人甲状腺球蛋白测定酶联免疫吸附试验方法的建立及应用

目的建立一种简便、快速、灵敏、可靠的测定甲状腺球蛋白的酶联免疫吸附试验方法.方法在纯化甲状腺球蛋白(TG)的基础上,制备出TG单克隆抗体,并用纯化的TG多抗包被,酶标记单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA.结果经临床50例健康人测定,其范围在9～16μg/L.方法的批内变异为7.76%～9.69%,批间变异为12.3%～12.6%.检测低限为0.13μg/L,可定量报告低限为1.0μg/L.结论人甲状腺球蛋白ELISA方法的建立为甲状腺疾病的检测提供了一种新的方法.     

骨钙素酶免疫检测方法的研究和应用

目的：建立骨钙素酶免疫测定方法，并应用于临床检测血清骨钙素。方法：应用了3种检测模式，根据检测灵敏度、剂量反应曲线的形态进行分析，选择出合适的模式进一步应用于临床血清标本的骨钙素检测。结果：所采用的骨钙素单克隆抗体是钙离子依赖型的。固相抗原竞争法适合于临床定量测定骨钙素。最低可测限为1．4μg/L;20μg/L骨钙素样品批内CV＝3．98％，批间CV＝12．67％。测定正常献血员140名（年龄17－45岁），第5－95百分位点的骨钙素含量，男性为7．5－15．0μg/L女性为7.0-17.5μg/L。70例疑有骨质疏松症患者血清骨钙素含量2．91－30．20μg/L，以第95百分位点的骨钙素含量为cut-off值，升高5例。与进口试剂盒（Novocalcin,USA）相比较，有较好的相关性，r=0.81。结论：固相抗原竞争法酶免疫测定可以灵敏地检测血清中骨钙素含量，有实用价值。     

单克隆抗体测定甲状腺球蛋白 ELISA 方法的建立及应用

在自行纯化甲状腺球蛋白(TG)的基础上,制备了抗TG的单克隆抗体,并建立了单克隆抗体的测定TG的ELISA方法,对方法进行了考核,与RIA对比检测血清标本,符合性良好。     

ELISA定量测定抗甲状腺球蛋白抗体与临床应用

用纯化甲状腺球蛋白(TG)和酶标记TG,建立双抗原夹心ELISA 技术,兔抗人TG 纯化抗体制备标准曲线,定量测定循环抗TG 抗体。此法敏感性与精密度优于常规PHA。可测最低含量为5μg/L,日内、日间CV 均<10%。正常人抗TG<70μg/L;桥本氏甲状腺炎患者达200～280 000μg/L。常规检验可于3 h30min 内完成。操作简便,适于对临床患者的动态观察。     

双标记前列腺特异性抗原时间分辨荧光免疫分析试剂盒研究

目的研制钐（Sm）标记检测总前列腺特异性抗原（tPSA）及铕（Eu）标记检测游离前列腺特异性抗原（fPSA）的双标记时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）试剂盒。方法以抗PSA单克隆抗体101^#包被96孔微孔板，用Sm^3＋标记抗tPSA单克隆抗体102^#、Eu^3＋标记抗fPSA单克隆抗体201^#，采用双抗体夹心法建立t／fPSA双标记TRFIA。标准曲线由TRFIA检测仪自带的Log-Log_B函数处理。结果tPSA批内和批间变异系数（CV）分别为2．38％和3．91％，最低检测下限0．02μg／L，可测范围为0．02～250μg／L，回收率为101．3％；fPSA批内和批间CV分别为3．16％和3．34％，最低检测下限0．05μg／L，可测范围为0．05～250μg／L，回收率为103．2％。t／fPSA TRFIA试剂盒测定健康组、前列腺良性疾病组和前列腺癌组（Pca）的tPSA平均值为1．4μg/L、4．3μg/L、14．2μg/L，fPSA平均值为0．3μg/L、1．5μg/L、6．2μg/L。tPSA3．6μg/L、f／tPSA〈0．21为Pca与良性疾病的鉴别阈值。自制试剂盒与PE公司进口试剂盒同时测定血清样本，二者tPSA与fPSA的相关系数分别为0．99和Q97。结论自制t／fPSA TRFIA试剂盒的各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品。     

EIA定量检测甲状腺球蛋白抗体和甲状腺微粒体抗体在临床中的应用

目的 探讨酶免疫法定量检测血清抗甲状腺球蛋白抗体（TG—Ab）和抗甲状腺微粒体抗体（TM—Ab）在临床应用价值。方法 采用酶免疫法（EtA）定量检测血清TG—Ab和TM—Ab．并对检测条件、干扰因素、精密度和准确度进行试验探讨。结果 EIA定量测定血清TG—Ab和TM—Ab分别在880IU／ml和665IU／ml以下线性良好．TG—Ab批内和批间CV分别为3．2％和7．1％，TM—Ab批内和批间CV分别为3．9％和7．6％。测得平均回收率为TG—Ab：92．4％、TM—Ab：101．2％．血清标本4℃存放一周内．对测定结果无影响。胆红素、血红蛋白在0．5g／L对测定无干扰．Hb浓度〉0．5g／L对TM-Ab产生正干扰．结论 EIA定量检测能较准确检测血清甲状腺自身抗体水平，操作简便．结果准确．符台临床常规使用要求．对自身免疫性甲状腺疾病的诊断、疗效观察及预后具有临床应用价值。     

ELISA法测定血清瘦素

目的 建立ETJSA测定血清瘦索的方法。方法 制备瘦素单克隆抗体，以双抗体夹心法测定血清瘦素。结果 方法的平均回收率为89．7—92．1％。取浓度为1．21μg／L、6．32μg/L瘦素标本其批内变异分别为4．4％和2．6％；批间变异分别为5．7％和4．9％。方法的线性为：1．25—20μg／L。与放射免疫法比较有良好的相关性（r^2=0．9988）。参考值范围为：5．26—5．92μg／L。结论 该法简便、快速、特异、敏感，适于临床常规应用。     

酶偶联法测定肌酐与苦味酸法的比较

目的：评价肌酐酶－氧化酶偶联法测定肌酐（以下简称酶法）。方法：同时用ROCHE公司和LABO公司的两种酶法试剂盒测定肌酐并与苦味酸法进行比较。结果：LABO酶法测定肌酐的线性范围为25μmol/L-2210μmol/L，ROCHE为49μmol/L－4420μmol/L，苦味酸法为92μmol/L－520μmol/L。LABO试剂的批内CV＜0．54％，批间CV＜2．06％，回收率为95％；ROCHE试剂的批内CV＜0．88％，批间CV＜2．30％，回收率为99％；苦味酸法批内CV＜1．13％，批间CV＜3．23％，回收率为93％。溶血、黄疸对两种酶法测定肌酐的干扰率＜4％；抗坏血酸对苦味酸法产生正干扰，当其＞0．625g/L时，干扰率≥11．2％，抗坏血酸≥1．25g/L时，对ROCHE试剂测定结果的干扰率≥5．58％；药物头孢曲松钠≥1．00g/L时，对苦味酸法产生正干扰，干扰率≥7．11％，对其它两种试剂无干扰。结论：酶法测定肌酐优于苦味酸法，可作为临床常规测定方法。同时，临床实验室需根据自己的实际情况选择合适的酶法试剂盒。     

4种方法检测低水平乙型肝炎表面抗原比较

目的比较4种方法对低水平乙型肝炎表面抗原检测的灵敏度与符合率。方法采用Axsym微粒子酶免分析（MEIA）、时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体金免疫层析（GICA）4种方法对204例HBsAg浓度介于（0～5）μg／L血清标本及定值质控标本进行检测与比较。结果MEIA、TRFIA、ELISA、GICA检测HBsAg的灵敏度分别为0．125μg/L、0．25μg/L、0．50μg/L和2．50μg／L，对204例HBsAg浓度介于（0～5）μg／L的血清阳性检出率为74．5％、70．6％、63．2％、22．1％。以MEIA及中和确认试验为准，TRFIA、ELISA、GICA3种方法对HBsAg浓度在5μg/L以下的血清标本漏检率占阳性总检出者的5．9％、16．4％和70．4％。与MEIA的相符率为95．1％、86．8％、47．5％。结论不同的方法对低水平HBsAg检测灵敏度差异较大，HBsAg浓度5μg／L以下的血清标本阳性检出率高低依次为MEIA〉TRFIA〉EUSA〉CICA。     

ELISA法测定糖原磷酸化酶同工酶BB

目的建立ELISA法测定糖原磷酸化酶同工酶BB的方法.方法从心肌中纯化糖原磷酸化酶同工酶BB,制备单克隆抗体,以双抗体夹心ELISA法测定GPBB酶蛋白含量.结果方法线性可达100μg/L,平均回收率为102%±2.4%,低值和高值的批内、批间变异分别为5.1%,7.4%和6.2%,10.4%.参考值范围为1.05～6.53μg/L.AMI诊断域值为7.9μg/L.结论 GPBB方法简便、快速,适于临床应用,是AMI早期诊断的敏感指标.     

心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体制备及酶免疫法的建立

目的 研制人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)单克隆抗体，建立双单克隆抗体两点一步夹心酶免疫法(简称“双抗夹心ELISA”)。方法 用亲和层析法直接从人心肌组织中提纯cTnⅠ，经免疫、融合、筛选、克隆等杂交瘤技术，制备出3株特异性抗cTnⅠ单克隆抗体，选用其中互补的2株2F11和9F5，分别制成生物素化抗体和酶标抗体，建立双抗夹心ELISA检测法。结果 用双抗夹心ELISA和美国PBM公司Life sign TroponinⅠ检测试剂对40名健康献血员和34例急性心肌梗塞患者血中cTnⅠ水平进行检测，本法最低检测限为0．8μg／L，两者符合率分别为97．5％和93．9％，符合临床诊断要求。结论 双抗夹心ELISA特异性强，灵敏度、准确度和精密度较高，具有应用及推广价值。     

酶联免疫法测定全血他克莫司浓度

目的 酶联免疫法（ELISA）测定全血他克莫司浓度的方法学确证。方法 含有他克莫司的全血样本经消化、孵育、离心，上清加入已包被的酶标板进行抗原抗体反应，检测波长450／630nm。结果 方法的平均回收率为93．5％，批内批间变异系数7．6％和9．8％，检测范围30μg/L以内，稀释线性回收率95．0％-101．4％。结论 该方法快速、敏感、准确，适用于测定全血他克莫司浓度。     

4种方法检测低水平乙型肝炎表面抗原比较

目的比较4种方法对低水平乙型肝炎表面抗原检测的灵敏度与符合率。方法采用Axsym微粒子酶免分析（MEIA）、时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体金免疫层析（GICA）4种方法对204例HBsAg浓度介于（0～5）μg／L血清标本及定值质控标本进行检测与比较。结果MEIA、TRFIA、ELISA、GICA检测HBsAg的灵敏度分别为0．125μg/L、0．25μg/L、0．50μg/L和2．50μg／L，对204例HBsAg浓度介于（0～5）μg／L的血清阳性检出率为74．5％、70．6％、63．2％、22．1％。以MEIA及中和确认试验为准，TRFIA、ELISA、GICA3种方法对HBsAg浓度在5μg/L以下的血清标本漏检率占阳性总检出者的5．9％、16．4％和70．4％。与MEIA的相符率为95．1％、86．8％、47．5％。结论不同的方法对低水平HBsAg检测灵敏度差异较大，HBsAg浓度5μg／L以下的血清标本阳性检出率高低依次为MEIA〉TRFIA〉EUSA〉CICA。     

尿液和脑脊液蛋白测定自动比浊法的评价

目的：评估和证实尿液和脑脊液蛋白测定自动比浊法的性能，方法：用罗氏公司的苯索氯铵试剂，以比浊法进行尿液和脑脊液蛋白测定，并对方法的检测限，病人结果可报告范围，精密度和准确度等作了实验观察，结果：方法的检测低限为0．04g/L，可定量报告的检测限为0．08g/L，病人结果可报告范围为0．08－2．0g/L，批内CV为1．5％，批间CV为2．2％，传统磺柳酸蛋白测定与之比较，二法间尿液Y1＝0．85X＋0．068，r=0.972,脑脊液Y2＝0．86X＋0．056，r=0.980。结论：本法简便，快速，准确且样本用量少（5－15ul)，适合临床实验室推广应用。     

血清蛋白电泳分析系统方法学探讨

目的探讨血清蛋白琼脂糖凝胶电泳分析系统的性能，建立本实验室的参考值范围。方法采用精密度试验、线性梯度试验、样本量试验探讨该系统的性能。通过对100例健康体检者进行检测以建立本实验室参考值范围。所有数据统计均使用SPSS10．0软件进行分析。结果批内CV为4．25％，批间CV为7．73％；50～120g／L载量及8～15μL样本量均能得出一致性的结果；参考范围白蛋白（Alb）为55．5％～65．2％α1-球蛋白（alpha-1 globulins，α1-Glo）为2．0％～3．8％，α2-球蛋白（alpha-2 globulins，a2-Glo）为8．0％～12．4N，β-球蛋白（Betaglobulins，β-Glo）为7．9％～12．8％，r球蛋白（gammaglobulinss，γ-G10）为11．8％～20．2％。结论该系统能满足临床要求。     

美国Abbott Axsym免疫分析仪性能初步评价

目的 对Abbott Axsym免疫分析仪性能进行评价。方法 通过检测HBsAg，对Abbott Axsym免疫分析仪的灵敏度、特异性、正确检测率(可检测性)、重复性、线性及与ELISA检测HBsAe的相关性等指标进行测定。结果Abbott Axsym免疫分析仪的灵敏度达到0.16μg/L，特异性为100％，正确检测率(可检测性)为99．72％，不同参比血清的总CV值在5．4％一9．4％之间波动，在0．1—100μg/L范围内线性良好(r＝0．9949)，与ELISA比较，两法的符合率为97％。结论 该仪器设计科学合理，检测快速方便，结果准确可靠，是大、中型医院临床实验室比较理想的免疫分析仪之一。     

血清γ-谷氨酰基转肽酶ELISA检测方法的建立及其在原发性肝癌诊断中的临床应用研究

目的建立可用于血清蔓陀罗凝集素(DSA)-γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)检测的酶联免疫吸附法(ELISA),并探讨其在原发性肝癌(PHC)诊断中应用价值。方法制备抗DSA-GGT单克隆抗体(McAb),经蛋白G亲和层析柱色谱纯化后进行生物素标记,构建血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法。用建立的方法对健康者、PHC患者和非PHC患者进行DSA-GGT检测,并进行方法学评价;采用受试者工作曲线(ROC曲线)确定DSA-GGT诊断PHC的临界值。结果所构建ELISA检测方法的最低检测限为2μg/L,平均批内、批间变异分别为8.9%和11.5%。健康者血清DSA-GGT水平呈正态分布,参考范围为(1.50±0.51)μg/L;经ROC曲线分析,确定其诊断PHC的临界值为3.25μg/L;其诊断PHC灵敏度为66.7%(28/40)、特异度为91.8%(112/122)。结论所建立的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法具有良好方法学性能,其诊断PHC的灵敏度、特异度良好,为PHC实验室诊断提供了新的方法。     

克隆酶供体免疫测定法在环孢菌素A浓度监测中的应用

目的 评价用自动生化分析仪测定全血环孢菌素A（cyclosporine A,CsA)浓度的克隆酶供体免疫,测定（CEDIA）方法。方法 分析测定CEDIA方法的精密度,灵敏度,线性,准确性（回收实验）以及与荧光偏振免疫分析法（FPIA／TDx)和酶扩大免疫测定法（EMIT）之间的相关性。结果 CEDIA测定的批内CV分别为1．8％（455．7μg/L）,2．29％（270．5μg/L）和7．0％（73．8μg/L）;最低检出限为7．0μg/L;测定线性范围可达1800μg/L;平均回收率为99．4％;CEDIA法与FPIA／TDx和EMIT法进行对比,相关系数分别为0．931和0．945。结论 CEDIA方法测定CsA血液浓度具有操作简便,标本不需繁琐的前处理,精密度好和较宽的分析范围等特点,更便于临床实验室应用。     

血清肌红蛋白比浊法测定试剂的评价及其初步临床应用

目的 通过评价肌红蛋白测定试剂的性能,建立一种用全自动生化分析仪检测肌红蛋白的免疫比浊法。 方法 利用标记抗体检测抗原的比浊法原理,进行精密度、线性、回收率、干扰试验。 结果 本法标准曲线y＝7．3635＋0．9739x,r＝0．9997。正常人血清肌红蛋白浓度的批内CV％为0．25％,批CV％为1．49％。心肌梗塞病者的则分别人1．3％与2．23％,回收率为97．1％～104．7％。血清TG＞5．0mmol／L或Hb＞500mg／L对肌红蛋白的检测才有干扰。测定100例健康体检者血清肌红蛋白（SMb）含量为20．7～58．9μg／L。33例急性心肌梗塞（AMI）患者的SMb的含量为542±178μg／L。 结论 该法具有快速、灵敏、简便、准确的优点,对AMI的诊断有较高的应用价值。     

用基因工程抗原建立ELISA检测莱病特异IgM抗体

目的 利用伯氏疏螺旋体基因工程抗原外膜蛋白C（OspC)建立间接ELISA，检测莱姆病特异性抗体IgM。方法 基因工程抗原OspC的包被浓度和酶标抗μ链单抗所用浓度及血清稀释倍数，均由方阵滴定法确定，并进行精密度、特异性试验、阻断试验和干扰试验。结果 OspC最佳浓度为150μg/L，批内平均变异系数4．6％，批间平均变异系数14．2％，用ELISA测定临床已确诊莱姆病33例，57例正常体检者，同时与进口ELISA试剂盒比较，两方法符合率97．8％。结论 该方法特异性强、敏感性高、实验结果可靠,是莱姆病早期诊断的好方法。