痰标本p16和MGMT基因甲基化对肺癌的诊断价值

目的：分析肺癌患者痰标本中p16和MGMT基因启动子区甲基化的改变情况,评价该指标作为肺癌辅助诊断分子标志物的价值。方法：运用甲基化特异性PCR技术,检测77例原发性肺癌患者痰标本和部分对应肿瘤组织(53例),以及30例正常对照者痰标本中p16和MGMT基因启动子区域的甲基化改变。结果：49例(63．6%)肺癌患者痰标本中检测到了pi6基因异常甲基化,34例(44．2%)检测到了MGMT基因异常甲基化,77例患者痰标本中2个基因中至少有1个基因出现甲基化为64例(83．1%),对肿瘤的检出灵敏度较高。长期吸烟史是影响肺鳞状细胞癌痰标本p16(P=0．001)基因启动子区甲基化的因素。随TNM分期增高,肺鳞状细胞癌患者痰标本中p16基因甲基化比例增高(P=0．021)；随TNM分期增高,肺腺癌患者痰标本MGMT基因甲基化比例增高(P=0．023)。对照组正常人痰液标本未发现p16和MGMT基因启动子区甲基化。结论：痰标本中p16和MGMT基因甲基化是临床肺癌辅助诊断的有效生物标志物之一。     

食管癌中DNA修复基因MGMT启动子区CpG岛过甲基化研究

目的：探索O~0-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O~6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子区过甲基化状态与食管癌的关系。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)分析食管癌、癌旁和正常食管黏膜细胞中MGMT基因启动子区过甲基化状态。用免疫组织化学SP法检测上述组织中MGMT蛋白表达情况。结果：76例食管癌组织中有26例(34.2%)MGMT基因启动子过甲基化,相应的癌旁组织中有8例发生甲基化,而正常食管黏膜细胞中均无甲基化。所有甲基化的癌组织中均无MGMT蛋白表达,而所有非甲基化的癌组织、相应癌旁组织和8例正常组织中均有MGMT蛋白表达。结论：MGMT基因启动子区过甲基化而使其蛋白表达缺失,可能是食管癌发生的重要因素。     

巢式甲基化特异性PCR 检测食管癌病人血清中p16 基因启动子区过甲基化

 目的 检测食管鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）患者外周血血清中p16基因启动子区的甲基化状态，探讨p16基因启动子的过甲基化在食管鳞状细胞癌筛查及早期诊断中的意义。方法 利用巢式甲基化特异性PCR（nMSP）法检测食管鳞状细胞癌患者外周血血清与正常人血清中p16基因启动子的甲基化状态，并与普通甲基化特异性PCR（MSP）法进行了比较。结果 56例SCC血清样品中nMSP法发现34例p16基因启动子的过甲基化，MSP法只检出15例，而22例正常人血清中都未检测到p16基因启动子的过甲基化。测序结果进一步验证了方法的可靠性。结论 利用巢式MSP（nMSP）法检测外周血血清中p16基因启动子的甲基化，可为食管癌的筛查、早期诊断及预后判断提供有价值的信息。     

食管鳞状细胞癌中MGMT基因异常甲基化与MTHFR C677T基因多态的关系

背景与目的:作为基因失活的主要原因之一,肿瘤相关基因启动子区异常甲基化正日益受到关注,但是在食管癌方面研究尚十分有限.本研究的目的在于探讨DNA损伤修复基因MGMT异常甲基化与食管鳞状细胞痛临床特征和叶酸代谢酶基因MTHFR C677T多态之间的联系.方法:选择2005年1月至2006年3月间新发的、经病理学检查确诊并在江苏省扬中市人民医院进行手术治疗的食管鳞癌患者开展流行病学问卷调查,并采集其外周静脉血标本、癌组织和癌旁正常组织标本.应用甲基化特异性PcR法检测MGMT基因启动子区CpG岛甲基化状态.应用限制性片断长度多态(restriction fragment length polymorphism,RFLP)技术检测叶酸代谢酶基因MTHFR C677T多态.并分析和探讨食管粘膜组织中MGMT基因甲基化分布规律及其与MTHFR C677T基因多态间的联系.结果:125例食管鳞状细胞癌组织中MGMT基因甲基化频率达27.2%,癌旁组织甲基化频率11.2%,10例正常成人健康对照的食管粘膜均呈去甲基化状态.患者淋巴结转移与否与DNA甲基化频率有关,存在淋巴结转移的患者癌组织中MGMT基因甲基化频率(37.3%)高于无淋巴结转移的患者(18.2%).患者性别、年龄、吸烟、饮酒、饮茶等因素与DNA异常甲基化之间的相关性无统计学意义(P>0.05).在调整了相关潜在混杂因素后,携带MTHFR变异基因型CT和TT者食管癌组织中MGMT基因甲基化频率增高,与野生基因型CC比较,比值比OR分别为3.34(95%Cl:1.07～10.39)和3.83(95%CI:1.13～12.94).结论:食管鳞状细胞癌中MGMT基因启动子区异常甲基化与MTHFR基因多态有关,携带MTHFRC677基因变异基因型CT与TT的癌组织中MGMT基因异常甲基化频率更高.     

食管癌前病变组织p16及FHIT基因甲基化探讨

目的:探讨食管癌前病变组织p16及FHIT基因启动子区CpG岛的甲基化状况.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法,对食管癌前病变不同阶段及鳞状细胞原位癌的病变组织进行了甲基化检测,并与同一个体相应的病变旁组织及慢性食管炎和浸润性鳞癌组织的甲基化情况进行了时比分析研究.结果:轻度、中重度不典型增生、鳞状细胞原位癌和浸润癌共95例病变组织中p16基因的甲基化频率分别为22.73%、59.09%、78.57%、64.86%:FHIT基因的甲基化频率分别为22.73%、45.45%、64.29%、67.57%.同一个体相应的95例病变旁对照组织中16例未检测成功,余79例中5例(6.33%)p16基因甲基化,3例(3.80%)FHIT基因甲基化,与病变组织相比,均有统计学差异.10例慢性食管炎组织中1例p16基因甲基化,未发现FHIT基因甲基化.结论:p16及FHIT基因甲基化在癌前病变阶段就已经存在,可能是食管癌发生的早期事件之一.     

DNA修复基因MGMT启动子区过甲基化与食管鳞状细胞癌

目的：O^6－甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）可以转移DNA加合物O^6－甲基鸟嘌呤中的甲基,从而修复DNA损伤,许多肿瘤中发现MGMT基因启动子过甲基化导致该基因失活,我们研究了MGMT基因启动子甲基化状态与食管癌的关系。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应及测序方法分析食管癌。癌旁组织和正常食管上皮中MGMT启动子甲基化状态。结果：在检测的199例食管癌组织中,46例（38．7％）有MGMT基因启动子过甲基化,相应癌旁组织22例中也有5例（22．7％）出现MGMT基因甲基化,而21例正常食管上皮均无此种改变。结论：MGMT基因启动子过甲基化是食管癌中常见的分子事件,可能发生在癌过程的早期阶段。     

食管鳞癌中hMLH1、E-cadherin、p16^INK4a基因启动子甲基化及其意义

背景与目的:目前认为抑癌基因启动子甲基化导致转录抑制是恶性肿瘤发生的重要机制之一,hgLH1、E-cadherin及p16INK4a基因在多种恶性肿瘤中都已被证实存在较高频率的甲基化.本研究通过检测食管鳞癌组织及癌旁组织中hMLH1、E-cadherin,p16INK4a基因启动子甲基化的发生情况,探讨hMLH1、E-cadherin、p16INK4a基因启动子甲基化在食管鳞癌发生发展中的作用.方法:采用酚-氯仿法提取105例食管鳞癌组织及癌旁组织的基因组DNA,应用甲基化特异性PCR对所提DNA进行hMLH1、E-cadherin、p16INK4a基因甲基化检测.采用EnVison免疫组织化学二步法对癌组织中上述3种基因蛋白表达进行检测.结果:癌组织中E-cadherin、hMLH1、p16INK4a基因启动子甲基化的阳性率分别为57.1%(60/105)、20.9%(22/105)和50.5%(53/105),而癌旁食管组织中相应的3个基因的甲基化率分别为10.5%(11/105)、1.9%(2/105)和7.6%(8/105),均显著低于癌组织.E-cadherin(P=0.021)及p16INK4a(P=0.026)基因甲基化与蛋白表达缺失密切相关,而hMLH1基因甲基化与蛋白表达无显著相关性.E-cadherin基因启动子甲基化与淋巴结转移有关(P=0.016),p16INK4a基因启动子甲基化与低分化癌有关性(P=0.024).hMLH1基因甲基化与各项临床病理特征均无关.结论:食管鳞癌中p16INK4a基因启动子甲基化与相应蛋白表达缺失密切相关,且在低分化癌中更多见;E-cadherin基因启动子甲基化与相应蛋白质表达缺失有相关性,并且有淋巴结转移多见的显著特征,这2个基因的甲基化位点与食管鳞癌密切相关.hMLH1基因甲基化可能并不直接参与食管鳞癌的发生、发展.     

非小细胞肺癌组织MGMT基因启动子过甲基化与临床病理特征相关性的研究

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)过甲基化状况与临床病理特征的关系.方法:甲基化特异性PCR(MSP)检测120例病理确诊的非小细胞肺癌组织及癌旁正常肺组织和30例病理确诊为肺炎症组织中MGMT的甲基化状况.结果:120例NSCLC组织中MGMT基因启动子甲基化率(35%)显著高于癌旁正常组织甲基化率(5%,P<0.05),亦显著高于30例正常肺组织中甲基化率(0,P<0.05).NSCLC中MGMT基因启动子过甲基化状态与淋巴结转移、TNM分期、吸烟史、肿瘤分化程度有关(P值均<0.05),与患者年龄、性别、病理组织类型无关(P值均>0.05).结论:在NSCLC中,MGMT基因启动子甲基化可能与肺癌的发生、发展相关.     

非小细胞肺癌INK4a和ARF基因甲基化与其蛋白共表达关系的探讨

目的:分析INK4a和ARF基因启动子甲基化与其蛋白共表达之间的关系.方法:选择前期实验中p14ARF和p16INK4a蛋白共表达阴性的非小细胞肺癌(NSCLC)患者35例,共表达阳性的NSCLC患者20例作为研究对象,分别称为(p14 p16)阴性组和(p14 p16)阳性组.运用甲基化特异性PCR(MSP)方法对两组患者癌组织INK4a和ARF基因启动子的甲基化状态进行检测.结果:(p14 p16)阴性组有18例发生INK4a基因甲基化,(p14 p16)阳性组有2例发生INK4a基因甲基化,两组差异有显著意义(P＜0.01).(p14 p16)阴性组有8例发生ARF基因启动子甲基化,(p14 p16)阳性组有2例发生ARF基因启动子甲基化,两组差异无显著意义(P＞0.05).INK4a和ARF基因异常申基化相互之间无显著相关性(P＞0.05).结论:NSCLC患者肺癌组织INK4a基因甲基化是导致p16INK4a蛋白表达阴性的重要机制;INK4a和ARF基因甲基化可能是相对独立的事件.     

NSCLC患者血浆p16和MGMT基因甲基化检测及临床意义

目的：检测非小细胞肺癌（non—small cell lung cancer，NSCLC）患者外周血血浆中p16基因、O^6-甲基乌嘌呤-DNA甲基转移酶（O^6-methylguanine—DNA methyhransferase，MGMT）基因启动子的甲基化状态，探讨p16、MGMT基因启动子的异常甲基化在NSCLC筛查及早期诊断中的意义。方法：利用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法检测NSCLC患者外周血血浆p16、MGMT基因启动子的甲基化状态。结果：65例NSCLC血浆样品中分别发现19例（29．23％）p16基因启动子异常甲基化和16例（24．62％）MGMT基因启动子异常甲基化，45例正常对照血浆组未检测到p16、MGMT基因启动子的异常甲基化（P〈0．05），血浆中两基因甲基化检出率与NSCLC的分型及临床分期无明显相关性（P〉0．05）。结论：利用巢式甲基化特异性PCR法检测外周血血浆中p16、MGMT基因启动子的甲基化，可为NSCLC的筛查、早期诊断及预后判断提供有价值的信息。     

NGAL基因5''''侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体的构建与鉴定

背景与目的:构建NGAL基因5'侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体.材料与方法:以PCR法从SHEEC食管癌细胞基因组DNA中扩增NGAL基因5'侧翼转录调控区不同长度片段G0-G6(-1431～ 84).PCR产物经pGEM-Teasy转载,再定向亚克隆插入pGL3-Basic.重组子通过特异限制性内切酶切割,琼脂糖电泳予以鉴定.结果:成功构建NGAL基因5'侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体7个,pGLB-GO～G6.结论:为借助于双荧光素酶报告基因检测系统研究确定NGAL基因5'侧翼转录调控区转录调控元件的分布特点以及转录调控元件与转录调控蛋白之间相互作用的性质提供了基本实验条件.     

人乙肝病毒基因在家蝇基因组中的整合

背景与目的:探讨人乙肝病毒基因能否整合在家蝇基因组中.材料与方法:构建人乙肝病毒基因质粒载体pHBVneo,以电转移方式在新生家蝇蝇卵中实施HBV基因转移,通过特异PCR反应鉴定HBV基因在转人乙肝病毒基因家蝇基因组中的整合情况.结果:成功构建了人乙肝病毒基因质粒载体pHBVneo,并在转HBV基因家蝇基因组中检测到特异HBV基因存在.结论:人乙肝病毒基因能够在家蝇基因组中整合.     

Absence of Linkage between the Retinoblastoma Gene and hts Gene in the LEC Rat: A Model of Human Wilson's Disease

The LEC rat is an authentic model of human Wilson's disease (WD) with an autosomal recessively inherited hepatitis. We investigated linkage between the hepatitis gene ( hts ) and the rat retinoblas-toma gene (RB), that is closely linked to the WD gene in humans, to see whether or not the hts gene is located on the syntenic region of WD and is the counterpart of the WD gene. Polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism analysis with backcross progenies from LEC and TM strains showed that the recombination rate between these two loci was 55.6%, demonstrating that the hts and RB genes are not linked to each other. These data indicate that the hts gene is not the counterpart of the WD gene and that the human syntenic region on which the WD locus and human RB gene are located, is not conserved in the rat genome.     

基因突变与胰腺癌

胰腺癌的发病率在我国呈逐年上升趋势 ,由于其起病隐匿 ,恶性程度高 ,早期诊断困难 ,出现临床症状时多属晚期 ,因此患者的预后较差。近年来随着分子生物学技术的发展 ,对胰腺癌发生机制的研究已进入基因水平 ,研究表明胰腺癌的发生是多基因异常改变的结果。就 p16基因 ,p5 3基因 ,DPC4基因 ,Ras基因及MMR基因与胰腺癌的关系作一综述。     

Survivin基因研究现状

Survivin基因是近年来新发现的一种抗凋亡蛋白,具有高度的组织分布特异性和强大的抗凋亡功能,逐渐成为肿瘤发病及治疗研究中的一个热点.文章重点介绍其致病机理及治疗应用中的一些新进展.     

Gene therapy for cancer, the course ahead

Previous chapters have shown that there are a large number of therapeutic approaches under consideration for the gene therapy of cancer. Many of these have progressed into Phase I clinical trials. However, many of the early results are perceived to be disappointing in terms of low levels of gene transfer and systemic efficacy. In this concluding chapter, possible solutions to this state of unease are addressed, so that gene therapy of cancer can resume on its course to become a major contributor to clinical oncology in the years ahead.     

两种基于PNP/ Mep-dR 系统的新型融合自杀基因载体的构建及鉴定

 目的 构建两个新型融合自杀基因表达载体并检测其表达。方法 利用DNA重组技术制备两个融合基因PNP-TK和PNP-CD，将二者分别插入真核表达载体pcDNA3．0中，构建两个融合基因表达载体pcDNA3．0／PNP-TK和pcDNA3．0／PNP-CD；经酶切、PCR及测序鉴定各个重组体。结果 成功构建了两个新型融合基因表达载体并在肝癌细胞株HepG2中检测到二者的表达。结论 两个基于PNP／Mep-dR系统的融合自杀基因表达载体是肿瘤基因治疗中杀瘤谱广、杀伤效应强大的理想载体。     

Bcl-x Gene Expression in Hodgkin's Disease

Bcl-x is a Bcl-2-family protein that has been previously detected in cortical thymocytes, plasma cells, and activated lymphocytes. We report here on the high detection rate of the Bcl-x protein found in 86% of Hodgkin's disease samples and on the significance regarding its complex role among the Bcl-2-family of proteins: Bcl-x is known to heterodimerize with Bcl-2 (an anti-apoptosis protein) and with Bax, a potent inducer of cell death. Morover, recent evidences show that Bcl-x may induce multiple drug resistance in vitro, suggesting that chemical or biological interactions with this protein may have potential therapeutic value in Hodgkin's disease.     

FHIT基因及错配修复基因MLH1在结直肠癌中的表达研究

目的　探讨FHIT、MLH 1基因在结直肠癌组织中的表达及其意义。方法　采用免疫组化S P法检测 84例结直肠癌组织中FHIT、MLH 1基因表达。结果　FHIT、MLH 1基因在 84例结直肠癌中表达阳性率分别为 48.81%和 92 .86%。FHIT基因水平低或不表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、组织学类型无关 (P >0 .0 5 ) ,而与肿瘤浸润深度、分化程度、Dukes分期和淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 ) ;结直肠癌组织中FHIT基因表达与MLH 1基因表达无显著相关性 (P >0 .0 5 )。结论　FHIT基因参与了结直肠癌的演化和进展 ,是结直肠癌的 1个候选抑癌基因 ;结直肠癌组织中FHIT、MLH 1基因表达的关系还有待深入研究