染料木素对子宫内膜异位症裸鼠模型体内病灶组织生长的抑制作用

目的研究染料木素对子宫内膜异位症(EM)裸鼠模型体内病灶组织生长及黏着斑激酶(FAK)活性的影响,探讨其作为EM治疗药物的可能性及其作用机制。方法建立EM裸鼠模型,随机分为染料木素低(0.5 mg/kg)、中(1.5 mg/kg)、高(4.5 mg/kg)三个剂量组、雌激素受体拮抗剂他莫昔芬(4.5 mg/kg)对照组、溶剂对照组和空白对照组,每组5只;隔日注射1次,连续给药2周;每周测量1次病灶直径。并采用化学发光分析法测量各组裸鼠体内雌激素含量,采用免疫印迹法比较各组病灶组织FAK及其下游信号蛋白AKT的表达及其磷酸化水平变化情况。结果和空白对照和溶剂对照相比,染料木素各剂量组均能显著抑制EM裸鼠模型体内病灶的生长(P<0.05),并呈现剂量依赖性的作用特点,其中大剂量组与他莫昔芬对照组相比差异也有统计学意义(P<0.05)。分析其作用机制,发现染料木素对EM模型体内雌激素水平没有影响,但能够下调FAK及其下游AKT蛋白的磷酸化水平,而对照药他莫昔芬无此作用。结论染料木素可以有效阻抑EM病灶组织生长,抑制FAK及其下游AKT蛋白活化可能是其作用机制之一。     

染料木黄酮不是通过雌激素受体促进成骨细胞增殖

目的:探讨染料木黄酮对成骨细胞活性的影响及其可能机制,为染料木黄酮防治骨质疏松提供理论依据。方法:实验于2001-05/2003-01在卫生学环境医学研究所完成。无菌条件下用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分步消化乳鼠颅盖骨获得成骨细胞,传代后细胞用于实验。染料木黄酮组分别加入10-5～10-7mol/L染料木黄酮,对照组以吐温20为对照。分别用噻唑蓝比色法和3H-胸腺嘧啶掺入法测定成骨细胞增殖和DNA合成,用反转录-聚合酶链式反应和Westernblot测定雌激素受体mRNA和蛋白表达。结果:①成骨细胞培养基中加入(10-5～10-6mol/L)染料木黄酮,培养48h和72h后噻唑蓝的吸光度值与对照组相比均明显升高[培养48h:(0.39±0.03),(0.45±0.03),(0.46±0.02),(0.19±0.05);培养72h:(0.29±0.04),(0.32±0.02),(0.37±0.02),(0.15±0.04)]。②染料木黄酮组3H-胸腺嘧啶掺入量均显著增加[染料木黄酮组为(101.20±10.06),(844.60±366.90),(512.20±197.6);对照组为(68.67±10.39)],未发现成骨细胞雌激素受体基因和蛋白表达。结论:染料木黄酮不是通过促进雌激素受体基因和蛋白的表达来促进成骨细胞增殖。     

染料木黄酮对小鼠子宫内膜癌c-fos、cj-un mRNA表达的影响

目的探讨染料木黄酮对雌二醇-17β(E2)所诱发的小鼠子宫内膜癌c-fos、c-jun mRNA表达的影响。方法利用免疫组化方法和定量RT-PCR法检测小鼠子宫内膜癌细胞c-fos、c-jun mRNA的表达量。结果E2单独投与群c-fos、c-jun mR-NA表达增强,与E2单独投与群比较,E2和染料木黄酮联合投与群明显抑制E2刺激所诱发的c-jun表达增强。c-fos mRNA表达有减少趋势。结论E2皮下注射的雌性ICR小鼠给予染料木黄酮后c-fos、c-jun mRNA表达减少,对子宫内膜癌的预防有一定的意义。     

染料木黄酮对小鼠子宫内膜癌c-fos、cj-un mRNA表达的影响

目的探讨染料木黄酮对雌二醇-17β（E2）所诱发的小鼠子宫内膜癌c-fos、c-jun mRNA表达的影响。方法利用免疫组化方法和定量RT-PCR法检测小鼠子宫内膜癌细胞c-fos、c-jun mRNA的表达量。结果E2单独投与群c-fos、c-jun mR-NA表达增强,与E2单独投与群比较,E2和染料木黄酮联合投与群明显抑制E2刺激所诱发的c-jun表达增强。c-fos mRNA表达有减少趋势。结论E2皮下注射的雌性ICR小鼠给予染料木黄酮后c-fos、c-jun mRNA表达减少,对子宫内膜癌的预防有一定的意义。     

姜黄素对人子宫内膜癌细胞增殖抑制的初步研究

目的观察姜黄素对体外培养的人子宫内膜癌(HEC-1-B)细胞增殖和细胞周期分布的影响。方法将体外培养的HEC-1-B细胞随机分为5组:对照组、姜黄素Ⅰ组、姜黄素Ⅱ组、姜黄素Ⅲ组和姜黄素Ⅳ组。分别给予不同浓度的姜黄素(0,10,20,40,80)μmol/L培养48 h。采用MTT法和Western blot法检测HEC-1-B细胞的增殖程度;流式细胞仪进行细胞周期时相分析。结果①MTT法显示培养48 h后,姜黄素组的吸光度值A490 nm低于对照组(P<0.01),且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。②Western blot法结果显示,与对照组比较,姜黄素作用48 h后,姜黄素各组的PCNA表达减少(P<0.01),且在10～80μmol/L范围内呈剂量依赖性。提示姜黄素可抑制HEC-1-B细胞内PCNA的表达。③流式细胞仪检测显示培养48 h后,姜黄素组的G2/M比例高于对照组(P<0.01),且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。结论在一定浓度(10～80μmol/L)范围内,姜黄素可抑制体外培养的HEC-1-B细胞增殖,阻止细胞周期进展。这可能是姜黄素抗HEC-1-B细胞作用的机制之一。     

染料木素抑制HER2阳性人乳腺癌与卵巢癌细胞增殖作用的研究

目的研究染料木素对人HER2高表达乳腺癌与卵巢癌细胞增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法采用流式细胞分析技术、western blotting及细胞增殖与凋亡检测试剂盒等检测方法,对染料木素作用于HER2表达阴性的MCF-7细胞与通过稳定转染HER2而获得的MCF-7-1以及BT-474、SKOV-3等HER2阳性表达细胞的效果进行了剂量或时间反应关系的研究。结果浓度为0.1～10μg/ml的染料木素对HER2表达水平低的MCF-7细胞增殖的影响不大,而对HER2高表达的MCF-7-1、BT-474和SKOV-3细胞的增殖有显著的抑制作用(与DMSO对照组相比,P<0.01),且表现出剂量依赖性反应关系。用10μg/ml的染料木素作用12～48 h可以诱导BT-474细胞凋亡或坏死(与DMSO对照组相比,P<0.01),且表现出时间依赖性反应关系。结论染料木素能够明显抑制HER2阳性肿瘤细胞的增殖,这一作用可能是通过下调肿瘤细胞HER2信号转导而介导的。     

子宫内膜癌的电镜诊断研究

目的研究子宫内膜癌的超微结构变化。方法运用电镜技术研究了２９例子宫内膜癌。结果确定了具有诊断意义的形态学特征：①不规则奇形核仁或网孔状核仁；②畸形核，分叶核伴细桥－核间桥形成；③核旁微丝；④核体；⑤核包涵体；⑥细胞重度多形性，排列紊乱，似乱石铺堆；⑦出现奇形细胞和／或癌巨细胞；⑧形成奇形乳头和奇形细胞簇；⑨细胞表面特异功能结构分化不良。结论电镜能够确定子宫内膜癌的组织学类型，准确判断肿瘤细胞的分化程度，更能细致地观察子宫内膜癌的亚细胞结构，为该病的临床诊断提供了可靠的形态学依据，更有利于其发病机理的深入研究     

As2O3对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B皮下移植瘤抗肿瘤作用

目的检测不同浓度As2O3对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞裸鼠皮下移植瘤的抗肿瘤作用及对瘤细胞内磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶（p-ERK）表达的影响,进一步探讨As2O3的抗肿瘤机制。方法建立人子宫内膜癌HEC-1-B细胞皮下移植瘤模型,随机分为实验组,即As2O3低剂量（1.0 mg/kg）、中剂量（2.5 mg/kg）、高剂量（5.0 mg/kg）剂量组,生理盐水（NS）组及顺铂组（5 mg/kg）,腹腔内注射给药,连续8 d。观察用药前后裸鼠体质量改变。剥取瘤组织,计算药物的抑瘤率。检测用药后裸鼠的肝肾功能及血常规。透射电镜观察细胞变化,流式细胞仪检测细胞凋亡周期和细胞凋亡率,免疫组化法检测p-ERK的表达。结果不同浓度As2O3和顺铂均有不同程度抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞凋亡的作用,其中As2O3低剂量组的抑瘤率为34.3%,p-ERK的表达率为37.5%,该组在亚G1期出现典型的凋亡峰,且As2O3低剂量组与NS组比较,凋亡率、瘤质量差异均有显著意义（F=27.20、33.92,q=9.19、13.34,P〈0.05）。As2O3低剂量组与顺铂组相比,无明显血液及肝肾毒性。结论低剂量As2O3组能明显抑制肿瘤细胞HEC-1-B生长,且毒副作用轻,可能与阻滞细胞周期,抑制p-ERK表达有关。     

染料木黄酮对乳鼠颅盖骨成骨细胞增殖分化和转化生长因子β表达的影响

目的:动物实验、临床研究以及流行病学调查表明染料木黄酮可预防骨质疏松的发生,但其具体机制尚不清楚。观察染料木黄酮对成骨细胞活性的影响及其与转化生长因子β的关系。方法:实验于2001-05/2003-05在卫生学环境医学研究所生化实验室完成。①实验材料:选择出生3d的Wistar大鼠,体质量(10±2)g。②实验方法:无菌条件下分离颅盖骨,剪碎,加入胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶,用含体积分数为0.1胎牛血清的F-12培养基重悬,调整细胞浓度后接种于25mL培养瓶中,Ⅱ代细胞用于实验。实验分为染料木黄酮组、雌激素组和对照组(吐温20),染料木黄酮组浓度分别为0.1,1,10μmol/L,雌激素组的浓度分别为0.1,1nmol/L。③实验评估:培养48,72h应用四甲基偶氮唑盐测定成骨细胞增殖;培养48h3H-胸腺嘧啶掺入实验测定DNA合成;免疫组织化学方法观察转化生长因子β的表达。结果:①染料木黄酮对成骨胞增殖的影响:与对照组相比,培养48h后0.1,1,10μmol/L染料木黄酮四甲基偶氮唑盐的吸光度值分别增加1.43,1.36,1.05倍;0.1,1nmol/L雌激素组分别增加1.00倍和0.84倍;培养72h,染料木黄酮3个浓度组分别增加1.46,1.13倍和0.93倍,雌激素组分别增加2.26倍和2.30倍;各组与对照组相比差异均有显著性(P<0.05)。②3H-胸腺嘧啶掺入实验:0.1,1,10μmol/L染料木黄酮3H-胸腺嘧啶掺入量分别比对照组增加6.45,11.29,0.47倍;0.1,1nmol/L雌激素组增加16.5倍和15.4倍,各组与对照组相比差异均有显著性(P<0.05)。③成骨细胞转化生长因子β的表达:各组成骨细胞周围均有较强的呈棕色的阳性颗粒,但染料木黄酮组与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论:不同浓度染料木黄酮和雌激素一样可以促进成骨细胞增殖和DNA合成,但染料木黄酮不是通过影响转化生长因子β的表达来促进成骨细胞增殖与分化,详细机制还需进一步研究。     

黄芪总苷对人子宫内膜癌KLE细胞作用的研究

目的 探讨黄芪总苷(TA)单独或与顺铂(DDP)联合应用对人子宫内膜癌KLE细胞生长的影响.方法 培养KLE细胞,分为三组分别加入不同浓度TA和(或)DDP,另设阴性对照组,观察细胞形态学改变,中性红比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布.结果 TA能明显抑制KLE细胞增殖,且呈剂量-时间依赖性,12 h、24 h、48 h的IC50分别为374.2、263.5、212.1 μg/ml;两药联合应用时抑制率显著增高(P<0.01);流式细胞仪检测显示TA能使KLE细胞发生G1期阻滞,同时诱导细胞凋亡,其凋亡率与浓度-时间呈依赖关系,荧光显微镜可见细胞凋亡形态学变化.结论 TA可抑制KLE细胞增殖,诱导细胞凋亡,且与顺铂联合应用有协同作用.     

电化学治疗对人肝癌细胞SMMC7721化疗耐药性的影响

目的 观察电化学治疗对人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１化疗耐药性的影响,为其临床应用提供实验依据。方法 细胞计数法观察ＥＣＴ、化疗药阿霉素（ＡＤＲ）结合的抑癌效应,应用“多药效应分析软件”分析两之间的相互作用。流式细胞仪（ＦＣＭ）分析ＥＣＴ细胞内ＡＤＰ累积的影响,免疫组化法检测ＥＣＴ对ＳＭＭＣ７７２１细胞Ｐ－ｇｐ的影响,ＲＴ－ＰＣＲ法观察ＥＣＴ对细胞ＭＤＲ１ ｍＲＮＡ水平的影响。结果 ＥＣＴ与ＡＤＲ结     

CXCL10基因对乳腺癌细胞株MCF-7肿瘤相关基因表达的影响

EGF在实验组、对照组及未转染组灰度值分别为0.183±0.003、0.787±0.019及0.789±0.011,3组间比较差异有统计学意义(F=2 232,P<0.01);STAT3在实验组、对照组及未转染组灰度值分别为0.573±0.016、0.707±0.008及0.711±0.013,3组间比较差异有统计学意义(F=115,P<0.01).结论 CXCL10能在MCF-7细胞株稳定表达,且CXCL10能抑制MCF-7细胞VEGF及STAT3表达,从而发挥抗肿瘤作用.     

木瓜凝乳蛋白酶与5-Fu或MTX对人肝癌细胞7402的细胞毒试验

目的：测定木瓜凝乳蛋白酶及其与5-氟尿嘧啶(5-Fu)、氨甲喋呤(MTX)单独或联合作用对人肝癌细胞7402的细胞毒性。方法：采用MTT法，不同浓度的酶和药物在不同的培养时间下，通过其细胞抑制率和半数抑制率(IC50)测定木瓜凝乳蛋白酶及联合药物的细胞毒性。结果：木瓜凝乳蛋白酶对7402细胞的：IC50约为125μg／mL，随浓度增加对细胞的抑制率增加。培养36h时酶对细胞的毒性最大。酶与5-Fu、MTX联合使用比单独使用效果更好。结论：木瓜凝乳蛋白酶对人肝癌细胞7402具有细胞毒作用，酶在培养36h时细胞毒作用最大；联合化疗药物有一定的效果。     

缺氧对乳腺癌细胞E-cadherin、cytokeratin、vimentin表达的影响

目的:研究体外缺氧对乳腺癌细胞系MCF7浸润能力及其细胞表面黏附分子E-cadherin和细胞骨架蛋白犤细胞角蛋白(cytokeratin)、波形蛋白(vimentin)犦表达的影响。方法:模拟体外缺氧环境,观察缺氧对乳腺癌细胞MCF7浸润穿透Matrigel的能力;以及采用半定量RT-PCR检测细胞表面黏附分子E-cadherin和cytokeratin、vimentin表达情况。结果:缺氧状态下MCF7细胞的浸润能力明显增强;且在缺氧条件下E-cadherin基因表达下降、cytokeratin、vimentin基因表达升高。结论:缺氧状态下MCF7细胞转移能力和其表面的E-cadherin基因、cytokeratin、vimentin基因表达存在一定关系。     

六磷酸肌醇对人胰腺癌细胞株PC-3和人胰腺原代培养细胞增殖分化的影响

目的观察六磷酸肌醇(IP6)在不同浓度、不同时间作用下对胰腺癌细胞株PC-3和正常胰腺原代培养细胞生长、分化的影响。方法直接细胞记数绘制生长抑制曲线、MTT法、流式细胞计检测细胞凋亡等方法观察PC-3细胞株和原代培养细胞增殖、分化特性。结果IP6对PC-3胰腺癌细胞的抑制呈时间、剂量依赖性,10 mmol/L时抑制作用达到最强,5mmol/L时的抑制效果稍小于10 mmol/L;IP6在<5 mmol/L时对人胰腺原代培养细胞的增殖几乎无影响,5 mmol/L时有轻度的抑制作用,10 mmol/L有明显的抑制作用。结论5 mmol/L的IP6既最大限度的杀伤肿瘤细胞,又最小程度的干扰非靶细胞,为最佳抑癌浓度。     

siRNA 干扰的 DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的影响及机制研究

目的：探讨DKK1 siRNA干扰的DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法瞬时转染DKK1 siRNA至培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞;应用实时定量PCR和蛋白免疫印迹方法分别检测转染前后细胞中DKK1的mRNA和蛋白表达;应用Transwell实验检测癌细胞侵袭、迁移能力。应用荧光显微镜观察转染前后Wnt/β-catenin信号通路中活性β-catenin、MMP14表达情况。结果转染DKK1 siRNA至Ishikawa细胞使细胞中DKK1基因表达水平降低21.00%（t＝3.05,P＜0.05）, DKK1蛋白表达降低39.35%（t＝40.97,P＜0.01）。侵袭实验中DKK1 RNAi组的细胞均数140.8±4.733,高于空白对照组的细胞均数123.7±6.700,癌细胞的侵袭能力增强13.82%。迁移实验中DKK1 RNAi组细胞均数（152.0±3.528）高于空白对照组（130.6±4.061）,癌细胞的迁移能力增强16.39%。DKK1 siRNA处理后,细胞中活性β-catenin、MMP14荧光增强,提示表达水平上升。结论 DKK1具有抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的作用。Wnt/β-catenin信号通路参与了DKK1这一作用过程。DKK1不失为抑制子宫内膜癌转移的有效治疗靶点。     

促性腺激素释放激素拮抗剂在诱导HEC-1A子宫内膜癌细胞株生长抑制中MAPK的活性

目的调查促性腺激素释放激素（GnRH）拮抗剂Cetrorelix对HEC-1A子宫内膜癌细胞株生长是否具有直接抑制作用,并探讨它的作用机制。方法应用RT-PCR法测定在子宫内膜癌细胞株促性腺激素释放激素及它的受体mRNA的表达。应用5-溴-2’-脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2’-deoxyuridine,BrdU）免疫组化标记技术测定细胞增殖变化。应用Western免疫印迹技术测定与信号传导相关的丝裂原活化蛋白激酶/MAPK的蛋白水平。结果 HEC-1A细胞株表达GnRH及其受体。GnRH拮抗剂Cetrorelix在浓度10^-5mol/L下,体外作用24h后抑制了HEC-1A细胞的生长。Cetrorelix在浓度10^-6mol/L与10^-5mol/L之间作用于HEC-1A细胞6h,磷酸化丝裂原活化蛋白激酶/ERK1/2蛋白水平增长,并持续24h,这个增长被提前加入丝裂原或化蛋白激酶/MEK抑制剂U0126而阻止。而磷酸化p38、JNK蛋白水平没有变化。结论结果表明持续的ERK1/2活性在Cetrorelix抑制HEC-1A细胞生长中发挥重要作用。