5-杂氮脱氧胞苷对人膀胱癌细胞株T24增殖作用的影响

目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮脱氧胞苷(5-aza-dc)对人膀胱癌细胞株T24增殖、凋亡的影响.方法:应用不同浓度(0.1、0.5、2.5、12.5μmol/L)的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-dc,于不同作用时间(6、12、24、48 h)处理人膀胱癌细胞株T24,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度的5-aza-dc在不同时间作用下T24细胞株的生长抑制率:采用流式细胞仪检测不同浓度的5-aza-dc在处理T24细胞24 h后的凋亡率变化情况.结果:MTT提示各浓度的5-aza-dc对细胞生长均有抑制作用.流式细胞分析结果示,不同浓度5-aza-dc处理24 h后T24细胞凋亡率均明显增加.不同药物浓度组在同一作用时间下,T24细胞生长抑制率及凋亡率的差异有统计学意义(P<0.01);同一药物浓度在不同作用时间组之间的细胞生长抑制率差异也有统计学意义(P<0.01),且浓度为12.5 μmol/L的5-aza-dc作用24 h时对T24细胞的生长抑制及凋亡作用最明显.结论:5-aza-dc有抑制人膀胱癌细胞株T24生长及促进其凋亡的作用,其抑制作用呈时间依赖性及浓度依赖性.     

肌醇六磷酸对结肠癌HT-29细胞分化的影响

目的 研究肌醇六磷酸（IP6）对结肠癌细胞株HT-29细胞周期的影响,探讨IP6诱导HT-29细胞分化的作用及其机制。方法 将HT-29细胞与不同浓度（0、1.8、3.3 mmol/L）IP6共同孵育24、48、72 h后,收集细胞,使用流式细胞仪检测细胞周期,并用透射电镜观察细胞结构的变化。结果 除1.8 mmol/L IP6作用24 h对HT-29细胞周期分布没有明显的影响外,其他各组G0/G1期细胞明显增多,S期、G2/M期细胞则相应减少。同时,IP6作用后细胞结构发生改变,出现核固缩、细胞器丰富、微绒毛增多等分化趋势。结论 IP6能够调节HT-29细胞周期,阻止细胞从G0/G1期进入S期,从而诱导细胞分化。     

姜黄素联合顺铂对人前列腺癌PC-3细胞株的影响

目的观察姜黄素联合顺铂(DDP)对人前列腺癌PC-3细胞株抗肿瘤活性作用的影响,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测姜黄素单独或联合顺铂对人前列腺癌PC-3细胞株的抑制率;采用流式细胞术检测不同浓度姜黄素和顺铂单药、联合处理后对人前列腺癌PC-3细胞株凋亡率变化;RT-PCR检测姜黄素单独或联合顺铂对人前列腺癌PC-3细胞株作用后P53的mRNA蛋白表达。结果不同浓度的姜黄素组随着药物浓度增加、作用时间延长,细胞抑制率上升,差异有统计学意义(P<0.05);联合用药组明显高于单一用药组(P<0.05),两药联合具有协同作用;姜黄素和顺铂均促进人前列腺癌PC-3细胞株凋亡,联合用药可显著增加凋亡率;RT-PCR结果显示联合用药组能使P53 mRNA蛋白表达水平较单药组上升。结论姜黄素对人前列腺癌PC-3细胞株具有生长抑制作用,且具有剂量和时间依赖性,其与顺铂联合具有协同抑制作用,其协同作用可能与上调P53 mRNA表达有关。     

5-氮杂脱氧胞苷对白血病细胞生长作用及相关基因表达的影响

目的　探讨甲基化抑制剂 5 氮杂脱氧胞苷 (5 aza 2′ deoxycytidine,5 aza CdR)去甲基化治疗白血病的作用机制。方法　采用MTT实验、硝基四氮唑蓝 (NBT)还原实验和DNA凝胶电泳的方法 ,观察 5 aza CdR对白血病细胞株和原代细胞增殖、分化和凋亡的影响 ;通过RT PCR和甲基化特异性PCR方法检测DNA甲基转移酶 (DNMT)、p15、p5 3、bcl 2基因表达变化和p15基因的甲基化状态。结果　 5 aza CdR对HL 6 0、K5 6 2细胞和白血病原代细胞的生长抑制有明显的剂量依赖性和时间依赖性。 0 .5 μmol/L 5 aza CdR对HL 6 0细胞有较明显的促分化作用。不同浓度 5 aza CdR处理细胞后 ,有不同程度的p15、p5 3mRNA表达上调和bcl 2mRNA表达下调 ,DNMTmRNA表达水平在处理前后无明显变化。在原代白血病细胞中 ,p15基因甲基化程度随着 5 aza CdR浓度的增加逐渐减低。结论　 5 aza CdR对白血病细胞株和原代细胞的增殖均有明显的抑制作用 ,其作用机制可能与p15、p5 3基因的上调以及bcl 2基因的下调有关 ,p15 INK4B基因甲基化程度的降低 ,主要与 5 aza CdR的竞争性抑制有关 ,而不是由DNMT基因的下调所致     

反义寡核苷酸对前列腺癌细胞株PC-3血管内皮生长因子表达的抑制作用及意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对人类前列腺癌细胞PC-3生长及VEGF表达的影响。方法采用流式细胞术检测反义及正义寡核苷酸作用下前列腺癌细胞株PC-3 VEGF表达情况,MTT法检测VEGF反义及正义寡核苷酸对PC-3细胞生长抑制作用。结果在浓度为5～20μmol/L的反义寡核苷酸作用48 h后,肿瘤细胞VEGF表达量为0.102±0.008～0.037±0.006(P<0.05),细胞的生长抑制率为25.2%～43.9%(P<0.05),且存在浓度依赖性。结论 VEGF反义寡核苷酸可能通过抑制前列腺癌细胞PC-3 VEGF的表达而抑制肿瘤细胞的生长。     

超声破坏载紫杉醇微泡对卵巢癌细胞株SKOV3的抑制增殖及诱导凋亡作用

目的探讨超声破坏载紫杉醇微泡后对卵巢癌细胞株SKOV3生长抑制及凋亡诱导作用。 方法体外培养卵巢癌细胞,将细胞分为5组,即紫杉醇组,紫杉醇联合超声辐照组,载紫杉醇微泡联合超声辐照组,单纯载紫杉醇微泡组及空白对照组。用MTT法观察超声破坏载紫杉醇微泡后在不同时间对细胞的生长抑制情况,用透射电镜观察细胞的凋亡诱导情况。 结果在紫杉醇浓度为1×10^-6mol/L时,载紫杉醇微泡联合超声组的细胞在微泡辐照击破后生长明显受到抑制,并且随培养时间延长,抑制效应越明显,透射电镜观察到载紫杉醇微泡联合超声组的细胞有凋亡小体,比其它各组对卵巢癌细胞株SKOV3的凋亡诱导作用强。 结论载紫杉醇微泡被超声辐照破坏后对卵巢癌细胞株SHKOV3生长有明显抑制作用,并且能诱导其凋亡。     

氯化锰标记前列腺癌细胞株的体外MRI研究

目的 初步探索使用氯化锰（MnCl2）标记前列腺癌细胞株（PC-3）行体外MRI的可行性和安全性.方法 将PC-3进行复苏、培养和扩增.在细胞培养箱中,PC-3与8组含不同MnCl2浓度的F-12 HAM＇S培养基共同培养1h,收集已标记的PC-3并行MRI.另对不同细胞数量级和不同时间点的MnCl2标记的PC-3行MRI.用含维拉帕米的培养基培养MnCl2标记的PC-3 4 h,在不同时间点取标记后的PC-3行MRI.用WST-8法测定氯化锰标记的PC-3活性.结果 MnCl2标记的PC-3在T1WI显示为高信号,其信号强度与未标记的PC-3形成明显差异（P＜0.01）,以1.0 mmol /L MnCl2为标记浓度时信号强度最强.1.0mmol/L MnCl2标记的PC-3在细胞数量为0.5×106时可呈高信号.在体外培养的条件下,标记后24 h的PC-3信号强度明显下降,标记后72 h基本恢复至未标记的PC-3信号强度水平.维拉帕米可延长MnCl2标记的PC-3有效成像时间至72 h.标记后4 h,除0.1 mmol/L MnCl2对PC-3的活性没有影响（P ＞ 0.05）外,其余各浓度组（＞ 0.1mmol/L）的MnCl2对PC-3的活性均有不同程度的影响（P ＜ 0.05）;标记后24h,0.5 ～ 1.0 mmol/L MnCl2对细胞的活性影响不明显（P ＞ 0.05）.结论 MnCl2可以有效标记PC-3,并能在T1WI以高信号成像且具有一定灵敏度.在浓度低于或等于1.0 mmol/L时,标记PC-3有一定的安全性,但标记维持时间较短.钙离子通道阻滞剂（维拉帕米）可适当延长PC-3的MnCl2标记维持时间.     

Cyclopamine对人前列腺癌PC-3细胞增殖凋亡及Bcl-2,Bax,caspase-9蛋白表达的影响

目的研究cyclopamine对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的作用及对Bcl-2,Bax,caspase-9蛋白表达的影响,并探讨其机制。方法体外培养的PC-3细胞应用cyclopamine处理后,通过MTT测定细胞增殖抑制情况;电镜下观察肿瘤组织形态学变化;流式细胞仪检测凋亡率;Western印迹技术检测Bcl-2,Bax,caspase-9蛋白的表达变化。结果MTT法结果显示4μmol/L,8μmol/L及12μmol/L浓度的cyclopamine对PC-3细胞增殖有显著抑制作用,与对照组相比差异有显著性(P0.05或P0.01),抑制效果都随着浓度的增大及时间的增加而增强。电镜下可观察到典型的凋亡细胞;流式细胞仪检测结果表明cyclopamine诱导PC-3细胞发生凋亡;Western印迹技术的结果:经培养72h后,随着药物浓度增大,Bcl-2蛋白表达呈逐渐减少,而Bax,有活性的caspase-9蛋白表达逐渐增多。结论Cyclopamine抑制PC-3细胞增殖,在一定剂量和时间范围内呈时间、浓度依赖关系,并可诱导其凋亡。Cyclopamine诱导PC-3细胞凋亡可能通过Bcl-2,Bax,caspase-9介导。     

人胚胎脊髓神经干细胞的体外培养条件及分化特征

目的:观察人胚脊髓神经干细胞的体外培养条件及分化情况。方法:实验于2004-10/2005-04在西安交通大学医学院神经生物教研室完成。①从7～10周胚龄流产人胚胎脊髓分离脊髓神经干细胞(家属知情同意),采用无血清培养技术进行原代和传代培养。培养液组成:DMEM/F12(1∶1),表皮生长因子20μg/L,碱性成纤维细胞生长因子20μg/L,重组人白血病抑制因子10μg/L,N2添加剂(终浓度为10mL/L)。②并采用免疫荧光法检测细胞的分化情况。结果:①人胚脊髓神经干细胞形态学观察:原代细胞培养得到大量悬浮生长的神经干细胞球,形态较规则,呈圆形,细胞边界清楚,折光性强。部分细胞贴壁生长继而分化。传代培养后,细胞团生长速度明显加快;传3代以后脊髓神经干细胞易贴壁。②人胚脊髓神经干细胞的鉴定和分化结果:神经干细胞球,巢蛋白染色阳性;可诱导分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论:人胚胎脊髓分离培养得到的细胞具有脊髓神经干细胞的基本特征,可进一步用于基础及临床研究。     

脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠体外诱导Kasumi-1细胞分化和凋亡作用

目的 探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(PB)体外阻断AML1-ETO的生物学功能，消除AML1-ETO的转录抑制，诱导Kasumi-1细胞生长抑制、分化和凋亡作用。方法 应用MTT比色法观察PB对细胞的生长抑制作用，普通光学显微镜和透射电镜观察细胞形态和结构改变，流式细胞术分析细胞周期和检测髓系分化抗原的表达，Annexin V标记、DNA凝胶电泳和流式细胞术分析细胞凋亡。结果 ①PB明显抑制Kasumi—1细胞的生长，半数抑制浓度(IC50)约为2．3mmol/L；②经PB作用后细胞阻滞于G0／G1期，伴有S期细胞减少；③PB可诱导Kasumi—1细胞髓系分化抗原CD11b和CD13表达增加，并呈剂量和时间依赖性；④PB诱导Kasumi-1细胞凋亡，呈时间剂量依赖性，PB3mmol/L培养2d早期凋亡细胞增加，培养3d晚期凋亡细胞增加，培养5d出现明显DNA梯形条带；⑤处理后的细胞出现单核细胞样分化和凋亡细胞形态改变。结论 脱乙酰化酶抑制剂PB抑制Kasumi—1细胞生长，使细胞阻滞于G0／Gl期；诱导细胞部分分化和凋亡。     

Establishment of a human pancreatic cancer cell line and detection of pancreatic cancer associated antigen

We succeeded in an establishment of a human pancreatic cancer cell line (PK-1) from liver metastasis of pancreatic cancer. Primary pancreatic cancer cells grew as islands surrounded by fibroblastic cells. However, these fibroblastic cells were gradually omitted by the polygonal shaped cancer cells. This cell line contained neither zymogen granules nor trypsin indicating that this pancreatic cancer originated from pancreatic duct cells. Modal chromosome numbers of this cell line were 42 and 72 and the doubling time was 48 hr. This cell line was transplantable in athymic nude mice to form progressive tumors which had histology similar to that of the original cancer (papillotubular adenocarcinoma). Neither AFP nor ferritin but CEA was detected on the surface and in the cytoplasm of this cell line in indirect immunofluorescence. Rabbit antiserum against this pancreatic cancer cell line detected pancreatic cancer associated antigen besides CEA in the culture supernatant. This antiserum reacted with sera from patients with pancreatic cancer to form a distinct precipitin line in agarose gel which fused with the precipitin line formed between the culture supernatant of this cell line and the antiserum.     

Effects of glucose and D-3-hydroxybutyrate on human pancreatic islet cell function

Beta-Cell function in human islets derived from a number of kidney donors was investigated by using various types of islet preparations. With fresh islets, both insulin release and biosynthesis were increased by raising glucose concentrations, although the response was a variable one. In fresh islets, the effects of 5 mmol of glucose/l on release were potentiated by 10 mmol of D-3-hydroxybutyrate/l. Insulin release at 20 mmol of glucose/l was inhibited by adrenaline (0.1 mmol/l), and potentiated by theophylline (10 mmol/l) in the presence of 5 mmol of glucose/l, in islets cultured for 4 days. After culture for 8 days, islets still showed an increase in insulin release and biosynthesis in response to glucose. Pancreas slices derived from fresh human tissue also responded to increasing concentrations of glucose with a sigmoidal curve for insulin release.     

双氢青蒿素对人肺腺癌细胞株A549抑制作用的实验研究

目的观察双氢青蒿素对人肺腺癌细胞株A549的作用。方法采用四唑氮蓝（MTT）法测定不同浓度和时间双氢青蒿素对A549细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术检测双氢青蒿素对A549细胞增殖和细胞周期的影响;应用透射电镜分析法检测双氢青蒿素对A549细胞凋亡的影响。结果双氢青蒿素对A549细胞有明显的体外增殖抑制作用,72 h的IC50值为580 nmol/L,且有明显的时间和剂量依赖关系;双氢青蒿素作用后G0/G1期细胞数增加;双氢青蒿素作用A549细胞后可以出现凋亡的形态学改变。结论双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞有生长抑制作用,其机制可能与诱导A549细胞周期阻滞和凋亡有关。     

全反式维甲酸对卵巢上皮腺癌细胞株抑制作用的实验研究

目的 探讨全反式维甲酸（ATRA）对卵巢上皮性腺癌细胞株（COC2）增殖的抑制作用.方法 用不同浓度的ATRA处理体外培养的COC2,采用直接细胞计数法计算一定时期内的细胞密度情况;利用倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变及细胞结构变化.结果 ATRA能够抑制COC2增殖,在1 ～20 μmol/L之间,具有浓度依赖性,在30 μmol/L时几乎未见存活细胞;倒置显微镜和电镜观察到使用ATRA处理后,细胞形态及结构受到破坏.结论 在一定浓度范围内,ATRA对卵巢上皮性腺癌细胞株（COC2）有抑制作用.     

Four peptides decrease the number of human pancreatic adenocarcinoma cells

BACKGROUND: Long-acting natriuretic peptide, vessel dilator, kaliuretic peptide and atrial natriuretic peptide are four peptide hormones synthesized by the same gene. Their main known biologic properties are sodium and water excretion and blood pressure lowering in both animals and humans. METHODS AND MATERIALS: These four peptide hormones, each at their 1-microm concentrations, were evaluated for their ability to decrease the number and/or proliferation of human pancreatic adenocarcinoma cells in culture at 24, 48, 72 and 96 h. RESULTS: Vessel dilator, long-acting natriuretic peptide, kaliuretic peptide and atrial natriuretic peptide decreased the number of human pancreatic adenocarcinoma cells in culture by 65% (P<0.001), 47% (P<0.01), 37% (P<0.05) and 34% (P<0.05), respectively, within 24 h. This decrease was sustained without any proliferation of the cancer cells occurring in the 3 days following this decrease in number. The mechanism of these peptide hormones' decrease in cancer cell number and antiproliferative effects was a 83% (P<0.001) or greater inhibition of DNA synthesis but not owing to enhanced apoptosis, i.e. programmed cell death. The two known mediators of these peptide hormones' mechanism(s) of action, i.e. cyclic GMP and prostaglandin E2, inhibited DNA synthesis in these adenocarcinoma cells by 51% and 23%, respectively. CONCLUSIONS: Four peptide hormones significantly decrease the number of pancreatic adenocarcinoma cells within 24 h and inhibit the proliferation of these cells for at least 96 h. Their mechanism of doing so is via inhibition of DNA synthesis mediated in part by cyclic GMP.     

吡罗昔康声动力效应对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 从细胞增殖和凋亡两方面观察吡罗昔康声动力效应对乳腺癌细胞MDA-MB-231的迟发抑制作用。方法 用MIT法检测吡罗昔康声动力作用后MDA-MB-231细胞的增殖能力,采用TUNEL法检测凋亡。结果吡罗昔康声动力效应和单纯超声作用均能明显降低MDA-MB-231细胞的增殖代谢活性而抑制其增殖,但是前者作用更为显著（P〈0．01）。TUNEL法染色显示吡罗昔康声动力组和单纯超声组均有数量不等的凋亡细胞,并以前者为著。结论吡罗昔康介导的声动力作用不仅能显著抑制MDA-MB-231细胞增殖,还能有效诱导其凋亡。     

PPAR-γ对人胰腺癌BxPc-3细胞增殖的影响

目的 通过促进人胰腺癌BxPc-3细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）的表达,分析其对BxPc-3细胞增殖的影响。方法 培养BxPc-3细胞,分别给予终浓度为5、10、20、40 μmol/L的PPAR-γ 激动剂罗格列酮处理细胞,蛋白免疫印迹法检测PPAR-γ蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察细胞增殖活性。结果 BxPc-3细胞经5、10 μmol/L罗格列酮处理后其PPAR-γ表达与对照组比较差异均无统计学意义（P均> 0.05）,经20、40 μmol/L罗格列酮处理后PPAR-γ表达升高,与对照组比较差异有统计学意义（P均< 0.05）,且40 μmol/L罗格列酮组PPAR-γ表达较20 μmol/L罗格列酮组升高（P < 0.05）;BxPc-3细胞给予浓度为5、10 μmol/L罗格列酮处理后BxPc-3细胞增殖活性分别为0.60±0.07、0.57±0.06,与对照组的0.62±0.09比较差异均无统计学意义（P均> 0.05）;经40 μmol/L罗格列酮处理后BxPc-3细胞增殖活性为0.30±0.02,低于20 μmol/L罗格列酮的0.45±0.03,且2组BxPc-3细胞增殖活性均低于对照组、5 μmol/L罗格列酮组和10 μmol/L罗格列酮组（P均< 0.05）。结论 促进PPAR-γ表达可以有效抑制人胰腺癌BxPc-3细胞增殖。     

维甲酸诱导HL-60细胞分化中对细胞周期素依赖性激酶活性的影响

目的探讨维甲酸（ＲＡ）对ＨＬ６０细胞的增殖抑制和诱导分化作用与细胞周期素依赖性激酶（ＣＤＫ）活性变化的相关性。方法用５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）或芳维甲（ＡＥ）处理ＨＬ６０细胞１～４天,在观察细胞生长、四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原实验以及细胞周期分析的基础上,用组蛋白Ｈ１激酶活性分析技术检测ＣＤＫ２的活性,免疫沉淀法分析结合于ＣＤＫ２和ＣＤＫ４上的相应的细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎ）Ｅ和Ｄ的量。结果ＨＬ６０细胞在ＡＴＲＡ或ＡＥ作用下,细胞增殖减慢,对ＮＢＴ的还原能力明显增强,９０％左右的细胞被阻滞在Ｇ１／Ｇ０期;在Ｇ１到Ｓ期转换过程中起关键作用的ｃｙｃｌｉｎＥ／ＣＤＫ２的活性显著下降,结合于ＣＤＫ４上的ｃｙｃｌｉｎＤ１的量减少。结论ＲＡ抑制ＨＬ６０细胞增殖并诱导其分化可能与ＣＤＫ２和ＣＤＫ４的活性下降有密切关系     

Mesothelin is a malignant factor and therapeutic vaccine target for pancreatic cancer

Given the high fatality rate of pancreatic cancer, an effective treatment for this devastating disease is urgently needed. We have shown that mesothelin expression was higher in human pancreatic cancer cells than in human pancreatic duct epithelial cells, and mesothelin mRNA was substantially overexpressed in 18 of 21 (86%) clinical pancreatic adenocarcinoma specimens when compared with the surrounding normal tissues. However, the biological functions of mesothelin in tumor progression are not clearly understood. Here we studied the effects of mesothelin overexpression in pancreatic cancer cell proliferation and migration in vitro and pancreatic cancer progression in vivo. We found that forced expression of mesothelin significantly increased tumor cell proliferation and migration by 90% and 300%, respectively, and increased tumor volume by 4-fold in the nude mice xenograft model when compared with the vector control cell line. Silencing of mesothelin inhibited cell proliferation and migration in pancreatic cancer cells and ablated tumor progression in vivo. Vaccination with chimeric virus-like particles that contain human mesothelin substantially inhibited tumor progression in C57BL/6J mice. The increases in mesothelin-specific antibodies and CTL activity and the decrease in regulatory T cells correlated with reduced tumor progression and prolonged survival. This study revealed novel functions of mesothelin and suggested a new therapeutic vaccine strategy whereby mesothelin is targeted to control pancreatic cancer progression.