p53基因与mdm2基因在食管鳞癌中的作用

目的 探讨p53基因和mdm2基因在食管鳞癌中的作用及其相互关系。方法 提取20例新鲜食管癌及癌旁组织的DNA,用银染单链多态构象分析（SSCP）及差异PCR（dPCR）法分别检测p53基因第七、八外显子突变及mdm2基因扩增。结果20例食管癌组织中共8例（40％）有P53基因突变,其突变同癌组织的分化程度、局部有无淋巴结转移呈显著相关;5例（25％）有mdm2基因扩增,但同临床各项指标不相关。结论p53基因突变同食管癌的发生、发展及某些生物学行为有关;mdm2基因扩增主要发生在无p53基因突变的癌组织中。     

湖南地区238 例非小细胞肺癌EGFR 基因突变状态分析

目的：评价湖南地区非小细胞肺癌患者EGFR基因突变状态及其与临床特征之间的关系。方法收集2012年1月至2013年6月中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院手术切除的非小细胞肺癌石蜡包埋组织238例,采用PCR扩增结合直接基因测序的方法,对组织DNA中EGFR基因第18-21外显子突变进行检测。结果在238例非小细胞肺癌中,EGFR突变的检出率为35.3％（84/238）。其中,第18、19、20、21号外显子突变占总突变的比例分别为2.4％（2/84）、67.9％（57/84）、3.6％（3/84）、26.2％（22/84）。19号外显子的突变均为第746-753密码子的碱基缺失,以Del E746-A750为主;21号外显子突变类型以L858R为主。女性EGFR基因的突变率显著高于男性,不吸烟者显著高于吸烟者（P〈0.05）。而EGFR基因的突变率与非小细胞肺癌患者的年龄、临床分期和淋巴结转移均无相关性（P〉0.05）。结论湖南地区的非小细胞肺癌EGFR基因突变以19、21外显子为主,且19外显子的突变率高于21外显子,多见于女性、腺癌、不吸烟患者。     

非小细胞肺癌患者肿瘤组织中 EGFR、K-Ras 和 BRAF 基因突变的分子病理检测分析

目的：探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织中 EGFR、K-Ras 和 BRAF 基因各亚型突变情况。方法应用直接测序方法检测550例 NSCLC 石蜡组织中 EGFR 基因、K-Ras 基因和 BRAF 基因突变情况。结果 NSCLC肿瘤组织中 EGFR 基因总突变率为37.09%(204/550),外显子18、19、20和21的突变率分别为1.45%(8/550)、21．09%(116/550)、3.64%(20/550)和11.09%(61/550);EGFR 基因各外显子之间双重突变共13例(2.36%),EGFR基因各外显子内双重突变共12例(2.18%)。 K-Ras 基因总突变率为2.00%(11/550)。 BRAF 基因总突变率为0．36%(2/550)。结论 NSCLC 患者中 EGFR 基因存在较高的突变率,尤其为19和21外显子突变,其基因突变亚型分类能指导 EGFR-TKI 的肿瘤靶向治疗,K-Ras 和 BRAF 基因突变率虽低但不容忽视。     

乙酰肝素酶在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨乙酰肝素酶（Hpa）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其与NSCLC临床病理特征间的关系。方法应用RT-PCR和免疫组化方法检测52例NSCLC术后组织标本及相应癌旁组织中Hpa的表达,分析Hpa表达与NSCLC临床病理特征的关系。结果NSCLC组织中存在Hpa基因的表达,并定位于肿瘤细胞质和（或）细胞膜中。52例NSCLC组织中有39例Hpa基因mRNA表达阳性（39／52.75％）,癌旁组织有11例表达阳性（11／52,21．2％）．2组间差异有统计学意义（P〈0．01）。免疫组化染色NSCLC组织中Hpa阳性率69．2％（36／52）,癌旁组织阳性率17．3％（9／52）,2组间差异有统计学意义（P〈0．01）,Hpa基因mRNA和蛋白质的检测均显示腺癌癌组织Hpa表达高于鳞癌,有淋巴结转移的癌组织表达高于无淋巴结转移组,TNM分期Ⅲ-Ⅳ期的癌组织表达高于Ⅰ～Ⅱ期,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论NSCLC组织Hpa基因及蛋白表达高于正常组织,并且与NSCLC的转移和进展有密切关系。     

非小细胞肺癌患者肿瘤组织中EGFR、K-Ras和BRAF基因突变的分子病理检测分析

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织中EGFR、K-Ras和BRAF基因各亚型突变情况。方法应用直接测序方法检测550例NSCLC石蜡组织中EGFR基因、K-Ras基因和BRAF基因突变情况。结果 NSCLC肿瘤组织中EGFR基因总突变率为37.09%(204/550),外显子18、19、20和21的突变率分别为1.45%(8/550)、21.09%(116/550)、3.64%(20/550)和11.09%(61/550);EGFR基因各外显子之间双重突变共13例(2.36%),EGFR基因各外显子内双重突变共12例(2.18%)。K-Ras基因总突变率为2.00%(11/550)。BRAF基因总突变率为0.36%(2/550)。结论 NSCLC患者中EGFR基因存在较高的突变率,尤其为19和21外显子突变,其基因突变亚型分类能指导EGFR-TKI的肿瘤靶向治疗,K-Ras和BRAF基因突变率虽低但不容忽视。     

检测大肠癌组织及粪便中APC基因突变的临床意义

目的：了解大肠癌组织APC基因第15外显子突变集中区（MCR）的突变情况，探讨检测粪便脱落细胞中APC基因突变的可：行性及其临床意义。方法：应用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）银染技术检测22例大肠癌患者的癌组织及其中9例患者的正常大肠黏膜，并检测10例患者粪便中APC基因的突变体。结果：22例大肠癌患者的癌组织中，9例检出APC基因突变，突变率为40．9％（9／22）。10例粪便标本中有4例APC突变体阳性，检出率为40％（4／10）。癌组织与相应患者的粪便APC基因检测一致率为90％（9／10）。结论：APC基因突变为散发性大肠癌常见的分子事件，粪便中APC基因突变体检测为无创性检查，且基本反映了癌组织的APC突变状况．故有望成为大肠癌诊断的分子途径。     

Sanger法检测分析非小细胞肺癌患者组织EGFR

目的探讨Sanger法检测非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者组织表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变情况,为肺癌病人“个体化靶向分子治疗”提供依据。方法收集63例NSCLC患者组织标本（石蜡切片）,提取组织DNA,用EGFR外显子18、19、20和21四位点的分子扩增（PCR）试剂盒进行外显子扩增,扩增产物先后进行电泳鉴定、酶解,酶解产物PCR扩增、纯化,纯化产物用ABI-3130型基因分析仪检测得出EGFR外显子18、19、20、21的野生或突变状态结果,并分析EGFR基因突变和患者临床病理生理特征、临床靶向用药疗效的关系。结果测试显示肺腺癌患者EGFR基因19、21外显子的突变率为33．3％（21／63）,而EGFR基因的突变与患者的病理组织学类型、吸烟状态有关（P〈0．05）。同时EGFR突变患者能从临床靶向用药获益。结论Sanger法检测NSCLC突变情况可为临床靶向用药提供技术支持。     

非小细胞癌组织和血清中表皮生长因子受体突变一致性

目的对非小细胞癌(NSCLC)组织和血清中表皮生长因子受体(EGFR)突变的一致性进行分析研究。方法抽取90例NSCLC患者的肿瘤组织及匹配的血清标本,采用直接测序法检测EGFR基因中第19和21外显子的突变状态,分析肿瘤组织和EGFR中基因突变的一致性。结论肿瘤组织总突变检测率为32.2%,血清总突变检出率5.6%。直接测序法检测血清EGFR活化性突变的特异度为100%,灵敏度为17.2%,血清和肿瘤组织EGFR活化性突变的一致率为5.6%。结论血清的突变检出率明显低于肿瘤组织,肿瘤组织可作为评价NSCLC患者EGFR基因突变状态的依据。     

非小细胞肺癌胸腔积液与小活检标本中EGFR基因突变检测的比较

目的：探讨非小细胞肺癌胸腔积液与小活检标本中EGFR基因突变检测结果的一致性,评价胸腔积液标本检测EGFR基因突变的应用价值。方法：收集中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院非小细胞肺癌患者胸腔镜下活检标本46例,配对收集相同患者胸腔积液43例,抽提肿瘤细胞DNA,采用焦磷酸测序的方法,对DNA中EGFR基因第18～21外显子突变进行检测。结果：活检标本和胸腔积液标本中EGFR基因突变检出率分别27．9％（12／43）和25．6％（11／43）,两者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：恶性胸腔积液可以作为无法获得肿瘤组织的晚期非小细胞肺癌EGFR基因检测的替代标本。     

p21和p27基因多态性与女性肺癌的关联研究

目的探讨p21和p27基因多态性与女性非小细胞肺癌（NSCLC）遗传易感性的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）方法,分析110例女性NSCLC患者和124例女性健康对照人群p21基因3＇非翻译区（3＇UTR）和p27基因第109密码子多态性位点的基因型。结果p21基因突变型（C/T＋T/T）频率在病例组（76.4%）显著高于对照组（56.5%）[（χ2=10.27,P=0.001）。携带T等位基因（C/T和T/T基因型）能显著增加这一人群NSCLC发病风险（经年龄校正的OR=2.60,95%CI（1.46,4.61）]。根据吸烟状况和年龄分层分析发现,p21基因突变型（C/T＋T/T）频率在不吸烟病例组（86.0%）和≥50岁病例组（76.6%）均显著高于对照组（P〈0.01）,携带C/T和T/T基因型可显著增高不吸烟者和50岁以上人群的NSCLC发病风险[经年龄校正的OR分别为4.95和2.68,95%CI分别为（2.36,10.40）和（1.41,5.08）]。p27等位基因和基因型总体分布在2组差异无统计学意义（P〉0.05）,分层分析也未显示出结果有差异性。对淋巴结转移的研究显示p21和p27基因多态性与NSCLC患者的淋巴结转移无关。结论p21基因3＇UTR多态性与该女性人群NSCLC发病风险有关,C/T、T/T基因型可能增加NSCLC发病风险,尤其对于不吸烟个体及50岁以上者其可能是NSCLC的发病危险因素。p27基因多态性与该女性人群NSCLC遗传易感性无关。p21和p27基因多态性与NSCLC患者淋巴结转移无关。     

食管鳞状细胞癌中p53基因突变和蛋白表达研究

目的检测食管鳞状细胞癌(ESCC)中p53基因突变和蛋白表达及其与临床病理和预后的相关性。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)和免疫组织化学(SP)两种方法检测56例ESCC中p53基因突变和蛋白的表达。结果56例ESCC组织中p53蛋白阳性表达率为61%(34/56),它与患者的年龄、性别和家族史无关(P>0.05),有和无淋巴结转移的阳性率分别为81%(17/21),49%(17/35);生存率<3年组和>3年组的p53阳性表达率为74%(17/23),46%(13/28),差异有统计学意义。PCR-SSCP检测p53基因突变率为77%(43/56),突变位于第4外显子者5例,第5外显子者23例,第6外显子者1例,第7外显子者4例,第8外显子者7例,有3例在内显子。p53基因突变/过度表达率为46%(26/56),两种方法检测的符合率为55%(31/56)。结论p53基因突变/过度表达在食管鳞癌发生、发展中可能发挥重要作用,可作为判断食管鳞癌患者预后的参考指标之一。     

P53、Bcl-2、Caspase-3在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性分析

【摘要】目的 探讨p53、bcl-2、caspase-3在老年晚期非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及相关性。方法 收集经手术后病理学检查确诊的117例老年晚期NSCLC患者的临床资料和存档石蜡组织标本。免疫组织化学方法检测肿瘤组织中p53、bcl-2、caspase-3蛋白的表达情况,分析p53、bcl-2、caspase-3蛋白表达的相关性及其与患者临床病理学特征的关系。结果 117例老年晚期NSCLC组织标本中,p53、bcl-2、caspase-3的阳性表达率分别为 42.74%（50/117）、38.46%（45/117）、36.75%（43/117）。p53阳性表达率在低分化、中央型、有淋巴结转移的鳞癌患者中较高;bcl-2阳性表达率在高分化、有淋巴结转移患者中较高;caspase-3阳性表达率在高分化、无淋巴结转移患者中较高。NSCLC组织中bcl-2与caspase-3表达呈正相关（r=0.262, P=0.003）。结论 p53、bcl-2、caspase-3可能在老年晚期NSCLC的发生和发展过程中起重要调控作用,为临床病理诊断提供理论依据。     

PTEN和DNA含量与非小细胞肺癌侵袭转移的关系探讨

目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中抑癌基因PTEN的表达和DNA含量与NSCLC侵袭、转移的关系.方法 采用免疫组织化学SP方法检测PTEN在78例肺癌标本中的表达,并用流式细胞术检测30例肺癌标本中DNA含量.结果:肺癌标本中PTEN蛋白总缺失率为42.3%,有淋巴结转移组和无淋巴结转移组肺癌表达缺失率分别为52.1%和26.7%(P＜0.05),其表达缺失率随TNM分期增加而上升,分期越晚表达缺失率越高.PTEN缺失率高者生存时间短.DNA指数(DI)的分布范围在1.04～1.93.异倍体肿瘤24例,DI值随TNM分期增加而增加(P＜0.05),与淋巴结转移呈正相关.结论 肺癌组织中PTEN的表达与肺癌淋巴结转移有显著相关性,肺癌细胞DNA含量与肺癌TNM分期及淋巴结转移密切相关.检测PTEN蛋白表达和DNA含量将有助于判断肺癌的转移及预后.     

非小细胞肺癌组织中VEGF-C表达与淋巴转移的关系

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中血管内皮生长因子C（VEGF-C）表达情况与肿瘤淋巴转移的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测NSCLC肿瘤组织中VEGF-C阳性表达情况和微血管、微淋巴管的密度,分析VEGF-C阳性表达与肿瘤分化情况、淋巴结转移情况、病理类型的关系,比较有、无淋巴结转移和VEGF-C阳性、阴性表达的不同肿瘤组织中微血管和微淋巴管的密度.结果 有淋巴结转移肿瘤组织VEGF-C的阳性表达率高于无淋巴结转移肿瘤组织（x2=15.461,P＜0.05）;不同分化程度和不同病理类型的NSCLC组织中VEGF-C的阳性表达率差异无统计学意义（P＞0.05）.VEGF-C阳性表达的NSCLC组织微淋巴管计数高于VEGF-C阴性NSCLC组织（t=22.080,P＜0.05）;有淋巴结转移NSCLC组织微淋巴管和微血管计数高于无淋巴结转移NSCLC组织（t分别为37.312、20.847,P＜0.05）.结论 VEGF-C可能通过调节微淋巴管生成的数目促进NSCLC的淋巴转移.     

VEGF在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及意义

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组化(IHC)染色技术检测101例非小细胞肺癌及20例肺良性病变组织VEGF的表达水平并结合临床资料进行综合分析.结果:经χ2检验VEGF在非小细胞肺癌组织和良性病变组织中,两组对比差异具有显著性(P＜0.01).VEGF的表达与组织学类型无关(P＞0.05),VEGF表达水平与NSCLC的TNM分期呈正相关,而与NSCLC组织分化程度无关,与淋巴结转移成正相关,与原发灶大小有关,VEGF的阳性表达与术后生存时间呈负相关具有较强的侵袭和转移能力.结论:VEGF可作为预测NSCLC患者术后复发转移情况及临床预后的生物学参考指标.     

毛细管电泳检测nm23-H1基因在乳腺癌组织中的表达

目的:检测nm23-H1基因在乳腺癌中的表达与突变,寻找它们与淋巴结转移的关系。方法:用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测nm23-H1mRNA表达,毛细管聚丙烯酰胺凝胶电泳(CPAGE)行单链构象多态性分析(SSCP)检测DNA突变。结果:应用CPAGE可在30min内分离出nm23-H1基因RT-PCR产物的单链及双链峰。nm23-H1表达、突变在腋淋巴结有、无转移组均有差异;mRNA在有远处转移组呈现低表达;DNA突变率在肿瘤≤5cm和>5cm组间有差异。结论:nm23-H1表达和突变可以做为评估乳腺癌转移危险的指标;CPAGE技术用于肿瘤组织的PCR-SSCP分析具有快速灵敏、准确、重复性好的特点。     

胃癌组织中p16蛋白和Ki-67抗原的表达及意义

目的　探讨 p16蛋白和 Ki- 6 7抗原在胃癌发生、发展中的作用。方法　应用免疫组织化学法检测 p16和 Ki- 6 7在 2 0例正常胃组织和 6 0例胃癌组织中的表达。结果　胃癌组织中 p16蛋白表达阳性率(48.9% )明显低于胃正常组织 (90 % )。 p16蛋白表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移及浆膜和浆膜外脏器的累及有关 (P<0 .0 5 )。Ki- 6 7在胃癌组织中的标记阳性率明显高于胃正常组织 (P<0 .0 5 ) ,伴有淋巴结转移的胃癌组织Ki- 6 7标记阳性率较高。 p16蛋白表达与 Ki- 6 7分级呈明显负相关 (P<0 .0 5 ) ,p16阴性表达的细胞增生活性明显增高。结论　 p16蛋白表达缺失及其引起的细胞周期调控失常在胃癌的发生、发展中起一定作用 ;p16蛋白的检测有助于估计胃癌患者的预后、指导临床治疗 ;联合检测 p16和 Ki- 6 7对判断淋巴结转移的危险性具有较高的价值     

Detection of EGFR Somatic Mutations in Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC) Using a Novel Mutant-Enriched Liquidchip (MEL) Technology

We have developed and standardized a novel technology, mutant-enriched liquidchip (MEL), for clinical detection of EGFR mutations. The MEL integrates a mutant-enriched PCR procedure with liquidchip technology for detections of EGFR exon 19 deletions and L858R mutation on both formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) slides and plasma samples from patients with non-small cell lung cancer (NSCLC). The detection sensitivity was 0.1% of mutant DNA in the presence of its wild-type DNA. The cross-reaction rate was lower than 5%. To evaluate the MEL platform, the EGFR mutation status of 59 patients with advanced NSCLC treated with EGFRTKIs (Tyrosine Kinase Inhibitors) were tested on their FFPE samples. EGFR exon 19 deletions and L858R were detected in 21 patients (21/59) and 76.2% (16/21) of them had partial response to the EGFR-TKIs, while by sequencing method, only 4 (4/59) mutations were detected. Plasma samples from 627 patients with various stages of NSCLC were examined with the MEL and 22% of EGFR exon 19 deletions and L858R were detected. Furthermore, in patients with advanced disease there are more mutations detected in plasma samples than in patients with less advanced disease. In conclusion, the MEL is a sensitive, stable, and robust technology for detecting EGFR DNA mutations from both FFPE and plasma samples from patients with NSCLC and is now routinely used for clinical diagnosis.     

非小细胞肺癌中抑癌基因PTEN和FHIT蛋白的表达及其与临床病理的关系

目的 探讨抑癌基因PTEN和FHIT与非小细胞肺癌发生、发展的关系.方法 应用免疫组化Elivision法检测78例非小细胞肺癌组织和40例非肿瘤肺组织中PTEN和FHIT在基因蛋白的表达.结果 非肿瘤肺组织FHIT和PTEN蛋白阳性表达率明显高于肺癌组织(P＜0.05);肺癌组织中FHIT和PTEN蛋白阳性表达率与肿瘤分化程度和临床分期有明显相关性(P＜0.05);而FHIT和PTEN蛋白的阳性表达率在不同类型肺癌组织以及患者年龄、肿瘤大小、有无淋巴结转移等情况的比较中差异无显著性(P＞0.05).结论 PTEN和FHIT基因蛋白表达缺失在不同类型和不同分化程度的非小细胞肺癌发生、发展中可能存在着普通意义,可作为判断肺癌生物学行为和患者预后的参考指标.