非小细胞肺癌DNA指数及增殖活性与病理特征的关系

目的探讨DNA指数（DI）、增殖指数（PI）及合成期细胞比值（SPF）与非小细胞肺癌（NSCLC）临床病理指标的关系。方法应用流式细胞仪对60例肺癌新鲜组织及20例良性病变的肺新鲜组织的DI、PI和SPF进行测定,并结合临床病理资料分析其意义。结果 DI、PI、SPF在NSCLC组织中阳性表达率显著高于良性病变肺组织（P〈0.05）,SPF与NSCLC临床分期、淋巴结转移相关（P〈0.05）。结论 DI改变、增殖活性的增加与NSCLC的侵袭、转移相关,DNA含量及细胞增殖活性测定有助于进一步研究NSCLC的生物学行为。     

24例细支气管肺泡细胞癌外科治疗效果

目的总结细支气管肺泡细胞癌（BAC）的临床特点及外科治疗效果。方法回顾性分析我院2000年1月至2006年12月经手术治疗的24例BAC的临床资料，并随访其生存情况。结果本组男性11例（46％），女性13例（54％），平均年龄59．1（47～72）岁；其中孤立结节型13例，肺炎实变型7例和多发结节型4例。全组均手术切除。术后TNM分期：Ⅰ期8例（ⅠA期4例、ⅠB期4例），Ⅱ期4例（ⅡA期1例、ⅡB期3例），Ⅲ期11例（ⅢA期7例、ⅢB期4例），Ⅳ期1例。随访22例，平均随访时间42月（12月～90月）；10例死亡，死亡者术后中位生存期14月。结论BAC是一种特殊类型腺癌，呈女性多发趋势。早期BAC的手术治疗可以取得满意的长期生存，没有淋巴结转移的多发结节型BAC仍可采取手术治疗，肺炎实变型BAC手术治疗效果差。     

大肠癌端粒酶活性与肿瘤细胞增殖活性的研究

用端粒重复扩增－酶联免疫吸附法（TRAP－ELISA）检测40例大肠癌及癌旁组织的粒酶活性，用流式细胞术（FCM）检测肿瘤细胞的增殖指数（PI）和S－期细胞比率（SPF）。结果显示，肿瘤端粒酶阳性率为87．5％，癌旁组织阳性率为5％，两者比较有显著性差异。大肠癌端粒酶活性与年龄、性别和分化程度无关，而与肿瘤大小和淋巴结转移状况有关。大肠癌端粒酶活性与肿瘤细胞PI和SPF有关。提示大肠癌端粒酶活性是判断肿瘤的指标，它与肿瘤细胞增殖活性有关。     

I期非小细胞肺癌的分子预后

目的 联合检测I期非小细胞肺癌（NSCLC）的细胞增殖、凋亡和血管生成，探讨I期非小细胞肺癌预后分层。方法应用免疫组织化学方法检测118例I期非小细胞肺癌、30例肺良性组织和30例正常肺组织血管内皮生长因子（VEGF）的表达，应用比Ki67标记检测细胞增殖指数（PI）。TUNEL法检测70例I期非小细胞肺癌，30例正常肺组织凋亡指数（AI）。结果单因素分析结果表明，肿瘤血管浸润、VEGF高表达、高PI、低AI为I期非小细胞肺癌的不良预后因素。多因素分析结果显示，肿瘤血管浸润（BVI、VEGF及PI可以作为影响I期非小细胞肺癌预后的独立因素。根据免疫组化综合评分（IRS）IRS=VEGF＋PI＋AI，将患者分为低危组及高危组，5年总体生存率分别为82．22％、23．33％，有显著性差异（P=0．0056）。综合评分可作为独立预后因素（RR=4．878，95％CI：1．379～17．258，P=O．014）。结论联合检测肿瘤的细胞增殖、凋亡和血管生成，可能实现对I期非小细胞肺癌的预后分层，判断预后以及指导治疗。     

Ⅰ期非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡及其临床意义研究

目的通过检测肿瘤组织的增殖指数及凋亡指数,探讨Ⅰ期非小细胞肺癌(NSCLC)的细胞增殖、凋亡及其与预后的关系。方法采用免疫组化和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测1994年1月至2002年7月在北京市结核病胸部肿瘤研究所住院接受手术治疗的70例Ⅰ期NSCLC患者肺癌组织的增殖指数(PI)与凋亡指数(AI)。结果肺癌组织的PI较正常肺组织明显上调,与T分期、分化和吸烟有关;肺癌组织的AI较正常肺组织明显上调,与T分期有关;Ⅰ期NSCLC细胞增殖与凋亡无明显相关。高PI组5年存活率较低PI组明显降低,分别为33.57%和73.12%,差异有显著性意义(P=0.0001)。低AI组5年存活率较高AI组明显降低,分别为41.48%和68.80%,差异有显著性意义(P=0.008)。多因素分析结果表明,PI为Ⅰ期NSCLC的独立预后因素(RR=2.473,95%CI:1.278~4.784,P=0.007)。结论Ⅰ期NSCLC为高增殖、高凋亡的亚组,细胞恶性增殖在其发生发展中起重要作用,研究细胞增殖与凋亡有助于判断预后,指导治疗。     

去甲斑蝥酸钠对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

目的观察去甲斑蝥酸钠对人肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法取常规培养的HepG2细胞,接种于24孔板,SNCID组分别加入5、2．5、1、0．5μg／ml的注射用去甲斑蝥酸钠1ml,对照组不添加任何药物。培养24、48、72h后用流式细胞术检测细胞周期,并计算增殖指数PI。结果SNCID组G0／G1期的细胞比例明显增高,而S期细胞比例、PI降低,此效果呈时间和浓度依赖性（P均〈0．05）。结论去甲斑蝥酸钠培养可阻滞人肝癌HepG2细胞于G0／G1期,抑制HepG2细胞增殖。     

胰腺癌Bcl-2,P53蛋白表达和细胞凋亡

目的　探讨ｂｃｌ２ ,ｐ５３ 基因和细胞凋亡在胰腺癌发病机制中的作用以及它们之间相互关系．方法　应用ＡＢＣ 免疫组化技术检测５０ 例胰腺癌中Ｂｃｌ２ 和Ｐ５３ 蛋白表达,运用原位末端标记法观察肿瘤中细胞凋亡数量．结果　Ｐ５３ 蛋白表达阳性率为５４ ％ ,临床Ⅰ期阳性率（２６－７ ％ ）却显著低于Ⅱ期（６１－１ ％ ） 和Ⅲ＋ Ⅳ期（７０－６ ％ ,Ｐ＜ ０－０５） ;Ｂｃｌ２蛋白表达阳性率为６４ ％ ,临床Ⅰ期阳性率（９３－３ ％ ） ,显著高于Ⅱ期（５５－６ ％ ） 和Ⅲ＋ Ⅳ期（４７－１ ％ ,Ｐ＜ ０－０５） ;组织学Ⅲ级癌细胞中凋亡指数明显高于Ⅰ,Ⅱ级（ Ｐ＜ ０－０５） ,Ｂｃｌ２ 蛋白阴性病例中凋亡指数明显高于Ｂｃｌ２ 阳性者（ Ｐ＜ ０－０１） ．结论　Ｂｃｌ２ 是通过抑制细胞凋亡参与肿瘤的生长过程,Ｂｃｌ２和Ｐ５３ 蛋白表达之间 存在密切负相关（τ＝ － ０－１７４７ ,Ｐ＜ ０－０５） ．     

长效胰岛素类似物对胰岛素抵抗和β细胞功能的影响

91名2型糖尿病患者分为来得时及诺和灵30R治疗组，测定治疗前后空腹血糖（FPG）。空腹血清免疫反应胰岛素（IRI）、SI、PI水平，计算PI占总胰岛素比例，并比较治疗前后HOMA模型中胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）及β细胞功能指数（HOMA-IS）的变化，分析血糖下降对胰岛素抵抗的影响。结果：（1）FPG两治疗组问差异无显著性。（2）HOMA-IS来得时组上升72％；诺和灵30R组上升62％，差异无显著性。HOMA-IR来得时组下降16％。诺和灵30R组下降17％，差异无显著性。下降与空腹及餐后血糖的下降相关。（3）治疗后，来得时组空腹PI及SI水平均略有下降；诺和灵组均略有上升．但均无统计学差异：结论：注射来得时及诺和灵30R均可改善胰岛素抵抗和β细胞功能。     

NSCLC survivin表达特点及其与细胞周期的关系研究

目的探讨survivin在非小细胞肺癌(NSCLC)中和正常肺组织中的表达,以及survivin与NSCLC临床病理特征、肿瘤细胞周期分布之间的关系。方法应用免疫组化SP方法检测43例NSCLC组织和10例正常肺组织中survivin的表达,分析survivin与NSCLC临床病理学特征的关系。同时应用流式细胞术(FCM)检测NSCLC细胞survivin阳性组与survivin阴性组细胞周期分布状态,计算S期细胞比例(SPF)和增殖指数(PI)。结果(1)NSCLC组织中survivin的阳性表达率为51.2%,正常肺组织无survivin表达,差异具有统计学意义(P0.05)。(2)survivin的表达与患者性别和淋巴结转移情况明显相关(P0.05);survivin的表达与患者年龄、病理类型、T分期均无明显相关(P0.05)。(3)通过使用流式细胞术对6例survivin表达阳性的NSCLC组织以及6例survivin表达阴性的NSCLC组织的细胞进行细胞周期检测,结果发现,survivin阳性组PI值为11.80±4.25,阴性组为5.68±2.56,差异有统计学意义(P0.05);survivin阳性组SPF为13.93±3.21,阴性组为6.44±2.52,差异有统计学意义(P0.05)。结论(1)Survivin在NSCLC组织中的表达明显高于正常肺组织。(2)Survivin在NSCLC中的表达与性别、淋巴结转移状态明显相关。(3)NSCLC组织中survivin阳性表达组SPF、PI均高于阴性表达组,提示survivin阳性表达通过抑制细胞凋亡提高了肿瘤细胞的增殖活性。     

P16、Rb和PCNA在非小细胞肺癌的表达及临床意义

目的检测P16、Rb和PCNA在非小细胞肺癌中表达的改变，并探讨其临床意义。方法收集88例NSCLC手术切除标本存档蜡块，其中鳞癌63例，腺癌25例；Ⅰ～Ⅱ期48例，Ⅲ～Ⅳ期40例。取正常肺组织20例作对照。应用免疫组织化学SABC法检测全部标本中P16、Rb、PCNA的表达情况，并计数PCNA增殖指数（PI）。结果P16蛋白表达缺失率为51．1％（45／88），Rh表达缺失率为21．6％（19／88），P16与Rb表达呈负相关；Rb表达缺失表现为较高的细胞增殖活性，Rb（＋）与Rb（-）组PCNA增殖指数分别为30．8±17．1，58．1±19．2，组间差异有显著性（P〈0．01），P16（＋）与P16（-）组间PCNA增殖指数分别为39．5±18．7，34．0±22．5，差异无显著性（P〉0．05）。结论p16基因改变在NSCLC发生中起重要作用，是NSCLC早期诊断的有用指标。Rh基因改变不是NSCLC发生发展的重要机制，P16与Rb表达呈负相关，P16和Rh作用于细胞周期和肿瘤抑制的单一途径，存在负反馈回路。Rb表达缺失表现为较高的细胞增殖活性，可能在预后估计上有一定意义。     

T细胞亚群Ⅰ和Ⅱ型细胞比例与急性移植物抗宿主病相关性研究

目的：研究T细胞亚群Ⅰ、Ⅱ型细胞比例在异基因造血于细胞移植（allo-HSCT）早期的变化，探讨其在急性移植物抗宿主病（aGVHD）发生中的作用。方法：移植后7、14、21、28d采取21例allo-HSCT受者外周血，加入佛波醇酯、伊能霉素、莫能霉素体外培养4h。3色荧光标记后用流式细胞仪检测T细胞亚群Ⅰ、Ⅱ型细胞比例。结果：发生aGVHD组Ⅰ型T细胞比例明显高于无aGVHD组。发生aGVHD时Th1、Tc1和CD4^＋IL-2^＋T细胞比例明显高于发生前和治疗后。与轻度相比，中、重度aGVHD发生时Tc1、Tc2和CD8^＋IL-2^＋T细胞比例更加升高，Th2细胞比例明显下降。移植早期CD3^＋干扰素-γ（INF-γ）^＋T细胞比例≥8％者aGVHD的发生率增加。移植后第7天Th1细胞比例〉5．5％者发生中、重度aGVHD的危险性显著增高（P〈0．05）。aGVHD腹泻者Th1细胞比例显著高于非aGVHD腹泻者（P〈0．05）。结论：Th1和Tc1细胞比例在aGVHD发生时明显升高，因此移植早期动态检测T细胞亚群的Ⅰ型细胞比例有助于aGVHD的诊治。     

铜绿假单胞菌诱导巨噬细胞凋亡与细胞周期的关系

目的探讨铜绿假单胞菌（PA）诱导巨噬细胞凋亡与细胞周期的关系。方法选用J774细胞作为PA上清液感染的体外巨噬细胞模型,使细胞与15%的PA上清液混合,在37℃水浴中培养3、6、9 h,并以此为实验组,同时设对照组（不含PA）。用吉姆萨染色技术进行J774细胞凋亡检测,用流式单染技术观察PA诱导巨噬细胞凋亡与细胞周期的关系。结果 PA上清液与J774细胞培养3 h即有少数细胞发生凋亡,随着干预时间延长,凋亡细胞数量逐渐增多;不同时间PA上清液能使J774细胞阻滞于G1期,G1期细胞百分比增加,S期细胞百分比明显下降,呈时间依赖性,且与对照组比较P均〈0.05。结论 PA上清液可以诱导细胞凋亡,呈时间依赖性;PA上清液能够阻止J774细胞从G1期向S期转换。     

胰升血糖素样肽1对胰岛β细胞脂性凋亡的拮抗作用及机制

目的观察棕榈酸盐对胰岛β细胞凋亡及胰腺衍生因子（PANDER）的影响,并观察胰升血糖素样肽1（GLP-1）对其的干预。方法培养β-TC3细胞分别以PA、PA＋GLP-1以及空白处理24h,以MTT法、Annexin-V／PI荧光染色流式细胞术、Tunel荧光染色法检测细胞凋亡,以RT—PCR法测定PANDER mRNA的表达。结果PA浓度达0．25mmol／L时细胞存活率开始显著下降,并随浓度上升逐渐下降（P〈0．05）。GLP-1能显著拮抗PA致胰岛口细胞凋亡;PA能明显增加PANDER mRNA的水平,而GLP-1能显著抑制PA对PANDER的作用。结论PA在诱导胰岛B细胞凋亡的同时刺激PANDER表达,GLP-1拮抗PA致胰岛β细胞凋亡及PANDER的表达;PANDER可能是GLP-1拮抗胰岛B细胞脂性凋亡的靶点之一。     

干扰CDC25A基因对CNE2细胞连续照射期间增殖的影响

目的 采用RNA干扰技术沉默CDC25A基因，观察其对鼻咽低分化鳞癌细胞株（CNE-2）在连续照射中后期加速增殖现象的影响。方法构建、培养出CDC25A基因沉默效果稳定的CNE2-psilence4．1-CDC25A，接受射线2Gy／d连续照射5d，分别采用MTT法、流式细胞术检测细胞的生长增殖活性，并在mRNA及蛋白水平上应用RT—PCR、WesternBlot法进行验证。结果MTT法检测结果表明，CNE2-psilence4．1-CDC25A细胞存活分数（SF）在第5天达到高峰，CNE2-psilencc4．1-Control细胞SF在第3天达到高峰。流式细胞术检测结果显示，CNE2-psilenee-4．1-CDC25A细胞在照射第5天S期细胞比（SPF）及增殖指数（PI）为最高值，CNE2-psilence4．1-Control细胞在照射第3天SPF值最高，在照射第4天PI值最高；RT-PCR、WesternBlot法进一步验证CNE2-psilence4．1-CDC25A细胞在照射第1、3、5天的CDC25A的表达与MTT法、流式细胞术检测结果基本吻合。结论与CNE2-psilencer4．1-Comrol细胞相比，基因沉默的CNE2-psileneer4．1-CDC25A细胞在连续分割照射期间，细胞的生长速度减慢、生长高峰延迟。     

花生四烯酸改善饱和脂肪酸诱导肝细胞胰岛素抵抗的作用机制

目的探讨花生四烯酸（AA）改善软脂酸（PA）诱导的肝细胞胰岛素抵抗（IR）的作用机制。方法分别用0.25 mmol/L PA和PA＋50μmol/L AA与HepG2细胞共同培养24 h,并设正常对照组。测定每组在有无胰岛素刺激时及胰岛素刺激情况下加和不加入PI3K抑制剂WT或PKC抑制剂CC时细胞内糖异生限速酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）活性和胰岛素受体底物2（IRS-2）蛋白水平。结果PA组基础及胰岛素刺激的PEPCK活性比对照组和PA＋AA组明显升高,IRS-2蛋白下降（P〈0.05）。加入WT与否,对照组和PA＋AA组PEPCK活性、IRS-2蛋白水平有明显差异（P〈0.05）;加入CC与否,对照组和PA＋AA组IRS-2蛋白水平有明显差异（P〈0.05）;PA组均无变化。结论肝细胞IR时,胰岛素信号转导通路的PI3K途径和PKC通路可能存在严重障碍。AA通过纠正异常的糖代谢关键酶活性和胰岛素信号蛋白量,改善胰岛素信号转导通路缺陷,缓解PA引起的IR。     

姜黄素对乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖、侵袭的影响及其机制探讨

目的观察姜黄素对雌激素受体阳性（ER＋）乳腺癌细胞MCF-7和ER-乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭的影响,并探讨其机制。方法将MCF-7/MDA-MB-231随机分为四组,姜黄素高、中、低剂量组（姜黄素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组）分别加入5、10、20μg/ml的姜黄素,对照组不加。MTT法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,通过Boyden小室观察细胞侵袭力,RT-PCR法检测细胞中的MMP-9 mRNA。结果与对照组相比,姜黄素各剂量组细胞增殖下降,G0/G1期及S期细胞比例减少,而G2/M期细胞比例显著增加,细胞侵袭指数降低,细胞中的MMP-9 mRNA表达下降,P均〈0.05。结论姜黄素能抑制MCF-7/MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭作用,与其降低MMP-9基因表达有关。     

外源性Nurr1基因过表达促进6-羟基多巴胺诱导的SK-N-SH细胞凋亡

目的 研究Nurr1基因过表达在6-羟基多巴胺（6-OHDA）选择性诱导多巴胺（DA）能神经元特异性损伤中的作用。方法 ①不同浓度6-OHDA作用不同时间，比较细胞形态；②细胞经6-OHDA作用后，经流式细胞术（FCM）检测细胞周期分布比例；③不同浓度6-OHDA作用不同时间，经AnnexinV／PI双染后，运用共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况，获得毒素诱导凋亡的最适剂量（75μmoL／L）和时间（12h），运用FCM检测两株细胞早期凋亡比例。结果 ①经6-OHDA处理后，倒置相差显微镜观察，结果显示SK-N-SH／Nurrl细胞形态损伤早于SK-N-SH细胞，且损伤程度明显；②细胞周期结果显示，6-OHDA诱导SK-N-SH细胞G2／M期细胞比例下降，而SK-N-SH／Nurr1细胞S期细胞比例下降；③经Annexin V／PI双染联合FCM检测早期凋亡比例结果显示，SK-N-SH／Nurr1细胞凋亡比铡明显高于SK-N-SH细胞（P〈0．05）。结论外源性Nurr1基因过表达促进了6-OHDA诱导的SK-N-SH／Nurr1细胞凋亡，Nurr1可能与SK-N-SH／Nurr1细胞对6-OHDA损伤敏感性增强有关。     

卡托普利及合用氯沙坦对大鼠心肌梗死区肌纤维细胞增殖和功能的影响

目的:比较卡托普利组和卡托普利与氯沙坦合用组急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌瘢痕组织的肌纤维细胞在离体情况下的增殖率及转化生长因子-1(TGF-β1)水平。方法:雄性wistar大鼠36只,前降支结扎术后存活12h以上者随机分成对照组、卡托普利组和合用组,用药14d后分离培养梗死区肌纤维细胞。流式细胞技术检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),刺激前后S期细胞比率(SPF)和增殖指数(PI),酶联免疫吸附实验(ELASA)法检测培养液中TGF-β1浓度。结果:AMI后梗死区肌纤维细胞具有极高的增殖活性。合用组SPF/PI低于对照组,而卡托普利组与对照组相比无统计学意义。合用组培养液中TGF-β1浓度低于对照组和卡托普利组。各组肌纤维细胞对AngⅡ刺激的反应性无统计学意义。结论:AMI后早期在有效剂量卡托普利的基础上加用氯沙坦更强抑制梗死区肌纤维细胞的增殖能力和生长因子产生。     

监护病房与普通病房下呼吸道铜绿假单胞菌感染的临床和耐药性对比研究

目的 通过对比重症监护病（ICU）与普通病房下呼吸道铜绿假单胞菌（PA）感染的临床资料和细菌耐药性,为临床合理防治提供依据。方法 分析1997年5月-2001年12月间发生于ICU和普通病房的323例（ICU163例,普通病房160例）下呼吸道PA感染患者的临床资料及自下呼吸道标本分离出的1387株PA（ICU879株,普通病房508株）的体外药敏活性。结果 323例患者的基础疾病较重,以慢性阻塞性肺疾病合并呼吸衰竭（23.31%的ICU患者和12.50%的普通病房患者）和恶性肿瘤（14.72%的ICU患者和14.38%的普通病房患者）最多。易患因素多而复杂,尤其侵袭性操作ICU明显多于普通病房,ICU较普通病房耐药率高,2000年后药物敏感性明显下降。药敏试验结果显示,PA对头孢哌酮-舒巴坦,哌拉西林-三唑巴坦,职权米卡星,头孢他啶,头孢吡肟,亚胺培南,哌拉西林,头孢哌酮,替卡西林-克拉维酸,环丙水利生的耐药率依次为1.0%,2.5%,6.1%,9.2%,11.3%,13.5%,13.8%,16.4%,17.2%及20.2%,ICU患者治疗效果差,病死率高。结论 PA致下呼吸道感染大多发生于免疫功能低下患者,各种易感因素促成本病发生,PA对常用抗生素亦存在一定耐药性,临床应根据药物敏感性选用抗生素。     

食管鳞癌患者外周血NK细胞、γδ T细胞变化的临床意义

目的探讨食管鳞癌患者外周血NK细胞、γδT细胞变化的临床意义。方法选择食管鳞癌患者35例（食管鳞癌组）,体检健康者18例（对照组）;采用流式细胞仪检测两组外周血NK细胞、γδT细胞。结果与对照组比较,食管鳞癌组NK细胞占淋巴细胞的比例稍升高、但无统计学差异（P〉0.05）,γδT细胞占淋巴细胞的比例明显降低（P〈0.05）;食管鳞癌组0～Ⅱ期患者的NK细胞比例明显高于Ⅲ～Ⅳ期者（P〈0.01）,0～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期患者γδT细胞占淋巴细胞的比例无统计学差异（P〉0.05）。结论食管鳞癌患者免疫功能紊乱,且随病情加重而发展。