在活化硝酸纤维素膜上的R-藻红蛋白荧光免疫测定

目的提高普及型藻胆蛋白荧光标记诊断试剂盒的检测灵敏度.方法采用化学方法活化处理硝酸纤维素膜,以R-藻红蛋白为荧光标记物,对比活化膜与未经处理的硝酸纤维素膜用于双抗体夹心法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的效果及稳定性.结果普通膜和活化膜与进口ELISA试剂对比,120份标本的阴阳性符合率达100%,特异性好;活化膜的检测灵敏度高于普通膜.结论活化的硝酸纤维素膜有效地提高了藻胆蛋白荧光标记诊断试剂检测的灵敏度.     

胶体金免疫斑点法检测人巨细胞病毒pp150抗体

目的：建立一种简便、快速的检测血清中人巨细胞病毒（HCMV）抗pp150抗体的胶体金免疫斑点法。方法：采用Frens法制备胶体金颗粒，标记葡萄球菌A蛋白（SPA），将本所利用基因工程技术生产的pp150抗原固定于0．45μm孔径的硝酸纤维素膜上，制成免疫斑点检测装置。血清中抗pp150 IgG与硝酸纤维素膜上的抗原结合，然后滴加胶体金标记的SPA，在膜上可形成肉眼可见的红色斑点。结果：胶体金免疫斑点法与ELISA试剂盒对比检测了200份临床确诊血清标本中抗pp150 IgG抗体，胶体金法的特异性和敏感性分别为92％和90％。结论：胶体金免疫斑点法检测血清中的抗pp150抗体特异性、灵敏度较高，简便快速，不需要昂贵的仪器。     

胶体金渗滤法检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体

目的 建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌(HP)细胞毒素相关蛋白A(CasA)抗体的胶体金免疫渗滤法(DIGFA)。方法 采用枸橼酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记葡萄球菌A蛋白(SPA),将重组的CagA抗原固定于硝酸纤维素膜上。血清中抗CagAIgG与金标记SPA及硝酸纤维素膜上的固相抗原结合后,形成肉眼可见的红色斑点。结果 用DIGFA与酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对比检测了326份血清标本中抗CagA抗体,两法符合率为96．6％。结论 DIGFA检测血清中的抗CasA抗体特异性强,简便快速,无需特殊仪器设备,有实用价值。     

兴奋剂促红细胞生成素免疫检测方法的研究

摘要：目的 探索兴奋剂促红细胞生成素 (EPO)的检测方法。方法 制备了抗重组 EPO(rHuEPO)的两株单克隆抗体： McAbF8和 McAbF11,同时纯化了天然螺旋藻中的藻胆蛋白。以 McAbF8作包被抗体,建立了检测血清中 EPO浓度的竞争 ELISA法;并将藻胆蛋白作为荧光探针标记 McAbF8,建立了检测血清中 EPO浓度的荧光免疫检测法,其检测线性范围为 10－ 10～ 10－ 12mol/L。结果 用于同样样本的血清检测,与竞争酶联免疫吸附法所测结果无显著性差异 (P >0.05)。结论 荧光免疫检测法在灵敏度和特异性等方面,并不亚于传统的酶联免疫吸附法 (ELISA),而在有些方面还要优于 ELISA,它在检测中将获得更大的应用。     

膜微阵列技术的建立及检测细菌条件的优化

目的　探讨膜微阵列技术检测细菌的可行性。方法　在细菌的 1 6SrRNA基因内设计了通用引物和特异性探针 ,将探针点在膜上制备微阵列 ,再与地高辛标记的DNA杂交 ,比较了随机引物标记法和PCR掺入标记法的灵敏度 ,探讨了硝酸纤维素膜和尼龙膜作基片的可行性 ,并比较了不同的固定条件和杂交条件下的杂交结果 ,以标准菌株DNA为样本 ,建立起微阵列技术。结果　随机引物标记法和PCR掺入标记法的灵敏度均为 0 .1pg ;尼龙膜较之硝酸纤维素膜可更好的结合寡核苷酸 ,经紫外线交联 3min ,与杂交液 3(5×SSC ,5g/LSDS ,1 %封闭剂 )在 5 5℃杂交结果最好。标准菌株除结核杆菌、变形杆菌外 ,均能与其对应的特异探针杂交。结论　利用膜微阵列技术检测细菌有快速、敏感、特异、无放射性污染的特点     

幽门螺杆菌IgG抗体免疫层析分型方法的建立

目的建立1种检测血清中抗幽门螺杆菌(Hp)抗体的胶体金免疫层析(GICA)方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记SPA,将Hp重组抗原VacA、CagA和UreaA、UreaB抗原包被于硝酸纤维素膜NC上,制成免疫层析检测试纸条.血清中的抗Hp抗体与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的酒红色线条。结果用GICA与免疫印迹试剂盒对比检测了180份血清标本中抗Hp抗体,显示本方法检测敏感度、特异度分别为95.4%和96.3%,两法总符合率为96.1%。结论用这种免疫层析GICA分型方法检测血清中抗Hp抗体,灵敏度高、特异性强、简便快速,有着广泛临床应用前景。     

肺炎支原体抗原量子点免疫层析法的建立及初步应用

目的建立肺炎支原体(Mp)抗原量子点免疫层析的检测方法,初步评价其在临床辅助诊断中的应用价值。方法在偶联剂碳二亚胺EDC和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)作用下,使鼠抗人Mp单克隆抗体(针对P1蛋白)与羧基量子点(CdSe/ZnS)偶联,制备量子点标记抗体包被在玻璃纤维膜上,以另一株Mp单抗(针对P1蛋白)作为捕获抗体包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上,建立双抗体夹心量子点免疫层析法检测肺炎支原体抗原。该方法检测130份临床咽拭子标本,并与荧光聚合酶链反应方法相比较。结果经过一系列的反应条件优化,确定偶联剂EDC用量为0.4mg/mL,sulfo-NHS用量为0.58mg/mL,标记抗体浓度1∶100稀释,捕获抗体浓度为0.75mg/mL,反应时间为10min。量子点免疫层析法检测临床标本,阴性符合率为96.4%,阳性符合率为90.0%。结论量子点(CdSe/ZnS)标记免疫层析法检测Mp与荧光聚合酶链反应法具有较好的符合性,该方法操作简便、检测快速、灵敏度高,适用于Mp感染的早期诊断。     

血清层粘连蛋白荧光免疫层析检测方法的建立及性能评价

建立一种荧光定量层粘连蛋白(LN)检测方法,定量检测人血清LN水平。将鼠抗LN抗体用划线机喷到硝酸纤维素膜表面作为检测线(T),将链霉素亲和素用划线机喷到硝酸纤维素膜表面作为质控线(C);用生物素荧光微球标记鼠抗LN抗体作为缓冲液。利用双抗体夹心法原理定量检测LN水平,对方法的线性、精密度、空白限、回收率、相关性等性能指标进行验证,并使用市售化学发光LN试剂盒比对。荧光免疫分辨检测LN方法的回收率为86.03%~97.50%,空白限为4.22 ng/mL,线性范围为20~800 ng/mL,相关系数(r)为0.9989;批内精密度为6.51%,批间精密度为6.23%。与市售LN试剂平行检测100份血清标本,有良好的相关性(Y=1.0219X-1.1720,r=0.9871)。本研究建立了LN荧光免疫检测方法,各项性能指标均达到临床检验要求,操作便捷、结果准确,可用于临床血清LN水平的检测。     

兴奋剂促红细胞生纱免疫检测方法的研究

目的 探索兴奋剂促红细胞生成素（ＥＰＯ）的检测方法。方法 制备了抗重组ＥＰＯ（ｒＨｕＥＰＯ）的两株单无隆抗体：ＭｃＡｂＦ８和ＭｃＡｂＦ１１,同时纯化了天然螺旋藻中的藻胆蛋白。以ＭｃＡｂＦ８作包被抗体,建立了检测血清中ＥＰＯ浓度的竞争ＥＬＩＳＡ法;并将藻胆蛋白作为荧光探针标记ＭｃＡｂＦ８,建立了检测血清中ＥＰＯ浓度的荧光免疫检测法,其检测线性范围为１０＾－１０￣１０＾－１２ｍｏｌ／Ｌ。特异性等方面,     

免疫印迹法检测过敏原特异性IgE

目的 研制过敏原特异性IgE检测试纸条,对该试纸条的检测效能进行评估.方法 将不同浓度的过敏原溶液点样到固相载体-硝酸纤维素膜上,经过固定,封闭,洗涤步骤,加入待检血清,血清中的抗体与膜上的抗原反应,经酶-底物反应显色,根据颜色判读结果,并与Allergy Screen过敏原检测系统进行对比.结果 该法的灵敏度和特异性较好,与Allergy Screen检测系统符合率较高.食物过敏原检测阳性率高于Allergy Screen法.结论 用硝酸纤维素膜检潮过敏原特异性IgE抗体,具有样本血清量少,操作简便,价格低廉等优点,具有较强的临床检测应用价值,为体外过敏原检测提供了新的思路.     

快速金标免疫斑点法测定血清甲胎蛋白的方法学研究

甲胎蛋白常用检测方法有对流免疫电泳、反向间接血凝法、ELISA法和放免法等,前两者灵敏度不够,后者操作费时,需特殊设备。本科室开展了金标技术后,经过实验摸索,又一次用金溶胶标记抗AFP进行硝酸纤维素膜免疫斑点法检测AFP,和ELISA相比,有简单、快速、准确等优点。现报告如下。     

介绍一种高灵敏度检测乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)的非同位素斑点杂交试验

本文介绍一种检测人血清HBV-DNA的非同位素斑点杂交试验。该试验把血清用量提高至200μl,并在操作时用抗-HBs沉淀血清中的Dane颗粒,离心收集抗原抗体复合物,弃去蛋白上清液以减少在点样时蛋白质对HBV-DNA在硝酸纤维素膜上的竞争性结合,从而大大提高检测的灵敏度。用同位素斑点杂交试验作对照,本法与同位素法检测灵敏度相仿:230例献血者及临床肝炎样品俭测结果两法的符合率为96.1%,检测灵敏度明显高于国内同类产品,适用于一般临床实验室。     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgM抗体的研究

目的 建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgM抗体的方法。方法 采用胶体金标记鼠抗人IgM单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中甲、戊型肝炎的特异性抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg、HEAg)、抗体(羊抗鼠IgM)结合形成肉眼可见的红色线条。结果 自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份，各单项指标IgM—抗HAV、IgM-抗HEV两法总符合率依次为97．9％、98．4％，检测灵敏度可达2ng／ml。结论 用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性抗体的GICA试条的制备条件已基本建立；其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备。     

介绍一种检测慢性粒细胞白血病外周血白细胞BCR/ABL融合蛋白的方法

目的建立一种检测外周血白细胞费城染色体编码融合基因产物(BCR/ABL)融合蛋白(P210)的方法,为临床提供特异、灵敏、快速诊断慢性粒细胞白血病(CML)的新方法。方法采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分离BCR/ABL融合蛋白,用包括蛋白电泳转膜与单克隆抗体结合显色等步骤,将分离的物质转移至硝酸纤维素薄膜(NC膜)上与特异的单克隆抗体结合形成抗原抗体复合物,用增强的免疫化学发光法(ECL)对区带进行处理。结果对68例符合法美英协会(FBA)分型的CML患者外周血白细胞的BCR/ABL融合基因表达产物进行检测,结果全部为阳性,而20例正常献血者全部阴性。结论外周血取材方便,患者无痛苦,该检测方法对诊断CML是一种特异性强、灵敏度高的方法。     

用快速斑点免疫金渗滤法检测抗双链DNA抗体

为了提供一种简便、快速、可靠的检测抗双链ＤＮＡ抗体的新方法，将生物素化的质粒ｄｓ－ＤＮＡ结合于包被了亲和素的硝酸纤维素膜上，以胶体金标记的葡萄球菌蛋白Ａ作为显示剂，建立了一种检测抗ｄｓ－ＤＮＡ抗体的快速斑点免疫金渗滤法。     

膜层析杂交方法的建立

[目的]建立一种快速、简便的核酸杂交检测模式。[方法]合成寡核苷酸探针固定于高流速硝酸纤维素层析膜的反应区(reaction zone，RZ)，溶于杂交液中的待杂交的DNA分子上样于层析膜的一端，在毛细管力的作用下，DNA在膜上移动并在RZ与固定探针杂交结合，同理，以标记有生物素的显示探针与靶核酸层析杂交，最后通过与链亲合素-碱性磷酸酶(SA-AP)接头结合，由AP的底物NBT／BCIP显色系统判断结果。[结果]生物素标记探针直接固定，进行显色反应后显色灵敏度为10fmol；膜层析杂交后的显色度没有降低；与斑点杂交方法比较，在灵敏度未降低的情况下，膜层析杂交可在2h内迅速完成。[结论]该方法简便、快速，适合较多探针的杂交，结果容易判断，不需要特殊仪器设备，对于病原体的快速、灵敏检测有着广泛的应用前景。     

斑点金免疫渗滤法检测大肠杆菌的研究

目的建立一种快速、简便、准确、灵敏度高的大肠杆菌斑点金免疫渗滤检测方法。方法选用混合纤维素膜为固相载体,以胶体金标记羊抗兔IgG,双抗免疫渗滤检测大肠杆菌。结果建立了灵敏度为253~1.04×106个/ml的简便、快速的大肠杆菌检测方法。结论斑点金免疫渗滤实验检测大肠杆菌与传统的检测大肠杆菌方法比较,具有检测速度快、灵敏度高、应用方便等优势。     

免疫酶斑点试验中硝酸纤维素膜的预处理

免疫酶斑点试验的反应载体是硝酸纤维素膜(NC 膜).该试验常用于抗原或抗体的检测及抗原研究中抗原免疫活性的测试.其结果可直接显示和照相记录.要获得背景清晰的结果,NC 膜的预处理显得十分重要.由于未经处理的NC 膜上往往有一层灰白色粉末,点样时样品蛋白与粉尘结合后牢固吸附于     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgG抗体的研究

[目的]探索并建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgG抗体的方法。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记鼠抗人IgG单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中甲、戊型肝炎的特异性IgG抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg、HEAg)、抗体(羊抗鼠IgG)结合形成肉眼可见的红色线条。[结果]自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份，各单项指标抗-HAV IgG、抗-HEV IgG两法总符合率分别为98．9％、98．9％，检测灵敏度可达1ng／ml。[结论]用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性IgG抗体的GICA试条的制备条件已基本建立；其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便、快捷，无需特殊仪器设备，有广泛的应用价值。     

滴金免疫法检测血清抗HBcIgM及IgG抗体

目的为简便快速地进行抗ＨＢｃＩｇＧ和ＩｇＭ测定。方法，用抗人ＩｇＭ或抗人ＩｇＧ抗体包被硝酸纤维素膜，用胶体金标记抗ＨＢｃ单克隆抗体，以重组ＨＢｃＡｇ溶液作为标本中抗ＨＢｃ与金标记抗ＨＢｃ的联接剂，建立了滴金免疫法（滴金法）。结果，经与酶免疫法对比测定，二法抗ＨＢｃＩｇＭ符合率为９７．２％，抗ＨＢｃＩｇＧ符合率为９５．８％，另以相同模式在同一硝酸纤维膜上分别点加抗人ＩｇＭ和抗人ＩｇＧ抗体，同步检测抗