荧光定量PCR检测HBVDNA与血清HBV标志物的关系

目的　探讨荧光定量 PCR检测血清 HBVDNA与血清 HBV标志物的关系。方法　采用酶联免疫吸附法(ELISA)和荧光定量 PCR(FQ- PCR)两种方法同时检测 357份肝炎患者血清 ,并对结果进行对比分析。结果　肝硬化组HBVDNA含量明显低于 HBs Ag携带者组 (P<0 .0 5)。血清 HBs Ag、抗 - HBc、HBe Ag阳性组 HBVDNA含量明显高于HBs Ag、抗 - HBc、抗 - HBe和 HBs Ag、抗 - HBc阳性组 (P<0 .0 1 ) ,而后两组 HBVDNA检出率仍较高。结论　 FQ- PCR可真实反映 HBV感染、复制及病程变化 ,对乙型肝炎临床诊断及治疗均有较大的指导意义     

HBV-DNA与HBV-TRFIA检测结果比较分析

目的　探讨乙肝患者血清 HBV DNA的表达水平及其与乙肝标志物的相互关系 ,了解用 TRFIA法检测 HBV- M,其对应的 HBV- DNA拷贝数。方法　用荧光聚合酶链反应 ( FQ- PCR)对患者进行 HBV-DNA检测 ,同时用 TRFIA法定量测定乙肝表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体和核心抗体指标。结果　在 39例患者血清中检测出 HBV- DNA病毒基因拷贝值范围为 2 .1× 1 0 3～ 3.8× 1 0 8copies/ ml,平均含量为 2 .95× 1 0 6copies/ ml,总阳性检出率为 43.3% ;2 0例 HBs Ag( + )、HBe Ag( + )、抗 - HBc( + ) ,其 HBV-DNA阳性为 1 6例 ,阳性检出率为 80 % ;42例 HBs Ag( + )、抗 - HBe( + )、抗 HBc( + ) ,其 HBV- DNA阳性为 1 7例 ,阳性检出率为 40 .5 % ;9例 HBs Ag( + )、抗 - HBc( + ) ,其 HBV- DNA阳性为 3例 ,阳性检出率为33.3% ;1 0例抗 - HBs( + )、抗 - HBe( + )、抗 - HBc( + ) ,其 HBV- DNA阳性为 1例 ,阳性检出率为 1 0 % ;3例 HBs Ag( + )、HBe Ag( + )、抗 - HBe( + )、抗 - HBc( + ) ,其 HBV- DNA阳性为 2例 ,阳性检出率为66.7% ;而 2例 HBV- M全 ( - )的 HBV- DNA也全 ( - )。结论　 FQ- PCR是测定乙肝病人血清中 HBVDNA含量较特异、灵敏的方法 ,能反映乙肝病毒的复制水平和活跃程度 ;乙肝血清学标志物定量     

768例乙型肝炎血清标志物和HBV-DNA载量相关性分析

目的：探讨HBV-DNA载量与乙型肝炎血清标志物之间的相关性。方法：采用实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA载量,化学发光法检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc五项乙型肝炎血清标志物。结果：在768份血清标本中,HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性组HBV-DNA阳性率为98.70%,HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性组HBV-DNA阳性率为66.02%,HBsAg阳性组HBV-DNA阳性率为43.75%,抗HBs、抗HBe、抗HBc阳性组HBV-DNA阳性率为10.00%,抗HBs、抗HBc阳性组、抗HBs阳性组及五项乙型肝炎血清标志物全阴组HBV-DNA阳性率为0。结论：不同组的乙型肝炎患者HBV-DNA载量阳性率不同,HBV-DNA载量与乙型肝炎血清标志物之间存在相关性。采用实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA载量是反映HBV复制的可靠指标,结合乙型肝炎血清标志物可以帮助临床了解HBV在体内复制的状况,并为临床评价抗HBV治疗效果提供可靠依据。     

HBV-DNA荧光定量检测在原发性肝癌患者中的应用价值

目的 :检测原发性肝癌 (PHC) 14 6例血清中乙型肝炎病毒 (HBV) DNA拷贝数 ,进一步研究 HBV感染与PHC关系。方法 :用 EL ISA法检测 PHC14 6例血清中 HBs Ag、HBs Ab、HBe Ag、HBe Ab、HBc Ab;同时采用荧光定量 PCR法 (FQ- PCR)定量检测其血清中 HBV- DNA含量。结果 :14 6例 PHC中 HBVM总感染率达 90 .4 1%(132 / 14 6 ) ,HBV-DNA总阳性率为 5 6 .85 %(83/ 14 6 ) ,平均 HBV- DNA拷贝数为 10 5.36± 1 .32 / ml。在 HBVM各模式组中 ,小三阳组的病例最多占 4 7.95 %(70 / 14 6 ) ,HBV- DNA阳性率为 71.4 3%,平均 HBV- DNA拷贝数为 10 5.0 5± 1 .2 2 / ml;大三阳组例数较少 (7/14 6 ) ,而 HBV- DNA阳性率最高 (10 0 %) ,平均 HBV- DNA拷贝数亦最高达 10 7.0 2± 1 .4 5/ ml。结论 :本研究发现 HBV感染与PHCS发生关系密切 ,HBe Ab的存在与 PHC之间有相关性 ,而 HBc Ab的持续阳性亦可能是 PHC的促发因素之一     

对乙肝"二对半"检测中"HBsAg阴性HBeAg阳性"现象的分析

在乙型肝炎病毒 (HBV)血清标记物中 ,在一般情况下 ,HBe Ag只出现于 HBs Ag阳性血清中 ,而我们在用 EL ISA法检测 HBV五项血清学标记物时 ,发现 6例 HBs Ag阴性而 HBe Ag阳性的血清。现对这一现象做简要分析。1　临床资料6例血清均来自 1997年 3月至 1998年 8月门诊收检的疑为乙型肝炎的患者。2　试剂及方法试剂盒均由上海科华公司提供 (EL ISA) ,严格按说明书操作。3　结　果6例血清 HBe Ag均为阳性 ,而其他 4项标记物均为阴性。4　讨　论4.1　 HBe Ag是一种可溶性的蛋白抗原 ,是完整的 HBc Ag肽链的一部分 ,当 HBc Ag被蛋…     

荧光定量PCR在乙型肝炎患者检测中的临床应用

目的　探讨荧光定量 PCR( fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)定量检测血清HBV-DNA的临床应用价值。方法　采用 FQ-PCR和 ELISA法检测 1 76例乙型肝炎患者血清 HBV DNA含量和 HBV血清学标志物 ,并进行比较分析。结果　 HBs Ag、HBe Ag和抗 -HBc三项阳性 ,HBs Ag、抗 -HBe、抗 -HBc三项阳性 ,HBs Ag、HBe Ag两项阳性 ,HBs Ag、抗 -HBc阳性的样品中 ,HBV DNA阳性率分别为 95 .1 %、83 .3 %、1 0 0 .0 %、81 .8% ,DNA拷贝数/ml分别为 2 .2 9× 1 0 7、1 .2 3× 1 0 6 、8.5 1× 1 0 6 、6.61× 1 0 5,其中以抗 -HBc-Ig M阳性组 DNA拷贝数为最高。结论　 FQ-PCR法检测 HBV DNA具有灵敏度高、结果可靠的优点 ,可检测 HBV感染和复制状态 ,对于乙肝的早期诊断、传染性判断和疗效考核具有重要的指导意义。     

定量PCR法检测HBV DNA与HBV血清标志物的相关性

目的　探讨血清HBV DNA水平与HBV血清标志物 ( HBVM)的相关性。方法　对 1 2 48例临床血清标本采用荧光定量 PCR法进行 HBV DNA检测 ,同时采用 ELISA法进行乙肝免疫学对比检测。结果　血清 HBV DNA水平与 HBV血清标志物的表现模式有关。以 HBs Ag( )、HBe Ag( )、HBc Ab( )模式患者的 HBV DNA阳性检出率最高 ,为 97.3 %( 4 99/5 1 3 ) ,DNA平均拷贝数为 8.41× 1 0 7/ml;其次为HBs Ag( )、HBe Ab( )、HBc Ab( )模式 ,HBV DNA阳性检出率为49.4% ( 1 3 3 /2 69) ,平均拷贝数为 2 .3 3× 1 0 5/ml,均显著高于其他 HBVM模式的患者。结论　 HBe Ag和 HBV DNA有明显的相关性。定量检测 HBV DNA能真实反映 HBV复制情况 ,为乙型肝炎的诊断及疗效评价提供客观依据。     

415例HBV感染的不同血清学指标组合的HBV—DNA的检测

目的 了解HBV感染的不同血清学指标组合的HBV－DNA阳性情况。方法 对415份血清同时行ELISA方法测定HBV－M及普通PCR法检测HBV－DNA。结果 HBsAg( )组HBV－DNA阳性率为77．8％（270，347），HBsAg(-)组HBV－DNA阳性率19．1％（13／68），二者差别显著（P＜0．001）。其中153例HBsAg( )HBeAg( )抗HBc( )血清，HBV－DNA全部阳性，阳性率为100％，HBsAg（ ）抗HBe( ）抗HBc( )组血清HBV－DNA阳性率为66．9％（79／118），HBsAg( )抗HBc( )组血清HBV－DNA阳性率为50％（38／76），抗HBs( )组为18％（9／50），9例抗HBs( )抗HBe（＋）抗HBc( )血清中2例HBV－DNA阳性，2例抗HBs( )抗HBc( ）血清中1例HBV－DNA阳性，4例单一抗HBc( )血清中1例HBV－DNA阳性。结论 单凭HBsAg或HBeAg是否阳性来判断肝脏中HBV复制及有无传染性是不够的，易造成部分慢性乙型病毒性肝炎的漏诊，对HBsAg阴性无论抗HBs是否阳性，只要有HBV感染后的任何血清学依据，都应进一步检测血清HBV－DNA作为诊断乙型肝炎的第二步筛选，有条件时肝活检加以证实。     

荧光定量聚合酶链反应对乙型肝炎病毒的检测分析

1　对象和方法1.1　对象　 5 30例乙肝患者来自 2 0 0 1- 0 1～ 2 0 0 1- 12我院消化内科门诊 ,男 310例 ,女 2 2 0例 ,男∶女为 1.4 1∶ 1,年龄在 12～6 0岁。其中病毒的标志物为大三阳 (即 HBs Ag、HBe Ag及抗 -HBc均为阳性 )者 310例 ,小三阳 (即 HBs Ag、抗 - HBe及抗 - HBc均为阳性 )者 2 2 0例 ,诊断符合 1995 - 0 5北京第五次全国传染病和寄生虫病会议讨论修订的病毒性肝炎诊断标准方案 (试行 )。1.2　方法　采用荧光定量聚合酶链反应 (FQ- PCR)方法对血清中 HBV进行定量检测 ,血清 HBV- DNA定量测定正常参考阈值为 <10 …     

全血乙型肝炎病毒定量检测方法的初步研究

目的探讨聚合酶链反应(PCR)检测全血中乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量及临床应用价值.方法取20μl血清裂解液提取HBV DNA、和取同样量的全血经不同裂解液提取血液中血清及白细胞内总HBV DNA,同时经PCR检测.对78份乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性患者两种取材方法检测HBV DNA含量进行比较.结果检测HBV DNA的最低检测限为1×103拷贝/ml,29份乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)和抗乙型肝炎核心抗体(抗HBc)均为阳性患者全血检测HBV DNA阳性率为100%,血清阳性率为100%,P＞0.05;37份HBsAg、抗乙型肝炎e抗体(抗HBe)和抗HBc均为阳性患者全血检测HBV DNA阳性率为97.30%,血清阳性率为48.65%,P＜0.01;12份HBsAg和抗HBc均为阳性患者全血检测HBV DNA阳性率为91.67%,血清阳性率为25%,P＜0.01;20份非乙型肝炎患者血清均为阴性.血清HBVDNA阳性多数是ALT升高患者,其拷贝数均小于全血测定的拷贝数.结论全血检测HBV DNA阳性率高,避免血液中白细胞内HBV漏检,它能准确地反应血液HBV含量,更好地为临床治疗效果作监测.     

乙型肝炎患者病毒复制指标与乙肝标志物及肝功能关系分析

目的探讨乙型肝炎患者病毒复制指标(HBV DNA)与乙肝标志物及肝功能的关系。方法对68例乙型肝炎患者采用电化学发光法检测血清中的乙型肝炎e抗体(HBe Ab)、核心抗体(HBc Ab)、e抗原(HBe Ag)、表面抗体(HBs Ab)、表面抗原(HBs Ag)水平。采用实时荧光定量法检测血清中的HBV DNA水平,采用全自动生化仪检测血清中的天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和胆碱酯酶(CHE)。结果 HBs Ag/HBe Ag/HBc Ab阳性组(大三阳组)患者血清中的HBV DNA阳性率以及定量结果高于其他组(P0.05);HBe Ag阳性组中HBVDNA的阳性表达率高于HBe Ag阴性组中HBV DNA的阳性表达率(P0.05);HBV DNA载量≤10~3、10~3HBV DNA载量106、HBV DNA载量≥106的患者间血清AST和ALT水平差异有统计学意义(P0.05),随着HBVDNA载量的增加血清AST和ALT显著增加;但三组间的CHE差异无统计学意义(P0.05)。结论乙型肝炎患者HBV DNA水平和乙肝患者的病毒复制情况、炎症程度有着密切的联系,但需要与乙肝标志物结合才能更加客观和准确的评价患者的病情变化和严重程度。     

各类慢性乙型肝炎患者HBV前S2抗原与HBV感染血清标志物及HBVDNA的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前S2抗原(preS2Ag)与HBV感染5项标志物(HBV-M)、HBV DNA之间的关系及对慢性乙型肝炎分类诊断的临床意义。方法对584例各类慢性乙型肝炎患者血清采用放射免疫法(R IA)检测preS2Ag,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV-M(HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc),用聚合酶链反应(PCR)检测HBV DNA。结果慢性乙型肝炎轻度、中度、重度及肝炎后肝硬化患者preS2Ag的检出率分别为45.98%、67.10%、83.87%及92.86%;preS2Ag在HBeAg阳性、HBV DNA>105拷贝/mL患者中检出率明显高于HBeAg阴性、HBV DNA<105拷贝/mL患者,差异有统计学意义(P<0.001)。结论preS2Ag的检出意味着病毒有复制或有传染性;开展preS2Ag的检测有助于慢性乙型肝炎的分类、慢性乙型肝炎急性发作和预后的判断。     

各类慢性乙型肝炎患者HBV前S2抗原与HBV感染血清标志物及HBV DNA的关系

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）前S2抗原（preS2Ag）与HBV感染5项标志物（HBV-M）、HBV DNA之间的关系及对慢性乙型肝炎分类诊断的临床意义。方法对584例各类慢性乙型肝炎患者血清采用放射免疫法（RIA）检测preS2Ag,用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HBV-M（HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc）,用聚合酶链反应（PCR）检测HBV DNA。结果慢性乙型肝炎轻度、中度、重度及肝炎后肝硬化患者preS2Ag的检出率分别为45.98%、67.10%、83.87%及92.86%;preS2Ag在HBeAg阳性、HBV DNA〉105拷贝/mL患者中检出率明显高于HBeAg阴性、HBV DNA〈105拷贝/mL患者,差异有统计学意义（P〈0.001）。结论preS2Ag的检出意味着病毒有复制或有传染性;开展preS2Ag的检测有助于慢性乙型肝炎的分类、慢性乙型肝炎急性发作和预后的判断。     

乙型肝炎患者e抗原-抗体系统的变化与HBV复制

目的 :探讨乙肝患者治疗过程中e抗原 -抗体系统的变化与HBV复制的关系。方法 :运用荧光定量PCR技术对 164例血清HBeAg( )的乙肝患者治疗过程中HBV -DNA血清水平进行监测。结果 :治疗前HBeAg( )患者HBV DNA阳性率为98 2 %。治疗过程中 ,97例出现HBeAg( -) /抗 -HBc( ) ,此时HBV -DNA阳性率为 48 5 %;75例出现HBeAg( -) /抗 -HBe( ) ,其HBV DNA检出率为 3 2 0 %;42例出现抗 HBe( ) /抗 HBc( ) ,其HBV DNA检出率为 7 1%;3 0例出现抗 HBe( ) /抗 HBs( ) (包括抗 HBe( ) /抗 HBe( ) /抗 HBc( ) ) ,其HBV DNA检出率为 6 7%;在 7例抗 HBc( )及 5例全阴的标本中 ,也有HBV DNA检出。结论 :在乙肝的治疗过程中血清HBeAg的消失及抗 HBe的产生 ,标志着HBV复制水平的下降 ,了解各阶段病毒复制程度对乙肝治疗及疗效评价有重要意义     

应用荧光偏振技术检测HBV DNA

目的建立一种简便、灵敏、特异的DNA检测方法.方法用荧光偏振技术检测102例乙型肝炎患者血清中的HBV DNA,并与多聚酶链反应-酶联免疫吸附试验(PCR-ELISA)方法作比较.结果该方法可以检测出1×101拷贝的HBV DNA模板,CV为6.44%,对102例乙型肝炎患者的血清进行检测,HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)血清HBV DNA阳性率为100%(40/40);HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)血清HBV DNA阳性率为81.8%(27/33);HBsAg(+)、抗HBc(+)血清HBV DNA阳性率为72.4%(21/29),其余为阴性.30例非乙型肝炎患者血清中HBV DNA的检测结果均为阴性.结论该方法简单、灵敏、特异,适用于临床进行大样本核酸检测.     

乙型肝炎病毒前S1蛋白检测的临床意义

乙型肝炎病毒 (HBV)包膜上的前 S1 ,前 S2 蛋白及表面抗原为 HBV- DNA的 S区、前 S1 、前 S2 及 S基因的编码产物 ,其中前 S1 可能与 HBs AG的运输与分泌有关 ,我们检测了 6 6例乙型肝炎患者血清前 S1 蛋白 ,并观察与其血清 HBV标志物和 HBV- DNA的关系 ,以进一步探讨血清前 S1 蛋白检测的临床意义。1　材料与方法1.1　标本来源　收集我院门诊和住院的 6 6例乙肝患者标本 ,采血后分离血清 ,再收集了助血员血清 2 5例 ,- 2 0℃冻存。1.2　试剂　 HBV标志物检测 (包括 HBs Ag、抗 - HBs、HBe Ag、抗 - HBe、抗 - HBc) ,由…     

FQ--PCR检测乙型肝炎患者血清HBV DNA

目的评价荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV DNA的临床应用价值.方法用FQ-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测乙型肝炎患者血清251份和健康体检者血清116份的HBV DNA和HBV血清标志物.结果HBsAg、HBeAg和抗-HBc 3项阳性、HBsAg、抗-HBe和抗-HBc 3项阳性以及抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc同时或分别阳性的样品,HBV DNA阳性率分别为96.5%、56.6%和12.3%,HBV DNA拷贝数分别为1.12×10s/ml、1.45×106/ml和6.61×104/ml.用ELISA检测HBeAg阳性率仅为FQ-PCR检测HBV DNA阳性率的55.4%.结论FQ-PCR对乙型肝炎早期诊断,传染性的判断及疗效考核有临床实用意义.     

新生儿血清乙型肝炎病毒表面抗原弱反应性结果分析

目的分析新生儿血清乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)弱反应性的原因。方法将35例父母HBs Ag均为非反应性而新生儿单独出现HBs Ag弱反应性的病例设为观察组,进行乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测,于1周后进行HBV感染血清标志物和HBV DNA复检,并与100例HBs Ag为非反应性的对照组进行比较。结果观察组2次HBV DNA检测均5.0×102拷贝/m L。观察组初检HBs Ag水平显著高于1周后复检水平(P0.01),1周后HBs Ag均0.05 IU/m L,呈非反应性;乙型肝炎表面抗体(抗HBs)水平显著低于1周后复检水平(P0.05)。而乙型肝炎e抗原(HBe Ag)、乙型肝炎e抗体(抗HBe)、乙型肝炎核心抗体(抗HBc)水平差异无统计学意义(P0.05)。初检时观察组与对照组新生儿HBV感染血清标志物的2种常见模式进行比较,同样发现抗HBs水平差异具有统计学意义(P0.05),而HBe Ag、抗HBe、抗HBc差异无统计学意义(P0.05)。结论 35例新生儿HBs Ag弱反应性是由于乙型肝炎疫苗注射产生的干扰现象,且干扰时间较短,随着抗体水平的升高,HBs Ag含量随即下降直至为非反应性。     

1 031例乙肝病毒携带者HBV-DNA含量与血清标志物的关系

目的：探讨乙型肝炎病毒携带者血清中HBV－DNA定量结果与乙肝血清标志物的关系。方法：采用定量聚合酶链反应（PCR）法检测1031例乙型肝炎病毒携带者血清中DNA含量，与HBV标志物作对比研究。结果：血清HBeAg阳性组HBV－DNA含量明显高于抗HBe或抗HBc阳性组。结论：定量PCR法检测HBV－DNA具有较强的特异性和灵敏度，为临床了解病毒复制情况，督促乙肝携带者治疗及制定治疗方案、疗效观察提供了确切依据。     

乙型肝炎病毒聚合酶链反应液相杂交酶免疫检测的定性判断值研究

目的探讨乙型肝炎病毒 (HBV)聚合酶链反应 (PCR)液相杂交酶免疫检测的定性判断值设立和灰区范围的计算方法。方法以 HBV为目的靶 DNA,引物 P1 5’端标记 Bio,PCR扩增 35个循环。扩增产物与 5’端标记Dig的探针混合进行液相杂交 ,杂交后产物被 SA酶标板固定 ,经酶标记抗 Dig抗体结合、显色。结果实验结果显示 ,本试剂的检测敏感度在 3× 10 4拷贝 /m l。 3种参比品 A450 值的 95 %、99%分布范围之间不存在交叉区 ,其中临界阳性参比品 95 %分布范围下限值 (A450 )为 0 .182。 5 85例献血员血清标本的 A450 均值为 0 .0 37,P99上限值为 0 .12 3,灰区范围在 0 .12 3～ 0 .182。本试剂对“HBs Ag /HBe Ag /抗 - HBc ”标本的阳性检出率为 98.8% ,“HBs Ag /抗 - HBe /抗 - HBc ”标本的检出率为 5 4.8% ,阴性标本的检测有较高的特异性。结论本试剂设立的定性判断值(灰区计算方法 )具有很高的正确性、可操作性和临床实用性