽(GSH)及染毒4 h后进行肝组织学和超微结构观察. 结果: 随着光气染毒后时间的延长,小鼠肝脏的MDA含量升高,GSH含量降低,T-SOD活力在染毒后2 h显著升高,与正常组差异显著(P<0.05);光镜下,光气染毒的肝组织肝细胞呈现空泡样变性. 电镜下,染毒肝细胞脂滴增多,肝脏出血,枯否氏细胞(KC)出现凋亡征象. 结论: 光气染毒可引起小鼠肝脏脂质过氧化,肝细胞脂肪变性、KC凋亡.     

亚砷酸钠对雄性小鼠生殖细胞损伤的实验研究

用浓度为1、3、5mg/kg 的亚砷酸钠及40mg/kg 环磷酰胺分别给雄性小鼠腹腔注射5天,于染毒后1、3、5周观察其精子,结果表明,亚砷酸钠是诱发雄性小鼠生殖细胞畸变的诱变剂.     

亚硒酸钠和亚砷酸钠对小鼠骨髓细胞微核率的影响

本文研究了亚硒酸钠对亚砷酸钠诱导小鼠骨髓细胞微核率的影响。结果表明亚砷酸钠显著增高小鼠骨髓嗜多染红细胞的微核率,与对照组比较有显著性差异(P<0.01).亚硒酸钠降低亚砷酸钠诱导的微核率。     

亚砷酸钠对小鼠肝细胞AML12损伤的作用机制

目的 探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对小鼠肝细胞AML12损伤作用的机制.方法 取对数生长期的小鼠正常肝细胞AML12,设置6个NaAsO2浓度[0(对照)、10、15、20、25及30μmol/L]组,分别用相应浓度的NaAsO2处理AML12细胞24 h;采用化学比色法和油红O染色法检测各组AML12细胞内丙二醛(MDA)和脂质含量水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法分别检测各组小鼠AML12细胞内法尼醇X受体(FXR)、小异二聚体伴侣(SHP)mRNA和FXR、SHP、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达.结果 与对照组相比,10～30μmol/L NaAsO2组小鼠AML细胞内MDA含量升高、但FXR和SHP mRNA及FXR蛋白相对表达量下降(P<0.05),15～30μmol/L NaAsO2组小鼠AML细胞内脂滴含量增加(P<0.05),20～30μmol/L NaAsO2组小鼠AML细胞内SHP蛋白相对表达量降低(P<0.05),25～30μmol/L NaAsO2组小鼠AML细胞内BAX蛋白相对表达量增高(P<0.05).结论 NaAsO2可致小鼠肝细胞AML12损伤,其机制可能与FXR-SHP信号通路的失调有关.     

亚硒酸钠对亚砷酸钠所致的小鼠精子畸形的影响

本文研究了亚硒酸钠与亚砷酸钠对小鼠精子畸形的影响.亚砷酸钠组引起的精子畸形率明显高于对照组.亚硒酸钠抑制了亚砷酸钠导致的精子畸形的增多.     

亚砷酸钠致小鼠乳腺癌作用机制研究

目的 研究亚砷酸钠(NaAsO2)对小鼠乳腺上皮细胞(NMuMG)的影响,为砷致乳腺癌机制提供理论依据.方法 以小鼠乳腺上皮细胞为模型,研究亚砷酸钠对乳腺上皮细胞形态的影响;经流式细胞仪检测亚砷酸钠对小鼠乳腺上皮细胞凋亡的影响;实时定量RT-PCR检测细胞周期基因P21 mRNAs表达水平.结果 NaAsO2对NMuMG具有毒性效应,在一定浓度范围内,随NaAsO2浓度升高,细胞形态明显改变,凋亡明显增多,且呈剂量-效应关系;细胞增殖的抑制基因P21 mRNA水平增高了18.12倍.结论 亚砷酸钠可能通过上调P21基因的表达来抑制NMuMG增殖,可能是砷中毒引起乳腺癌的发生机制之一.     

亚硒酸钠对亚砷酸钠引起的小鼠骨髓细胞染色体畸变的影响

本文研究了亚硒酸钠与亚砷酸钠在小鼠骨髓细胞染色体畸变上的相互作用。结果表明,亚砷酸钠明显增高染色体畸变频率,且随剂量的增加而增高。染色体损伤类型以染色单体裂隙、断裂为主,亚硒酸钠对亚砷酸钠引起的小鼠骨髓细胞染色体畸变有明显的抑制作用。     

90天饮水砷暴露对大鼠的肝脏、肾脏和心脏的毒性损伤作用

目的研究90 d饮水砷暴露对饮水砷代谢相关生化指标的影响及对大鼠肝脏、肾脏和心脏的损伤作用。方法将96只SPF级Wistar大鼠随机分为4组,分别为阴性对照组(蒸馏水)和低(50μg/L)、中(150μg/L)、高(450μg/L)剂量组,每组24只,雌雄各半,采用自由饮水方式连续染毒90 d,采集大鼠血液,分析活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)和凝血酶原时间(prothrombin time,PT);分离血清测定丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、肌酐(creatinine,Cr)、尿素(blood urea,BU)和血红蛋白(hemoglobin,Hb)含量;处死各组大鼠,解剖取材,计算脏器系数,HE染色后光学显微镜下观察大鼠心脏、肝脏、肾脏的组织学变化。结果与对照组比较,各剂量染砷组大鼠脏器系数差异无统计学意义(P> 0. 05);低剂量组和中剂量组的APTT和PT较对照组均可见延长趋势,高剂量组雄性PT较对照组有延长趋势(P> 0. 05)。各剂量组雄性大鼠Hb、ALT及低剂量组和高剂量组雌性大鼠ALT较对照组均降低(P> 0. 05);高剂量组大鼠Cr较对照组升高,低剂量组雄性大鼠Cr较对照组升高(P> 0. 05);中剂量组和高剂量组大鼠BU高于对照组,低剂量组雄性BU均高于对照组(P> 0. 05)。与对照组比较,各剂量组大鼠心脏、肝脏、肾脏均出现生不同程度的损伤。结论实验组大鼠经不同剂量的饮水砷染毒90 d后,大鼠血液生化指标受到一定程度的影响,同时出现肝脏、肾脏和心脏不同程度的损伤。     

苯甲酸钠多次给药对大鼠肝肾功能的影响

目的:研究食品防腐剂苯甲酸钠多次给药对大鼠肝肾功能的影响。方法:选取50只健康SPF级SD大鼠,分为5组,每组10只,苯甲酸钠低、中、高剂量组分别灌胃给予苯甲酸钠(0.1、0.2、0.4 g/kg),阳性对照组给予山梨酸钾(0.2 g/kg),空白对照组给予生理盐水,1次/d,连续4周。检测末次给药后大鼠血清学指标(ALT、AST、ALP、GGT、TP、ALB、TBIL、BUN、Cre、UA),并观察肝肾组织病理学改变。结果:与空白对照组相比,苯甲酸钠低、中、高剂量组大鼠的各项血清生化学指标均有一定的异常,高剂量组最为显著(P均<0.05)。苯甲酸钠高剂量组大鼠肝脏出现了明显病理学异常,各组大鼠肾脏均未见病理学改变。结论:苯甲酸钠多次给药对大鼠肝肾,尤其是肝脏有一定的损害。     

不同价态砷染毒对大鼠丙酮酸激酶活力的影响

目的 探讨不同价态及剂量砷染毒对大鼠血清丙酮酸激酶(pyruvate kinase, PK)的影响,为阐明砷毒作用机制提供依据.方法 Wistar大鼠70只,采用喂饲法染毒,暴露于不同价态无机砷.动物随机分成7组,每组10只,雌雄各半:即正常对照组(C);亚砷酸钠低 (AL)、中 (AM)、高 (AH) 剂量组;砷酸钠低 (BL)、中 (BM)、高 (BH) 剂量组.大鼠饲养至第3个月末,用颈椎脱臼法处死.应用酶联免疫分析法(ELISA)测定大鼠在不同价态及剂量砷染毒后血清PK活性变化.结果 血清PK活性在亚砷酸钠和砷酸钠高剂量组中的比较差异有统计学意义(P<0.05),在亚砷酸钠和砷酸钠中剂量组与低剂量组比较时差异均无统计学意义(P均>0.05),在亚砷酸钠和砷酸钠与对照组比较时差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 不同价态高剂量无机砷染毒,可导致PK活性降低,并且机制不完全相同.PK活性的改变可能是影响砷代谢及其毒作用的重要环节,低剂量染砷未见PK活性的改变.     

摄入超量焦亚硫酸钠对小鼠肾脏显微结构的影响

目的研究超量焦亚硫酸钠摄入对小鼠肾显微结构的影响,探讨焦亚硫酸钠对小鼠的毒性作用。方法健康雄性昆明属小鼠,随机分对照组和实验组,对照组小鼠喂食自来水,实验组小鼠代以1%焦亚硫酸钠溶液喂食。10 d后,处死小鼠,取出肾,常规石蜡制片染色,光镜观察。结果实验组小鼠肾组织中,近曲小管细胞的胞质呈水样变性。结论1%焦亚硫酸钠对小鼠肾脏有毒性作用。     

低浓度亚砷酸钠抑制Oct4、Sox2基因表达诱导肝癌干细胞分化

目的观察Hep G2、Hep3B、Hu H7和SMCC-7721细胞对亚砷酸钠的反应,CD133及CD13分子的表达和肿瘤球形成的差异,分析低浓度亚砷酸钠处理前后Hu H7和原代HCC细胞Oct4、Sox2因子的表达变化,探讨低浓度亚砷酸钠对HCC细胞生长的抑制机制。方法 CCK-8法检测0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μg/m L不同浓度亚砷酸钠处理48、72、96 h对Hep G2、Hep3B、Hu H7和SMCC-7721细胞生长的抑制作用;分析Hep G2、Hep3B、Hu H7、SMCC-7721和原代HCC细胞CD13、CD133表达及肿瘤球形成能力,确定是否含肝癌干细胞(LCSCs);观察0.5μg/m L亚砷酸钠处理Hu H7和原代HCC细胞前后Oct4和Sox2基因和蛋白表达的变化,分析低浓度亚砷酸钠对LCSCs有何作用。结果亚砷酸钠处理HCC细胞48、72、96 h,亚砷酸钠明显抑制Hep G2、Hep3B、Hu H7和SMCC-7721细胞生长,对HCC细胞增殖抑制作用与浓度和作用时间有关。亚砷酸钠处理HCC细胞96 h,0.2、0.4μg/m L亚砷酸钠已经明显抑制SMCC-7721细胞生长(P<0.05,P<0.01)。0.4μg/m L亚砷酸钠明显抑制Hep G2(P<0.01)和Hep3B(P<0.01)细胞增殖。0.1、0.2、0.4、0.6μg/m L亚砷酸钠刺激Hu H7细胞增殖,但差异无统计学意义(P>0.05),0.8μg/m L亚砷酸钠非常明显抑制Hu H7细胞增殖(P<0.01)。亚砷酸钠对Hu H7细胞存在低浓度刺激Hu H7细胞增殖和较高浓度抑制Hu H7细胞增殖的双向作用,随着作用时间延长,相同浓度下抑制作用增强。低浓度亚砷酸钠对SMCC-7721、Hep G2和Hep3B细胞几乎无刺激增殖作用。Hep G2、Hep3B和SMCC-7721既不表达CD133,也不形成肿瘤球。Hu H7和原代HCC细胞同时表达CD133、CD13标志,也具有形成肿瘤球能力,Hu H7和原代HCC细胞含有CD133+CD13+LCSCs。Hu H7和原代HCC细胞表达Oct4和Sox2基因和蛋白,0.5μg/m L亚砷酸钠可以下调Hu H7和原代HCC细胞Oct4和Sox2基因和蛋白表达。结论低浓度亚砷酸钠下调或抑制含CD133+CD13+LCSCs的Hu H7和原代HCC细胞Oct4和Sox2基因和蛋白表达,推测低浓度亚砷酸钠可能诱导LCSCs分化。     

砷对20个基因表达水平影响的研究

目的：研究砷（亚砷酸钠）对20个相关基因表达的影响。方法：依据已报道的砷中毒机理，选择与其相关的20个基因，并设内对照和阴性对照，然后制备这些基因的寡核苷酸探针（长度在23－30mer之间），并制备寡核苷酸芯片。选取人正常肝细胞（L－02）培养并用不同浓度的砷染毒，提取染毒细胞的总RNA，纯化mRNA，反转录获第一链cDNA，并用Cy^3、Cy^5生物标记，切断后同已制备好的寡核苷酸的基因探针杂交，最后读片，根据信号强度并进行一定计算来判定砷对每个基因表达水平的影响。结果：0.5μM和2.0μM染砷组与对照组相比,C-myc癌基因、抗砷蛋白基因（ARS）和CAAT结合转录因子基因（CTF）的表达水平均出现下调，染砷2.0μM还可抑制肝细胞生长因子基因（HGF）表达，同时诱导p53抑癌基因表达。结论：砷可抑制CTF基因的表达，使基因转录的起始受阻，从而导致大部分基因表达水平下调，这可能就是砷遗传毒性的机理所在。     

亚砷酸钠对体外培养淋巴细胞存活率及金属硫蛋白含量的影响

目的:了解亚砷酸钠对体外培养淋巴细胞活性及金属硫蛋白(MT)表达的影响。方法:无菌抽取健康人血液,分离出淋巴细胞,分别用2、5、10、15、30、60μmol/L亚砷酸钠(2、5、10、15、30、60μmol/L染毒组)作用于淋巴细胞,采用四噻唑兰还原法测定不同染毒时间(24、48、72h)各染毒剂量组淋巴细胞存活率,采用银饱和-血红蛋白原子吸收分析法测定各组MT含量。结果:低浓度亚砷酸钠(2、5μmol/L)组细胞存活率较对照组明显升高(P<0.05);其它各组细胞存活率随染毒剂量增加而降低,与对照组及2、5μmol/L染毒组比较差异有统计学意义(P<0.05);不同剂量亚砷酸钠染毒一定时间后细胞MT含量增加,且存在时间-剂量交互效应(P<0.05),MT含量在染毒48h左右达到高峰,其中2、5μmol/L组MT含量高于对照组及其它各剂量组。结论:低剂量砷可促进淋巴细胞的体外存活,并可诱导其MT合成增加。     

亚砷酸钠对人皮肤细胞增殖作用的影响

目的：探讨亚砷酸钠对人皮肤细胞增殖作用的影响。方法：使用原代培养的人真皮成纤维细胞和表皮细胞，采用直接细胞计数法和MTT法检测亚砷酸钠对两种细胞系生长的影响。结果：成纤维细胞较表皮细胞易于培养；MTT法检测，不同剂量的亚砷酸钠与对照组比较，吸光度值均有提高，有剂量－效应关系（P＜0.01)；0.5-8.0μmol/L的亚砷酸钠对成纤维细胞有明显增殖作用；低浓度（0.8μmol/L、1.6μmol/L)对表皮细胞有明显的增殖作用，浓度高于3.2μmol/L时，表皮细胞生长受抑制；10.00μmol/L亚砷酸钠对成纤维细胞有毒性作用。结论：无机砷诱导人皮肤细胞的增殖作用可能是引起慢性砷中毒皮肤损伤的重要原因，具体作用机制有待进一步研究。     

锰对小鼠肝肾的致毒作用

目的:探讨锰对肝脏和肾脏的毒性机理,防治锰中毒。方法:测定锰染毒小鼠的血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)活性、肝脏与肾脏脂质过氧化物值(LPO)和肝、肾组织中锰、锌、铁等浓度。结果:染锰小鼠血清AST,ALT,LDH活性、肝脏与肾脏LPO值和锰含量均明显高于对照组,差异有统计学意义,而肝、肾中铁、锌含量明显低于对照组(P<0.01),说明锰具有明显的肝、肾毒性。结论:脂质过氧化及锌、铁等代谢障碍可能是锰引起肝肾损害的重要机理。     

亚砷酸钠对胰岛细胞中p53、mdm2和Kras基因及蛋白表达的影响

目的：探讨砷对大鼠胰岛β细胞（INS-1）p53、mdm2和Kras基因和蛋白表达的影响。方法荧光实时定量PCR法检测亚砷酸钠对大鼠胰岛β细胞中野生型p53（Tp53）、mdm2和Kras基因表达的影响,Western blot检测亚砷酸钠对大鼠胰岛β细胞突变型p53和mdm2蛋白表达的影响。结果亚砷酸钠作用于INS-1细胞后,Tp53基因水平降低,mdm2、Kras基因水平升高;突变型p53和mdm2蛋白表达增加。结论亚砷酸钠可使INS-1细胞中抑癌基因Tp53向突变型p53转变,癌基因mdm2和Kras的水平升高。