荧光定量聚合酶链反应检测唾液中幽门螺杆菌的研究

幽门螺杆菌(Hp)感染与胃炎、胃溃疡甚至胃肿瘤等的发病关系密切,国际癌研究协会已于1994年将Hp感染列为人的Ⅰ类致癌因子.检测Hp感染发展迅速,然而其中大多属于有创性,荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)法能从唾液中直接检测H p并具有无创、简便、可准确定量等优点.我们用FQ-PCR法检测唾液中Hp,对诊断儿童Hp感染进行探讨.     

聚合酶链反应检测幽门螺杆菌

本文应用与幽门螺杆菌染色体ＤＮＡ高保守区序列互补的引物对，建立聚合链反应检测技术，对２８种非ＨＰ菌及１６株ＨＰ进行检测，特异性１００％，敏感性达到能检出１ｐｇ染色体ＤＮＡ（相当于１００个菌细胞）水平，对３６例接受胃镜检查病人的胃活检组织进行检测，ＨＰ阳性率４７．２％（１７／３６），而对照方法中细菌培养ＨＰ阳性率３３．３％（１２／３６），快速尿素酶试验ＨＰ阳性４１．６％（１５／３６）。结果提示ＰＣＲ     

竞争性定量聚合酶链反应检测幽门螺杆菌cagA基因

目的 建立竞争性聚合酶链反应（ＰＣＲ）定量检测幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白基因Ａ（ｃａｇＡ）的方法。方法 以重组ＰＣＲ将乳糖操纵子中乳糖调节蛋白（ＬａｃＩ）的特异性结合序列（２１ｂｐ）插入ｃａｇＡ基因的一段序列（４００ｂｐ）中得到重组ｃａｇＡ基因片段（ｒｆｃａｇＡ）。体外克隆并表达谷胱甘肽转硫酶－ＬａｃＩ（ＧＳＴ－ＬａｃＩ）的融合蛋白,其一端具有ＣＳＴ活性,另一端可特异性地与ｒｆｃａｇＡ结合     

聚合酶链反应结合探针杂交检测幽门螺杆菌

建立特异，灵敏的聚合酶链反应结合长臂光敏生物素探针杂交检测幽门螺杆菌的方法。用ＰＣＲ产物直接克隆并测序，以含ＨＰ ＤＮＡ序列的重组质粒外源片段为探针。用细菌培养，单纯ＰＣＲ和ＰＣＲ结合杂交检测经胃镜诊断为慢性炎，胃溃疡，十二指肠球部溃疡的胃活检组织，唾液和粪便标本中的ＨＰ。     

聚合酶链反应和尿素酶试验检测幽门螺杆菌

近年来随着大量研究资料表明,幽门螺杆菌（ＨＰ）与慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌的发生均有着十分密切的关系［１、２］。目前检测 ＨＰ感染的方法较多,分为入侵性和非入侵性两类,如细菌涂片。培养,尿素酶试验（ＲＵＴ）,聚合酶链反应（ＰＣＲ）和血清ＨＰ抗体检测及１３Ｃ或１４Ｃ,尿素呼吸试验（ＵＢＴ）等。我们通过对２ １６例患者胃镜活检同部位粘膜标本,分别作ＰＣＲ反应和ＲＵＴ试验检测对照,以了解各自优缺点。１资料和方法 本组２１６例,男１３６例,女８０例,年龄１７～８２岁,平均５２．１岁。慢性萎缩性胃炎８２例,…     

聚合酶链反应结合探针杂交检测幽门螺杆菌

目的建立特异、灵敏的聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合长臂光敏生物素探针杂交检测幽门螺杆菌（ＨＰ）的方法。方法用ＰＣＲ产物直接克隆并测序，以含ＨＰＤＮＡ序列的重组质粒外源片段为探针。用细菌培养、单纯ＰＣＲ和ＰＣＲ结合杂交（ＰＣＲ－Ｓｂ）检测经胃镜诊断为慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠球部炎症、十二指肠溃疡的胃活检组织、唾液和粪便标本中的ＨＰ。结果检测胃活检标本７９份，ＰＣＲ－Ｓｂ阳性率为９９％，单纯ＰＣＲ及细菌培养的阳性率分别为９５％和６５％，ＰＣＲ－Ｓｂ的灵敏度达到１ｆｇ。唾液标本的检测阳性率为３５％，粪便标本的检测结果均为阴性。结论测序证实了ＰＣＲ扩增的正确性。ＰＣＲ结合长臂光敏生物素探针杂交是特异、灵敏、简便和对人体无害的检测ＨＰ的方法。     

实时荧光定量聚合酶链反应检测唾液HBV-DNA结果分析

目的：探讨乙型肝炎患者血清中HBV-DNA与唾液中HBV-DNA之间的相关性。方法：用时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎病毒血清标志物,用实时荧光定量聚合酶链式反应（实时荧光定量PCR）检测HBV-DNA。结果：在300例乙型肝炎患者中血清HBV-DNA〉103 copies/mL者268例,阳性率为89.33%。唾液HBV-DNA〉103copies/mL者219例,阳性率为73.00%。血清、唾液HBV-DNA阳性比较差异有统计学意义（χ2=26.586,P〈0.01）。结论：血清中HBV-DAN与唾液中HBV-DNA的含量有很好的相关性,当唾液中HBV-DNA〉105 copies/mL时同样导致HBV的水平传播,这在流行病学上有重要意义。     

荧光定量聚合酶链反应在胃黏膜幽门螺杆菌感染诊断中的应用研究

幽门螺杆菌(Hp)感染是慢性胃炎、消化性溃疡的最主要病因之一,与胃癌和胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的发生密切相关[1].     

聚合酶链反应检测幽门螺旋杆菌

自从1983年Marshall和Warren报道胃粘膜活检标本中成功地分离出幽门螺杆菌（HelicobacterPylori，HP）以来，国内外学者对此进行了广泛深入的研究，在检测技术上有很大发展。分子生物学方法中的聚合酶链反应（PCR）技术为HP的快速检测提供了全新手段。本文对冒镜确诊的362例胃炎、胃十二指肠溃疡等病例作PCR技术确定HP检出率，并以病理检查作对照，结果报告如下。1材料与方法1．1材料：标本采自本院1995年3月～1997年10月经胃镜检查确诊的胃、十二指肠溃疡、各类胃炎及溃疡合并胃炎362例，每例在距幽门口5cm内钳取胃粘膜2份（每例检…     

多聚酶链反应检测幽门螺杆菌临床意义

多聚酶链反应检测幽门螺杆菌临床意义康黎（江西省波阳县人民医院，波阳３３３１００）幽门螺杆菌（ＨｅｌｉｃｏｂａｔｅｒＰｙｌｏｒｉ，ＨＰ）的检测方法有多种，包括细菌涂片、培养、尿素酶试验、血清学检查、１４Ｃ呼吸试验等都有一定的诊断价值，应用多聚酶链反应（...     

聚合酶链反应(PCR)检测幽门螺杆菌cag A基因

目的　探讨应用PCR直接测定胃粘膜标本中幽门螺杆菌cagA基因。方法　不需细菌培养 ,直接从胃粘膜标本中提取幽门螺杆菌DNA ,选择合适的引物及条件进行PCR ,通过琼脂糖电泳来确定标本中的cagA基因。结果　每例cagA阳性的标本在 191bp的位置有一条清晰的电泳带。 19例胃溃疡患者中cagA阳性 16例 ,阴性 3例。 15例健康人血清对照 ,cagA阳性 3例 ,阴性 12例。该法敏感性 84 .2 % ,特异性 80 %。同时进行快速尿素酶实验 ,发现 17例阳性标本中PCR方法 16例阳性 (94 .1% ) ,2例快速尿素酶实验阴性标本PCR阴性。二者没有显著差异 (χ2 =0 ,P >0 .0 5 )。结论　应用PCR直接测定胃粘膜标本中幽门螺杆菌cagA基因方法简单 ,快速 ,灵敏度和特异性较高。     

荧光定量聚合酶链反应检测肝病患者HBV DNA

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法的临床应用价值.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和FQ-PCR法对240例不同的肝病患者及108例健康体检者进行乙型肝炎病毒标志物(HBVM)以及HBV DNA定量检测.结果不同临床类型(急慢性乙肝患者、肝硬化和肝癌)患者血清中HBV DNA的阳性检出率的差异具有显著性(x2=9.40,P<0.05);不同人群血清中HBV DNA阳性检出率的差异亦具有显著性(x2=125.31,P<0.001).ELISA检测结果为"HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)"和"HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)"的HBV感染者,体内HBV DNA含量显著高于HBVM阴性者;e抗原阳性和阴性者体内HBV DNA含量的差异亦具有显著性.HBV、HCV重叠感染者血清HBV DNA含量明显低于单纯HBV感染者(P<0.05).结论 FQ-PCR法检测HBV DNA具有灵敏度高、特异性好、结果可靠的优点,可反映HBV真实感染和低复制状态,对于乙肝的临床诊断、治疗方案选择和预后判断具有重要的指导意义.     

聚合酶链反应法测定幽门螺杆菌的vacA基因型

以幽门螺杆菌ＤＮＡ为模板,采用聚合酶链反应设计了５个特异性寡核苷酸引物的一个共引物,分析检测了６２株幽门螺杆菌空泡形成细胞毒素基因Ｓ１ａ、Ｓ１ｂ、Ｍ１型和Ｍ２型,检测结果均为Ｓ１ａ／Ｍ２实验显示胃十二指肠疾病与空泡形成细胞毒素基因无相关关系。     

荧光定量聚合酶链反应检测肝病患者HBV DNA

目的　探讨荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)法的临床应用价值。方法　采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和FQ PCR法对 2 4 0例不同的肝病患者及 10 8例健康体检者进行乙型肝炎病毒标志物 (HBVM )以及HBVDNA定量检测。结果　不同临床类型 (急慢性乙肝患者、肝硬化和肝癌 )患者血清中HBVDNA的阳性检出率的差异具有显著性 (x2 =9.4 0 ,P <0 .0 5 ) ;不同人群血清中HBVDNA阳性检出率的差异亦具有显著性 (x2=12 5 .31,P <0 .0 0 1)。ELISA检测结果为“HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)”和“HBsAg(+)HBeAb(+)HB cAb(+)”的HBV感染者 ,体内HBVDNA含量显著高于HBVM阴性者 ;e抗原阳性和阴性者体内HBVDNA含量的差异亦具有显著性。HBV、HCV重叠感染者血清HBVDNA含量明显低于单纯HBV感染者 (P <0 .0 5 )。结论　FQ PCR法检测HBVDNA具有灵敏度高、特异性好、结果可靠的优点 ,可反映HBV真实感染和低复制状态 ,对于乙肝的临床诊断、治疗方案选择和预后判断具有重要的指导意义     

聚合酶链反应分子灯塔法检测幽门螺杆菌的临床应用价值

幽门螺杆菌是引起胃炎和消化道溃疡的重要病原体 [1 ]。目前 HP检测方法大多敏感性差 ,特异性不强。近年发展起来的PCR方法有许多优点 ,但也存在一些问题 ,如假阳性、假阴性、污染等 ,使其不能作为临床的常规方法而开展起来。因此对PCR的研究一直在继续 ,并出现许多改善的 PCR方法。但都是检测时杂交过程与 PCR扩增是分开的 ,杂交过程较繁琐。而我们可用 PCR分子灯塔法 (PCR- molecular bacon assay) [2 ]将PCR扩增、荧光探针杂交、检测一体化 ,对临床标本中幽门螺杆菌检测 ,并与快速尿素酶实验和培养法进行分析比较 ,从而探讨其…     

聚合酶链反应检测120例胃粘膜中产毒素幽门螺杆菌核酸

临床上将幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）分为细胞毒素菌株（Ⅰ型）和不产细胞毒素菌株（Ⅱ型）。本文应用ＰＣＲ检测不同胃粘膜病变组织中产毒素Ｈｐ的感染情况，以探讨其在胃疾病发生中的作用。１材料和方法１．１标本来源胃粘膜标本来自本院病理室...     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

目的 用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱ－ＰＣＲ）方法准确地定量检测血清中乙型肝炎疾病（ＨＢＶ）的数量和免疫指标以指导临床,方法 设计合成了ＨＢＶＦＱ－ＰＣＲ诊断试剂盒,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合产生的实时检测定量ＰＣＲ方法,检测了５３２份临床血清标本,结果 经ＦＱ－ＰＣＲ检测,１５８份ＨＢＶ的ｓ抗原,ｅ抗原,ｃ抗体（ＨＢｓＡｇ,ＨＢｅＡｇ,ＨＢｃＡｂ）都阳性的标本,其血清标本ＨＢ     

荧光定量聚合酶链反应技术检测儿童患者人巨细胞病毒结果分析

目的 了解本院儿童患者人巨细胞病毒(HCMV)感染现状.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术对243例住院疑似患儿进行HCMV-DNA定量检测.结果 HCMV总阳性率为16.05%;男性和女性阳性率分别为17.83%和12.79%;1个月至1岁年龄组(婴儿期)患者最高为17.41%.临床诊断主要以肝损害、腹泻和黄疸为主.结论 加强儿童患者HCMV的检测,有助于临床诊断与治疗方案的选择.